MALDI样品制备方法
maldi-tof-m 鉴定菌株的流程
maldi-tof-m 鉴定菌株的流程
Maldi-TOF-MS（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry）是一种常用于鉴定微生物菌
株的快速、准确且高通量的技术。
以下是Maldi-TOF-M鉴定
菌株的一般流程：
1. 准备样本：从培养的纯菌培养物中取一小块细菌落或菌液，然后在银基质上涂抹样品。
2. 干燥：将样品凉干或使用空气吹干，以去除水分。
3. 氨基酸基质添加：使用辅助基质（常见的是α-氰基-4-羟基
肉豆蔻酸）涂抹在样品上，以促进离子化。
4. 晶片装载：将处理好的样品芯片放入MALDI-TOF质谱仪中。
5. 质谱测量：向样品表面照射激光，产生离子化的分析物质，并根据离子质量通过飞行时间测量分析物的质量-电荷比
（m/z）。
6. 数据分析：使用专门的软件将测得的质谱数据与数据库中的参考谱进行比较，以鉴定菌株。
根据样品的质谱图与数据库中的谱图进行匹配，软件会给出最符合的结果。
7. 结果解读：根据软件提供的匹配结果和相似度，判断菌株的种属和可能菌株。
总的来说，Maldi-TOF-M鉴定菌株的流程主要包括样品准备、质谱测量和数据分析等步骤，通过比较样品的质谱与数据库中的参考谱图，可以准确快速地鉴定菌株。
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF MS）是一种高分辨率、高灵敏度的质谱分析技术，广泛应用于生物分子的分析和鉴定。
本文将从MALDI-TOF MS的原理、仪器构成、样品制备、数据处理等方面进行详细介绍。
一、原理MALDI-TOF MS的原理是利用基质分子（matrix）将待分析的生物分子样品与激光束混合后，通过激光的辐射能量将样品分子离子化，然后将离子加速到飞行管（flight tube）中，通过离子的质量-电荷比（m/z）比较离子的飞行时间，最终得到样品分子的质谱图。
二、仪器构成MALDI-TOF MS主要由以下几个部分组成：1. 激光系统：用于产生激光束，通常采用氮气激光或二极管激光。
2. 基质系统：用于制备基质，通常采用较小的有机分子，如辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase）或环状芳香族化合物。
3. 样品系统：用于制备待分析的生物分子样品，通常采用溶液法或固相法。
4. 离子源：用于将样品分子离子化，通常采用正离子模式或负离子模式。
5. 飞行管：用于加速离子并测量离子的飞行时间，通常采用直线型或反射型。
6. 探测器：用于检测离子并将信号转换为电信号，通常采用微通道板（MCP）或多道光电倍增管（PMT）。
三、样品制备MALDI-TOF MS的样品制备通常采用溶液法或固相法。
溶液法是将待分析的生物分子样品与基质混合后，通过激光的辐射能量将样品分子离子化。
固相法是将待分析的生物分子样品固定在基质表面后，通过激光的辐射能量将样品分子离子化。
四、数据处理MALDI-TOF MS的数据处理主要包括质谱图的解析和峰的识别。
质谱图的解析是将离子的飞行时间转换为离子的质量-电荷比（m/z），并绘制出质谱图。
峰的识别是通过峰的位置、峰的形状和峰的强度等特征，识别出样品分子的质量和结构信息。
五、应用MALDI-TOF MS广泛应用于生物分子的分析和鉴定，如蛋白质、核酸、糖类等。
MALDI样品制备方法
