流式细胞术在食品微生物检测领域的研究进展
流式细胞术检测单增李斯特菌与酿酒酵母_黄生权
流式细胞术检测单增李斯特菌与酿酒酵母黄生权1，付萌1，唐青涛1，黄韵2，胡双芳2，余以刚2，肖性龙2（1.无限极（中国）有限公司，广东江门 529156）（2.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）摘要：为探讨流式细胞术对单增李斯特菌和酿酒酵母的活菌与热灭活菌的检出效果，本文采用荧光染色试剂SYTO-9和碘化乙锭（PI）对单增李斯特菌和酿酒酵母的活菌与热灭活菌的细胞悬液进行染色，采用流式细胞仪同时测量红色荧光与绿色荧光从而得出细胞悬液中的细菌和酵母的含量。
结果表明经核酸荧光染料染色后，再结合流式细胞术对细菌与酵母菌进行检测，步骤简单、耗时短。
该法不仅简化了测量步骤且分辨率高，对单增李斯特菌和酿酒酵母均具有良好的检出结果，能分辨同一体系中同一菌种的活细胞与热灭活细胞和同一体系中的细菌与酵母活细胞；该法检出限低，将单增李斯特菌稀释后，最低检出限可达1.2×104 cells/mL，将酿酒酵母稀释后，最低检出限可达6×103 cells/mL，因此能大大缩短增菌时间或者避免繁复的增菌步骤。
关键词：流式细胞术；荧光；李斯特菌；酿酒酵母文章篇号：1673-9078(2014)3-195-200Detection of Saccharomyces cerevisiae and Listeria monoeytogenes byFlow CytometryHUANG Sheng-quan1, FU Meng1, TANG Qing-tao1, HUANG Yun2, HU Shuang-fang2, YU Yi-gang2,XIAO Xing-long 2(1.Infinitus (China) Co. Ltd., Jiangmen 529156, China)(2.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)Abstract: The viable and heat-treated microorganisms such as Listeria monocytogenes and Saccharomyces cerevisiae were investigated in this study. They were stained by fluorescent staining reagents SYTO-9 and Propidium Iodide (PI) and then the red and green fluorescence signals were detected using flow cytometry to get the concentration of cells in samples. The results showed that flow cytometry was able to detect bacteria and yeast after the nucleic acid fluorescent staining. This method simplified the procedure for L. monocytogenes and S. cerevisiae detection, shortened the time of detection procedures, and also distinguished viable with heat-treated micrograms and viable bacteria with yeast in the same system. This method was capable of detecting as few as 1.2×104 cells/mL L. monocytogenes and 6 × 103 cells/mL S. cerevisiae. This improvement might shorten the time consuming of culture enrichment or simplify the process.Key words:flow cytometry; fluorescent; Listeria; Saccharomyces cerevisiae由于保健品原料中污染的微生物往往含量很低，或在加工过程中受到损伤活性低，给快速检测带来许多困难，由此造成的漏检给保健品生产企业带来重大的经济损失与资源浪费[1]。
