鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定

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鸭1型甲肝病毒亚型的鉴定

鸭1型甲肝病毒亚型的鉴定傅秋玲;陈珍;黄瑜;傅光华;陈翠腾;万春和;程龙飞;陈红梅;施少华【摘要】为了明确引起雏鸭胰腺炎的新型鸭1型甲肝病毒(duck hepatitis A virus 1,DHAV-1)的分类地位,通过鸭胚血清交叉中和试验测定并分析其与经典的肝炎型DHAV-1的抗原相关性.经血清交叉中和试验测得抗胰腺炎型DHAV-1阳性血清对胰腺炎型DHAV-1、经典的肝炎型DHAV-1的中和效价分别为1∶169.8、1∶91.2,而抗肝炎型DHAV-1阳性血清对经典的肝炎型DHAV-1、胰腺炎型DHAV-1的中和效价分别为1∶125.9、1∶89.1.参照同属小RNA病毒科的口蹄疫病毒血清型、亚型的划分标准,计算得出胰腺炎型DHAV-1与经典的肝炎型DHAV-1间的抗原亲源值(R)为0.62,介于0.32～0.7之间,表明胰腺炎型DHAV-1与经典的肝炎型DHAV-1相比其抗原性发生了较大变异,定名为鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a).【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2015(051)007【总页数】3页(P36-38)【关键词】鸭1型甲肝病毒;胰腺炎;抗原性变异;亚型【作者】傅秋玲;陈珍;黄瑜;傅光华;陈翠腾;万春和;程龙飞;陈红梅;施少华【作者单位】福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013;福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建福州350013【正文语种】中文【中图分类】S852.65鸭1型甲肝病毒（duck hepatitis A virus 1，DHAV-1）是小RNA 病毒科（Pacornaviridae）禽肝病毒属（Avihepatovirus）的成员之一，主要侵害6 周龄内的雏鸭，以发病急、病程短、致死率高、病死鸭呈角弓反张、肝脏肿大、出血为临床特征。

I型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备的开题报告

I型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备的开题报告摘要：鸭肝炎病毒（DHBV）是一种能引起鸭肝炎的DNA病毒。

本研究旨在制备特异性I型DHBV单克隆抗体，并应用于DHBV的检测。

首先，通过ELISA筛选抗原刺激后的小鼠脾细胞，得到单个阳性克隆。

随后，将阳性克隆细胞与骨髓瘤细胞融合，得到稳定产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

最后，对制备的单克隆抗体进行特性分析，并进行DHBV的检测。

预计本研究可以为DHBV的早期检测提供重要的技术支持。

关键词：鸭肝炎病毒；单克隆抗体；制备；检测背景：鸭肝炎病毒是一种通过食物、饮水、接触粪便传播的常见病毒。

DHBV感染可引起肝脏炎症、肿瘤等疾病，严重危害鸭养殖业的健康和经济效益。

因此，DHBV的检测和防控成为当前鸭养殖业亟需解决的重要问题。

单克隆抗体是近年来广泛应用于生命科学领域的一种重要工具。

制备特异性单克隆抗体，可以实现对病原体的高灵敏度、高特异性检测，为疾病的早期诊断提供重要技术支持。

因此，本研究旨在制备I型DHBV 单克隆抗体，并应用于DHBV的检测。

方法：1.制备抗原收集DHBV感染的鸭肝组织，利用离心法纯化DHBV颗粒。

2.免疫小鼠将DHBV纯化颗粒和佐剂混合，接种BALB/c小鼠，共接种四次，间隔两周。

3.筛选阳性克隆收集小鼠脾细胞，进行ELISA筛选，挑选出特异性I型DHBV抗体阳性细胞。

4.融合细胞将阳性克隆细胞与骨髓瘤细胞融合，得到杂交瘤细胞株。

5.单克隆抗体的纯化和鉴定对杂交瘤细胞株进行限稀、鉴定、扩增、分离、纯化等步骤，得到单克隆抗体。

6.特性分析和应用对制备的单克隆抗体进行特性分析，并应用于DHBV的检测。

预期结果：预计通过上述步骤制备的单克隆抗体可以有效地检测I型DHBV。

同时，该研究也为进一步防控DHBV提供了重要的技术支持。

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及间接ELISA方法的建立的开题报告

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及间接ELISA方法的建立的开题报告
题目：Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及间接ELISA方法的建立
研究背景：
Ⅰ型鸭肝炎病毒（DHBV）是一种引起鸭肝炎的病原体，也是动物病毒的重要代表之一。

