土壤有效磷的测定-碳酸氢钠提取—钼锑抗比色法(olsen法)
碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项
碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项碳酸氢钠浸提－钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项摘要介绍了碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定石灰性和中性土壤有效磷的注意事项，以供参考。
关键词Olsen法；测定；土壤有效磷；注意事项国家农业标准中，采用碳酸氢钠浸提－钼锑抗比色法（Olsen法）测定石灰性土壤中（中性及酸性土可参照使用）的有效磷含量（其中操作规程以下简称规程），其中校准曲线或回归方程较易做出或求出，因此也较容易测定。
但是，要提高其测定准确性，减轻劳动量还需要注意以下几点。
（1）所用的试剂要按规程要求准确配制。
一是选用质量合格的仪器、药品、试剂、纯水，要求测定者首先对要使用的仪器进行校准，在试剂的配制中注意观察药品、试剂、纯水的颜色，发现异常要查找原因；二是精确称取或量取；三是按规程要求的步骤顺序配制，调节酸碱度。
但需要说明的是：①该规程要求的钼锑抗显色剂，称取的抗坏血酸（C6H8O6左旋，旋光度+21°－22°）0.5g溶于100mL钼锑贮备液中测定的结果，土壤有效磷含量要低于称取1.5g抗坏血酸溶于100mL钼锑贮备液中测定的结果。
②配制磷标准贮备液的KH2PO4 要选用优级纯的，而且要经过105℃烘干2h，并冷却后再称取配制。
（2）所需试剂要按规程要求保存与使用。
钼锑贮备液要盛放于棕色瓶中，避光存放；钼锑抗显色剂要现用现配。
（3）所用的器械要反复冲洗干净，有的还要干燥。
测定中所用的（刻度、胖肚）吸管、塑料瓶、瓶盖、漏斗、三角瓶、容量瓶、瓶塞、比色皿要反复冲洗干净，塑料瓶、瓶盖、漏斗、三角瓶需烘干后再用。
（4）要严格土液比、温度、振荡频率及振荡时间。
由于这4个方面对浸提出的磷含量有至关重要影响，因此一定要严格控制。
①要严格土液比。
即风干土样准确称取2.50g （电子天平先预热30min，再校准后使用），加入的碳酸氢钠浸提剂准确量取50.00mL。
②要严格浸提温度。
土壤有效磷测定
有效磷一、试剂配制1、氢氧化钠溶液：10g氢氧化钠溶于100ml水中。
2、碳酸氢钠浸提剂：42.0g碳酸氢钠溶于约950ml水中，用氢氧化钠溶液调PH 至8.5，用水稀释至1L。
3、酒石酸锑钾溶液：0.3g酒石酸锑钾溶于水中，稀释至100ml。
4、钼锑贮备液：10.0g钼酸铵溶于300ml约60℃水中，冷却。
181ml浓硫酸缓缓注入800ml水中，搅匀，冷却。
将稀硫酸注入钼酸铵溶液中，搅匀，冷却。
再加入100ml酒石酸锑钾溶液，最后用水稀释至2L，盛于棕色瓶中。
5、钼锑抗显色剂：0.5g抗坏血酸（C6H8O6左旋，旋光度+21~22°）溶于100ml 钼锑贮备液中，应用时现配。
二、磷标准溶液配制1、磷标准贮备液：称取经105℃下烘干2h的磷酸二氢钾（优级纯）0.4390g，用水溶解后，加入5ml浓硫酸，然后加水定容至1000ml，放入冰箱可长期使用。
2、磷标准溶液：吸取5.00ml磷标准贮备液于100ml容量瓶中，定容，现配现用。
3、标准曲线：吸取磷标准溶液0，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00ml于25ml 比色管中，加入浸提剂10.00ml，显色剂5ml，慢慢摇动，排出ＣＯ2后加水定容至刻度。
浓度依次为0.00，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50，0.60μg/ml，在室温高于20℃处放置30min后测定。
三、分析步骤称取2mm土样2.50g，置于200ml塑料瓶中，加入碳酸氢钠浸提剂50.0ml，摇匀，于振荡器上用200转/min频率振荡30min，立即用无磷滤纸过滤于干燥的150ml 三角瓶中。