食品微生物检验内容及检测技术
161综述随着社会的进步与发展，人们生活水平与理念的提升，许多食品安全问题不断被揭露出来，对于食品安全问题的关注度也显著增加。
食品检验是对食品安全的一个重大保障，只有达到标准的食品才能进入市场。
在食品安全问题中，微生物是对食品安全问题造成威胁的主要来源。
微生物是一种肉眼看不见的生物，如果在食品加工或运输过程中，不严格按照标准进行，就很容易被微生物污染，而微生物污染过的食品就会对人体健康安全造成威胁。
因此，做好食品检验工作，为食品安全提供有力保障。
1.食品微生物检验的内容1.1细菌总数的鉴定。
细菌菌落总数是指食品检验经处理，在一定条件下培养后所得1g食品或1ml食品或1cm2食品表面积上所含有的细菌菌落总数。
食品微生物中细菌总数的检验是衡量食品污染程度的指标。
通常是对生活中的食品或水通过特殊的物理、化学和生物的方法进行处理，在特定的培养条件下进行培养，得到细菌总数。
食品中细菌数量越多，腐败速度越快，甚至会对人体健康造成影响。
因此，细菌总数可以作为一个衡量食品安全的标准。
虽然细菌总数的并不能直接反映致病菌的多数量，但在一定程度上，二者是呈现正相关性的。
1.2大肠杆菌群数。
一定范围的大肠杆菌数能够维持人体内的正常菌群，但大肠杆菌菌群包含有多种肠道致病菌，超过范围就会对人造成危害。
在食品微生物检测过程中，待测样品中含有超标的大肠杆菌，很可能表明该待测样品直接或间接接触过粪便感染，当人们食用了这样的食品，其肠道致病菌感染的可能性大大增加。
大肠菌群MPN值是指1g或1ml待测样品中大肠菌群最可能数。
因此，大肠菌群MPN值可以作为粪便污染食品的指示菌。
1.3霉菌和酵母群数。
霉菌和酵母菌也是常见的食品微生物，起初酵母菌用于面包制造，酿酒等生产中，而霉菌也用于酿酒、制酱等一些食品生产中。
但是这一些腐生型酵母菌会使食物腐败变质，对于常见的面包而言，他主要含有淀粉，因此更容易滋生霉菌，霉菌则会分解淀粉，从而产生有毒黄曲霉素，是强致癌物质。
食品中菌落总数的快速检测方法研究
食品中菌落总数的快速检测方法研究食品卫生安全一直是人们关注的重要问题，而食品中的菌落总数是评价食品卫生状况的重要指标之一。
现研究人员通过快速检测方法来监测食品中菌落总数，以提供更为方便快捷、准确可靠的食品安全检测手段。
菌落总数是衡量食品中微生物数量的指标，它代表着这些微生物在食品中的总体分布情况。
菌落总数的高低与食品的新鲜度、卫生状况、微生物质量等息息相关。
常规的菌落总数检测方法包括平板计数法、薄膜过滤法和MPN法等，但这些传统方法需要较长的培养时间，且操作相对繁琐，无法满足快速监测的需求。
近年来，随着生物技术的进步和仪器设备的提升，科研人员提出了多种快速检测菌落总数的新方法。
其中，荧光定量PCR法（Real-Time PCR）是一种应用较广泛且成熟的DNA检测技术。
其原理是利用DNA扩增和荧光信号增强技术，通过特定荧光探针的标记，实现对菌落总数的快速测定。
相比于传统的培养方法，Real-Time PCR检测方法具有更高的灵敏度、更短的检测时间和更低的污染风险。
同时，该方法还能够实现对多种细菌的同时检测，具备一定的多功能性。
除了Real-Time PCR法，还有一种新兴的快速检测菌落总数的方法是纳米颗粒传感技术。
纳米颗粒传感技术是借助纳米材料对样品中微量生物分子的选择性捕捉和灵敏检测，以实现菌落总数的快速计数。
这种技术利用纳米材料的特殊性质，如高比表面积、强磁性和特异的生物识别能力，可以在短时间内完成对食品中菌落总数的检测，并且不受样品复杂性的影响。
此外，纳米颗粒传感技术还可以结合图像分析、流式细胞术等技术手段，提高检测的准确性和可靠性。
不仅仅是科研领域，食品安全监管机构也积极探索和应用各种新的快速检测方法。
在食品生产和销售环节，常常会出现一些突发性的食源性疾病爆发。
为了及时控制疫情蔓延，提高食品安全水平，食品监管部门常常需要快速检测食品中菌落总数。
因此，研发出快速、准确、可靠的食品菌落总数检测方法显得尤为重要。
分子生物学方法在食品微生物检测中的应用
分子生物学方法在食品微生物检测中的应用分子生物学方法是一种利用生物分子来进行检测、分析和研究的技术手段，已经广泛应用于食品微生物检测中。
这些方法的应用可以提高检测效率和准确性，并且对食品安全有着重要的意义。
