细菌染色和涂片观察的方法
细菌涂片和革兰染色法
细菌涂片和革兰染色法是常用的微生物学实验技术，用于观察和鉴定细菌。
细菌涂片是一种简单而常见的方法，用于制备细菌样品的薄层。
它通常包括以下步骤：
1.取少量细菌样品：从培养基或临床标本中取少量细菌，并使用吸管或接种环在玻璃
片上均匀涂抹。
2.干燥：将涂片放置在室温下使其自然干燥，以确保细菌固定在玻璃片上。
3.固定：通过加热或使用特定化学药剂（如甲醇）进行固定，以保持细菌在涂片上的
形态结构。
4.染色：涂片可以使用不同的染色方法进行染色，例如格拉姆染色、苏木精染色等，
以区分不同类型的细菌。
5.观察：准备好的细菌涂片可在显微镜下观察。
通过观察细菌的形态、大小、排列方
式等特征，可以初步判断细菌的类型和特性。
革兰染色法是最常用的细菌染色方法之一，用于区分细菌的革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两类。
它包括以下步骤：
1.取少量细菌样品：从培养基或临床标本中取少量细菌，并涂抹在玻璃片上。
2.固定：对细菌进行固定，通常使用加热的方法使其附着在玻璃片上。
3.染色：首先将细菌涂片涂上紫色的革兰染色试剂（如紫晶染剂），然后用碘溶液形
成复合物。
接下来，使用酒精溶液洗去多余染料，并进行脱色。
最后，用蓝色的对
照染剂（如苏木精）进行染色。
4.观察：通过显微镜下观察细菌涂片。
革兰阳性细菌会呈现紫色或深紫色，而革兰阴
性细菌则呈现粉红色。
革兰染色法的结果可以提供有关细菌类型及其细胞壁结构的信息，这对于细菌分类和鉴定非常重要。
它是微生物学中常用的一种初步鉴定方法。
培养观察细菌的简易方法
培养观察细菌的简易方法一、牙垢中的细菌用消毒牙签，在自己牙齿缝里挑下一些碎屑，放在洁净载玻片上的水滴中，调匀，制成涂片。
待涂片干燥后，在酒精灯火焰上徐徐来回掠过3～4次，细菌外面的一些胶质粘着在载玻片上，使细菌固定、稍冷，加一滴亚甲基蓝溶液，染色1～2分钟后，用清水冲洗，然后盖上盖玻片。
置显微镜下，先用低倍镜观察，再换高倍镜，可观察到杆菌、弧菌、球菌等。
若使用油镜观察，效果更清楚明显。
二、粪池里的细菌在粪池用吸管吸取一滴沤过的粪混合液上层液体，滴在洁净的载玻片上，盖上盖玻片。
置显微镜下观察，先用低倍镜，后用高倍镜。
可见到活的螺旋菌及杆菌。
注意在观察时光线应暗些，效果好。
三、酸莱、酸奶中的细菌取酸菜液上部的白色薄膜或酸奶澄清液，制成临时装片，放在高倍镜下观察，可看到乳酸杆菌。
四、根瘤菌的观察取豆科植物[大豆、蚕豆、花生]的根瘤用刀片切开，用针挑取一小块内容物，放在载玻片上的水滴中，制成涂片，晾干后，用酒精灯火焰烘烤固定，然后滴一滴亚甲基蓝溶液，染色2～3分钟，清水冲洗，盖上盖玻片，吸干后，用500倍高倍镜观察，可见到短杆状根瘤菌。
五、枯草杆菌的培养和观察把25克新鲜干草切成小段，放在盛200毫升清水烧杯中，加热煮沸15分钟，待溶液呈暗褐色时，倒入烧瓶，放在黑暗、20～30℃的温暖环境中。
2～3天后，液体混浊，表面形成薄膜。
用吸管吸取浮在上层的液体，制成临时涂片，放在高倍镜下观察，可看到连成线的枯草杆菌。
若将培养液放在低温处1～2天，再取出制成临时涂片，用600倍或更高倍数的显微镜观察还能看到枯草杆菌的芽孢。
微生物学实验细菌细胞的生化反应实验一、实验目的了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法。
二、实验原理各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。
糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。
实验一细菌形态和结构观察，涂片制作及染色法.pdf
实验一 细菌形态和结构观察，涂片制作及染色法 课程名称：兽医微生物学 实验学时： 2学时一、目的要求1．了解、熟悉油镜的使用和使用原理。
2．掌握细菌抹片的制备及美蓝和革兰氏染色方法。
3．能够识别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色特征。
4．熟悉细菌的基本形态学特征和特殊构造。
二、知识背景细菌个体微小，无色透明，在一般显微镜下不易识别，必须用适当的染料使其着色后，才能看到其形态、排列和结构。
某些细菌因有特殊的染色性，更可借特殊的染色方法加以鉴别。
因此染色技术是细菌鉴定中的基本技术之一。
检查微生物标本，需要使用显微镜。
比较多用的是普通光学显微镜。
根据不同要求，可使用暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜。
