烟草花叶病毒全解
【2019年整理】五种烟草病毒TMV
检测步骤
1.3 单重RT-PCR
单果重RT-PCR用2P电5CMμR泳-LMb检PuLC测fVfeR结反r 标［转准7录5反0酶m应反m体转o系l录/L:合1T4成r．is各-H3病Cμl毒L( pdcHdDH8N．2AO8第，) 一2，．链2050μmLm10ol×/L 以TMV、CM(2VNμ、HLT4dEN)V2T、SPO( 各4，2．0．5m1%moTlw/Le)e，n210］μL，上2游μL和2下5 游mm引o物l /混L M合g物Cl2， PVY 和TVBM( 各V 150种μm病ol /L) ，0． 2 μL Taq DNA 聚合酶( 5 U /μL) 和2 μL 毒的反转录产cD物N作A 为模P板C。R PCR 反应循环参数: 94℃预变性3 min; 94℃变性 反应的模板，30经sP，C4R8℃扩退火30 s，72℃延伸1 min，循环30 次; 72℃延伸 增分别得到大10小m为in2。37取、5 μL PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳分析比较 273、347、456 和547 bp 的5 条特异性条带
检测步骤
1．2引物的设计与筛选
应用Primer Premier 5． 0 引物设计软件分别设计这5 种病 毒的特异引物TMV cpF /TMV cpR、CMV cpF /CMV cpR、 TEV cpF /TEVcpR、PVY cpF /PVY cpR 和TVBMV cpF /TVBMVcpR。由于多重RT-PCR 要求在同一退火温度下同 时扩增多个目的片断，因此对设计的大量引物进行筛选， 选择Tm 值较一致的各对引物，以保证在同一退火温度下同 时检测到TMV、CMV、TEV、PVY 和TVBMV 这5 种病毒
病毒混合侵染烟草的检测
2007 －2008 年对陕西泾阳、乾县等烟区进行采样调查，样 品检测结果显示: 烟草花叶病毒( TMV)、黄瓜花叶病毒 ( CMV) 、烟草蚀纹病毒( TEV) 、马铃薯Y 病毒( PVY)和烟 草脉带花叶病毒( TVBMV)都有发生，且多为复合侵染. 采集复合侵染的烟叶进行多重RT-PCR 检测，结果显示烟草 中2 种、3 种和4 种病毒复合侵染都存在。
植物化学保护：烟草花叶病毒病
烟草病毒病损失情况
• 山东省 1974-1977年的4年中， 有 3年烟草 病毒病流行发生， 其 中 1975年大流行， 重病田减产20%-50%，夏烟田感病品种减 产达70%以上。
• 目前，山东省烟 草病毒病每年发病面积达 40万亩，发病率在20%-80%，经济损失每 年达 2000余万元。
——烟草病毒病及其危害
烟草上胜红蓟黄脉病毒和广东番木瓜曲叶病毒
心叶烟 普通烟
苎麻花叶病毒(RaMoV)，导致普通烟矮化的病原；寄主范围广。
普通烟 珊西烟
本氏烟 三生烟
危险性检疫病毒——南芥菜花叶病毒病
TRV？
TEV
TEV
TLCV
TLCV
丛顶病
脚叶烘烤后效果
单叶
左图为烤房中脚叶，上 图为脚叶单叶。
第一炕下炕情形
➢This gives rise to the name mosaic
to refer to the pattern of light
green and
dark green tissue,
or dark green islands.