DHBV感染鸭子时会导致严重的肝损伤以及肝癌等疾病，给养殖业、动物保健等领域造成了很大的损失和威胁。

因此，研究DHBV感染机制和控制方法显得非常重要。

其中，VP1蛋白是DHBV中最重要的蛋白之一，也是抗原表位较多的蛋白之一。

因此，通过鉴定VP1蛋白中的优势抗原区，建立有效的间接ELISA方法，能够在DHBV感染的诊断和疫苗的开发中起到积极的作用。

研究内容：
1. 鉴定Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白中的优势抗原区
通过重组表达和纯化DHBV的VP1蛋白，采用Western Blot和ELISA技术，筛选出VP1蛋白中的优势抗原区。

2. 建立基于VP1蛋白的间接ELISA方法
根据VP1蛋白优势抗原区的序列，设计并合成对应的多肽抗原，制备间接ELISA试剂盒，对鸭子血清进行检测，建立鸭子DHBV感染的诊断方法。

预期成果：
本研究旨在鉴定Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区，并通过建立基于VP1蛋白的间接ELISA方法，实现对鸭子DHBV感染的快速诊断。

实验成功将为DHBV的研究和控制提供重要的理论和技术支持。

3株鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因VP1的克隆及序列分析

3株鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因VP1的克隆及序列分析甘一迪;刘家森;姜骞;郭东春;司昌德;孟庆文;韩凌霞;刘娣;曲连东【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2009(40)6【摘要】通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1:161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列.系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%～96.9%和95.4%～96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似性均分别低于75%和88%,表明3株病毒属于DHV-1,与变异株是不同的血清型.强毒DHV-1:161/79/V的VP1蛋白第49和第183位氨基酸为T和H,弱毒DHV-1:YH、HN为S和Q,推测这2处位点的改变可能与病毒的强弱有关;DHV-1和其变异株的VP1蛋白均没有保守的RGD序列;变异株N-DHV:90D、04G在第50和51位比DHV-1多2个氨基酸(Q和D),在第147和185位各缺失1个氨基酸(E和L),而在变异株DHV:AP-03337、AP-04009、AP-04114、AP-04203的第145和146位比DHV-1多了2个氨基酸(G、G);不同血清型的鸭肝炎病毒在46-64位、95-149位、180-223位抗原指数差别较大,推测这些位点的改变可能影响病毒的生物学特性.【总页数】6页(P952-957)【作者】甘一迪;刘家森;姜骞;郭东春;司昌德;孟庆文;韩凌霞;刘娣;曲连东【作者单位】中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,哈尔滨,150001;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,哈尔滨,150001;黑龙江省农业科学院,哈尔滨,150001;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,哈尔滨,150001;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,哈尔滨,150001;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,哈尔滨,150001;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,哈尔滨,150001;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,哈尔滨,150001;黑龙江省农业科学院,哈尔滨,150001;中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,哈尔滨,150001;黑龙江省农业科学院,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备 [J], 赵立娜;崔言顺;任建亭;李建亮;黄兵;李玉峰;马秀丽2.Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆与序列分析 [J], 任邵娜;袁生;蒲文珺;彭巧丽;王辉;陈志伟;张浩吉;李国清3.Ⅰ型鸭肝炎病毒R株VP1基因克隆与序列分析 [J], 罗玉均;张桂红;陈建红;徐小芹;廖明;张济培4.鸭肝炎病毒JS株VP1基因克隆及序列分析 [J], 宋新刚;刘芳萍5.Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白单克隆抗体的研制 [J], 提金凤;李志杰;王海燕;吴卫东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达及鉴定顾玲玲;吴萌;朱善元;王安平【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2018(047)001【摘要】为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-Ⅰ)的主要结构蛋白VP1,根据GenBank已发表的DHAV-Ⅰ SH株VP1基因序列,设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1,获得重组杆状病毒转移载体pFB-VP1,将其转化E.coliDH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定后,构建重组穿梭质粒rBacmid-VP1.在脂质体介导下将重组质粒rBacmid-VP1转染昆虫细胞Sf 9,制备含有DHAV-ⅠVP1基因的重组杆状病毒rBac-VP1.Western blot结果显示,表达的重组蛋白VP1大小约27 ku,能与DHAV-ⅠVP1多克隆抗体发生特异性反应;间接免疫荧光检测结果显示,重组蛋白VP1能与DHAV-Ⅰ全病毒阳性血清发生特异性反应,细胞内出现较强的荧光.以上结果表明,在昆虫细胞中成功表达了具有免疫原性的DHAV-Ⅰ主要结构蛋白VP1.【总页数】4页(P114-117)【作者】顾玲玲;吴萌;朱善元;王安平【作者单位】江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州 225300;江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州 225300;江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州 225300;江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州 225300【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9【相关文献】1.Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒3C基因在昆虫细胞的表达与检测 [J], 吴植;顾玲玲;朱善元;王安平2.Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备 [J], 顾玲玲;朱善元;成大荣;左伟勇;洪伟鸣;蔡树东;王安平3.Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP3基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 [J], 王安平;朱善元;王永娟;吴双;左伟勇;洪伟鸣4.密码子优化型鸭甲肝病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达 [J], 李传峰;陈宗艳;孟春春;梁瑞英;胡文;刘光清5.鸭甲型肝炎病毒-Ⅰ型3D基因在昆虫细胞中的表达及抗原检测 [J], 吴植;夏文龙;朱善元;顾玲玲;王安平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸭肝炎病毒的纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定的开题报告