前几种显微镜用可见光线或紫外光线作照明光源，它们都属于光学显微镜；电子显微镜则是用电子流代替照明光源，与光学显微镜不同。
［普通光学显微镜的构造和使用］普通光学显微镜（或称生物显微镜）的构造，使用与保护方法，已在《组织学与胚胎学》教材中讲过，这里概述油镜的原理和使用要点：检查细菌标本，多用油镜进行，油镜是一种高倍放大（95-100倍）的物镜，一般都标有放大倍数（如95×；100×等）和特别标记，以便识别。
国产镜多用“油”字表示，国外产品则常用“Oil 或“HI”作记号。
油镜上还常漆有黑环或红环，而且油镜镜身比高倍镜和低倍镜长，镜片最小，这也是识别的另一个标志。
油镜头的晶片细小，进入镜中的光量也较少，其视野比用高倍镜时为暗。
当油镜头和载玻片之间为空气层所隔时，因为空气的折光指数与玻璃的不同，故有一部分光线被折射而不能进入镜头之内，使视野更暗；若在镜头与载玻片之间放上与玻璃的折光指数相似的油类，如香柏油等，使光线不致于因折射而大为损失，则可使视野充分照明，并能使操作者清楚地进行观察和检查（图l ）。
实验室中几种常用物质的折光指数 品名 玻璃 檀香油香柏油 加拿大树胶二甲苯 液体石蜡松节油甘油 水 折光指数 1.52-1.59 1.52 1.51 1.52 1.49 1.48 1.47 1.47 1.33进行油镜检查时，应先对好光线，但不可直对阳光，采取最强亮度（升高集光器，开大光圈，调好反光镜等）。
微生物学实验-1 口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用;细菌的革兰氏染色
G-细菌
G+细菌
革兰氏染色机理
G+细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高和其分子交联 度较紧密，故在用乙醇洗脱时，肽聚糖网孔会因脱水而 明显收缩，因不含脂类，故乙醇处理不能在壁上溶出缝 隙，因此，结晶紫与碘复合物仍牢牢阻留在其细胞内， 使其呈现紫色。 G-细菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交联松散，故遇乙醇后， 肽聚糖网孔不易收缩，加上它的类脂含量高，所以当乙 醇把类脂溶解后，在细胞壁上就会出现较大的缝隙，结 晶紫与碘的复合物极易被溶出细胞壁，因此，通过乙醇 脱色后，细胞又呈无色。这时再经番红复染，就使G-细 菌染成红色，而G+细菌仍呈紫色。
实验材料
试剂：
蒸馏水； 石碳酸复红染液；香柏油；
二甲苯
光学显微镜、灭菌牙签、载玻片
实验方法
滴水 刮取牙垢 涂片 自然干燥 火焰固定
革兰氏染色或 复红染色1分钟 水洗 干燥
镜检（油镜）
口腔微生物染色操作步骤
实验结果
注意事项
1. 载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。
2. 取样时只需轻刮牙齿表面，肉眼可见少许牙垢 即可，滴水不宜过多，以免干燥时间过长；涂 片不宜过厚，以免水洗不完全造成背景杂乱。 3. 自然干燥后再进行火焰固定（以玻片不烫手为 宜）。 4. 染色过程中勿使染色液干涸。
实验目的
实验原理
微生物学实验-1
实验材料
实验方法 实验结果 注意事项 实验报告
实验一 细菌的革兰氏染色
思考题
实验目的
1. 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌 分类鉴定中的重要性。 2. 学习并掌握革兰氏染色技术，进一步 熟练光学显微镜油镜的使用技术。
实验原理
革兰氏染色法（Gram staining） 是微生物学中常用的一种染 色方法，该染色法由丹麦医 生（Christian Gram）于1884 年创立，故名。
革兰氏染色原理及步骤
革兰氏染色原理及步骤
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，可根据细菌的染色特性分为革兰氏阳性和革兰氏阴性。
该染色方法主要通过酸碱性染料的交替作用，使革兰氏阳性和阴性细菌能够在显微镜下呈现不同的颜色。
革兰氏染色的步骤分为四个主要过程：准备、染色、洗涤和观察。
1. 准备：首先需要准备好细菌涂片。
将细菌培养物均匀涂布在玻片上，使其干燥。
2. 染色：将涂片先用香精酊固定，使细菌附着在玻片上。
然后将涂片浸入革兰氏碘液中，进行固定。
固定后，将涂片通过酒精醇溶液脱色。
接下来，将涂片浸入革兰氏紫水溶液中，染色时间一般为1分钟。
染色完成后，用水冲洗涂片。
3. 洗涤：将涂片在水龙头下冲洗，直到液体变清澈。
4. 观察：将涂片在显微镜下观察。
革兰氏阳性细菌会呈现紫色，而革兰氏阴性细菌则会呈现粉红色。
总的来说，革兰氏染色方法是一种简便而有效的细菌染色方法。
