蓝莓组织培养中污染褐变玻璃化的防止措施
组织培养褐化原因以及防止措施
褐化原因及防止措施褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散致使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。
在组织培养中，褐变是普遍存在的，这种现象与菌类污染和玻璃化并称为植物组织培养的三大难题。
而控制褐变比控制污染和玻璃化更加困难。
因此，能否有效地控制褐变是某些植物能否组培成功的关键。
(一)褐变的原因影响褐变的因素极其复杂，随着植物种类、基因型、外植体的部位及生理状况等的不同，褐变的程度也有所不同。
1.与基因型有关不同植物与品种之间褐变现象是不同的，有人把此归结为基因型的不同。
一般来说植物材料中单宁类和多种羟酚类化合物的含量高，易引起外植体材料的严重褐化。
多数木本植物比草本植物易引起褐化，多年生草本植物比一年生草本植物易引起褐化。
2.与取样外植体的年龄有关通常幼龄部位产生褐化较轻，随着组织的老龄化含醌类物质增多而褐化加重。
因此，在外植体接种时常需要剥去鳞片和大叶片，尤其是以切取幼嫩的芽尖或切取顶芽分生组织(或带少量叶原基)接种更为理想。
3.与外植体取材时间有关一般在春夏季，尤其是春季采取生长旺盛的外植体产生褐化较轻，已木栓化或木质化的枝条和处于休眠状态的芽作为外植体时褐化严重。
即分生部位接种后形成醌类物质少，而分化的部位则形成醌类物质较多。
4.与培养基有关过高的无机盐浓度会引起棕榈科植物外植体酚的氧化，低盐培养基，尤其是Mn2+和 Cu2+离子浓度较低时，外植体的褐化程度较轻。
例如油棕用MS无机盐培养容易引起外植体的褐变，而用降低了无机盐浓度的改良MS培养基时则可减轻褐变，而且获得愈伤组织和胚状体。
植物生长调节物质使用不当时，材料也容易褐变，细胞分裂素BA有刺激多酚氧化酶活性提高的作用，这一现象在甘蔗的组织培养中十分明显。
培养基的PH值较低时常有利于减轻外植体的褐化。
植物组织培养中的褐变现象与防止方法
植物组织培养中的褐变现象及其防止措施摘要：细胞受损后，由于细胞区隔作用被破坏，毒性酚类或其氧化物醌类物质毒害细胞，导致组织褐变，植物组织培养过程中培养低效或失败。
目前认为组织培养中褐变程度主要受外植体材料的基因型、生理状态、种类、大小、预处理、培养条件、培养基及培养方式的影响。
在目前的研究中控制褐变的有效方法主要有低温培养、暗培养、勤转种、添加抗氧化剂、增效剂或吸附剂于培养基中等。
关键词:植物;组织培养;褐变;防治方法褐变是植物组织培养中一种普遍存在的现象，是由于组织中多酚氧化酶被激活，使细胞酚类物质被氧化而产生棕褐色醌类物质，这种褐变现象又被称为酚污染。
多酚类物质及其氧化物醌类物质会抑制其它酶的活性，从而毒害整个外植体，严重影响外植体的脱分化、再分化和生长。
褐变这种现象与菌类污染和过度含水化(即玻璃化)并称植物组织培养的3 大难题。
目前褐变已成为植物组织培养发展的一大障碍[1]。
1 褐变现象的原因1.1 非酶促褐变非酶促褐变是由于细胞受胁迫或其他不利条件影响所造成的细胞程序化死亡或自然发生的细胞死亡，即坏死形成的褐变现象，并不涉及酚类物质的产生。
诸多不利条件都可以造成细胞的程序化死亡，但这种褐变若采取适当措施或者愈伤组织适应了胁迫环境就不再发生。