Tobacco Mosaic Virus Infected Plant
பைடு நூலகம்
烟草花叶病症状
• 自苗期至收获期均能发病 。病株呈现典型的花叶症 状。嫩叶发病，先是脉明 ，以后形成浅绿和深绿病 斑，叶缘有时向背面卷曲 。由于受害叶片部分细胞 增多或增大，致使叶片厚 薄不匀，皱缩扭曲，呈畸 形，并有不规则的缺刻， 严重时延长呈柳叶状，或 呈带状。早期发病烟株节 间缩短，植株矮化，生长 缓慢或不育。病重的烟株 花变形，蒴果小而皱缩， 所产生的种子，发芽力很 差。
➢ Green islands typically do not contain very much virus which explains
备课素材：烟草花叶病毒的研究-高一下学期生物人教版必修2
烟草花叶病毒的研究2019版高中生物学必修二简单提到，烟草花叶病毒中RNA是遗传物质：那么，烟草花叶病毒是什么？如何证明它的遗传物质是RNA？在病毒大家庭中，有一种病毒有着特殊的地位，这就是烟草花叶病毒（TMV）。
烟草花叶病毒结构包含单链RNA，约6400个核苷酸，外壳蛋白有2130个亚基，每个亚基有158个氨基酸，绕RNA分子螺旋状排列。
无论是病毒的发现，还是后来对病毒的深入研究，烟草花叶病毒都是病毒学工作者的主要研究对象，起着与众不同的作用。
烟草花叶病毒（TMV）烟草花叶病毒的发现1886年，在荷兰工作的德国人麦尔（Mayer）把患有花叶病的烟草植株的叶片加水研碎，取其汁液注射到健康烟草的叶脉中，能引起花叶病，证明这种病是可以传染的。
通过对叶子和土壤的分析，麦尔指出烟草花叶病是由细菌引起的。
1892年，俄国的伊万诺夫斯基（Ivanovski）重复了麦尔的试验，证实了麦尔所看到的现象，而且进一步发现，患病烟草植株的叶片汁液，通过细菌过滤器后，还能引发健康的烟草植株发生花叶病。
这种现象起码可以说明，治病的病原不是细菌，但伊万诺夫斯基将其解释为是由于细菌产生的毒素而引起。
生活在巴斯德的细菌致病说的极盛时代，伊万诺夫斯基未能做进一步的思考，从而错失了一次获得重大发现的机会。
1898年，荷兰细菌学家贝杰林克（Beijerinck）同样证实了麦尔的观察结果，并同伊万诺夫斯基一样，发现烟草花叶病病原能够通过细菌过滤器。
但贝杰林克想得更深入。
他把烟草花叶病株的汁液置于琼脂凝胶块的表面，发现感染烟草花叶病的物质在凝胶中以适度的速度扩散，而细菌仍滞留于琼脂的表面。
从这些实验结果，贝杰林克指出，引起烟草花叶病的致病因子有三个特点：（1）能通过细菌过滤器；（2）仅能在感染的细胞内繁殖；（3）在体外非生命物质中不能生长。
根据这几个特点，他提出这种致病因子不是细菌，而是一种新的物质，称为“有感染性的活的流质”，并取名为病毒，拉丁名叫“Virus”。
第五单元第五章病毒课件2022-2023学年人教版生物八年级生物上册
治疗和预防病毒性疾病：疫苗
新冠和新冠疫苗
疫苗：疫苗是经过人工处理的减毒的或者 无毒的病毒
天花和牛痘疫苗
我国是在1965年消 灭了天花，1979年 世界卫生组织宣布 天花在地球上绝迹， 1981年我国开始停 止接种牛痘疫苗
糖丸爷爷顾方舟和脊髓灰质炎
2000年，“中国消灭脊髓灰 质炎证实报告签字仪式”在 卫生部举行。这也宣告脊髓 灰质炎在中国彻底消灭了。 2019年1月2日，顾方舟因病 在北京逝世。
宿主细胞裂解， 释放出大量病毒
五、病毒的繁殖 重点
自我复制 病毒寄生在活细胞中，靠自己的遗传物质中的 遗传信息，利用细胞内的物质，制造出新的病毒。
病毒只能寄生在活细胞中，当病毒离开活细胞后会成为结晶体， 条件适宜时，结晶体会重新激活，重新感染活细胞。
六、病毒与人类生活的关系
●致病
●乙肝、流感、手足口病以及艾滋病、狂犬病、埃博拉、 SARS、新型冠状病毒、口蹄疫、禽流感等等。许多至今 未找到彻底治愈的方法。
