常见微生物标本的采集
微生物标本采集及保存要求
微生物标本采集及保存要求引言微生物标本的采集和保存是微生物学研究和诊断的基础。
正确的采集和保存方法能够确保标本的质量和完整性，并提供可靠的结果。
本文将介绍微生物标本采集和保存的要求，旨在帮助人们正确进行微生物标本的处理。
1. 标本采集前的准备在进行微生物标本采集之前，准备工作是至关重要的。
以下是一些需要注意的事项：•准备采集工具和材料: 预先准备好所需的采集工具和材料，如无菌容器、无菌拭子等。
•确保个人卫生: 采集标本前，采集人员应洗手，佩戴适当的个人防护设备，例如手套和口罩，以防止交叉感染。
•了解采集部位和要求: 在采集标本前，了解所要采集的部位和采集要求，以便采集人员能够正确操作。
2. 标本采集步骤下面是一些常见微生物标本的采集步骤：2.1 血液标本血液标本是常见的微生物病原体检测标本之一。
以下是血液标本的采集步骤：1.选择合适的采集部位: 常用的采集部位有静脉内和指尖采血。
根据需要选择合适的采集部位。
2.消毒采集部位: 使用适当的消毒剂对采集部位进行消毒，以减少细菌的污染。
3.利用无菌注射器或放血针采集血液: 选择合适的采血设备，按照正确的技术和步骤采集适量的血液。
4.将血液转移到无菌容器中: 将采集到的血液转移到适当的无菌容器中，如血培养瓶或离心管。
2.2 呼吸道标本呼吸道标本用于检测呼吸道感染。
以下是常见的呼吸道标本采集步骤：1.依照需要选择合适的采集方法: 常见的呼吸道标本采集方法包括咽拭子、鼻拭子、喉拭子等，根据需要选择合适的采集方法。
2.使用无菌拭子采集标本: 使用无菌拭子轻轻刮取相应部位的分泌物，注意避免刮伤黏膜。
3.将拭子转移到无菌容器中: 将采集到的标本拭子放入无菌容器中，并确保容器密封。
2.3 尿液标本尿液标本常用于病原体的检测和诊断。
以下是尿液标本的采集步骤：1.准备容器和适当的采集方法: 准备无菌容器和适当的采集方法，如尿杯或导尿管。
2.进行尿液采集: 采集尿液时应注意保持个人卫生，避免污染。
微生物检验标本的正确采集及注意事项
微生物检验标本的正确采集及注意事项正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。
可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。
为此应正确采集各种细菌学标本。
一、血液标本的采集1、采集方法（1）75%酒精清洁局部皮肤。
（2）待皮肤干后，再用2%—2.5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。
（3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5-10ml，婴幼儿1-5ml。
（4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。
2、注意事项（1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。
（2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。
切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。
（3）培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。
（4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。
（5）每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。
（6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。
（7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。
（8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。
二、骨髓的采集1、采集方法在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。
2、注意事项（1）骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。
几种常见微生物培养标本的采集
西双版纳州人民医院医学检验科 陈曙明
A proper clinical assessment is essential for optimal use of laboratory services!