MALDI-TOF的样品制备¾样品制备¾基质选择¾样品净化样品制备的一般顺序：选择基质制备基质溶液制备样品溶液混匀基质和样品点靶放干100 pmol/µl多聚物10 -100 pmol/µl 核酸0.1 -10 pmol/µl (糖蛋白10 pmol/µl)多肽和蛋白质理想浓度样品类型理想的样品浓度注: 1 pmol/ul = 10-6M 常见的样品制备方法干燥液滴法真空干燥法压碎结晶法快速蒸发法双层法夹心法电喷雾法快速点样法预点基质法先点样品法 压片法干燥液滴法操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸取5-10 uL基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ，涡旋混匀•吸取0.5-2 uL点靶•室温自然干燥本法最为常用，适用于大多数情况。
干燥液滴法的优缺点优点1.方法简单，适用于很多种样品2.具有较好的耐盐性3.适用于混合物4.可以洗去表面的不挥发性盐份缺点1.使用某些基质（如2,5-dihydroxybenzoic acid ）时，结晶不均匀，容易长在液滴的外环边上。
2.有些组份与基质不能形成共结晶。
真空干燥法操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸取5-10 uL基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ，涡旋混匀•吸取0.5-2 uL点靶•把靶放入真空干燥器内，抽真空到10-2Torr以下，使溶液快速干燥注：本法是干燥液滴法的一种变体。
真空干燥法的优缺点优点减小结晶颗粒的大小提高结晶的均匀程度提高质量准确度和分辨率缺点效果不总是好于干燥液滴法需要额外的真空泵碱金属离子加合峰较强压碎结晶法操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸1 uL基质溶液点到靶上，自然放干•取一块干净的玻璃片盖在基质晶体上按压•轻轻刷去多余的基质碎颗粒•吸取5-10 uL基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀•吸取1 uL混合液点到压碎的干燥基质上•室温自然干燥1分钟后，把靶浸入蒸馏水中，以除去不挥发性溶剂•用吸水纸吸去多余水份，自然放干注：本法适用于含有高浓度不挥发性物质（如甘油、尿素、DMSO等）的样品压碎结晶法（简化版）操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心，吸1 uL基质溶液，用枪头在靶上涂刮，自然放干•吸取5-10 uL基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀•吸取1 uL混合液点到压碎的干燥基质上•室温自然干燥1分钟后，把靶浸入蒸馏水中，以除去不挥发性溶剂•用吸水纸吸去多余水份，自然放干。
mals质谱原理
MALDI（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization）质谱原理是一种常用的质谱 分析技术，它主要用于分析生物大分子（如蛋白质、肽段、核酸等）的分子质量。
MALDI质谱原理的基本步骤如下：
1. 样品制备：将待分析的生物大分子与一个辅助基质（matrix）混合，并通过溶解、混 合、蒸发等步骤制备成固态样品。
5. 数据分析：通过测量离子到达检测器的时间，可以计算出离子的质量。质谱仪会生成质 谱图，其中横轴表示m/z值，纵轴表示离子信号强度。
mals质谱原理
MALDI质谱原理的关键在于辅助基质的选择和样品制备。辅助基质的主要作用是吸收激 光能量并传递给样品分子，帮助样品分子形成带电离子。样品制备过程中，辅助基质会将样 品分子包裹在其中，减少样品分子之间的相互作用，有利于样品分子的解离和离子化。
MALDI质谱技术具有快速、高灵敏度、高分辨率和简单样品制备等优点，广泛应用于生 物医学研究、蛋白质组学、药物研发等领域。
2. 激光辐射：用一束激光照射样品表面，激光的能量会被辅助基质吸收，导致基质分子发 生光解和脱附。
mals质谱原理
3. 电离：激光的能量使得基质分子脱离样品质谱：带电离子经过加速和聚焦后，进入质谱仪，通过串联质谱（TOF，Time-ofFlight）技术进行分析。离子在电场中加速，根据它们的质荷比（m/z）的大小，离子会以不 同的速度到达检测器。