第五章 病毒
新冠病毒
流感病毒
细菌病毒
一、病毒的发现
正常烟草
花叶病烟草
俄国科学家伊万诺夫斯基在研究烟草花叶病的病因时，发现了 比细菌还小的病原体，他把这种病原体叫做“滤过性病毒”
科学家在研究口 蹄疫病时，证明 了口蹄疫也是由 “滤过性病毒”
引起的
一、病毒的发现
发现者： 伊万诺夫斯基
研究材料： 烟草
科学家首次用电子显微镜 观察到烟草花叶病毒是一种杆 状颗粒。
7
二、病毒的大小
病毒比细菌小得多， 只能用纳米（用 nm表示，1nm = 1 /1000000mm） 来表示它的大小， 必须借用电子显微 镜才能观察到。
烟草花叶病的防治和治疗办法
06
研究展望与未来发展趋势
研究展望
深入探究致病机制
进一步研究病毒的致病机制，包括病毒与寄主植物的相互作用、 病毒的传播和变异等，有助于开发更有效的防治措施。
抗病基因的挖掘和利用
利用基因工程技术，发掘和利用烟草自身的抗病基因，提高植物对 病毒的抵抗能力。
综合防治技术的研发
研究和发展生物防治、化学防治和物理防治等综合防治技术，提高 防治效果，降低病毒对烟草的危害。
烟草花叶病的防治实践案例
05
分析
国内防治实践案例
贵州毕节地区
该地区在2015年遭受烟草花叶病毒的严重侵袭，当地农业部门迅速采取措施，加 强防治技术的宣传和培训，提供抗病品种和农药支持，有效控制了病情的扩散。
山东临沂地区
该地区在2016年烟草花叶病毒病流行，当地政府及时协调各方资源，组织农民进 行集体防治，加强植物检疫，推广高效低毒农药，取得了良好的防治效果。
注意安全使用
选择安全、低毒、高效的 化学药剂，避免对人类和 环境造成污染。
药剂治疗
在发病初期，使用化学药 剂对烟草植株进行治疗， 控制病情的发展。
生物防治
01
02
03
使用抗病菌株
通过接种对烟草花叶病有 抗性的菌株，增强烟草植 株的抗病能力。
利用生物农药
使用生物农药对烟草植株 进行喷洒，预防和治疗烟 草花叶病。
未来发展趋势和挑战
智能化监测和预警系统
利用物联网、大数据和人工智能等技术，建立智能化监测 和预警系统，实现对烟草花叶病的实时监测和提前预警， 及时采取防治措施。
绿色防控技术
推广绿色防控技术，如生物农药、天敌昆虫等，减少化学 农药的使用，降低对环境和人类健康的负面影响。
烟草花叶病毒的发现历程概述
烟草花叶病毒的发现历程概述陈光(河北省雄安新区安新中学雄安071600)摘要本文概述了人类发现的第一种病毒——烟草花叶病毒(TMV)的发现历程,主要内容包括TMV走进科学家的视野、TMV 的性质之争、TMV化学组成与结构的探索。
关键词TMV传染性活流质化学组成结构病毒个体微小,必须借助于电子显微镜才能观察到，所以在生活中我们几乎察觉不到病毒的存在，那么科学家是如何发现病毒的呢？本文仅就人类发现第一种病毒一烟草花叶病毒(TMV)的历程作简要叙述。
1TMV走进科学家的视野1876年,德国的麦尔(Adolf Eduard Mayer)发现烟草常常会患一种病一烟草花叶病,这引起了他的关注。
麦尔先后用单层滤纸和双层滤纸过滤患病烟草叶子的汁液,再用滤液分别去感染健康烟草叶片，发现前者能致病，而后者不能%麦尔认为真菌菌体较大，在过滤时已被滤除,所以烟草花叶病是由更小的细菌引起的。
1888年,俄国的伊万诺夫斯基(D.Iwanovski)用滤孔孔径比细菌还小的尚柏朗过滤器代替滤纸，重复了麦尔的实验%他发现得到的滤液仍然具有传染性,但是他认为出现这种情况是过滤器有问题，提出这种传染性可能是分泌毒素的细菌引起的[1]o1897年，荷兰微生物学家贝杰林克(Martinus Beijerinck)重复伊万诺夫斯基的研究,将患病的烟草叶子汁液经尚柏朗过滤器后，发现将稀释滤液接种到健康烟草之后也会致病。
据此,贝杰林克认为滤液的这种感染性不是由化学物质而是由一种具有生命的致病因子引起的。