吸取滤液10.00ml于25ml比色管中，加入显色剂5.00ml，慢慢摇动，排出ＣＯ2后加水定容至刻度，充分摇匀。
在室温高于20℃处放置30min后测定。
用0浓度磷标液做参比，用1cm光径比色皿在波长880nm处比色测定。
四、计算公式有效磷，mg/kg=ρ×125/m。
碳酸氢钠浸提-钼锑抗分光光度法测定土壤中的有效磷
在 波 长 ８ ０ｎ 处 测 量 吸 光 度 。 当 取 样 量 为 ２ ５ ８ ｍ ．０ ｇ时 ， 用 ５ 使 ０ ｍＬ碳 酸 氢 钠 溶 液 浸 提 ， 用 １ｃ 比 色 皿 ， 出 限 为 使 ｍ 检 ０４ｍ ／ ｇ 测 定 下 限 为 １６ｍ ／ ｇ 满 足 了 土 壤 有 效 磷 的监 测 要 求 。 ． ｇ ｋ ， ． ｇ ｋ ，
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土壤 有效磷的测定 方法验证报告
HJ 704-2014土壤有效磷的测定碳酸氢钠浸提-钼锑抗分光光度法验证报告1、目的通过对实验人员、设备、物料、方法、环境的能力确认，验证实验室均已达到各种要求，具备开展此实验的能力。
2、方法简介用0.5mol/l碳酸氢钠溶液浸提土中的有效磷，浸提土壤中的有效磷与钼锑抗反应生成磷钼蓝后，于880nm处测定吸光度。
3、仪器设备及药品验证情况3.1使用仪器设备：SP-722分光光度计、比色管50ml、容量瓶50ml/100ml、移液管0.5ml/1 ml/2ml/5ml/10ml、烧杯100ml/200ml、电子天平。
3.2设备验证情况设备验收合格。
4、环境条件验证情况4.1本方法对环境无特殊要求。
4.2目前对环境的设施和监控情况天平室环境指标：温度:22℃;湿度57%。
4.3环境验证条件符合要要求5、人员能力验证5.1该项目人员配备情况有二名以上符合条件的实验人员。
5.2人员培训及考核情况通过培训，考核合格，相关记录见人员技术档案。
6、标准物质及试剂验证情况6.1方法所需标准（物质）溶液及试剂情况表6.16.2配备情况表6.27、方法验证情况7.1方法要求7.11检出限：方法检出限为：0.5mg/kg。
精密度：方法无要求。
准确度：向空白样品中加入4ml的5ug/ml的标准溶液。
7.2目前该项目本实验的精密度、检出限、准确度的实际水平。
7.21精密度表7.2.1测得实验室相对标准偏差1.66%。
7.22准确度在空白液中中加入4mL的5ug/ml总磷标准溶液，加标后测得含量如下：表7.2.2加标回收率测定结果测得回收率97.5%，符合要求。
7.23检出限7.23空白测定结果表得出检测限为0.007mg/L，符合方法要求。
8、结论仪器设备验证合格、环境条件验证合格、人员能力验证合格、试剂验证合格、方法验证合格，即设备、环境、人员、物料均符合实验方法要求，实验室具备开展此项目的条件。
9、附件（记录）编制批准日期日期。
Olsen法测定土壤中有效磷的方法优化及检测研究
Olsen法测定土壤中有效磷的方法优化及检测研究张飞龙【摘要】土壤有效磷含量的测定最常用的方法是碳酸氢钠浸提—钼锑抗比色法(Olsen法).该方法测定过程中有机质对测定值影响比较大,一般采用无磷活性炭吸附的办法去除有机质的干扰.据《土壤分析技术规范》注释,测定时可建议采用紫外可见分光光度计于波长880nm处比色,此波长处对浸出的有机质已基本无吸收,浸提时可不加活性炭.本实验拟探讨这两种方法对土壤有效磷测定值的影响.实验结果表明,在紫外波长880nm处对土壤有机质背景的干扰能够有效的去除,测定值结果相较与传统的活性炭法没有显著性差异,测定过程具有准确、简单、快捷、低成本的优势.故采用紫外可见分光光度计于波长880nm处比色能够准确的测定土壤有效磷.【期刊名称】《西藏农业科技》【年(卷),期】2016(038)004【总页数】5页(P33-37)【关键词】有效磷;有机质;紫外可见分光光度计;无磷活性炭【作者】张飞龙【作者单位】西藏自治区农牧科学院农业质量标准与检测研究所西藏拉萨·850032【正文语种】中文磷是作物生长必须的大量营养元素之一，土壤有效磷的含量决定了是否继续施用磷肥的主要因素，在农业生产中一般采用土壤有效磷的指标来指导施用磷肥[1-5]。
