结核病实验室诊断技术及应用
+
M africanum
+
+
M bovis
+
+
BCG substrain
-
-
gothenburg
-
-
moreau
-
-
tice
-
-
tokyo
-
-
danish
-
-
glaxo
-
-
montreal
-
-
pasteur
-
-
环境分枝杆菌
M abcessus M avium M branderi M celatum M chelonae M fortuitum M gordonii Mintracellulare
蛋白质组学的发展
3、4、7种结核杆菌优势表位抗原
（16KD、38KD、MPT64、ESAT-6、CFP10、Mtb8、Mtb8.4、
Mtb16.3）制备多靶点蛋白微阵列
大量的文献报道其敏感性
特异性均显著高于涂片与培养法
可用于结核病的临床辅助诊
断，提高痰涂片和痰培养假阴性的检测率
参考文献略
结核病实验室诊断技术及应用
M kansasii
M malmoense M marinum M oenavense M crofulaceum
M smegmatis
M szulgai M terrae M vaccae M xenopi
抗原
ESAT6
+ + + + -
CFP-10
+ + + + -
结核病实验室诊断技术及应用 12
结核病实验室诊断技术及应用
结核病实验室诊断技术及应用
全球范围内结核病疫情急剧恶化 全球1/3人口（约20亿）已感染了结核菌， 人口的大规模流动 结核病与艾滋病同时流行 结核菌耐多药菌株的出现 我国是世界上仅低于印度和印尼的第三结核病大国 患病率高， 新发患者93万/年，结核菌感染率为约40％ 死亡率高，每年死亡人数达13万 耐药率高 早期快速诊断与治疗成为制约结核病防控的关键因素 常规结核病实验室检测方法诊断阳性率不到60％。
血清学检测
交叉污染
WHO不推荐
仪器要求复杂
r-干扰素释放实 反应抑制
验
结核病实验室诊断技术及应用
RNA诊断：
TMA NASBA
SAT
20世纪90年代
高灵敏度 高特异性 交叉污染少
一、细菌法 直接涂片 （阳性率低—5000以上细菌/ml；
不能区分真假、死活）
结核病实验室诊断技术及应用
•列入欧美25个国家结核诊疗指南 2011年英国NICE指南、2010年美国最新结核诊疗指南、
2010年加拿大结核指南
•美国CDC推荐—卡介苗（BCG）接种人群结核感染检测首选
• 国内风湿科和消化科已列入专家共识
分枝杆菌固体培养与液体培养比较
疑似新发患者报阳时间 （d）
复诊患者报阳时间(d) 疑似新发患者阳性率
复诊患者阳性率 污染率
液体培养 （BD MGIT960）
13.63±7.14
22.94±9.55 32.00% 9.30% 6.57%
固体培养 （罗氏L-J）
28.67±10.04
28.53±10.40 17.90% 2.60% 4.0%
一、细菌法 结核菌的培养
结核病病原学诊断的金标准 (培养时间长是其软肋)
结核病实验室诊断技术及应用
一、细菌学检测的新方法 —提高阳性率
➢ 发光二极管荧光显微镜（LED） ➢ 液体培养（可同时缩短培养时间） ➢ 自动化涂片/染色技术（夹层杯法）
不能区分真假、死活；培养仍是金标准 但耗时长、
结核病实验室诊断技术及应用
准确—T-SPOT临床诊断性能
• 特异性
阴性预测值：93.9%（478/509） 阳性预测值：95.4%（624/654）
只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗（ BCG）无交叉反应
➢美国FDA数据：特异性97.1%(297/306) ➢国内临床数据：特异性94.1%(478/508)
结核病实验室诊断技术及应用
WHO关于血清学检测声明
2011年7月20日，世界卫生组织（ WHO ）正式声明，要 求禁止将 血清学检测方法 （抗原，抗体，蛋白芯片等）用
于肺结核和肺外结核的诊断。
WHO warns against the use of inaccurate commercial serological tests for pulmonary and extra-pulmonary TB.