2TMV的性质之争1898年，贝杰林克用琼脂凝胶层析的方法做了一组实验，结果显示：扩散至琼脂凝胶内部的滤液仍然具有传染性。
贝杰林克根据以上研究结果断定这种病原体不是细菌，而是一种小分子物质组成的“传染活液”[2]。
同年,他在论文中提出了“传染性活流质”的概念,并用“virus”来表示“传染性活流质”，这也为“病毒”这一概念的诞生奠定了基础，贝杰林克也因此被称为“真正的病毒学之父”⑶。
烟草花叶病毒
TMV的形态特征
TMV的形态特征
烟草花叶病毒具有杆状外观。它的衣壳由2130分子衣壳蛋白和一分子基因组单链正义RNA组成，长6400个碱基。外壳蛋白在RNA周围自组装成杆状螺旋结构（每螺旋圈16.3个蛋白质），形成发夹环结构。蛋白质单体由158个氨基酸组成，这些氨基酸被组装成四个主要的α-螺旋，这些螺旋通过近于病毒体轴的突出环连接在一起。病毒粒子的长度约为300nm，直径约为18nm。负染色的电子显微照片显示出半径为2nm的独特内部通道。RNA位于4nm的半径处，并被外壳蛋白保护免受细胞酶的作用。基于3.6Å(0.36纳米)分辨率的电子密度图，研究了完整病毒的X射线纤维衍射结构。衣壳螺旋内部的核心附近是卷曲的RNA分子，它由6395±10个核苷酸组成
TMV病毒基因组
TMV基因组由6.3–6.5 kb单链（ss）RNA组成。 3'末端具有类似tRNA的结构，而5'末端则具有甲基化的核苷酸帽——m7G5’pppG。基因组编码4个开放阅读框（ORF），其中两个由于泄漏的UAG终止密码子的核糖体通读而产生单一蛋白质。 这4个基因编码一个复制酶（具有甲基转移酶[MT]和RNA解旋酶[Hel]域）和RNA依赖性RNA聚合酶，所谓的运动蛋白（MP）和衣壳蛋白（CP）。
致谢
TMV的发现
TMV 的第一张电子品微镜图像是1939年由 Gustav Kausche , Edgar Pfankuch 和 HelmutRuska 制成的1955年， Heinz Fraenkel-Conrat 和 Robley Williams 表明纯化的TMV RNA 及其衣壳(外壳）蛋白自行组装成功能性病毒，表明这是最稳定的结构（自由能最低的结构）1958年，晶体学家罗莎琳德 • 富兰克林(Rosalind Franklin）设计并制造了 TMV 模型，她推测该病毒是空心的，而不是固体，并推断TMV 的 RNA 是单链的TMV是第一个被鉴定为病毒的病原体
烟草花叶病毒（TMV）基因编码蛋白研究进展
烟草花叶病毒（TMV）基因编码蛋白研究进展摘要：烟草花叶病毒属基因组编码四种蛋白，大小分别为126kD、183kD、30kD和17.5kD.本文综述了近年来有关这四个蛋白质的表达、功能和外壳蛋白合成抑制物等方面的一些研究结果，以期为这方面的研究提供理论依据。
关键词：TMV基因编码蛋白表达功能烟草花叶病毒（Tobaccomosaicvirus，TMV）属于烟草花叶病毒属。
该属基因组编码四种蛋白，大小分别为126kD、183kD、30kD和17.5kD.其中126kD和183kD蛋白参与病毒的复制，称为RNA依赖的RNA聚合酶（RNAdependentRNApolymerase，RdRP）的亚基；183kD的蛋白是126kD 蛋白的阅读框终止子通读的产物；30kD蛋白参与病毒在寄主细胞间的移动，称为运动蛋白（Movementpro2tein，MP）；17.5kD的蛋白为病毒的外壳蛋白（Capsidprotein，CP）。
烟草花叶病毒（TMV）侵染后30～40小时感病叶内126KDa和183KDa蛋白质达到高水平；外壳蛋白在侵染后10小时才开始合成，30～40小时达到高峰；相比之下，体内30KDa蛋白质早就出现，在侵染后20小时达最高值，这很可能与30KDa涉及负责病毒在细胞与细胞间的转运有关。