土壤有效磷的测定通常采用碳酸氢钠法-钼锑抗比色法( Olsen法)进行磷含量的测定，该方法是浸提土壤有效磷最经典、传统的方法。
由于该方法与作物对磷肥的反应相关性好，在我国被作为常规土壤测试方法被采用，该方法是 1954 年Olsen 等人提出的，适合弱酸性到碱性 pH 范围的土壤。
其作用原理为磷酸根与钼酸铵作用生成磷钼杂多酸，加入还原剂将其还原成磷钼杂多蓝后可用分光光度法测定其含量[6-9]。
磷钼蓝法常用的还原剂有氯化亚锡、1,2,4-胺基萘酚磺酸、硫酸联氨、抗坏血酸等[10]。
土壤有效磷的速测方法多用氯化亚锡作还原剂，氯化亚锡的灵敏度高，显色快，但颜色不稳定。
土壤有效磷的测定 碳酸氢钠浸提-钼锑
7 参考文献.................................................................................................................................18 附一：方法验证报告 ..................................................................................................................... 19
目录
1 项目背景...................................................................................................................................1 1.1 任务来源...........................................................................................................................1 1.2 工作过程...........................................................................................................................1
土壤-有效磷的测定-方法验证报告
土壤检测第7部分土壤有效磷的测定NY/T 1121.7-2014方法验证报告1、目的通过对实验人员、设备、物料、方法、环境的能力确认，验证实验室均已达到各种要求，具备开展此实验的能力。
2、方法简介利用氟化铵-盐酸溶液浸提除溶液里的有效磷，利用碳酸氢钠溶液浸提出中性或石灰性土壤的有效磷，用钼锑抗比色法测定磷的含量。
3、仪器设备及药品验证情况3.1使用仪器设备：SP-722分光光度计、比色管50ml/25ml、容量瓶50ml/100ml/250m/1000ml、移液管0.5ml/1 ml/2ml/5ml/10ml、烧杯100ml/200ml、电子天平。
3.2设备验证情况设备验收合格。
4、环境条件验证情况4.1本方法对环境无特殊要求。
4.2目前对环境的设施和监控情况天平室环境指标：温度:26℃;湿度52%。
4.3环境验证条件符合要要求5、人员能力验证5.1该项目人员配备情况有二名以上符合条件的实验人员。
5.2人员培训及考核情况通过培训，考核合格，相关记录见人员技术档案。
6、标准物质及试剂验证情况6.1方法所需标准（物质）溶液及试剂情况6.1表6.2配备情况6.2表7、方法验证情况7.1方法要求7.11检出限：方法无要求。
精密度：方法无要求。
准确度：测定加标回收率。
7.2目前该项目本实验的精密度、检出限、准确度的实际水平。
7.21精密度表7.21中性或石灰性测得实验室相对标准偏差1.74%。
表7.21酸性测得实验室相对标准偏差1.31%。