MALDI样品制备方法
快）中配制新鲜的饱和基质溶液 • 离心,吸取 5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中 • 加入1-2 uL样品溶液,涡旋混匀 • 吸取 0.5 uL 点在放干的基质颗粒上，放干 • 除盐：吸5-10 uL 0.1% TFA加到样品点上 ，放置2-10秒钟，
挥发性溶剂 • 用吸水纸吸去多余水份，自然放干
注：本法适用于含有高浓度不挥发性物质（如甘油、尿素、DMSO等）的样品
压碎结晶法（简化版）
操作步骤： • 在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液 • 离心，吸1 uL基质溶液，用枪头在靶上涂刮，自然放干 • 吸取 5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中 • 加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀 • 吸取 1 uL 混合液点到压碎的干燥基质上 • 室温自然干燥1分钟后，把靶浸入蒸馏水中，以除去不挥
快速蒸发法的优缺点
优点 1. 结晶均匀，颗粒小，无甜点效应 2. 信号强度与浓度的相关性更好 3. 灵敏度、分辨率和准确度更好 4. 便于除盐 5. 可批量预点基质 (类似于PAC靶)，便于通量分析
缺点 1. 制样的重现性较差，点与点之间的重现性较差 2. 对肽有效，但对蛋白的效果久佳
双层法
操作步骤： • 先配底层基质：用易挥发溶剂（如丙酮或甲醇）配制浓的基质
100 pmol/µl
常见的样品制备方法
干燥液滴法 真空干燥法 压碎结晶法 快速蒸发法 双层法 夹心法 电喷雾法 快速点样法 预点基质法 先点样品法 压片法
干燥液滴法
操作步骤： • 在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液 • 离心,吸取 5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中 • 加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ，涡旋混匀 • 吸取 0.5-2 uL 点靶 • 室温自然干燥
质谱成像技术的样品制备和数据分析方法
质谱成像技术的样品制备和数据分析方法质谱成像技术（Mass Spectrometry Imaging，简称MSI）是一种通过质谱仪将物质分析技术与空间成像相结合，能够在样品表面获取分子成分及其分布信息的高分辨率成像技术。
它已经在生物医学领域、环境科学和食品分析等方面得到广泛应用，并取得了卓越的成果。
本文将介绍质谱成像技术中样品制备和数据分析方法的一些重要内容。
一、样品制备方法在进行质谱成像之前，样品的制备是一个至关重要的环节。
样品制备的好坏直接影响到成像结果的质量和准确性。
常见的质谱成像样品制备方法主要有四种。
1. 直接组织切片法：这是最常见的样品制备方法之一，适用于固态样品。
首先，将样品切割成适当的薄片，然后将其固定在载玻片上，再进行后续的前处理和质谱成像分析。
2. 冷冻切片法：适用于含有水分的生物组织。
将样品迅速冷冻，并使用冷冻切片机将其切割成薄片，然后进行后续的处理和成像。
3. MALDI样品制备法：主要适用于质谱成像中利用基质辅助激光脱附离子化（MALDI）技术。
样品与基质混合并涂覆在特殊的载玻片上，然后进行质谱成像分析。
4. 涂片法：适用于液态样品的质谱成像。
将样品溶液均匀涂在载玻片上，然后通过干燥等方法将其固定在载玻片上，最后进行质谱成像分析。
以上是一些常用的质谱成像样品制备方法，根据具体的实验目的和样品类型，还可以选择其他更适合的方法。