在下面的内容中，我将详细介绍一些分子生物学方法在食品微生物检测中的应用。
1.基于PCR的方法：聚合酶链反应（PCR）是一种广泛应用的分子生物学方法，通过扩增特定DNA序列来检测食品中的微生物污染。
PCR可用于检测致病菌、变质菌和食品腐败微生物，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等。
此外，PCR还可以用于检测传统方法难以分离和检测的微生物，如非典型变形菌、嗜冷菌等。
2.实时荧光PCR：与常规PCR相比，实时荧光PCR可以实时监测PCR扩增的过程，具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点。
该方法可以实时检测食品中微生物的数量，并能够快速准确地定量微生物的存在。
此外，实时荧光PCR还可以与其他分子生物学方法结合使用，如多重PCR和荧光探针技术，以提高检测效果。
4.基于基因芯片的方法：基因芯片是一种能够同时检测多个样本中多个基因组区域的技术，可以用于高通量的微生物检测。
通过基因芯片，可以同时检测和鉴定食品中多个微生物的存在，并能够快速、准确地确定微生物的种类和数量。
此外，基因芯片还可以用于快速筛选和鉴定食品中的污染物和有害物质。
5.其他分子生物学方法：除了上述方法外，分子生物学还广泛应用于食品微生物检测中的其他技术。
例如，流式细胞术可以用来快速检测食品中的细菌和真菌等微生物，并且能够对样品中细菌的数量、形态和大小等进行精确测量。
此外，分子生物学还可以与其他化学和免疫学方法结合使用，如PCR-ELISA、PCR-RFLP和PCR-DGGE等，以提高微生物检测的准确性和灵敏度。
总之，分子生物学方法在食品微生物检测中的应用极其广泛。
通过这些方法，我们可以高效、准确地检测和鉴定食品中的微生物污染，为食品安全的监测和控制提供有力的技术手段。
流式细胞术检测细胞内细胞因子的研究进展
流式细胞术检测细胞内细胞因子的研究进展【摘要】：细胞因子具有调节细胞生长、分化成熟、功能维持、调节免疫应答、参与炎症反应、创伤愈合和肿瘤消长等多种生物学功能。
因此，细胞因子的研究成果为临床上预防、诊断、治疗疾病提供了科学基础，特别是利用细胞因子治疗肿瘤、感染、造血功能障碍、自身免疫性疾病等，具有非常广阔的应用前景[1]。
随着细胞表面标记及胞内细胞因子标记流式细胞技术的出现，使对胞内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。
流式细胞术也成为了检测单细胞水平细胞因子表达能力的重要检测方法。
本文针对流式细胞术在胞内细胞因子检测中的研究进展作一综述。
【关键词】：流式细胞术；细胞内；细胞因子；检测技术引言：细胞因子(cytokine，CK)是由多种组织细胞(主要为免疫细胞)所合成和分泌的小分子多肽或糖蛋白，能介导细胞之间的相互作用，并在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中起到重要作用。
细胞因子的检测方法一般分为生物学测定法、分子生物学测定法及免疫学测定法。
而目前用于检测单个细胞特定细胞因子表达的手段则包括：多参数流式细胞术，酶联免疫斑点法ELISPOT[2]、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析（limiting dilution analysis，LDA）和单细胞PCR等生物分析技术。
相较于其它的检测方法，流式细胞术在细胞内细胞因子的检测上具有高效、简便、适应性广等优势。
一、流式细胞术的概述流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种能够对单个细胞或生物微颗粒的生物学性质进行定量分析和分选的检测手段，具有快速、高精度、高准确性、多参数和高通量等优点，是目前先进的细胞定量分析技术之一。
FCM能够快速分析单个细胞或粒子的多种特性，既可以定性，也可以定量，尤其适用于大量样品检测，已在临床检验工作中得到广泛应用。
流式细胞仪（fluorescenceactivated cell sorter，FACS）的检测分析已涉及到细胞生物学、免疫学、肿瘤学、遗传学、血液学、微生物学等学科。
牛奶中的微生物及其快速检测方法
⽜奶中的微⽣物及其快速检测⽅法 ⽜奶中微⽣物的含量是评价⽜奶质量的⼀个重要指标。