7.22准确度在已知浓度中加入2 mL的5 ug/ml总磷标准溶液，加标后测得含量如下：7.2.2加标回收率测定结果表（酸性）测得回收率94.4%，符合要求。
在已知浓度中加入4 mL的5 ug/ml总磷标准溶液，加标后测得含量如下：7.2.2加标回收率测定结果表（中性或石灰性）测得回收率95.8%，符合要求。
7.23检出限7.23空白测定结果表（酸性）得出检测限为0.015mg/L，符合方法要求。
土壤 有效磷的测定 碳酸氢钠浸提-钼锑抗分光光度法 .pdf
目 次前言 (ii)1 适用范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 术语和定义 (1)4 方法原理 (1)5 干扰和消除 (1)6 试剂和材料 (1)7 仪器和设备 (2)8 样品 (3)9 分析步骤 (3)10 结果计算 (4)11 精密度和准确度 (4)12 质量保证和质量控制 (5)13 注意事项 (5)附录A （资料性附录）平行样测定允许差范围 (6)i前 言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》，保护环境，保障人体健康，规范土壤中有效磷的测定方法，制定本标准。
本标准规定了测定土壤中有效磷的碳酸氢钠浸提-钼锑抗分光光度法。
本标准为首次发布。
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由环境保护部科技标准司组织制订。
本标准主要起草单位：南通市环境监测中心站。
本标准验证单位：江苏省环境监测中心、扬州市环境监测中心站、镇江市环境监测中心站、南通市农产品质量检验测试中心、苏州市环境监测中心站和南通市通州区环境监测站。
本标准环境保护部2014年09月15日批准。
本标准自2014年12月01日起实施。
本标准由环境保护部解释。
ii土壤 有效磷的测定 碳酸氢钠浸提-钼锑抗分光光度法1适用范围本标准规定了测定土壤中有效磷的碳酸氢钠浸提-钼锑抗分光光度法。
本标准适用于石灰性和中性土壤中有效磷的测定。
当取样量为2.50 g，使用50ml碳酸氢钠溶液浸提，采用10 mm比色皿时，本方法检出限为0.5 mg/kg，测定下限为2.0 mg/kg。
2规范性引用文件本标准内容引用了下列文件或其中的条款。
凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
HJ/T166 土壤环境监测技术规范HJ 613 土壤干物质和水分的测定重量法NY/T 395-2012 农田土壤环境质量监测技术规范3术语和定义土壤有效磷 available phosphorous缩写为A-P，也称为速效磷，在植物生长期内能够被植物根系吸收的土壤磷，即在本标准规定的条件下浸提出来土壤溶液中的磷、弱吸附态磷、交换性磷和易溶性固体磷酸盐等。
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土壤有效磷的测定
A 碳酸氢钠提取—钼锑抗比色法(olsen法)
1、方法提要
碳酸氢钠溶液除可提取水溶性磷外，也可以抑制Ca2+的活性，使一定量活性较大的Ca-P盐类中的磷被浸出，也可使一定量活性Fe-P和Al-P盐类中的磷通过水解作用而浸出。
由于浸出液中Ca、Fe、Al浓度较低，不会产生磷的再沉淀。
浸提液中的磷可用钼锑抗比色法定量测定。
土壤浸出的磷量与土液比、液温、振荡时间及方式有关。
本法严格规定土液比为1：20，浸提液温度为25℃±1℃，振荡提取时间为30min。
2、适用范围
本方法适用于石灰性土壤有效磷含量的测定；中性土壤及水稻土也可参照使用。
3、主要仪器设备
3.1分光光度计或紫外—可见分光光度计；
3.2恒温(25℃±1℃)往复式或旋转式振荡机，或普通振荡机及恒温室，满足180r/min±20r/min的振荡频率或达到相同效果；
3.3塑料瓶，200mL；
3.4无磷滤纸。
4、试剂
4.1无磷活性碳粉：如所用活性含磷，应先用1：1盐酸溶液浸泡24h，然后移至平板漏斗抽气过滤，用水淋洗到无Cl-为止(约4~5次)，再用碳酸氢钠浸提剂浸泡24h，在平板漏斗上抽气过滤，用水洗尽碳酸氢钠，并至无磷为止，烘干备用；