通过该方法可以区分细菌的革兰氏阳性和阴性，有助于进一步分析细菌的形态结构和鉴定。
实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）
实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）一目的要求1．了解简单染色法和革兰氏染色法的基本原理，熟练掌握细菌的涂片与革兰氏染色技术。
2．初步学习细菌细胞特殊结构的染色方法，并观察细菌的特殊结构。
3．观察细菌的菌落平板，学会识别大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的菌落特征，学会初步鉴别微生物的种类的方法。
二实验内容与原理1．简单染色法原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，一般用于观察个体形态与细菌排列。
由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫对细菌进行染色。
美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使菌体着色。
染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim2．革兰氏染色法原理革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。
它是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（G －）两大类。
革兰氏染色过程：涂片→固定→结晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脱色（95% 酒精,30s）→番红复染（30 秒）→干燥→镜检阳性菌：紫色阴性菌：红色革兰氏染色要点：（1）初染：用结晶紫，染色 1 分钟，水洗。
（2）媒染：加碘液覆盖 1 分钟后水洗。
（3）脱色：连续滴加 95％乙醇，约 30 秒，直到滴下的乙醇无色为止，水洗。
（4）复染：加番红染色 1 分钟，水洗。
（5）干燥。
（6）镜检：先低倍镜，后油镜观察。
注意：涂片要薄而均匀，脱色程度要控制得当。
学生做大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草杆菌的革兰氏染色。
观察细菌个体形态与排列，绘图。
3．芽孢染色原理细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。
试验二细菌的染色和细菌细胞构造的观察-海南大学
实验二 细菌的革兰氏染色
一、实验目的
• 掌握细菌的革兰氏染色 • 进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术 • 观察和识别细菌细胞的特殊构造
二、实验的基本原理
• 细菌细胞壁的结构和组成存在差异，因此不同细菌对革兰氏染色 有不同的反应（阳性和阴性）： • 革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多脂类，肽聚糖层较薄、交联度 低，当以95%酒精脱色时，脂类被溶解除去，使得细胞壁空隙变 大，肽聚糖因95%酒精处理，其孔径会缩小，但由于肽聚糖含量 较少，细胞壁孔径缩小有限，使得结晶紫与碘形成的紫色染料复 合物被95%酒精洗脱出细胞壁之外，并被随后的红色复染剂染成 红色；
四、实验步骤
• 油镜的使用
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜， 在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细 调至看清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头 上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油， 最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。
2-1棉塞制作方法
2-2移液管灭菌前 的包装
二、培养基的配制
牛肉膏蛋白胨培养基的配制 （一）培养基配方： 牛肉膏 2.5g 蛋白胨 5.0g 、 NaCl2.5g、琼脂10.0g、自来水500mL、pH7.2~7.4 。 （二）操作步骤： 1. 取一个1000mL烧杯，装500mL蒸馏水。 2. 按配方逐一正确称取各种成分，依次加入水中溶 解。 注意：a. 前一种成分溶解之后，才能加入下一种成 分 b. 蛋白胨、肉膏可加热促进溶解 c. 加热过程应不断搅拌，以免糊底烧焦，并 适当补充因蒸发而损失的水量。