二、数据分析方法质谱成像技术生成的数据通常较为复杂，需要进行合适的数据分析和处理才能获取有价值的信息。
下面将介绍几种常用的质谱成像数据分析方法。
1. 特征峰提取方法：通过对质谱图像进行处理，提取出显著的特征峰。
特征峰可以是特定分子的离子峰，也可以是一组特定质荷比的离子峰。
提取的特征峰可以提供样品中特定分子的分布情况和相对含量。
2. 数据去噪和背景减除：质谱成像数据中常常存在着噪音和背景信号，需要进行去噪和背景减除处理，以减少干扰，提高数据质量。
这一步骤通常采用滤波器、基线校正等方法。
maldi-ms原理
maldi-ms原理
Maldi-MS（Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry）是一种质谱分析技术，其原理如下：
1. 选择合适的基质（matrix）：基质是一种有机分子，其能够吸收紫外光或激光光源的能量，并将其转化为热量。
基质通常具有较低的挥发性，能够与待测样品分子相互作用，利于样品光解和电离。
常用的基质包括较大的有机分子，如辣根过氧化物酶、辣椒黄素等。
2. 混合样品和基质：待测样品和基质以一定的比例混合。
在样品中加入基质的目的是增加待测分子的脱附和电离效率，促进样品分析物质变成气相离子。
3. 挥发和结晶：将样品-基质混合物溶液滴于金属或晶体基板上，然后通过真空等手段去除混合物中的溶剂。
待溶剂挥发后，基质分子结晶并固定在基板上，样品分子则与基质分子相互作用形成共晶体。
4. 激光辐射：使用激光器产生一个脉冲激光束，激光的波长通常为紫外光或红外光。
激光能量被基质分子吸收，导致基质蒸发并产生冲击波，使共晶体分子飞散。
5. 电离和飞行时间测量：由于激光的能量作用下，样品分子离子被脱附和电离，并以高速进入飞行时间质谱仪中。
质谱仪通过分析离子的飞行时间和质量-电荷比，将离子分离并识别。
综上所述，Maldi-MS通过基质辅助激光脱附和电离的方法，能够高效地分析待测样品中的分子质谱信息。
该技术在化学、生物化学、药学等领域的分析中得到广泛应用。
maldi-ms原理
maldi-ms原理
Maldi-MS（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry）是一种常用的质谱分析技术。
它的原理如下：
1. 样品制备：首先，使用一种称为基质的有机化合物与待测分子混合，并制备样品。
这个基质通常是一种能够吸收能量并产生分子离子的化合物。
2. 激光照射：然后，使用一束激光照射样品。
这个激光的能量会被基质吸收并转化为热能，从而导致基质分子的振动和解离。
3. 离子化：热能的转化使得样品中的分子变得高度激发。
接下来，这些激发态的分子会从基质中脱离，并形成带正电荷的分子离子。
4. 飞行时间测量：分子离子以经过称为飞行管的真空室中的非常高速的速度沿着导向电场飞行。
在飞行过程中，离子的质量和电荷比决定了它们的加速度和导向。
较轻质量离子比重质量离子加速更快，到达检测器的时间更早。
5. 信号检测：离子到达检测器（通常是微通道板或静电反射器）时，它们会引起电流的产生。
该电流的大小取决于离子的相对丰度，在衡量飞行时间的基础上，可以使用电流的大小来确定离子的质量。
最后，该信号会被放大并记录下来。
6. 数据分析：通过计算飞行时间和解析信号强度，可以得到离子的质量/电荷比（m/z）谱图。
这个谱图可以提供关于样品中
分子的质量和丰度的信息。
总体来说，Maldi-MS利用激光照射样品，将分子离化并将其加速飞行，然后通过测量飞行时间和检测信号强度来分析质谱数据。
这种技术广泛应用于生物分子、有机化合物和无机物质等领域的分析研究。