4.2氢氧化钠溶液[ρ(NaOH)=100g·L-1]：称取10g氢氧化钠溶于100mL水中；
4.3碳酸氢钠浸提剂[ρ(NaHCO3)=0.5mol·L-1，PH=8.5]称取42.0g碳酸氢钠(NaHCO3)溶于约950mL水中，用100g·L-1氢氧化钠溶液调节PH至8.5(用酸度计测定)，用水稀释至1L。
贮存于聚乙烯瓶或玻璃瓶中备用。
如贮存期超过20d，使用时须重新校正PH；
4.4酒石酸锑钾溶液[ρ(K(SbO)C4H4O6·1
2
H2O)=3g·L-1]：称取0.3酒石酸
锑钾溶于水中，稀释至100mL；
4.5钼锑贮备液：称取10.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]溶于300mL约60℃水中，冷却。
另取181mL浓硫酸缓缓注入800mL水中，搅匀，冷却。
然后将稀硫酸注入钼酸铵溶液中，搅匀，冷却。
再加入100mL3 g·L-1酒石酸锑钾溶液，最后用水稀释至2L，盛于棕色瓶中备用；
4.6钼锑抗显色剂：称取0.5g抗坏血酸(C6H8O6左旋，旋光度+21~22°)溶于100mL钼锑贮备液中。
此溶液有效期不长，应用时现配。
4.7磷标准贮备液[ρ(P)=100μg·mL-1]：准确称取经105℃下烘干2h的磷酸二氢钾(优级纯)0.4390g，用水溶解后，加入5mL浓硫酸，然后加水定容至1000mL。
该溶液放入冰箱可供长期使用；
4.8磷标准标准液[ρ(P)=5μg·mL-1]：吸取
5.00mL磷标准贮备液于100mL 容量瓶中，定容。
该溶液用时现配。
5、分析步骤
称取通过2mm孔径筛的风干试样2.50g，置于200mL塑料瓶中，加入约1g 无磷活性炭，加入25℃±1℃的碳酸氢钠浸提剂50.0mL，摇匀，在25℃±1℃温度下，于振荡器上用180r/min±20r/min的频率振荡30±1min，立即用无磷滤纸过滤于干燥的150mL三角瓶中。
吸取滤液10.00mL于25mL比色皿中，加入显色剂5.00mL，慢慢摇动，排出CO2后加水定容至刻度，充分摇匀。
在室温高于20℃处放置30min，用空白溶液(以10.00mL碳酸氢钠浸提剂代替土壤浸提液，同上处理)为参比，用1cm光径比色皿在波长700nm处比色，测量吸光度。
标准曲线绘制：吸取磷标准溶液[ρ(P)=5μg·mL-1]0、0.5、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL于25mL比色管中，加入浸提剂10.00mL，显色剂5mL，慢慢摇动，排出CO2后加水定容至刻度。
此标准系列溶液中磷的浓度依次为0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60μg·mL-1。
在室温高于20℃处放置30min后，按上述样品待测液分析步骤、条件进行比色，测量吸光度，绘制标准曲线或计算回归方程。
6、结果计算
有效磷(P)，mg·kg-1=
(P)V D
m
ρ⋅⋅
式中：ρ(P)—查标准曲线或求回归方程而得测定液中P的质量浓度，μ
g·mL-1；
V—显色液体积，25mL；
D—分取倍数，即试样提取液体积/显色时分取体积，本试验为50/10；
m—风干试样质量，g；
平行测定结果以算术平均值表示，保留小数点一位
7、精密度
平行测定结果的允许误差
测定值(P，mg·kg-1) 允许差(P，mg·kg-1)
＜10 绝对差值≤0.5
10~20 绝对差值≤1.0
＞20 相对相差＜5%
8、注释
⑴测定时也可采用于波长880nm处比色，浸提时可不加活性碳退色。
⑵如果土壤有效磷含量较高，应减少浸提液的吸样量，并加浸提剂补足至
10.00mL后显色，以保持显色时溶液的酸度。
计算时按所取浸提液的分取倍数计算。
⑶用NaHCO3溶液浸提有效磷时，温度影响较大，应严格控制浸提温度。
⑷土样经风干和贮存后，测定的有效磷含量可能稍有改变，但一般无大影响。