Garbage in
Laboratory
Garbage out
•
正确获取临床微生物检查标本是 保证检查质量与提高病原分离阳性 率最基本也是最关键的环节，这包 括适宜的取材 时间、适当的取材 部位与适当的 方式获取检查标本。
一、血液及骨髓培养
• 4.采血时间、血培养频率、培养瓶的选择 • 实际操作中采血的原则是尽量在使用抗菌 药物之前采集。 • 一般的病人不同部位采集2套。 • 一般2周内没有用过抗菌药物的门诊或住院 病人用普通瓶，2周内用过抗菌药物的门诊 或住院病人用抗生素中和瓶。 • 需要特别注意的是抽好血后要注明抽血的 时间。
三、尿液培养
2.耻骨上膀胱穿刺：
使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤 消毒穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱 内细菌感染的“金标准”方法，但有 一定的痛苦，患者难以接受。主要用 于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿 尿标本的采集。
三、尿液培养
3.直接导尿：
按常规方法对会阴部进行消毒后，用 导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀 胱尿液，可减少尿液标本污染，准确 地反映膀胱感染情况。但有可能将下 尿道细菌引入膀胱，导致继发感染， 一般不提倡使用。
（5）适量采集标本 为避免因标本量少引起 的假阴性结果，标本最小采集量固体标本不 少于1g，液体标本通常不少于1ml（分枝杆 菌及真菌检查不少于10ml）。 （6）无菌操作 采集标本时严格执行无菌操 作程序。 （7）标本收集 采集的标本均应盛于惰性、 广口、带螺旋帽、容积不小于50ml的无菌容 器内送检。
标准化的微生物标本采集图文
标准化的微生物标本采集图文微生物学作为一门重要的学科，经常需要进行微生物标本采集和细胞培养。
标本采集的质量和效率直接影响到后续细胞培养和研究的可靠性和准确性。
因此，标本采集过程中需要严格遵守标准化操作规程，以确保微生物样品的质量和数量。
在进行微生物标本采集之前，我们需要先了解一些基本的采集规范和标准化流程。
在本文中，我们将详细介绍微生物标本采集的相关知识和注意事项，以便读者更好地掌握微生物标本采集的技巧和方法。
什么是微生物标本采集？微生物标本采集是指从生物组织、液体、分泌物或物体表面等部位采集微生物组织样品，进行后续的细胞培养和研究。
常见的标本种类有血液、尿液、胸腔积液、脑脊液、粪便等。
微生物标本采集需要注意什么？1. 采集前的准备工作在进行微生物标本采集之前，需要做好一些必要的准备工作，以确保采集过程的顺利进行。
这些工作包括但不限于：•熟悉标本的种类、采集方法和保存方式；•完成必要的培训课程并接受相关的操作指导；•携带必要的采集工具（如采样针、采样棉签、吸管、针头等）和采集容器；•确保采集工具和容器已经完成消毒，消毒方法可选用较为常见的热气灸法、酒精或紫外线灯消毒。
2. 采集过程中的操作规范采集过程中需要遵守一些操作规范，以确保标本的质量和数量。
具体操作规范包括：•采集方式要正确，避免对标本造成损伤或污染；•采集前后要做好手卫生，并佩戴口罩和手套等必要的防护用品；•采集时要避免受到其他因素干扰，如血液样品采集需要避免受到很强的光照；•标本采集后需要采取相应的保存方式，如储存在低温条件下或者进行新鲜处理；•注意标本的采集量，避免过多或过少。
3. 处理采集到的标本采集到标本后需要及时进行相应处理，如加枸橘霉素、厌氧试管培养等。
具体的处理方法需要按照标本类型和采集情况进行选择。
微生物标本采集的流程与方法在对微生物标本进行规范的采集之前，需要先了解标本的种类和一些基本的采集流程和方法。