1 126kD/183kD蛋白1.11 26kD/183kD蛋白表达烟草花叶病毒通过机械伤口或者借助媒介昆虫进入细胞内，在病毒颗粒部分脱壳露出基因RNA的5′端时即侵染后1-10分钟内，翻译开始首先合成126KDa和183KDa的两种蛋白质。
183KDa 是由126KDa基通读而产生，Tyr插在这个琥珀型终止子上，有6个保守的核苷酸［1］。
1.21 26kD/183kD蛋白功能烟草花叶病毒复制所需依赖的RNA的聚合酶由两部分组成：一是由寄主提供的亚基，一是由病毒编码的特异的复制酶亚基组合成有专一性的全酶。
[2]183KDa有RNA依赖的RNA聚合酶的结构，126KDa的C端有类似于螺旋酶和甲基转移酶的基本结构［3，4］。
烟草病毒病
烟草病毒病Tobacco Viral Diseases烟草病毒病是世界各烟草产区普遍发生的一类重要病害，种类很多，国外报道已从烟草上分离到的病毒有27种左右，国内已发现16种，其中发生普遍的有烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、马铃薯Y病毒（PVY）和烟草蚀纹病毒（TEV）等。
各种病毒病在不同的地区间分布略有差异，TMV主要分布在东北、云南、贵州、广东、四川等烟区，CMV 主要发生在黄淮、西南、西北、福建等烟区，在很多地区还存在TMV和CMV的复合侵染。
马铃薯Y病毒90年代以前在大多数烟区发生较轻，90年代中后期在某些烟区如山东、安徽、云南及东北等省区危害加重，1996年皖北烟区马铃薯Y病毒的暴发流行，曾给烟叶生产造成巨大损失，山东的PVY与CMV复合侵染也是生产上亟待解决的问题。
症状TMV引起的烟草花叶病：苗期至大田期均可发生，烟株感病后一般5~7d表现症状。
发病初期，新叶叶脉颜色变浅，呈半透明状明脉，随后叶脉两侧叶肉组织褪绿，形成黄绿相间的斑驳或花叶。
田间症状因气候条件、病毒株系不同而异，大致可分为两种类型：一是轻型花叶，仅表现为叶片褪绿，形成黄绿相间的花叶或驳斑，植株高度及叶片形状、大小均无明显变化。
一般成株期感病，易表现此类症状；另一种为重型花叶，叶片上部分叶肉组织增大或增多，叶片厚薄不匀，形成很多泡状突起，叶片皱缩，扭曲畸形，叶尖细长有时叶缘背卷。
若苗期感病，则发病更重。
整个植株节间缩短，严重矮化，生长缓慢，几乎无经济价值。
后期不能正常开花结实，或结出的蒴果小而皱缩，种子量少，多数不能发芽。
CMV引起的烟草花叶病：与TMV在田间症状相似，有时不容易区别。
发病初也表现明脉，然后形成花叶，重病叶也会表现扭曲，形成泡状突起等症状。
但随病毒株系、品种不同而症状有较大变化。
除表现花叶外，有时伴有叶片狭窄，叶基呈拉紧状，叶片上茸毛稀少，叶色发暗，无光泽。
病叶有时粗糙，发脆呈革质，叶基部伸长，侧翼变窄变薄，叶尖细长。
抗烟草花叶病毒研究综述
烟草花叶病毒生物防治研究综述植检08-1 郑奕20080543摘要：植物病毒病是农业生产中发生普遍、危害严重的一类病害，每年给农业生产带来很大的经济损失，烟草花叶病毒是病毒病中极其重要的一种病害。
现有的化学药物对植物病毒病的防治效果不佳，且对生态环境、人畜生存质量有负面影响。
植物源农药因植物资源有限、成本高、效果不稳定等因素，难以商品化生产。
因此，筛选、开发微生物源抗植物病毒活性物质是防治植物病毒的主要研究方向。
关键字：烟草花叶病毒；微生物源；防治一、前言植物病毒是仅次于真菌的一类病原物，是迄今为止人们发现的最小微生物之一。
它是内含感染性核酸，外披蛋白质外壳的实体，其特征是能感染寄主细胞和通过感染引起病害现象[1]。
常见的植物病毒病约有1000多种，多由716种病毒造成，危害仅次于真菌[2,3]。