1.2 酶促褐变多数认为，植物组织培养中的褐化现象主要是由酶促褐变引起的，即由多酚氧化酶( P PO ，Polyphenol Oxidase) 作用于天然底物酚类物质而引起的。
在正常条件下,细胞中的酚和醌之间保持一种动态平衡,醌类物质水平较低;而酚氧化酶及其底物分布在正常组织的不同部位，酚类物质分布在细胞的液泡内，酶则分布在各种质体或细胞质内，这种区域性分布致使底物与酶被质膜分隔开来；但当外植体或培养材料处于机械损伤等逆境，或细胞受伤或衰老时，细胞膜结构或细胞中物质区域化分布的破坏会导致酚氧化酶释放或合成，如果此时在合适的pH 和温度等条件下，酚氧化酶、酚类（底物）和氧发生酶促氧化反应，形成有毒的棕褐色醌类物质,从而使组织发生褐变。
植物组织培养中褐变机理和防治措施
植物组织培养中褐变机理和防治措施摘要：褐变现象是指组织培养诱导脱分化或再分化的过程中，外植体组织从表面向培养基释放褐色物质而使得培养基逐渐变成褐色，外植体随之褐变死亡的现象，褐变现象又称酚污染，在植物组织培养过程中经常出现。
对诱导外植体的脱分化和培再分化过程的影响非常大，甚至是影响某些植物组织培养成功与否的关键。
褐变主要发生在外植体、愈伤组织的继代、悬浮细胞培养、原生质体的分离与培养等。
褐变产物不仅使外植体、细胞、培养基等变褐，而且对许多酶有抑制作用，从而影响培养材料的生长与分化，严重时甚至导致死亡。
本文对褐变的影响因素和对策进行了研究。
关键词：组织培养，褐变，影响因素1. 影响褐变的因素因子是复杂的，随植物的种类、基因型、外植体部位及生理状态等的不同，褐变的程度也有所不同。
1.1褐变类型及基因型物种及其基因型对褐化的影响。
植物组织培养过程中外植体的褐化主要由多酚氧化酶作用于酚类物质而引起的。
不同植物品种、同种植物的不同类型因为外植体材料的基因型不同，在组织培养中褐化发生的频率和程度都存在着较大的差异[4]。
由于酚类的糖苷化合物是木质素、单宁和色素的合成前体，木本植物、单宁含量或色素含量高的植物酚类物质含量也很高，木质素、单宁或色素形成多，其组织培养就容易发生褐变。
因此，组织培养过程中，木本植物一般比草本植物易发生褐变。
目前报道发生褐变的植物中多数是木本植物[5]。
在木本植物中，核桃、板栗由于单宁含量很高，进行组织培养难度很大，不仅在接种后的初代培养期容易发生褐变，而且在形成愈伤组织以后也会因为褐变而引起死亡。
红豆杉愈伤组织的诱导及继代培养过程中，常常发生培养细胞褐变现象，轻者影响细胞生长和繁殖，重者导致细胞死亡。
豆科植物和芸苔属植物原生质体培养中容易褐化也是一个普遍的问题，橡胶的花药培养中，海垦2号花药的褐变较少，因而愈伤组织的诱导容易；而有些品系花药容易褐变，因而愈伤组织的诱导困难。
在组织培养中，有些品种、品系难以成功，而有些则容易成功。
植物组织培养中的褐变现象及其防止措施
04
褐变现象的研究进展
褐变与基因表达的关系
总结词
褐变与基因表达之间存在密切关系，一些关 键基因在褐变过程中被激活或抑制，影响植 物组织的褐变程度。
详细描述
在植物组织培养过程中，褐变通常与某些基 因的表达水平有关。这些基因可能涉及到酚 类物质的合成、代谢和运输等过程。通过深 入研究这些基因的表达模式，可以更好地理 解褐变现象的分子机制，并寻找有效的防止 措施。
添加抗氧化剂
总结词
在培养基中添加抗氧化剂可以有效防止褐变。
详细描述