γ-干扰素释放实验（IGRAs)
Interferon-Gamma Release Assays
结核病实验室诊断技术及应用 10
结核杆菌特异抗原：ESAT-6与CFP10
ESAT-6 : 早期抗原靶6（Early Secreted Antigenic Rarget 6） CFP10 : 培养滤液蛋白10（Culture Filtrate Protein 10）
《摘自2014年中国结核病监测报告》
结核病实验室诊断技术及应用
结核病检测技术发展历程
分子诊断时代
细菌法： 直接镜检 体外培养
19世纪中叶
灵敏度低 检测周期长 成本低
免疫学检测： Ab Ag PPD
T-SPOT
20世纪60年代
DNA诊断：
PCR LAMP GeneXpert 基因芯片
20世纪80年代
•由结核杆菌基因组RD1区相同的操 纵子编码的蛋白 •所有的卡介苗（BCG）均丢失RD1 和RD2 •绝大多数的环境分枝杆菌(NTM)也 不存在RD1和RD2区
结核病实验室诊断技术及应用 11
结核杆菌特异抗原：ESAT-6与CFP10
结核菌群
抗原
ESAT6
CFP-10
M tuberculosis +
液体培养在提高阳性率、缩短报阳时间上均优于固体培养。
仍然不能满足临床快速诊断的需要
吴学兵，陆彬，桂晓虹等。液体MGIT结培养核法病在实结验核室分诊枝杆断菌技检术测及中应的应用用评估。检验医学，2013,3（28）：211-214
二、免疫学检测
➢血清学检测（抗体、抗原） ➢结核菌素试验（灵敏度、特异性？） ➢结核感染T细胞检测（γ-干扰素检测）
• 灵敏度
基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率
➢美国FDA数.3%(624/655)
结核病实验室诊断技术及应用 13
T-SPOT相关指南
•T-SPOT®.TB是采用γ-干扰素释放试验（IGRA）原理，获得
美国FDA认证、欧盟CE认证和首个中国CFDA认证的商业化 产品
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测的金标准是基于培养和鉴定结核分枝杆菌。
以下是具体步骤：
1.痰液样本收集：患者需要提供早晨醒来时的深咳痰液样本，
以获得有效的细菌数量。
2.痰液预处理：痰液样本经过预处理，包括离心和去除杂质。
这一步通常包括液体化和浓缩痰液。
3.痰液培养：将预处理后的痰液接种到培养基上，通常是液体
培养基。
培养基中的结核分枝杆菌将逐渐增殖形成菌落。
4.鉴定：通过常规培养、染色和生化试验等方法，鉴定已培养
的菌落是否为结核分枝杆菌。
5.药敏试验：对已鉴定的结核分枝杆菌进行药敏试验，以确定
哪些药物对其具有抗菌作用，从而为治疗方案的选择提供依据。
此方法被认为是金标准，因为它能够准确检测到结核分枝杆菌，并且可以确定其对药物的敏感性，为结核病的诊断和治疗提供可靠的结果。
但是，该方法需要相对较长的时间（通常需要几周）来进行培养和鉴定，因此在临床实践中可能需要其他更快速的检测方法来尽早确诊结核病。
肺结核的检查项目有哪些？
肺结核的检查项目有哪些？检查项目：病原学检查、X线胸片检查、胸部CT扫描、经皮肺穿刺术、结核菌素试验实验室诊断：1.细菌学检查痰涂片及培养查找结核菌是诊断肺结核最特异的方法，也是监测疗效、病原传染性和选择用药的重要依据。
沉淀或漂浮集菌法涂片，或采用荧光镜检可提高阳性率，若无痰可采用导痰法，或取气管灌洗液或取清晨胃液均可。
2.结核菌素试验：是判断结核感染的主要手段，但不论是旧结核菌素(OT)或纯蛋白衍生物(PPD)均非纯化抗原，对于鉴别是结核杆菌感染还是非结核杆菌感染或是卡介苗接种后反应有局限性。
结素试验强阳性(局部肿结>2cm或有水疱、坏死)提示处于结核超敏状态，对原发型肺结核、结核性胸膜炎有诊断参考价值。
3.血清学检查由于结核菌的弱抗原性以及抗原的非特异性，结核病的血清诊断学至今未取得实质性进展。
近年大量报道的酶联免疫吸附试验(ELISA)，敏感性颇高，但方法学尚不成熟，特异性也不满意。
采用PPD复合蛋白抗原剂，虽然敏感性和特异性可提高，但其仍非单一特异性抗原。
4.基因诊断近几年结核菌基因诊断技术受到广泛的关注。
有关文献报道最多的是PCR技术的应用，具有快速、特异、灵敏的特点，但其操作有很高的技术要求，可因扩增气溶胶污染而致假阳性或标本中抑制物的存在而致假阴性。
5.纤维支气管镜检查：可为病理学诊断和病原学诊断提供标本。