鸭肝炎病毒的纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定的
开题报告
一、研究背景
鸭肝炎病毒（DHBV）是一种常见的家禽病毒，主要感染鸭、鹅等家禽。

其主要病理表现为导致鸭肝细胞坏死、坏死灶形成等严重疾病。

因此，研究鸭肝炎病毒的纯化及单克隆抗体的制备与鉴定，对于深入了解病毒的结构与分子机制、开展相关疫苗研发等具有重要意义。

二、研究目的与内容
本研究的主要目的是通过以下步骤完成对鸭肝炎病毒的纯化及单克隆抗体的制备与鉴定：
1. 鸭肝炎病毒的分离与纯化：通过对鸭肝炎病毒进行分离、纯化等步骤，获得高质量的病毒颗粒，用于后续的单克隆抗体制备与鉴定。

2. 单克隆抗体的制备：通过免疫小鼠、获得小鼠的免疫原，从免疫小鼠体内收集抗体细胞，制备出单克隆抗体。

3. 单克隆抗体的鉴定：通过Western blot、ELISA等方法，对制备出的单克隆抗体进行鉴定，评价其亲和力、特异性等性质。

三、研究意义
本研究的完成，将有助于深入了解鸭肝炎病毒的结构、分子机制与病理表现等方面的问题。

同时，获得的高质量单克隆抗体，可为病毒相关的疫苗研发、诊断试剂的开发等领域提供有力保障。

I型鸭肝炎病毒VP1的原核表达与免疫学检测

I型鸭肝炎病毒VP1的原核表达与免疫学检测宋翠萍;韩先干;仇旭升;于圣青;陈鸿军;丁铲【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2010(018)006【摘要】本研究采用原核表达载体pCold-HF在大肠杆菌中表达Ⅰ型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus typeⅠ,DHV-I)弱毒株FC64株的VP1蛋白,经超声波裂解结果显示:VP1融合蛋白呈现可溶性表达.利用His-bind Resin试剂盒纯化该产物,作为免疫原免疫小鼠,制备特异性抗体,进行免疫学检测.结果表明:该抗体与原核袁达产物、DHV感染的SPF尿囊液总蛋白呈现特异性反应,这为DHV-I快速诊断方法的建立奠定了基础.【总页数】5页(P33-37)【作者】宋翠萍;韩先干;仇旭升;于圣青;陈鸿军;丁铲【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241【正文语种】中文【中图分类】S852.659.6;S852.4【相关文献】1.Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆及其原核表达 [J], 孔留五;康艳梅;何逸民;李小康;潘全会;张桂红2.Ⅰ型鸭肝炎病毒3C蛋白的原核表达和免疫学检测 [J], 杨洋;宋翠萍;卢凤英;丁铲;彭大新3.新型鸭肝炎病毒VP1基因的序列分析及其原核表达 [J], 施少华;程龙飞;傅光华;陈红梅;万春和;黄瑜4.鸭肝炎病毒鸡胚化弱毒MY株VP1基因克隆、原核表达及抗原性分析 [J], 向毅勇;罗薇;靳艳玲;刘内生;刘群;龙虎5.新Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1和3D蛋白的原核表达及鉴定 [J], 孟凡依;殷秀辰;李刚;陈玉环;张云;刘明;冯新畅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆和表达

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆和表达吕敏娜;戚南山;覃宗华;廖申权;余劲术;袁建丰;吴彩艳;孙铭飞【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)002【摘要】通过RT-PCR方法克隆出GD株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的结构蛋白VP1基因片段,VP1基因片段和原核表达载体pMAL-C2X均以EcoR Ⅰ、HindⅢ双酶切后构建获得重组质粒pMAL-C2X-VP1,经限制性酶切和序列测序证明,目的基因正确插入表达载体,转入E.coli BL21(DE3),构建重组表达菌E.coliBL21/pMAL-C2X-VP1,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明,DHV-1的结构蛋白VP1能在E.coliBL21(DE3)中表达,获得可溶性重组蛋白,表达产物的分子质量约为69 ku.【总页数】4页(P13-16)【作者】吕敏娜;戚南山;覃宗华;廖申权;余劲术;袁建丰;吴彩艳;孙铭飞【作者单位】广东省农业科学院兽医研究所,广东广州510640;广东省农业科学院兽医研究所,广东广州510640;广州英赛特生物技术有限公司,广东广州510663;广东省农业科学院兽医研究所,广东广州510640;广东省农业科学院兽医研究所,广东广州510640;广东省农业科学院兽医研究所,广东广州510640;广东省农业科学院兽医研究所,广东广州510640;广东省农业科学院兽医研究所,广东广州510640【正文语种】中文【中图分类】S852.659.6;S858.32【相关文献】1.Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因重组鸭瘟病毒载体的构建 [J], 张婧;董嘉文;罗永文;郭霄峰2.Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达 [J], 胡来根;廖俊伟;尹秀凤;刘大伟;毛火云;张小飞3.基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备 [J], 赵立娜;崔言顺;任建亭;李建亮;黄兵;李玉峰;马秀丽4.Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆与序列分析 [J], 任邵娜;袁生;蒲文珺;彭巧丽;王辉;陈志伟;张浩吉;李国清5.Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆及其原核表达 [J], 孔留五;康艳梅;何逸民;李小康;潘全会;张桂红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及抗体检测ELISA方法的建立