抗氧化剂可以抑制酚类物质氧化，从而减少褐变的发生。常用的抗氧化剂包括 抗坏血酸、柠檬酸、硫代硫酸钠等。在培养基中加入适量的抗氧化剂，可以有 效降低酚类物质的氧化程度，从而防止褐变。
调节光照和温度
总结词
调节光照和温度也是防止褐变的措施之一。
详细描述
光照和温度对植物组织培养中的褐变也有影响。适当降低光照强度或缩短光照时间可以减少酚类物质 的氧化，从而降低褐变发生率。同时，保持恒定的培养温度也有助于防止褐变的发生。
优化培养条件
总结词
优化培养条件是防止褐变的综合性措施 。
VS
详细描述
除了选择适当的培养基和外植体、添加抗 氧化剂、调节光照和温度等措施外，优化 培养条件也是防止褐变的重要措施。这包 括控制培养室的湿度、定期更换新鲜的培 养基、及时转移生长过快或过慢的植株等 措施。通过综合运用这些措施，可以有效 降低植物组织培养中的褐变发生率。
05
结论与展望
研究成果总结
褐变现象的机制
植物组织培养中的褐变现象是由多种因素引起的，包括酚类物质氧化、酶促反应和非酶 促反应等。这些反应导致培养基颜色变深，影响植物的正常生长和发育。
植物组培中玻璃化现象及其预防措施
植物组培中玻璃化现象及其预防措施在植物组织培养过程中，叶片和嫩梢呈透明或半透明水浸状的培养物称为玻璃化苗，它是组培苗的一种生理失调症状。
玻璃化大大降低了试管苗有效增殖系数，严重影响了试管苗质量，造成人、财、物的极大浪费，必须对玻璃化加以控制。
1、玻璃化苗的特点与发生原因（1）玻璃化苗的特点在形态解剖与生理上，玻璃化苗有如下特点：①玻璃化苗植株矮小肿胀、失绿、叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎②叶表面缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，仅有海绵组织而无栅栏组织③体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低④吸收营养与光合功能不全，分化能力大大降低，苗生长缓慢、繁殖系数大为降低，甚至死亡⑤生根困难，移栽成活率低（2）发生原因玻璃化苗是在芽分化启动后的生长过程，碳、氮代谢和水分发生生理性异常所引起。
其实质是植物细胞分裂与体积增大的速度超过了干物质生产和积累的速度，植物只好用水分来充涨体积，从而表现玻璃化。
不同作物种类或品种，玻璃化的发生频率各不相同，在情人草中较少见，香石竹中则较普遍。
2、影响玻璃化苗产生的因素（1）生长调节剂细胞分裂素和生长素的浓度及其比例均影响玻璃化苗产生。
高浓度的细胞分裂素有利于促进芽的分化，也会使玻璃化苗的发生比例提高。
不同的植物发生玻璃化的生长调节剂水平不相同，如香石竹的部分品种在BA 0.5mg/L时就有玻璃化发生。
同一植物的不同阶段对细胞分裂素的要求也不同，在某些特定阶段可忍受较高的浓度，而在其他阶段的培养中，却只需要较低的浓度，如非洲菊只有在BA 2-10mg/L时才能诱导幼花托脱分化形成愈伤组织，并在愈伤组织上诱导不定芽;而在丛生芽增殖过程中，BA 1 mg/L即可满足要求。
细胞分裂素与生长素的比例失调，细胞分裂素的含量显著高于两者之间的适宜比例，使试管苗正常生长所需的生长调节剂水平失衡，也会导致玻璃化的发生。
（2）温度随着培养温度的升高，苗的生长速度明显加快，但高温达到一定限度后，会对正常的生长和代谢产生不良影响，促进玻璃化的产生。