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MALDI-TOF的样品制备¾样品制备¾基质选择¾样品净化样品制备的一般顺序：选择基质制备基质溶液制备样品溶液混匀基质和样品点靶放干100 pmol/µl多聚物10 -100 pmol/µl 核酸0.1 -10 pmol/µl (糖蛋白10 pmol/µl)多肽和蛋白质理想浓度样品类型理想的样品浓度注: 1 pmol/ul = 10-6M 常见的样品制备方法干燥液滴法真空干燥法压碎结晶法快速蒸发法双层法夹心法电喷雾法快速点样法预点基质法先点样品法 压片法干燥液滴法操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸取5-10 uL基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ，涡旋混匀•吸取0.5-2 uL点靶•室温自然干燥本法最为常用，适用于大多数情况。
干燥液滴法的优缺点优点1.方法简单，适用于很多种样品2.具有较好的耐盐性3.适用于混合物4.可以洗去表面的不挥发性盐份缺点1.使用某些基质（如2,5-dihydroxybenzoic acid ）时，结晶不均匀，容易长在液滴的外环边上。
2.有些组份与基质不能形成共结晶。
真空干燥法操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸取5-10 uL基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ，涡旋混匀•吸取0.5-2 uL点靶•把靶放入真空干燥器内，抽真空到10-2Torr以下，使溶液快速干燥注：本法是干燥液滴法的一种变体。
真空干燥法的优缺点优点减小结晶颗粒的大小提高结晶的均匀程度提高质量准确度和分辨率缺点效果不总是好于干燥液滴法需要额外的真空泵碱金属离子加合峰较强压碎结晶法操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸1 uL基质溶液点到靶上，自然放干•取一块干净的玻璃片盖在基质晶体上按压•轻轻刷去多余的基质碎颗粒•吸取5-10 uL基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀•吸取1 uL混合液点到压碎的干燥基质上•室温自然干燥1分钟后，把靶浸入蒸馏水中，以除去不挥发性溶剂•用吸水纸吸去多余水份，自然放干注：本法适用于含有高浓度不挥发性物质（如甘油、尿素、DMSO等）的样品压碎结晶法（简化版）操作步骤：•在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液•离心，吸1 uL基质溶液，用枪头在靶上涂刮，自然放干•吸取5-10 uL基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ,涡旋混匀•吸取1 uL混合液点到压碎的干燥基质上•室温自然干燥1分钟后，把靶浸入蒸馏水中，以除去不挥发性溶剂•用吸水纸吸去多余水份，自然放干。
注：本法适用于含有高浓度不挥发性物质（如甘油、尿素、DMSO等）的样品压碎结晶法的优缺点优点1.简单有效2.对高浓度杂质有较好的容耐性3.结晶更均匀，点与点之间的重现性更好缺点1.比较费时2.难以高通量3.吸取基质溶液时，要防止吸入未溶解的基质颗粒快速蒸发法操作步骤：•在丙酮中加入1-2%的水或0.1%TFA(v/v)，再加入基质，使其浓度至半饱和（饱和至1/3饱和之间）•吸0.5 uL基质点靶•吸1 uL样品溶液点在放干的基质颗粒上，放干•除盐：吸5-10 uL0.1% TFA加到样品点上，放置2-10秒钟，吹去液滴注：本法的分辨率和准确度最好快速蒸发法的优缺点优点1.结晶均匀，颗粒小，无甜点效应2.信号强度与浓度的相关性更好3.灵敏度、分辨率和准确度更好4.便于除盐5.可批量预点基质(类似于PAC靶)，便于通量分析缺点1.制样的重现性较差，点与点之间的重现性较差2.