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及抗体检测ELISA方法的建立董井泉;张蕾;马波;师东方;王君伟【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2014(036)007【摘要】为鉴定Ⅰ型鸭肝炎病-毒(DHV-Ⅰ)VP1蛋白优势抗原区及建立DHV-Ⅰ抗体检测ELISA方法,本研究以重组质粒pEasy-VP1为模板,将其分为5段(VP1-a～e)及全长VP1经PCR扩增,并分别克隆于pET-32a(+)进行原核表达.经western blot分析表明,截短表达的蛋白VP1-c (80 aa～150 aa)抗原性良好.将其纯化作为包被抗原建立了DHV-Ⅰ抗体的间接ELISA检测方法.经反应条件优化确定:VP1-c包被浓度为2μg/mL,DHV-Ⅰ抗血清稀释度为1∶20,其临界值为0.208.该方法能够特异性检测DHV抗体,与其他常见的几种鸭病阳性血清无交叉反应;其批内和批间重复性试验变异系数均小于9％.应用建立的ELISA方法对48份鸭血清进行了检测,与中和试验相比较,符合率为86.9％.表明该方法可以初步应用于DHV 抗体的检测和血清流行病学调查.【总页数】5页(P542-546)【作者】董井泉;张蕾;马波;师东方;王君伟【作者单位】东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.利用Asia 1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法 [J], 林彤;邵军军;丛国正;独军政;高闪电;常惠芸;谢庆阁2.鸭甲肝病毒VP1蛋白主要抗原域的原核表达及间接ELISA方法的初步建立 [J], 孙涛;李传峰;徐彪;邓明俊;岳志芹3.基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立 [J], 李宁;刘光清;王桂军;孟春春;梁瑞英;李传峰;陈宗艳;缪秋红;毕庄莉;朱英奇;郭慧敏4.猪细小病毒3型VP2蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立[J], 王广操;崔鹏超;何玉;张梦岩;苑文涛;王先炜5.新Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1和3D蛋白的原核表达及鉴定 [J], 孟凡依;殷秀辰;李刚;陈玉环;张云;刘明;冯新畅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸭肝炎病毒Ⅰ型基因片段的原核表达及单克隆抗体的制备

ｃｍｂｎｎｕｉｎｐｏｅｎ２Ｄｏｏｗｓｏｔｉｅ．ｈＡＬ／ｍｉｒｍｍｕｉｅｔｈｓｒ．ｏｉａｔｓｒｔｉ（０ｋｒｓ）ａｂａｎｄＴｅＢＢｃｃｗｅｅｉｆｏｅｎｚｄｗｉｔｉｅｈ
ｃｍｂｎｎｒｔｉａｄａｍｏｏｌｎｌａｔｂｄｅｌｓｒｉｆＤＨＶ．ｓｐｏｕｅＴｈｅｔｒ．ｌｔｏｉａｔｐｏｅｎ，ｎｎｃｏａｎｉｏｙｃｌｔａｎｏＴｗａｒｄｃｄ．ｅＷｓｅｎｂｏａａｙｉａｄＥＬＩＡｈｗｅｈｔｔｅｒｃｍｂｎｎｒｔｉｆＤＨＶ．ｏｌｅｃｔｎｌｓｓｎＳｓｏｄｔａｈｅｏｉａｔｐｏｅｎｏＩｃｕｄｒａｔｗｉｈＤＨＶ— ｏｉｖＩｐｓｔｅｉ
Ｓａｇａ００Ｃｈｎ）ｈｎｈｉ２１６，ｉａ１
Ａｂｔａｔｓｒｃ：Ａｉｉｅｓｗｅｅｄｅｉｎｅｃｄｉｏｔｅｂｋ— ｅｒｅｏｍｐｅｅｇｎｏｍｅｐａｒｏｆｐｒｍｒｒｓｇｄａｃｏｒｎｇｔｈｅＧｎｅａｎｒｐｏｔｄｃｌｔｅ
ｔａｆｃｅｎｔｒｎｓｅｔｄｉｏＲｏｓｔａｇｍｉＤＥ３），ｎｃｄｂｙＩｅｔ．ａ（ｉｄｕｅＰＴＧｎｄｐｕｒｆｅｙｔｅＮｉＮＴＡ，ｎｄｔｕｓｔｅｒ．ａｉｉｄｂｈ．ａｈｈｅ
扩增出特异的ＤＨＶＩ基因片段；该片段克隆入原核表达载体ｐＴ２ａ转化大肠杆菌Ｒｏｅｔ．ａ（３， — 将Ｅ．８，ｓｔｇｍｉＤＥ）ａ