植物组织培养中常见问题与对策
植物组织培养中常见问题与对策作者：祁建国来源：《现代园艺》2012年第16期摘要：从植物组织培养中常见的污染、褐化、玻璃化现象等问题入手，分析了其形成的原因，并结合自身工作经验提出针对性的解决策略，对植物的组织快繁和工厂化育苗具有一定的参考意义和借鉴价值。
关键词：组织培养；污染；褐化；黄化1 污染问题及对策1.1 污染原因分析控制污染是组培过程中的首要技术。
造成污染的原因很多，如外植体的种类、取材的季节、时间、预处理方法、消毒药剂的种类、浓度、消毒时间以及消毒方法、培养基和器皿灭菌、操作人员、工作环境的要求、超净工作台的工作质量等都与污染密切相关。
一般来说，组培污染源分为3大类：材料带菌、接种污染、培养过程感染。
1.2 对策选择合理的外植体种类、取材的季节、时间、初代接种选取大小适宜的外植体。
在组培中应选取带菌较少或不带菌体的材料作为外植体。
对母株预处理，改善植株栽培环境，对母株喷布杀菌剂或抗生素。
改变灭菌方法，使用真空减压灭菌、多次消毒灭菌、混合消毒液、灼烧等。
在培养基中加入其它抑菌剂。
切分潜在的带菌材料时，要保证所用的接种工具已经过彻底的消毒；继代培养时确保污染的材料应给予丢弃。
针对接种污染，要做到紫外灯接种室消毒，清洗超净工作台；接种工具、材料不要与酒精灯、超净工作台铁网面、台面接触；接种人员接种时用酒精棉擦手或用浓度为75 %的酒精喷洒双手，接种时应穿上无菌的白大衣，戴上帽子和口罩；无菌室要注重平时除湿和熏蒸消毒工作。
培养过程中要定期对培养室进行消毒处理，及时清除污染材料，污染的材料及仪器必须经过药液消毒后方可使用。
2 褐化问题及控制措施2.1 褐化概念及原因分析褐化是指在植物组织培养过程中，外植体在诱导脱分化或再分化时，自身组织由其表面向培养基释放褐色物质，以致培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。
褐化一般分为2种：由于细胞受胁迫或其它不利条件影响所造成的细胞死亡而形成的褐化现象；由于酚类物质被多酚氧化酶氧化所引起的褐化。
植物组培中玻璃化现象及其预防措施
低 的浓度 ， 如非 洲 菊 只有 在 Ｂ ～ ０ ／ 才能 诱 Ａ ２ １ｍｇ Ｌ时 导 幼 花托 脱 分化形 成 愈 伤组 织 ， 在愈 伤 组 织上 诱 并
导不 定芽 ；而在丛 生 芽增 殖过 程 中 ， Ａ １ ／ Ｂ ｍｇ Ｌ即可
１ 玻璃化苗 的特 点与发 生原 因
ＮＨ ＋ ４水平 的 Ｂ ５培 养基 。 （ ） 加 自然光 照 ， 照 强度 较 弱 时 ， ６增 光 可通 过 延 长 时 间进行 补偿 。
的 消毒 和清 洗后很 容 易水渍 状 ， 继而 产生 玻璃 化 。
２５ 光 照 时 间 ．
光 照影 响 光合 作 用 和碳 水 化 合 物 的合 成 ， 照 光
普遍 。
２ 影 响玻 璃 化 苗产 生 的 因素
２１ 生长调 节剂 ．
正常 的比例很 低 ， 继代 培养 中仍 然形成 玻璃 苗 ， 玻 且 璃苗 的分化 能 力低 下 ， 以增 殖 生 根成 苗 。由于 玻 难 璃苗 的生 理功 能异 常 ， 以移栽 成活 ， 难 因此 玻璃苗 的
试 管苗 玻璃 化研究 的重 点 。■
信 资 息 讯
鬻 ０
杭州 农业科学研霪陀 验． 获得食晶检验机构资质 １ ，