实验二细菌的观察
细菌一般形态染色观察一、实验目的学习了解微生物染色的基本原理与方法学习掌握细菌的简单染色和革兰氏鉴别染色技术巩固显微镜油镜的使用方法。
二、实验原理细菌的个体极微小，无色透明，必须借助于染色法，使细菌（或背景）着色，与背景（或菌体）形成明显的对比便于在显微镜下观察细菌的形态构造。
染色方法主要有：见下图简单染色法简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用染料有：碱性染料：结晶紫、碱性复红、龙胆紫、番红、中性红、孔雀绿等。
酸性染料：酸性复红、刚果红、曙红等简单染色一般常用碱性染料进行染色原因：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，带正电荷，因此碱性染料很容易与细菌结合使细菌着色细菌细胞壁含有蛋白质或多肽，也就有等电点已知细菌的等电点pH为2～5。
革兰氏阳性菌为2～3，革兰氏阴性菌为4～5。
当细菌的培养液pH值大于等电点时，细菌带有负电荷；反之，带有正电荷。
一般，细菌的培养、染色、试验过程均在偏碱性（7～7.5）、中性、偏酸性（6～7）条件下，都高于细菌的等电点，故均带有负电荷革兰氏染色革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法，根据细菌对这种染色反应的不同，可分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两大类，其机理是由于细菌细胞壁的化学组成及结构不同和通透性不同的缘故。
革兰氏染色对于细菌的分类、鉴定及食品卫生检测都有重要意义。
革兰氏染色原理影响革兰氏染色结果的因素菌龄培养基pH值染色技术：涂片质量、染色时间、脱色时间、染色脱色均匀度等三、实验器材1. 器材：显微镜，擦镜纸，二甲苯，香柏油，载玻片，接种环，酒精灯,火柴，吸水纸，无菌牙签。
2. 染色液及试剂：石碳酸复红染液、碱性美蓝染液、结晶紫染色液，路戈氏碘液，95％的酒精，蕃红染色液，黑色素水溶液，蒸馏水。
3. 菌种：白葡萄球菌、大肠杆菌的新鲜斜面菌种各1支。
四、操作步骤（一）简单染色涂片火焰固定染色水洗干燥镜检（二）革兰氏染色涂片→干燥→火焰固定结晶紫染色→水洗碘液媒染95%酒精脱色→水洗蕃红复染→水洗干燥镜检（三）口腔中微生物观察负染色五、实验报告1、实验结果绘图2、思考题（1）细菌制片过程应注意哪些？（2）试分析菌龄、培养pH、染色技术对革兰氏染色结果的影响。
临床微生物学检验理论课：02细菌鉴定试验-涂片染色
涂片抗酸染色结果观察
镜检时，油镜下仔细查遍整个涂片或至少100个视野； 抗酸性菌呈红色，其它细菌及细胞呈蓝色； TB为细长，着色不均匀，可2个以上的菌形成V、Y、T
等或平行排列等。
涂片抗酸染色结果报告
结果报告，1984年国内统一暂行规定报告方式： 未找到抗酸菌-； 找到抗酸杆菌1或2个，全视野发现1或2个； 找到抗酸杆菌+，全视野发现3-9个； 找到抗酸杆菌++，全视野发现10-99个； 找到抗酸杆菌+++，每视野发现1-9个： 找到抗酸杆菌++++，每视野发现10个以上。
（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验
吲哚（靛基质或蛋白胨水）试验： 阳性：色氨酸酶，分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚，
加入指示剂形成红色界面； 阴性：加入指示剂不变色； 区分普通变形杆菌（+），奇异变形杆菌（-）。
尿素分解试验： 阳性：尿素分解酶分解尿素产生大量的氨，使培养基
呈碱性，加入指示剂为红色； 阴性：加入指示剂不变色。
4、墨汁染色查隐球菌
新生隐球菌广泛分布于自然界，也可存在于人体体表、 口腔及肠道中；
经呼吸道侵入人体，由肺经血行播散时，可侵犯所有脏 器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜；
好发于细胞免疫功能低下者，如AIDS、恶性肿瘤、糖尿 病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者；
临床上怀疑脑膜炎时，常抽取脑脊液检查细菌真菌、抗 酸菌、隐球菌。
3、涂片抗酸染色：检查抗酸杆菌
据世界卫生组织估计，全球每年增加结核病人约800万 1000万，死亡病人约300万；