具体的采集流程和方法如下：1. 血液标本采集血液标本采集是指从人体血管中采集微生物标本（包括静脉血、动脉血、毛细血管血等等）。
临床微生物样本采集规范
临床微生物样本采集规范临床微生物样本采集规范1. 范围和目的本规范适用于临床微生物样本的采集、处理和管理，旨在保证样本采集的质量和规范性，确保临床微生物诊断结果的准确性和可靠性。
2. 术语和定义（1）微生物：指包括细菌、真菌、病毒、支原体、立克次体、螺旋体等在内的微小生物体。
（2）临床样本：指从患者体内采集的各种生物标本，如血液、口腔、鼻咽部、骨髓、尿液、痰液、脑脊液等。
（3）采集容器：指用于采集临床样本的容器，如血液采集管、尿样瓶、培养皿等。
（4）采集套装：指一次完整的样本采集过程中所需的所有采集工具和材料。
3. 采集前准备（1）确定采集部位、时间和采集方式，注意患者的生命体征和病情变化。
（2）准备好所需的采集套装和采集容器，在样本采集前做好标签，并核对患者信息。
（3）认真阅读所有相关规范和实验室要求，确保样本采集符合要求。
4. 采集操作步骤（1）根据采集部位和样本类型选择合适的采集套装。
（2）采集前应让患者了解采集的目的和过程，并获得其同意。
（3）采集前要检查采集部位，患者的身体状态和生命体征，确保采集过程安全和无痛苦。
（4）采血时应注意采血量、采血速率、采血部位、采血方式等。
（5）尿样采集时应注意尿样的采集量、采集时间、采集方式、保护好样本的完整性和纯度。
（6）痰液采集时应注意痰液的颜色、黏度、量和纯度，选择合适的采集器具和采集方式。
（7）脑脊液采集时应注意采集部位、采集方式、采集量、采血顺序和样本处理标准等。
（8）其他临床样本采集时，应根据具体要求和操作规范，选择合适的采集方法和器具。
5. 样本运输和储存（1）在采集后，立即将样本放入相应的采集容器中，尽快送至实验室进行处理。
（2）若无法立即处理样本，应按要求在采集容器中注明采集时间和采集者信息，并存储在规定温度下，以便后续处理。
（3）运输过程中应遵循规范，确保样本不泄漏、不污染，并尽快送至目的地。
（4）储存过程中应保持样本的纯度和完整性，控制储存温度，在保质期内使用。
临床微生物学检验的标本采集
临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。
（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。
按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。
2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。
2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。
3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。
（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。
2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。
3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。
4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。
（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。
2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。
二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。