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Ｃｈｉｎａ：３．ＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＡｖｉａｎＤｉｓｅａｓｅｓＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｆ “ ｚｈｏｕ３５００１３，（ｉｎａ）
中国畜牧兽医
２０１７，４４（２）：５５４ — ５６０
Ｃｈｉｎａ Байду номын сангаас ＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ
ｄｏｉ：１０．１６４３１／ｊ．ｅｎｋｉ．１６７１ — ７２３６．２０１７．０２．０３５
（１．福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州３５００１３；２．福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州３５００１３；
３．福建省禽病防治重点实验室，福州３５００１３）
中图分类号：￥８５２．６５文献标识码：Ａ文章编号：１６７卜７２３６（２０１７）０２ — ０５５４ — ０７
ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔＶＰ１ＰｒｏｔｅｉｎｏｆＤＨＡＶ－ｌａＦＵＱｉｕ－ｌｉｎｇ＇，ＬＩＵＷｅｉ，ＨＵＡＮＧＹｕ ’ 。 ’ ” ，ＦＵＧｕａｎｇ－ｈｕａ ’ ， ⅥｒＡＮＣｈｕｎ－ｈｅ ’ 。～，
Ｆｕｚｈｏｕ３５００１３，Ｃｈｉｎａ；２．ＦｕｊｉａｎＡｎｉａｌｍＤｉｓｅａｓｅｓＣｏｎｔｒｏｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｅｎｔｅｒ，Ｆｕｚｈｏｕ３５００１３，
鸭１型甲肝病毒亚型ＶＰ１蛋白单克隆抗体的研制及鉴定
傅秋玲，刘伟，黄瑜。，傅光华。，万春和～，程龙飞，陈珍。，陈翠腾。－ｕ，林建生，陈红梅，施少华。，刘荣昌
ＣＨＥＮＧＬｏｎｇ－ｆｅｉ＇，ＣＨＥＮＨｏｎｇ－ｍｅｉ ’ ，ＳＨ１Ｓｈａｏ－ｈｕａ ’ ，ＵＵＲｏｎｇ－ｃｈａｎｇ ’ ，
ＣＨＥＮＺｈｅｎ，ｗ，ＣＨＥＮＣｕｉ — ｔｅｎｇ，。，ＬＩＮＪｉａｎ－ｓｈｅｎｇ ’ 。 ’ 。
摘
要：为制备抗鸭１型甲肝病毒亚型（ＤＨＡＶ－ｌａ）结构蛋白ＶＰ１的单克隆抗体（ＭＡｂｓ），本研究以ｐＧＥＸ－ＶＰ１重
组蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，同时以纯化浓缩的全病毒作为包被抗原，建立了筛选抗ＶＰ１蛋白阳性杂交瘤细胞株的
间接ＥＩＩＳＡ方法，经融合、筛选制备杂交瘤细胞及鉴定ＭＡｂｓ的稳定性、特异性、腹水效价和中和活性等生物学活
性，获得了２株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞（１Ａ２和５Ｇ３）。ＭＡｂｓ腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为１：３．２Ｘ１０和１：２．０ ×１０。亚类鉴定均为ＩｇＧ１／￣型。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ结果显示，２株ＭＡｂｓ均能与ＤＨＡＶ— ｌａＶＰ１蛋白和ＤＨＡｖ＿１ａ全病毒发生特异性反应。特异性试验结果显示２株ＭＡｂｓ能与鸭１型甲肝病毒（ＤＨＡｖ＿１）和ＤＨＡＶ一１ａ发生交叉反应。中和试验结果显示５Ｇ３株具有中和活性。结果表明２株ＭＡｂｓ的ＥＬＩＳＡ效价高、特异性强、稳定性好，均能与ＤＨＡＶ— ｌ和ＤＨＡＶ－ｌａ全病毒发生特异性反应，其中一株具有中和活性。关键词：鸭１型甲肝病毒亚型；单克隆抗体；生物学特性
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＦｕｊｉａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，