影像学诊断：1.X线检查不同类型和性质的病变表现不同，对于诊断肺结核无特异性，但是诊断肺结核的必备检查，可为进一步病因学检查提供对象，并为确定病变部位、范围、性质，了解其演变和选择治疗提供重要依据。
原发型肺结核典型X线表现为肺内原发灶、淋巴管炎和肿大的肺门或纵膈淋巴结组成的哑铃状阴影。
急性血行播散型肺结核胸片可见散布于两肺野，分布较均匀，密度和大小相近的粟粒状阴影，早期有时难以分辨;亚急性或慢性血行播散型肺结核粟粒大小和密度不一，或为结节状病变，范围较局限。
继发性肺结核，多为渗出，浸润和纤维结节的混合病灶，X线表现为云絮状或斑点结节状阴影，干酪性病变阴影密度偏高而不均匀，或有空洞形成而出现透亮区，结核空洞一般洞壁较光整液平少或仅见浅液平。
三种肺结核实验室诊断方法评估
三种肺结核实验室诊断方法评估发布时间：2023-02-24T03:39:06.796Z 来源：《医师在线》2022年32期作者：赵静2 田敏敏1 邓淑文1 李金方3 赵蓉芬1*[导读] 目的阐明LAMP技术联合痰涂片和培养检测在肺结核确诊诊断的价值，为制定和完善本区肺结核的防控指南提供依据.方法收集送检疑似肺结核患者痰标本563份，进行直接涂片镜检、固体培养和环介导恒温扩增检测（LAMP）检测。
赵静2 田敏敏1 邓淑文1 李金方3 赵蓉芬1*1苏州高新区人民医院检验科江苏苏州 2151292苏州市第五人民医院临床检验中心江苏苏州2151313苏州高新区疾病预防控制中心疾控科江苏苏州215011【摘要】：目的阐明LAMP技术联合痰涂片和培养检测在肺结核确诊诊断的价值，为制定和完善本区肺结核的防控指南提供依据.方法收集送检疑似肺结核患者痰标本563份，进行直接涂片镜检、固体培养和环介导恒温扩增检测（LAMP）检测。
结果检测563份结核门诊送检痰标本中，257份来自临床诊断肺结核病例痰标本，三种检测方法阳性率由高到低依次为：分子检测LAMP阳性率最高（53.7%），培养阳性率次之（47.5%），直接涂片阳性率最低（15.2%）；35例临床诊断肺结核患者三种方法检测同时阳性，占13.6%，培养和LAMP检测同时阳性率64例，最高（24.9%）；306份临床诊断非肺结核病例痰标本，272例三种检测方法检测未检到结核分枝杆菌，实验室检查阴性率占88.9%，假阳性率由高到低分别为LAMP检测5%，培养4.2%，涂片1%。
结论 LAMP（环介导恒温扩增）技术可以作为培养方法的替代技术，帮助临床医生早期诊断，确诊肺结核，并进行抗结核治疗。
【关键词】肺结核；涂片；固体培养；lamp2020 年苏州高新区发病率为 49.13/10 万，肺结核仍居苏州市法定报告甲、乙类传染病首位，防控形势仍旧严峻。
急需快速、准确、简便的诊断技术和预防结核病感染新疫苗、新药品的出现［1］。
结核病实验室检查及意义PPT课件
BCG接种者（如果也属于其 它风险人群）
推荐用IGRA
与传染性肺结核患者密切接 触
TST或IGRA
医务工作者
TST或IGRA
无法再来确认TST结果的人 群（例如，流浪汉，注射吸
毒者或交通不方便）
推荐用IGRA
TST，如果TST阴性要用 IGRA确认
没有特定的推荐
TST，用IGRA进一步确认 TST阳性 推荐用TST
非血 样本 的T-SPOT结果 很 强的话 （即 存 在大量 的结 核 效应 T 细 胞）,揭示在这个器官或部位存在活动性结核。
各国对潜伏感染风险人群的筛查指南
风险人群
美国指南Hale Waihona Puke 加拿大指南英国指南
免疫力抑制人群（例如， HIV感染者，使用强的松或
TNF-α抑制剂治疗）
TST或IGRA；如果是阴 性或高度怀疑的，TST和
与BCG的交叉反应
存在
存在的可能性较小
与NTM的交叉反应
存在
存在的可能性较小
与M.TB暴露的相关性
存在
相关性较PPD皮试大
阳性结果与随访期间罹患结核的相互关 系
可重复性
中到显著的正相关 中等，但可变
无充足的证据 较高，但证据较少
T-SPOT实验
阴性结果 提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。假阴性结 果： ①感染阶段不同；②少数免疫系统功能不全/疾病；③实验非正 常操作。
结核分枝杆菌-实验室检查
适用于多种标本；操作简便，价格低廉。 2份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性。
结核杆菌培养
传统方法：L-J固体培养基 快速培养法: 检测细菌生长过程中代谢产生的CO2或消耗的O2， 显微镜直接观察、变色液体培养基等BACTEC MGIT960系统等。
qftt检测的原理及临床应用价值