（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。
准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。
2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。
为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。
（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。
微生物标本采集原则
微生物标本采集原则血液标本：采血时间：应在抗生素治疗前、发热初期或高峰时为好。
方法：以无菌方法从患者静脉采血，血液抽出后，立即以无菌操作注入双相培养瓶中，充分混匀后送检。
采血量：成人3-5ml；小孩1-3ml。
脑积液标本：方法：由临床医生以无菌操作作腰椎穿刺，取收集于第一支无菌试管中的脑脊液（2-3ml）立即送检。
穿刺液标本（胸水、腹水、心包积液及关节液等）：方法：用无菌方法用注射器抽取体内可疑感染部位的液体（胸水、腹水、心包积液及关节液等），立即以无菌操作注入双相培养基瓶中，充分混匀后送检。
痰标本：采集时间：一般以晨痰为好。
方法：在流取痰标本前用清水反复漱口（务必刷牙），以减少常居菌污染，后尽量咳出气管深部痰标本，吐入无菌容器内立即送检。
咽拭标本：用无菌棉拭纸搽拭患者鼻烟部黏膜，置无菌试管内送检。
尿液标本：方法：留取标本前先清洗外阴或尿道口，弃去前段尿，留取中段尿于无菌容器内送检。
标本量：5-7ml。
生殖道标本：女性：用无菌棉拭采集阴道或宫颈分泌物盖回试管内送检。
男性：务必将尿道口清洗干净，用无菌男性棉拭采集尿道分泌物。
采集前列腺液时将按摩流出的前列腺液滴于无菌男性棉拭送检。
浓液及创伤感染分泌物标本：封闭性脓肿标本：消毒局部皮肤或黏膜表面后，用注射器抽取，将注射器针头盖回立即送检。
开放性伤口分泌物：先用无菌生理盐水冲洗伤口表面，用无菌棉拭尽量取伤口深处分泌物送检。
表面皮肤刮片标本（真菌培养）：在病灶皮肤表面用玻片轻轻刮取，将皮肤表皮刮起，将无菌棉拭用无菌生理盐水弄湿涂取刮起的皮削送检。
粪便标本：自然排便后，用无菌棉拭挑取其浓血、粘液部分送检。
注：1、所有标本采集容器都应是一次性、经过灭菌及带盖的无菌容器。
2、请各位医生及护士严格按照无菌操作原则采集标本，否则将会误导临床诊断和治疗等后果。
3、标本采集时如有疑问请致电检验科质询。
常见标本的采集及相应标本的微生物分布情况
生殖道标本采集
注意事项 生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格
遵循无菌操作以减少杂菌污染
生殖道标本采集
粪便标本采集及常见病原菌
采集方法
1、自然排便采集法：自然排便后，挑取有脓血 或粘液部位的粪便，液状粪便取絮状物盛于 无菌容器中及时送检
2、直肠拭子采集法：适用于排便困难患者或婴 幼儿。用肥皂水清洗肝门周围，用无菌盐水、 保存液润湿肝门采集拭子插入肝门（成人约 4~5cm,婴幼儿约2~3cm）轻轻旋转，采集后 及时送检
标本采集的一般原则
早期采集 采集标本最好是在病程早期、急性
期，且必须在使用抗菌素药物之前
严格无菌操作 尽量减少或避免与病灶周围正常
菌群和外源性细菌污染标本（如中段尿标本及阴道 分泌物的采集）
采集适量标本 标本量过少可能导致假阴性结果 盛放标本容器 无菌容器
血液及骨髓标本采集及常见病原菌
2、闭锁性脓肿：闭锁性脓肿标本指有完整脓壁 与体腔，与外界不相通的脓肿，如淋巴结脓 肿、乳腺脓肿、胸腔脓肿、腹腔积液、关节 腔积液及各器官脓肿等标本。之类标本应采 集渗出物和脓肿壁标本，一般不主张用拭子 采集标本，采集此类标本前应对病灶局部皮 肤或粘膜表面进行消毒，用无菌注射器将脓 肿内容物抽出，然后切开脓肿、引流，采集 脓液标本（大于1ml）送检。