如果乳品中微⽣物总数⾼，其中的致病菌会产⽣外毒素，消费者饮⽤后会导致中毒;且⼤量的细菌繁殖会加速产酸，从⽽引起⽜奶酸败，使得蛋⽩质热稳定性下降。
传统的乳品微⽣物检测⽅法是费时费⼒的，需要样品涂板，恒温培养和菌落计数。
乳品中营养丰富，微⽣物繁殖很快，乳品⽣产者需要快速的微⽣物检测⽅法。
乳品中微⽣物的快速检测⽅法： 1.免疫分析法 酶联免疫吸附法(ELISA)的基本原理是抗原与抗体的特异反应，将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产⽣颜⾊反应，⽤于定量测定。
酶联免疫技术的应⽤，⼤⼤提⾼了检测的敏感性和特异性，现已被⼴泛地应⽤于多种微⽣物的检测。
有报道使⽤ELISA⽅法研究检测出⽣乳中的布鲁⽒菌。
2. PCR法 聚合酶链式反应(PCR)是以待扩增的2条DNA 链为模板，由⼀对⼈⼯合成的寡核苷酸作为引物，通过 DNA 聚合酶促反应，在体外进⾏特异性 DNA 序列扩增。
PCR 技术对⽣乳微⽣物如沙门⽒菌、⽆乳链球菌、⼤肠杆菌、单增李斯特⽒菌、⾦**葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌等都能成功进⾏检测。
PCR 技术具有操作简单、快速、灵敏度⾼、特异性强等特点。
3. 电化学阻抗法 电化学阻抗技术的原理是细菌在培养基内⽣长繁殖的过程中，会将培养基中的⼤分⼦电化学惰性物质，如碳⽔化合物、蛋⽩质等代谢为具有电活性的⼩分⼦物质，如乳酸盐、醋酸盐等，使培养基的电化学性质发⽣变化。
通过检测培养基的在电极表⾯体现的电压、电流、电阻抗等变化情况，即可判定细菌在培养基中的⽣长、繁殖特性。
该技术的优点是⾼敏感性、特异性、快速反应性和⾼度重复性等。
有报道运⽤电阻抗技术快速分析⽜奶中菌落总数，结果表明电导、总阻抗、双电层电容可作为阻抗检测参数，且检测结果准确。
4.ATP⽣物发光法 ATP ⽣物荧光技术是在荧光素酶的作⽤下，由ATP 激活，荧光素被氧化，发⽣能量跃迁产⽣荧光光⼦，荧光强度与 ATP 浓度在⼀定范围内线性相关。
食品微生物检测新技术及发展趋势
2013年第1期广东化工第40卷总第243期 · 75 · 食品微生物检测新技术及发展趋势刘翔军(通标标准技术服务有限公司厦门分公司食品部，福建厦门 361101)[摘要]文章就近年来出现的ATP生物发光法、免疫磁性分离技术、流式细胞术、核酸探针等技术在食品微生物检测中的应用进行综述，并对这些技术的发展前景进行探讨。
[关键词]食品微生物；发展趋势；检测[中图分类号]TQ053 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2013)01-0075-02New Technologies and Development Trend of Food Microbiological TestingLiu Xiangjun(Xiamen Food Division SGS-CSTC Standards Technical Services Co., Ltd., Xiamen 361101, China)Abstract: The paper summarizes the ATP bioluminescence, Immuno-magnetic capture, flow cytometry, nucleic acid probe technology in the application of food microbiological testing, and the prospect of the development of these technologies are discussed.Keywords: food microbiological；development trend；testing目前，微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中最突出的问题。
加工食品所含菌的种类、数量，常随原料的生产环境及细菌学质量、工厂环境与操作人员的卫生及处理状况、制品贮运状况等而异。
流式细胞术在食品微生物检测领域的研究进展
流式细胞术在食品微生物检测领域的研究进展流式细胞术是一种通过流式细胞仪对细胞进行快速、精确、高通量的检测和分析的技术。
它具有高度的自动化和高通量性能，可以实现对微生物的快速、准确的检测，因此在食品微生物检测领域具有巨大的潜力。