QFT-T检测的原理及临床应用价值1. 原理介绍QFT-T（QuantiFERON-TB Gold Test）是一种血清学检测方法，用于诊断结核病。
它基于渗透素刺激人体T淋巴细胞，测量干扰素-γ（IFN-γ）的水平。
该检测方法在临床实践中被广泛应用，并且具有明显的优势。
QFT-T检测的原理如下： - 收集患者的静脉血样本，并将其分为三个试管。
- 第一个试管是阴性控制试管，其中只含有血清来激活细胞。
- 第二个试管是激动性试管，其中加入渗透素（TB抗原）来刺激T淋巴细胞产生干扰素-γ。
- 第三个试管是阳性控制试管，其中加入Phytohemagglutinin（PHA）来刺激T淋巴细胞产生干扰素-γ。
- 所有试管培养24小时后，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）来测量干扰素-γ的水平。
- 最后通过计算，来确定结核感染的结果。
2. 临床应用价值QFT-T检测在临床上具有较高的应用价值，主要体现在以下几个方面：2.1 早期诊断QFT-T检测可以在结核病早期提供可靠的诊断依据。
相比于传统的结核菌素皮肤试验，QFT-T检测具有更高的灵敏度和特异性，能够更准确地检测出感染者。
2.2 鉴别结核感染与结核病QFT-T检测能够帮助鉴别结核感染与结核病之间的差异。
对于那些接触过结核菌但尚未发展成结核病的患者，QFT-T检测可以帮助确定是否需要进行预防性治疗。
2.3 监测疗效QFT-T检测可以用于监测结核病患者的疗效。
治疗后，干扰素-γ水平会下降，所以通过定期检测QFT-T结果可以评估治疗效果。
2.4 排除结核感染QFT-T检测可以帮助排除结核感染。
对于那些胸部X线检查和症状都不典型的患者，通过QFT-T检测可以帮助减少不必要的结核病治疗。
3. 优势与局限QFT-T检测作为一种新兴的结核病诊断技术，具有以下优势：•高灵敏度和高特异性•操作简单，结果可靠•能够早期发现结核感染•可以在结核菌素皮肤试验失效的情况下使用然而，QFT-T检测也有一定的局限性：•需要专业的实验室设备和技术人员•无法区分活动性结核病与非活动性结核感染•在免疫功能低下的患者中的准确性可能较差4. 结语QFT-T检测作为一种基于干扰素-γ水平测量的新型结核病诊断方法，在临床上具有较高的应用价值。
结核实验室检查项目
结核实验室检查项目包括痰涂片、痰培养、结核菌素试验和胸部X线检查等。
1. 痰涂片：通过显微镜观察痰液中的结核杆菌是否存在，是诊断结核病的常用方法之一。
2. 痰培养：将痰液置于培养基上进行培养，检测结核杆菌的生长情况，可以确定病原体的种类和药物敏感性。
3. 结核菌素试验：注射结核菌素后观察皮肤反应，判断是否感染了结核杆菌。
阳性结果需要进一步确认是否为活动性结核病。
4. 胸部X线检查：通过X光照射胸部，观察肺部是否有结核病变，如结节、空洞等。
对于早期病变或隐匿性病变的发现具有重要意义。
这些检查项目可以帮助医生确定患者是否患有结核病，并指导治疗方案的选择和调整。
同时，这些检查也有助于监测治疗效果和预防结核病的传播。
结核病实验室检查
结核病实验室检查结核病是一种严重的传染病，通常由结核分支杆菌引起。
这种病菌会侵入肺部并引起肺结核，而也可以通过血液传播到其他部位，如淋巴、骨髓和肝脾等。
在许多地方，特别是在发展中国家，结核病仍然是一种普遍的疾病，因此及早诊断和治疗至关重要。
结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
结核病实验室检查通常涉及多种类型的检测，例如：1.酸杆菌检测结核分支杆菌是酸杆菌，因此酸杆菌检测是一种常用的实验室检查方法。
该方法不需要复杂的设备并且具有高度的特异性和灵敏度。
患者的样本可以是咳嗽的痰液、唾液或肺组织，也可以通过胃镜获得胃肠液。
如果酸杆菌检测呈阳性，则可以确诊结核病。
但是，该方法也存在一些局限性，例如在一些情况下不能检测出结核分支杆菌，如某些菌株可以耐受某些药物。
2. 结核抗体检测结核抗体检测是另一种可以用于诊断结核病的实验室检查方法。
该方法通常使用ELISA（酶联免疫吸附试验）或其他类似方法检测患者的血清中是否存在结核抗体，如果测试结果呈阳性，则表示患者可能感染了结核分支杆菌。
但是，结核抗体检测的结果可能会出现假阳性或假阴性的情况，这限制了其在临床实践中的应用。
3.结核病PCR检测PCR检测是检查抗原核酸序列的一种方法。
由于PCR技术可以扩增极微量的DNA，并且非常特异和灵敏，因此可以检测出非常小的感染量。