日前 ， 州 市农 科 院 实验 中心通 过 省 级计 量 认 证 复评 审 和 扩项 评 审 ， 杭 同时获 得 食 品
检验 机构 资 质认 定证 书 ，获 准 的检测 项 目由原 来 的 １５项 扩 展 到 ２０项 ，覆 盖 土壤 、 ６ ７ 水 质、 空气 、 品 、 食 植物 性食 品 、 物源 性食 品 、 产 品 、 叶 、 料等领 域 。 动 水 茶 饲 至此 ， 州市 农 科 院 实验 中心 已有 中 国合 格 评 定 国家 认 可 委实 验 室认 可 、 江 省计 杭 浙 量认 证 、 业 部农 产 品质 量安 全检 测机 构 、 品检 验机 构 等 四项 资质 。为 更好 的服 务 “ 农 食 三 农 ”提高杭 州 市农产 品质量安 全水 平作 贡献 。 、
植物组培过程中培养物的玻璃化及其防治方法
植物组培过程中培养物的玻璃化及其防治方法
当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，苗体趋于透明，其茎、叶表面无蜡质，这种现象通常称为玻璃化。
玻璃化为组培苗的生理失调症，它的出现会使组培苗生长缓慢、繁殖系数有所下降，玻璃化的嫩茎不宜诱导生根。
1 导致玻璃化的主要因素：
① 材料差异，在不同的种类、品种间，组培苗的玻璃化程度有所差异。
② 激素水平过高,若细胞分裂素浓度过高或细胞分裂素与生长素相对含量高，易引起玻璃化现象。
③ 培养基水势，培养基中离子种类,比例不适。
④ 环境温度、光照强度和通气性。
温度过低或过高,光照时间强度不足及培养容器中空气湿度过高，透气性较差所造成的通气不良,易造成组培苗含水量高,从而发生玻璃化现象。
⑤ 琼脂浓度降低、有杂质等。
2 常用的防治措施有
① 增加光照强度和光照时数。
② 降低细胞分裂素含量。
在培养基中添加少量聚
乙烯醇、脱落酸等物质，能够在一定程度上减轻玻璃化的现象发生
③ 增大培养基中琼脂的含量，以降低培养基的水势
④ 降低NH4+浓度，减少培养基中含氮化合物的用量
⑤ 增加容器通风，最好进行 CO2施肥，这对减轻组培苗玻璃化的现象有明显的作用；
降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻组培苗玻璃化的现象发生；。
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蓝莓组织培养中污染褐变玻璃化的防止措施作者：于永梅王冰余海英
来源：《现代农业科技》2018年第10期
摘要在蓝莓组培过程中很容易产生污染、褐变、玻璃化等现象，这些都直接限制了蓝莓规模化生产。
本文总结了蓝莓组织培养过程中污染、褐变、玻璃化现象的主要防止措施，以期为蓝莓组织培养提供参考。
关键词蓝莓；组织培养；污染；褐变；玻璃化；防止措施
中图分类号 S633.9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）10-0105-02
蓝莓为多年生小灌木树种，春季早花，夏季果熟，入秋叶呈红色，观赏效果极佳，可作为观光果园栽培树种，也可制作盆景；其果实中含有花青素、黄酮等多种多酚类生理活性成分，具有明目、防止脑神经衰老、抗癌、抗氧化等多种生理活性功能，越来越受到消费者的青睐，经济价值较高，市场潜力巨大，开发前景广阔。
蓝莓组培育苗技术的研究，采用蓝莓组培快繁技术，短期内获得大量的无病毒苗木。