植物病毒病一直是农业生产中的一大危害，素有植物“癌症”之称，由于病毒在植物细胞中绝对寄生，其复制所需的物质、能量、场所完全依赖寄主，且植物没有完整的免疫代谢系统，使得植物病毒病的防治较为困难，给农业生产造成了极大损失。
因此病毒病的防治成了全球植物保护工作面临的重要问题，也是植物病毒理论和实践中的重要研究领域。
人们对烟草花叶病毒（Tabacco mosaic virus,TMV）的研究已经一个多世纪了，TMV 是烟草花叶病毒属（Tobamovirus）的代表种，其寄主范围非常广泛，TMV除危害烟草外，还能侵染番茄、茄子、马铃薯、辣椒、龙葵等茄科植物[4]，此外还能侵染葫芦科、蓼科、十字花科、豆科、黎科、菊科等30个科的300多种植物。
烟草是在一种经济作物，由TMV 引起的烟草病害是世界各烟区的重要病毒病害，烟草花叶病严重影响了烟叶的产量和质量。
据报道，全球每年仅因烟草花叶病毒病造成的损失就达1亿多美元[5]。
目前，还没有开发出很好的抗病毒药剂，为了寻找较好的防治植物病毒病的资源，人们进行了多方面的探索和研究。
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TMV
烟草花叶病毒 tobacco mosaic virus 缩写 TMV，是烟草花叶病等的病原体，属于 Tobamovirus群。烟草花叶病和番茄花叶病 早为一般所了解。叶上出现花叶症状，生 长陷于不良状态，叶常呈畸形。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
烟草花叶病
螺旋对称 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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对称结构
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烟草花叶病毒的结构
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烟草花叶病毒的模型
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模型
证明实验
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病原
• Tobacco mosaic virus称烟草普通花叶病毒， 简称TMV，属病毒。病毒粒体杆状，大小 300×18(nm)。钝化 温度90一93℃经10分 钟，稀释限点1000000倍，体外保毒期 72—96小时。在无菌条件下致病力达数年， 在干燥病组织内存活30年以上。该病毒有 不同株系，我国主要有普通株系、番茄株 系、黄斑株系和珠斑等4个株系，因致病力 差异及与其他病毒的复合侵染而造成症状 的多样性
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TMV 电镜照片
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科学分类
界：病毒 （未分级）(+)ssRNA病毒 (+)ssRNA viruses 属：烟草花叶病毒属 Tobamovirus 种：烟草花叶病毒 Tobacco mosaic virus 二名法Tobacco mosaic virus
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
发现
它是一种RNA病毒，专门感染植物，尤其是 烟草及其他茄科植物，能使这些受感染的 叶片看来斑驳污损，因此得名（mosaic为 马赛克，也就是拼贴之意）。19世纪末期 人们已知有某种威胁烟草作物生存的疾病， 但直到1930年才确知此病正。