3、如标本注入无菌试管时，试管应用先加入灭菌肝 素后在注入标本，防止标本凝固；另一方面是由于 标本在接种时发生二次污染的机会较大，本人建议 少用。
穿刺液标本采集及常见病原菌
注意事项 1、标本采集过程严格无菌操作，防止污染。 2、为了防止标本凝固，最好在无菌试管中预先
加入灭菌肝素抗凝剂，抗凝剂：标本=1：10 或可以直接注入血培养瓶送检 3、标本送检过程中必须保证其安全，防止溢出， 避免环境污染。 4、此类培养时最好同时做血培养
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常见微生物标本的采集、处理与检测标本采集的基本原则：尽早采集、根据可疑的病原体，选择不同采集时机和标本种类、在抗生素应用前采集、遵守无菌操作、正确保存和运送。
容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和外壁。
1.血液标本正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入时可引起严重的菌血症或败血症。
一般情况下在患者发热初期或发热高峰时采集；持续性菌血症可随时采集；间歇性菌血症，应预测其体温上升期进行采血。
一般在使用抗生素前采集2~3次；多部位采集，如两侧肘静脉或动、静脉同时采取；对于已使用抗生素而无法停止的患者，也应在下次用药前采取。
在感染局部的附近血管中采血，可提高阳性率。
采血量成人一般5~10ml，婴幼儿1~2ml。
采集的血液标本注入培养瓶中先进行增菌培养，培养基和血液标本量的比例应>10：1，将血液中的各类杀（抑）菌物质充分稀释。
需氧菌常用培养基有胰酪蛋白大豆胨肉汤和葡萄糖酚红肉汤等，常加入对氨基苯甲酸（PABA）50μg/ml中和磺胺类，青霉素酶2单位/ml破坏青霉素类，硫酸镁中和链霉素、四环素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗生素。
加入0.03~0.05%的聚茴香磺酸钠（sodium polyanethol sulfonate, SPS）可抑制血清中的抗菌物质，并对氨基糖苷类和多肽类抗生素有灭活效果。
并加入Ⅹ、Ⅴ因子等生长因子。
培养瓶每天观察一次。
如发现①培养瓶内液体浑浊；②血球层上面出现颗粒状的生长物，并且有自下而上的溶血；③有明显的凝块；④液体表面有菌膜，培养液清晰或浑浊等，表明有细菌生长。
直接进行涂片染色初步报告。
同时分别接种血平板、巧克力（色）平板，普通培养和5%CO2 35℃培养。
也可直接进行体外药敏试验。
无细菌生长迹象的培养瓶孵育至第7d，接种血平板、巧克力（色）平板，分别进行普通培养和5%CO2环境35℃孵育24h。
为了提高检出的速度，在培养的第2~3d时应移种一次。
有厌氧菌感染时，同时注入需氧瓶和厌氧瓶，厌氧培养基通常用硫乙醇酸盐培养基、牛心脑浸液肉汤等；培养液中有刃天青，无氧时无色，有氧时呈红色。
需氧瓶和厌氧瓶同时浑浊，或需氧瓶无生长而厌氧瓶液体浑浊，提示厌氧菌生长。
分别接种血平板和厌氧血平板，置需氧和厌氧环境中，如果都只生长1种细菌，则为兼性厌氧菌；如果仅在厌氧环境中生长，可以直接报告“有厌氧菌检出”。
若长期应用抗细胞壁类抗生素，应考虑细菌L型存在，将血液接种高渗培养基中，分别进行需氧、厌氧和5%CO2环境培养。
每周移种2~3次于高渗固体培养基上，观察有无细菌L型菌落生长。
2.呼吸道标本正常上呼吸道有正常菌群。
下呼吸道正常情况下无细菌或仅有少量细菌侵入咽拭子直接涂片检查怀疑白喉的标本，应立即进行涂片革兰染色和异染颗粒染色。
如发现有呈Y、V、T等排列的棒状杆菌，有异染颗粒时可报告“找到有异染颗粒的革兰阳性杆菌”。
也可用特异性的荧光染色法检查A群溶血性链球菌和百日咳鲍特菌。
培养检查接种血平板，观察细菌的生长情况。