探讨蓝莓苗木的工厂化技术育苗体系，有助于我国蓝莓产业化发展，满足社会需求[1-2]。
但在蓝莓组培过程中，很容易产生污染、褐变、玻璃化等现象，限制了蓝莓的组培快繁和大规模生产，是目前急需解决的关键问题。
笔者总结了蓝莓组织培养繁育中常出现的污染、褐变、玻璃化的防止措施，对蓝莓苗木的快速繁殖和推广具有重要意义。
1 污染
1.1 操作人员注意卫生
首先要注意工作人员卫生，工作人员进入无菌室不能吃东西、吸烟等，应常剪指甲。
工作服要每周清洗消毒1次，夏季要每3 d清洗消毒1次，工作服灭菌后在缓冲室更换；一次性用品要及时更换，口罩、帽子要经常清洗。
进入无菌室前要用肥皂洗手，进入培养室后再用75%酒精对双手进行消毒[3]。
1.2 改善接种室环境条件
接种室应保持密闭、洁净；培养室应控制空气相对湿度在70%左右，湿度太高时可用抽湿机除湿。
每次接种前均应清洁接种室的地面，并喷75%酒精沉降灰尘，然后打开紫外灯灭菌20～30 min，紫外灯灭菌结束后，用75%酒精擦洗工作台面。
每次接种结束时，应清洁接种室的地面，并定期清洗无菌操作台的过滤膜和用甲醛熏蒸接种室[4]。
1.3 对培养基及接种工具彻底灭菌
培养瓶在使用之前要彻底清洗，所用的培养基以及接种过程中使用的器具也要严格灭菌。
一是培养基灭菌。
培养基需要在121 ℃条件下灭菌20～30 min，一般灭菌后的培养基不能放置太久，1～2 d内用完最好，最长不能超过1周，以减少培养瓶污染。
二是接种器具灭菌。
将接菌器具用报纸、牛皮纸等包扎严密，进行高温高压灭菌。
由于采用的是高压湿热灭菌，外层包裹的报纸易破，故要轻拿轻放。
一旦报纸、牛皮纸等破裂，灭菌的工具与空气接触，就必须重新灭菌[5]。
1.4 严格选择及消毒外植体
一般情况下选择在春季晴天中午采集外植体，尽量选择温室内的植株或新生嫩芽。
外植体消毒前先剪掉多余的枝、叶等组织，然后用自来水冲洗表面的灰尘和杂物，大约冲洗30 min。
外植体消毒在超净工作台上进行，将修剪、冲洗后的外植体放入烧杯中，用洗涤剂水浸泡3 min后，用水冲洗干净，然后用无菌水冲洗1遍，再用次氯酸钠或0.1%升汞溶液浸泡10～30 min（视植株品种幼嫩程度而定）消毒，消毒后用无菌水冲洗4～5遍。
注意消毒剂对植物有毒害作用，应正确选择消毒剂的浓度、种类和处理时间，尽量减轻对外植体的伤害。
1.5 合理添加抗生素
在培养基中添加抗生素的主要目的是防止外植体内生菌造成的污染，减少培养材料的损失。
但是，在使用抗生素时，必须明确使用的抗生素是否会对培养的植物组织有不良影响以及抗生素抑制的病菌种类、使用浓度和处理时间。
因为不存在对所有微生物都有效的抗生素，所以在培养基中添加抗生素只能作为防止污染的辅助措施[4]。
2 褐变
2.1 选择适当的外植体
不同时期和年龄的外植体在培养中褐变的程度不同。
因此，选择适当的外植体是克服褐变的重要手段。
旺盛生长状态的外植体，分生能力较强，其褐变程度低，是组培的首选材料。
Danhua和Carole研究了外植体起源与组织褐变的关系，认为腋生枝的顶芽较其他部位枝的顶芽褐变率低，生长在避荫处的外植体较全光下的褐变率低[5]。
2.2 对外植体进行预处理
预处理可减轻酚类物质对外植体的毒害作用。