对肽有效，但对蛋白的效果久佳双层法操作步骤：•先配底层基质：用易挥发溶剂（如丙酮或甲醇）配制浓的基质溶液(5-50 mg/mL)•吸0.5 uL底层基质点靶，放干•再配上层基质：在适当的溶剂（对基质的溶解能力不能太强太快）中配制新鲜的饱和基质溶液•离心,吸取5-10 uL基质溶液上清,加到小离心管中•加入1-2 uL样品溶液,涡旋混匀•吸取0.5 uL点在放干的基质颗粒上，放干•除盐：吸5-10 uL0.1% TFA加到样品点上，放置2-10秒钟，吹去液滴注：本法结合了压碎晶体法和快速蒸发法的特点，分辨率和准确度很好双层法的特点1.继承了快速蒸发法的优点，克服了其不足2.提高了灵敏度和制样重现性3.对于含有多肽和蛋白质的混合物很有效夹心法操作步骤：•在丙酮中加入1-2%的水或0.1%TFA(v/v)，再加入基质，使其浓度至半饱和（饱和至1/3饱和之间）•吸0.5 uL基质点靶•吸1 uL样品溶液点在放干的基质颗粒上，放干•再配上层基质：在适当的溶剂（对基质的溶解能力不能太强太快）中配制新鲜的饱和基质溶液•吸1 uL上层基质溶液点在放干的样品点上，放干。
夹心法（改良版）操作步骤：•在丙酮中加入3%体积的0.1%TFA，再加入基质至饱和•吸取10 ul该饱和溶液涂在AnchorChip靶的两排点上，立即自然干•吸1 uL样品溶液点在放干的基质颗粒上，放干•再配上层基质：在适当的溶剂（对基质的溶解能力不能太强太快）中配制新鲜的饱和基质溶液•吸1 uL上层基质溶液点在放干的样品点上，放干•加5ul 10mM 柠檬酸氢二铵(含0.1%TFA)以除盐。
放置10秒后吸干•加1 ul重结晶溶液(0.1g HCCA 溶解在1L乙醇:丙酮:0.1%TFA (6:3:1)的混合液中)。
电喷雾法操作步骤：•用毛细管吸取少量配好的样品与基质的混合溶液•把毛细管固定在金属靶板的上方，管尖离靶板0.5–3 cm。
•靶板接地,在毛细管上加3–5 KV的电压，使溶液喷在靶板上。
注：样品分布均匀，结晶颗粒很小很匀。
电喷雾法的优缺点优点1.制样均匀,重现性很好2.信号强度与样品浓度的相关性很好3.样品更耐激光的轰击4.可以与毛细管电泳或液相色谱进行连接缺点1.操作繁琐费时，每个样品约需5分钟，通量较低。
2.容易形成盐的加合物，需要脱盐3.需要额外设备和培训4.需要高电压，有一定危险快速点样法操作步骤：z吸1 uL样品点在靶上z立即再加1 uL基质溶液z用枪头在靶上混匀z风干后,加2-5 uL冷水进行靶上除盐快速点样法的优缺点优点1.快速2.适于蛋白的靶上酶解分析3.便于在样品中加入内标缺点1.条件不易控制2.重现性较差预点基质法操作步骤：•在靶上点好基质,放干备用•把样品溶液点在基质上注: 本法快速,灵敏度高,可以与液相色谱或毛细管电泳相连进行在线点靶先点样品法操作步骤：•先在AC靶上点样品(考染酶解液1ul ，银染酶解液3ul)。
•放干后，再点1 ul基质(0.4mg/ml HCCA溶于70%乙腈，0.1%TFA)。
•放干后，再点1 ul0.1%TFA，放置1分钟，吸干溶液。
注：适用于胶内酶解样品和AnchorChip靶压片法操作步骤：•把样品与基质碾碎后混匀•在靶上压成片状注:本法适用于无法溶解的样品样品制备注意事项样品应可溶于样品与基质的混合溶剂在制样过程中,要小心溶剂挥发引起组成的变化自然放干或风干,不要加热促干基质溶液要现配要尽量避免不挥发性溶剂,如甘油、PEG、Triton-X100、DMSO和DMF等尽量对样品进行除杂纯化必要时应进行样品的靶上脱盐及重结晶在点靶前，避免样品与基质的混合溶液中出现未溶解的基质 晶体生长时，溶液的pH值应小于4在最终点靶的溶液中，样品的终浓度应低于10 uM预先混匀法可以使混合物的分析重现性更好¾样品制备¾基质选择¾样品净化基质选择指南: 根据样品的种类及性质核酸多肽/蛋白质多聚物多糖CHCA/HCCAa-cyano-4-hydroxycinnamic acidHCCA广泛应用于多肽和小蛋白的分析，特别适用于多肽的一级和二级质谱分析，是蛋白质鉴定的首选基质。