有无特别的菌落生长，如为上呼吸道的正常菌群，比例大致正常，则报告“未检出致病菌”；如果某一种菌群明显占多数或接近纯培养，应考虑该菌与疾病有关，鉴定后报告。
呼吸道标本特殊菌的培养百日咳鲍特菌接种在鲍-金（Border-Gengou）平板；白喉棒状杆菌接种吕氏血清斜面或鸡蛋培养基，同时接种亚碲酸钾血平板；脑膜炎奈瑟菌带菌者的鼻咽拭子35℃保温运送，尽快接种在35℃预温的卵黄双抗平板上，置3~5%CO2环境中35℃孵育24h。
流感嗜血杆菌用巧克力平板或选择性平板。
化脓性A群链球菌的接种血平板，在接种原始区贴一张0.04U的杆菌肽纸片作为A群链球菌存在的指示。
痰液标本，采集晨痰为好。
观察标本的性状，选取脓血性的部分，如发现有颗粒、菌块及干酪样物，可能是放线菌或真菌感染。
有异常恶臭，与厌氧菌有关。
直接涂片染色检查发现，以柱状上皮细胞为主，有中性白细胞及细菌，则可根据形态和染色性直接报告，并且作为分离细菌时选择培养基的依据。
如果以鳞状上皮细胞为主，很少发现白细胞，则为不合格标本。
如有颗粒、菌块及干酪样物也应进行涂片检查，发现具有典型的真菌或放线菌样的菌落特点，可直接报告“找到真菌（放线菌）”。
痰液标本在分离接种前一般进行前处理，方法有均质化和洗净法。
痰液标本至少同时接种血平板、巧克力平板和EMB（或Mac Conkey平板）。
3.尿液标本正常人的尿液是无菌的，女性月经期间容易污染，不宜采集。
尿液的采集方法有：中段尿采集法、肾盂尿采集法、膀胱穿刺法，膀胱穿刺法一般用于厌氧菌培养的标本采集或不能正确留取中段尿而需确定诊断的儿童。
尿液标本检验采用定量培养的方法进行尿液菌落计数区别污染和病原菌。
一般认为尿液中的菌落数>105/ml为病原菌，<104/ml为污染菌，<105/ml >104/ml为可疑需重新复查，重新复查后仍为同样结果，则应视为病原菌。
会受到尿量、尿液在膀胱中停留的时间长短及使用利尿剂等影响。
计数的方法有：平板涂布法、倾注培养法和标准接种环法。
一般接种血平板和EMB（或Mac Conkey平板），或CLED平板。
尿液细菌L型较为常见，可同时接种L型平板。
尿液标本的快速检验用于尿液快速细菌检验的方法有硝酸盐还原法、氯化三苯四氮唑（TTC）还原法、尿中抗体包被细菌法和产色培养基法等。
4.脑脊液标本正常人的脑脊液是无菌的。
脑脊液标本的采集以无菌手续通过腰椎穿刺采集脑脊液3~5ml，应立即送检或床边接种。
应在35℃保温运送。
直接涂片检查由细菌引起的化脓性脑膜炎一般呈现混浊，在抗生素治疗后亦可不混浊。
此外结核性脑膜炎、无菌性脑膜炎等也不混浊。
可直接涂片革兰染色检查，不混浊的可3000r/min离心10~15min后取沉淀涂片染色检查。
如发现革兰阴性、凹面相对的双球菌，位于中性白细胞内外，则可报告“找到革兰阴性双球菌，位于细胞内（外），疑似脑膜炎奈瑟菌”；有革兰阳性矛头状的双球菌，菌体周围有明显的荚膜，可报告“找到革兰阳性双球菌，疑似肺炎链球菌”。
用肺炎链球菌全价抗血清进行荚膜肿胀试验，阳性者可报告“荚膜肿胀试验检出肺炎链球菌”；发现其他形态的细菌，可根据形态和染色性进行报告。
涂片阳性的标本最好进行标本的直接药敏试验。
应立即接种在35℃预保温的血平板和巧克力平板上,置5~10%CO2环境35℃培养18~24h。
脑脊液标本一般经3d培养仍未见细菌生长，可报告“经3天培养无细菌生长”。
脑脊液标本特殊病原菌的检验结核分枝杆菌将脑脊液4000r/min离心30min，取沉淀抗酸染色；或将脑脊液在室温下静置18~24h，待形成纤维网后，倾倒在洁净玻片上抗酸染色。
或用金胺“O”进行荧光染色观察。
取沉淀接种罗-琼培养基进行结核分枝杆菌的培养。
新型隐球菌将脑脊液离心沉淀后，进行墨汁负染，可在黑色背景中观察到折光性很强的菌体和周围似晕轮样的透明荚膜，有时可见到生芽的新型隐球菌。
5.粪便标本的采集粪便标本于急性腹泻期及未使用抗生素之前采取自然排出的粪便，挑选粘液、脓血部分，置无菌容器、保存液或增菌培养基中。