本文将对流式细胞术在食品微生物检测领域的研究进展进行详细介绍。
1. 细菌检测食品中的微生物污染是导致食品安全问题的重要原因之一。
传统的微生物检测方法通常需要数天的时间才能得出结果，而流式细胞术可以大大缩短检测时间，同时具有更高的灵敏度和准确性。
利用流式细胞仪可以对食品中的细菌进行快速检测，包括大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌种，为食品安全提供有力支持。
2. 酵母菌和霉菌检测除了细菌，食品中也会存在酵母菌和霉菌的污染，它们可能产生毒素严重影响食品质量和食品安全。
利用流式细胞术可以对酵母菌和霉菌进行快速准确的检测，为食品质量的控制和保障提供了有效手段。
3. 总菌数检测除了对特定的致病菌种进行检测外，流式细胞术还可以用于快速检测食品中的总菌数。
这对于食品的储存和保鲜具有重要意义，可以帮助食品企业及时采取措施，保证食品的安全和卫生。
1. 流式细胞术在快速检测技术中的应用传统的微生物检测方法通常需要进行培养和分离，这些步骤需要较长的时间，无法满足快速检测的需求。
而流式细胞术可以通过对样品中的微生物进行高通量的快速检测，显著缩短了检测时间，提高了检测效率。
2. 流式细胞术在微生物分类鉴定中的应用流式细胞术不仅可以对微生物进行数量上的检测，还可以结合荧光染色技术对微生物进行分类和鉴定。
通过染色标记不同的微生物成分，流式细胞仪可以对微生物进行快速准确的鉴定，大大提高了检测的精准度。
三、流式细胞术在食品微生物检测中的挑战与展望1. 技术标准化流式细胞术虽然在食品微生物检测领域具有巨大的应用潜力，但目前还存在技术标准化不足的问题。
不同的实验室可能使用不同的流式细胞仪，使用的染色荧光物质也各不相同，这将对不同实验室的检测结果产生较大影响。
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流式细胞术在食品微生物检测领域的研究进展
一、流式细胞术在食品微生物检测中的优势
流式细胞术是一种基于流式细胞仪的光学技术，能够快速获取微生物样品中细胞数量、大小、形状和生理状态等信息，具有毫秒级的分辨率、高通量和多参数检测能力。
相比传
统的微生物检测方法，如平板计数法、PCR法和传统细菌培养等，流式细胞术具有以下几
点优势：高通量和高度自动化的特点使其能够快速分析大量样品，提高检测效率；流式细
胞术能够实现对微生物数量和生理状态的快速、准确检测，能够快速识别食品中的致病菌
和污染微生物；流式细胞术还具有高灵敏度和低检测限，能够检测到极低浓度的微生物，
有助于实现对微生物的早期预警和控制。
流式细胞术在食品微生物检测中具有明显的优势，受到了广泛的关注和应用。
近年来，国内外学术界和食品工业界开展了大量针对流式细胞术在食品微生物检测中
的应用研究，取得了一系列重要成果。
一是在快速检测致病菌方面，研究人员利用流式细
胞术结合荧光标记技术，能够在几小时内，通过快速筛选和鉴定对食品安全具有威胁的致
病菌，如大肠杆菌、沙门氏菌等，为食品安全提供了有力的技术支持。
在食品卫生监测领域，流式细胞术也被广泛应用于饮用水、食品表面和生产设施等方面的微生物监测，为及
时发现和控制微生物污染提供了科学依据。
流式细胞术还可以实现对食品中益生菌和发酵
菌等有益微生物的快速检测和分析，有助于提高食品品质和营养价值。
流式细胞术在食品
微生物检测中的应用也不断向多参数、高通量和在线监测等方向发展，进一步扩展了其应
用范围和检测能力，为食品安全和质量控制提供了更多的技术手段和支持。
尽管流式细胞术在食品微生物检测领域取得了一系列的进展，但仍然面临着一些挑战。
流式细胞术在食品样品的前处理、细胞膜透过性和荧光标记等方面还存在一定的技术难题，需要进一步深入研究和解决。
流式细胞术在食品微生物检测中需要获得更高的灵敏度和准
确性，以满足对微生物快速、准确检测的需求。
流式细胞术在食品微生物检测中的应用还
需要建立一套全面的标准化和规范化体系，以确保检测结果的真实可靠性，并为商业化应
用提供技术支持。
面对这些挑战，流式细胞术在食品微生物检测领域仍然有很大的发展空间和潜力。
未来，随着流式细胞术相关技术的不断进步和完善，流式细胞术在食品微生物检测中将能够
更好地发挥其优势，为食品安全和质量控制提供更加有效和可靠的技术支持。
流式细胞术
也将更加广泛地应用于食品微生物检测的各个环节，包括食品生产、仓储、物流和销售等
方面，为构建更加安全可靠的食品供应链提供科学技术支撑。