在结核病中，PCR检测可以用于检测结核分支杆菌的DNA，以确认病原体的存在。
但是，该方法对样本中的DNA污染非常敏感，因此必须进行严格的实验室操作和质量控制。
总之，结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
这些测试方法都具有不同的优缺点，并且结果可能受到许多因素的影响。
因此，必须在临床实践中综合考虑这些方法的结果和临床表现，以取得最佳的诊断结果。
同时，实验室技术人员必须受过专业培训，严格遵守操作规程，以确保准确诊断和最佳治疗效果。
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病实验室诊断技术
GenoType MTBDR and 诊断结核感染及对利福 MTBDRplus；INNO- 平和异烟肼药物敏感性 LiPA Rif.TB
Frane; LW Scientific; Zeiss
诊断结核患者
Cepheid GeneXpert
诊断结核感染及对利福 平的耐药性
WHO推荐的结核新诊断技术
方法 DNA微阵列芯片法
有前景的几种新技术
❖ 分子诊断技术:GeneXpert（Cepheid公司） ❖ 分子线性探针技术:INNO-LIPA（Innogenetics公司） ❖ 反向点杂交技术:GenoType MTBDR （Hain Lifescience）
分枝杆菌菌种鉴定试剂盒（亚能生物） ❖ 基因芯片技术：微阵列芯片法（博奥生物） ❖ 细胞免疫学技术：T-SPOT.TB（Oxford Immunotec公司）
目前诊断方法回顾
细菌学检测方法 ： 涂片、常规培养、快培 其他辅助检查方法：皮试、结核抗体
目前诊断方法的局限性
涂片的缺点： 敏感性低； 特异性差； 无法区别死菌与活菌
培养的缺点： 耗时久，一般需4~8周； 阳性率低，约30%~50%；特异性差， 无法区别MTB与NTM
皮试的缺点： 敏感性低特异性差 抗体检测缺点：敏感性低特异性差
新型诊断技术产品比较
企业 美国 Cepheid
比利时 Innogenetics 德国 Hain Lifescience 中国 亚能生物
中国 博奥生物
英国 Oxford Immunotec
方法
产品特点
GeneXpert
同时检测MTBC和判断利福平耐药； 快速；简便；安全
线性探针杂交法 （INNO-LIPA）
➢ 新的实验诊断技术可弥补传统方法的不足，提高诊 断的灵敏度和特异性，但各有缺点或不足，难以完 全满足临床检测需求，因此，新型结核杆菌诊断技 术及产品的研发势在必行。
结核病实验室诊断技术2017.10.13
• 绝对浓度法 • 比例法
• 液体培养法
基于固体培养基；时间：4周 多种药物
基于液体培养基，时间：4-12天 INH/RFP/SM/EMB/PZA
结核分枝杆菌药物敏感试验
不同药敏方法的差异
三者在临界药物浓度接种菌量、结果判读方法等方面都有一定差 别，导致结果有很少一部分不相符
比例法和绝对浓度法检测结果的一致率4 药均高达96 %以上,对于 结核分支杆菌,二种方法测试 SM INH RFP EMB的耐药率均无显著 性差异
涂片显微镜检查的敏感性
观察到的AFB
AFB估计数量 涂片阳性的可能性(%)
数量
( /ml)
• 0 in ≥100 fields
< 1,000
<10
• 1-2 in 300 fields 5,000 – 10,000
50
• 1-9 in 100 fields about 30,000
80
• 1-9 in 10 fields
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
利用固体罗氏鉴别培养基的鉴别：
中性罗氏 培养基
+
噻吩-2-羧酸 肼TCH
+
对硝基苯 甲酸PNB
+
菌型鉴定 NTM
+
+
-
人型Mtb
+
-
-
牛型Mtb
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
• 原理：硝基苯甲酸还原酶机制
绝大部分非结核分枝杆菌能将对硝基-苯甲酸（PNB ）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸（PABA），而 绝大部分（98%以上）MTBC缺乏对硝基-苯甲酸（PNB ）还原酶活性，为对氨基-苯甲酸（PABA）将对硝基苯甲酸（PNB）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸 （PABA） • 局限：鉴定周期长15天-30天，特异性不高