用CHCA测蛋白分子量时，容易形成带多个电荷的离子。
基质的重结晶纯化（当基质纯度不够时）•在温乙醇中加入CHCA至溶解饱和•过滤除去不溶物后，加入二倍体积的冷水，4°C 静置24 hr以上。
•过滤，沉淀用冷水清洗后晾干即可CHCA的制样方法干燥液滴法这是金属靶的标准制样方法•基质溶液: HCCA饱和于TA (ACN : 0.1% TFA, 1:2)•样品溶液: 多肽和蛋白在溶液中的浓度为10 fmol/ul-1 pmol/ul.•两溶液等体积混匀后，取0.5 ul点靶。
薄层法•在板上点0.5 ul HCCA (在丙酮中饱和)基质，使成一薄层。
也可以在基质溶液中加入1/5体积的硝基纤维素溶液(20 g/l溶于acetone/2-propanol 1:1) 。
•取0.5 ul酸化的样品溶液(pH<6 !) 点在基质层上（如果pH>6，基质层会被溶解）•放干(如果怕样品氧化，可以进行真空干燥（真空度100 mbar）•用5-10 ul冷0.1% TFA靶上脱盐2-3次Sinapinic acid (SA)3,5-dimethoxy-4-hydroxycinnamic acidSA适用于很多多肽和蛋白质，尤其是分子量较大的蛋白质(10-150 kDa)，也可用于一些极性多聚物的分析和蛋白质的源内裂解分析，但对小肽(<3 kDa) 的信号较差。
用SA测量蛋白质的分子量时，通常观察到加合离子(+224 Da, 206 Da)SA的制样方法干燥液滴法•把基质SA (饱和于ACN : 0.1 % TFA, 1:2) 和样品溶液等体积混匀•取1 ul点靶，室温自然放干双层法(可提高灵敏度)•把底层基质SA (饱和于乙醇) 点到靶上，使形成一薄层•样品用0.1 % TFA稀释至1 pmol/ul•把样品与上层基质SA溶液(饱和于ACN : 0.1 % TFA, 1:2)等体混匀•取0.5 ul点到底层基质上注：对于MW>50 kDa的蛋白质，可以用上层基质SA溶液(饱和于ACN : 0.1 % TFA, 1:2)稀释样品。
先用干燥液滴法，也可以用压碎晶体法DHBDHB (2,5-dihydroxybenzoic acid, gentisic acid)2,5-DHB广泛应用于多肽、蛋白质、极性多聚物和多糖等的分析，是磷酸肽和糖肽分析常用的基质，也可用于蛋白质的ISD分析和脂类的分析。
适用于AnchorChip™靶，不加有机相在水中即可溶解。
缺点：结晶呈大的针状，不均匀，导致分辨率和准确度下降DHB的制样方法干燥液滴法(用于多肽和蛋白质)•将样品和基质溶液2,5-DHB (10 g/l in ACN : 0.1 % TFA , 1:2) 等体积混匀后点靶•用SDHB 取代2,5-DHB，可减少大蛋白(>50 kDa)的碎裂•用AnchorChip靶可避免甜点效应，并提高灵敏度干燥液滴法(用于多糖)•把样品溶液(10 pmol/ul in water) 和基质溶液2,5-DHB (EtOH:H2O , 1:2) 等体积混匀•取1 ul点靶，凉风吹干•多糖以加钠峰的形式存在于样品点的中央而不是周边的晶体中干燥液滴法(用于PEG)•把样品(5mg/ml)、基质2,5-DHB (10 mg/ml) 和0.1M 三氟乙酸钠(13.6 mg/ml)均溶于丙酮，按体积比10:50:2混匀•取0.5 ul点靶DHB基质的不同干燥方法比较真空干燥•容易形成盐加合物•结晶更均匀,便于自动分析•利于中性多糖和聚合物的分析•效果类似于使用高比例有机相作基质溶剂自然干燥•盐加合物较少•结晶不均匀•利于多肽和蛋白的分析superDHB(sDHB)“Super DHB”(DHB + 10% 5-methoxysalicylic acid)SDHB 是2,5-dihydroxybenzoic acid (2,5-DHB)和2-hydroxy-5-methoxybenzoic acid的混合物，适用于大蛋白和糖蛋白的分析及蛋白质的ISD分析。