外植体经流水处理后，置于冰箱（5 ℃左右）中12～20 h后，先接种到只添加蔗糖的琼脂培养基中培养5～7 d，使外植体组织中部分酚类物质渗入培养基，然后取出外植体用0.1%氯化汞溶液浸泡10 min，再接种到合适的培养基中培养，可有效抑制褐变。
2.3 选择合适的培养基和培养条件
培养基中适宜的无机盐成分、蔗糖浓度、激素组合、激素水平以及抗褐变剂可减轻褐变现象。
通过改良WPM培养基有利于抑制外植体的褐变，通过增加琼脂用量调节培养基硬度，可抑制褐变发生，琼脂添加量以8 g/L效果最好。
在培养基中加入活性炭和VC液都能一定程度地抑制褐变，促进外植体生长，以活性炭的抑制作用较明显；当综合运用VC液与活性炭时，以活性炭浓度为100～200 mg/L时，效果最好[6]。
在培养过程中要保持适宜的培养条件。
培养初期保持在15～20 ℃、黑暗或弱光下培养，可减轻培养材料的褐变[7]。
在接种1～2 d后，将外植体转移至新鲜培养基或同一培养基的不同部位，连续转移5～6次可防止酚类物质在伤口周围积累过多，有效防止褐变。
3 玻璃化苗预防措施
3.1 在培养基中适当增加无机营养成分，减少氮素含量
适当增加培养基中钙、锌、锰、钾、铁、铜、镁的含量，降低氮和氯的比例，特别是降低铵态氮浓度，提高硝态氮浓度，可减少玻璃化苗的比例[8]。
3.2 适当提高培养基中琼脂和蔗糖的浓度
适当提高培养基中琼脂的浓度，可以有效克服蓝莓组培苗玻璃化。
但若琼脂浓度过大，会导致培养基过硬，影响养分吸收，造成组培苗生长不良。
因此，培养基中琼脂的浓度以8 g/L 较适宜。
蔗糖的用量对蓝莓组培苗玻璃化现象也有一定影响，综合考虑组培苗的长势、节约成本和减少污染等方面，蔗糖用量以25 g/L为宜[9]。
3.3 适当降低细胞分裂素的浓度
在蓝莓组织培养中，组培苗玻璃化程度随着培养基中ZT含量的提高而增加，降低ZT含量，玻璃化苗率显著降低。
但培养基中ZT浓度过低会不利于组培苗的生长分化，ZT 浓度以2 mg/L较适宜[9]。
3.4 增加自然光照，控制光照时间
将玻璃化苗放在自然光下几天后，茎叶变红，玻璃化逐渐消失。
但是光照时间不宜太长，以8～12 h为宜；光照强度为1 000～1 800 lx时就能满足蓝莓的生长发育要求，并能有效防止玻璃化[8]。
4 参考文献
[1] 于强波，苏丹，于立杰，等.蓝莓组培育苗技术[J].北方园艺，2010（9）：163-163.
[2] 范兆和.界蓝莓生产历史与发展趋势[J].落叶果树，2003（1）：50-52.
[3] 任目瑾，周建峰.植物组织培养的常见污染及其防控技术[J].陕西林业科技，2016（6）：103-105.
[4] 陈玉生，梁秋月，洪向平.植物组织培养污染防治措施[J].广东农业科学，2008（1）：28-29.
[5] 贾鹏博，姜秀煜，高方.蓝莓组织培养污染分析及防治[J].内蒙古林业调查设计，2011（6）：118-119.
[6] 郑理乔，黄成林，刘华，等.兔眼蓝莓组织培养过程中褐化与生根问题的探讨[J].安徽农业大学学报，2012，39（5）：777-782.
[7] 陈惠娟.植物组织培养中褐变的产生机理及克服措施[J].植物保护，2005，31（2）：79-82.
[8] 陈世昌.植物组织培养[M].北京：高等教育出版社，2015：89-93.
[9] 毕云，苏艳，张艺萍，等.蓝莓组织培养过程中玻璃化现象的防止技术研究[J].西南农业学报，2014，27 （6）：2539-2542.。