可用肛门拭子。
不能立即送检的标本应放入Cary-Blair运送培养基中。
（1）直接涂片检查临床怀疑是霍乱弧菌、结核分枝杆菌感染或菌群失调需要大致估计菌群比例、二重感染（伪膜性肠炎、真菌性或葡萄球菌性肠炎）时进行直接涂片染色检查。
霍乱弧菌的涂片检查取“米泔水”样粪便或肛门拭子涂片2张，干燥后用乙醇或甲醇固定，分别进行革兰染色和1：10稀释石炭酸复红染色，用油镜观察有无革兰阴性、鱼群样排列的弧菌。
另外也可进行悬滴法动力试验和制动试验。
菌群失调及菌交替症取粪便标本直接涂片，进行革兰染色油镜观察，根据菌群的形态和染色特征可大致描述菌群的情况。
疑为伪膜性肠炎的患者标本中如发现大量革兰阳性呈葡萄状排列的球菌，则可报告“找到革兰阳性呈葡萄状排列的球菌”；如发现革兰阳性粗大杆菌、无荚膜，通常有位于菌体一端的卵圆形芽胞者，可报告“找到革兰阳性芽胞杆菌，疑似艰难梭菌”。
结核分枝杆菌取半个指甲大小粪便块，与饱和盐水10~15ml搅和，静置，1~2h后取最上层液体作涂片，进行抗酸染色检查。
（2）分离培养沙门菌属和志贺菌属直接接种肠道强选择性培养基（SS琼脂、木糖赖氨酸去氧胆酸钠琼脂）和弱选择性培养基（如Mac Conkey、EMB、中国蓝琼脂）各1个；携带者的检查，可将粪便标本接种于GN增菌液（适用于沙门菌属和志贺菌属）和亚硒酸盐或四硫磺酸盐增菌液（适用于沙门菌属）增菌后转种于肠道强和弱选择性培养基上观察菌落特征。
霍乱弧菌可疑标本接种于碱性蛋白胨水中进行35℃增菌，同时接种含糖双洗平板、庆大霉素琼脂平板或TCBS琼脂平板。
增菌培养6h后，取增菌液表层菌膜移种于上述平板中进行分离培养，同时取增菌液作革兰涂片染色和悬滴法动力试验和制动试验。
副溶血性弧菌取可疑粪便（或可疑食物）接种于副溶血性弧菌增菌液中，同时划线接种于副溶血性弧菌选择性平板和SS平板上。
肠致病性大肠埃希菌取可疑粪便标本接种在中国蓝平板（或Mac Conkey平板或EMB平板）。
小肠结肠炎耶尔森菌将可疑标本接种于新耶尔森菌选择培养基（NYE）、Mac Conkey及SS琼脂平板。
带菌者可将标本接种于1/15mol/LpH7.4~7.8的PBS中，在4℃进行冷增菌。
空肠弯曲菌取可疑粪便或在Cary-Bair运送培养基中的粪便标本接种于Camp-BAP血琼脂或Skirrow血琼脂，或接种于CEM增菌液在微需氧环境下培养18~24小时后接种上述平板，在微需氧环境下培养42~48h。
菌群失调及菌交替症要对粪便中的所有菌群进行观察，将粪便定量接种在肠道选择性培养基、需氧和厌氧血平板，甘露醇盐琼脂，沙保弱培养基等，观察各菌群的生长情况，进行鉴定后报告各菌群比例。
怀疑艰难梭菌的菌交替症时，如为黄色、夹有伪膜的粪便应立即接种CCFA平板，进行厌氧培养。
如为绿色、海水样粪便，应怀疑为金黄色葡萄球菌感染，接种甘露醇盐琼脂，有黄色菌落按葡萄球菌鉴定。
如为真菌性腹泻，常发生在抗生素使用之后，将标本接种在沙保弱培养基及血平板上，进行鉴定。
6.生殖道标本男性尿道、生殖器分泌物用无菌棉签将脓液采集在无菌试管中。
由临床医师从肛门进行前列腺按摩，收集前列腺液。
女性生殖道标本直视采集阴道后穹隆分泌物。
盆腔脓肿的患者应消毒阴道后从后穹隆穿刺抽取脓液。
子宫分泌物的采集采用双套管的方式插入子宫腔吸取分泌物。
外阴分泌物对外阴部位的硬下疳,从其溃疡底部挤出少许组织液，以洁净玻片直接沾取，加盖玻片后送检。
涂片检查对一般细菌和淋球菌的检查用革兰染色；梅毒螺旋体用暗视野显微镜或镀银染色法检查；结核分枝杆菌进行抗酸染色。
培养检查一般细菌培养用血平板和Mac Conkey平板各一个；培养淋病奈瑟菌需要巧克力平板或卵黄双抗平板.7.脓液、胸腹水及分泌物等其它标本封闭性脓肿直接穿刺；疑为厌氧菌感染者，应立即将注射器内的空气排空，将针头插入橡皮塞中隔绝空气；开放性脓肿或瘘管从深部采取标本。