全人类的三分之一即17亿人曾感染过结核杆菌； 结核病人主要见于发展中国家，尤其经济落后地区； 我国是结核病高发国家，广东地区发病率较高。
实验三、细菌简单染色和运动性观察-精选文档
载玻片无油迹；滴蒸馏水不要太多；涂片要涂抹均匀
❖ 2.干燥 室温自然干燥
❖ 3.固定 涂面朝上，通过火焰2-3次，热固定温度不宜过高，以免 改变或破坏细胞形态。
❖ 4.染色 滴加石炭酸复红染液于涂片上，染色约1-2分钟
❖ 5.水洗 用自来水冲洗，直至涂片上流下的水为无色为止。
不要直接冲洗涂面，使水从载玻片的一端流下。水流不宜过大， 以免涂片薄膜脱落
❖ 6.干燥 自然干燥或用吸水纸吸干
❖ 7.镜检 涂片必须完全干燥后才能用油镜观察
结果要画出形态图
（二）细菌运动性的观察
压滴法
❖ （1）制片 加水——挑菌液——加一滴0.01%的美蓝水溶液——加盖玻片
❖ （2）镜检 先用低倍镜找标本，再用高倍镜观察。 也可用油镜观察。 观察时要用略暗光线。
二、器材
1.菌种 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) 苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）
2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ染色剂：石炭酸复红染液
3.仪器及其他用具 显微镜 酒精灯 载玻片 接种环 双层瓶 擦镜纸 蒸馏水
三、操作步骤
（一）细菌的简单染色
❖ 1.涂片 取两块载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接种
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细菌染色和涂片观察的方法
细菌的染色和涂片观察是微生物学中非常重要的实验方法，可以帮助我们识别和研究细菌的形态、结构和特征。
下面将详细介绍细菌染色和涂片观察的方法。
一、细菌染色方法：
1.革兰氏染色法：
革兰氏染色法是细菌染色中最常用的方法之一、通过该方法，细菌可以被分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
步骤：
(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。
(2)用火炬预热玻璃片，使玻璃片夹持菌液返燃。
(3)在火焰中反复将菌液加热，使其彻底干燥。
(4)将干燥的玻片放在青霉素醛固定液中，固定细菌片。
(5)用生理盐水将玻璃片在微生物操作台上反复冲洗，去除青霉素醛固定液。
(6)将玻璃片放在碘酒液中浸泡3-5分钟，使菌液变成深度蓝黑色。
(7)洗净玻片，以去除碘酒液。
(8)将玻片放入95%乙醇中，进行除膜操作，1-2秒钟后取出。
(9)玻片反复在试管中加乙醇，直至洗涤液基本为无色，然后将玻片放入流动水中漂洗。
(10)用草绿素溶液染色，将玻片浸泡5分钟。
(11)用水漂洗片面，直至玻片颜色基本不变。
(12)用纤维纸轻轻拍去多余的水分，放在显微镜载物玻片上中间，覆盖一层玻璃标本纸，压平，尽量避免产生气泡。
(13)利用显微镜观察染色结果，革兰氏阳性菌为紫色或紫蓝色，革兰氏阴性菌为粉红色。
2.肥湖水染色法：
肥湖水染色法也是常用的细菌染色法之一，可以用来观察鞭毛、纤毛等细菌结构。
步骤：
(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。
(2)用火焰热熔玻璃片，使其保持与菌液接触状态，避免菌液干燥。
(3)将玻璃片放在肥湖水溶液中浸泡2-3分钟。
(4)用生理盐水将玻璃片反复冲洗，去除肥湖水溶液。
(5)用希森润湿法将玻璃片上覆盖一层希森润湿剂。
(6)利用显微镜观察染色结果，鞭毛呈现鲜绿色，纤毛呈现暗蓝色。
二、涂片观察方法：
1.涂片制备：
涂片制备是观察细菌形态和结构最常用的方法之一、涂片制备的步骤如下：
(1)在无菌条件下，将细菌涂布于玻璃片上。
(2)用火焰或紫外线灭菌，使其迅速晾干。
2.涂片观察：
(1)将制备好的涂片放在显微镜载片上，用夹片固定。
(2)调整显微镜至10倍或40倍目镜，将载片放入显微镜观察。
(3)通过目镜和物镜逐层调节，找到合适的聚焦位置。
(4)利用调整显微镜底部的光源以及光圈大小，得到合适的亮度和对比度。
(5)观察细菌的形态和结构，使用显微镜上的尺度进行测量和计数。
总结：
细菌染色和涂片观察是微生物学中非常重要的实验方法，通过这些方法可以帮助我们了解细菌的形态、结构和特征。
其中，革兰氏染色和肥湖水染色是常用的染色方法，涂片观察是观察细菌的形态和结构最常用的方法之一、掌握这些方法对于微生物学的学习和研究都非常重要。