人凝血因子Ⅷ效价测定一步法
凝血因子Ⅷ抑制物的实验室检测
APTT纠正试验
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APTT纠正试验
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全自动化、快速、重复性好、易于标准化 易受干扰
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THANKS！
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抑制物定义： 将受检血浆与或正常人血浆混合， 37℃温育2h后，
检测剩余因子Ⅷ的活性，以Bethesda单位（BU）来计算 抑制物的含量，1BU相当于灭活50%因子Ⅷ的量。 检测方法： 1. APTT纠正试验 2. Nijmegen 法、Bethesda法、ELISA法等
经典方法，耗时费力，重复性差，标准化程度差
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重复性
定量检测性能评价
N=10 Level 1 Level 2 Level 3 Level 4 Level 5 Level 6 Mean 0.12 0.68 6.30 16.76 21.10 63.31
SD 0.01 0.09 0.40 0.79 1.68 5.04 CV% 11.23 13.46 6.29 4.72 7.96 7.96
凝血因子Ⅷ抑制物的实验室检测
南方医科大学南方医院检验科
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FⅧ抑制物检测的临床意义： 1. 替代治疗并发症（20%～30% ） 2. 监测出血倾向 3. 指导免疫抑制剂的合理使用 4. 因子剂量的使用指导 5. 获得性血友病的诊断
血凝效价的简易计算法
血凝效价是衡量生物体血液中凝血因子活性的重要指标，通常用于评估凝血功能是否正常。
在实际应用中，血凝效价的计算常常采用一些简易方法，以便更快速地得出结果，为临床应用提供参考。
下面是血凝效价的简易计算法的介绍。
一、试管法
试管法是一种常用的血凝效价计算方法。
该方法需要使用凝血酶原时间（PT）试剂和凝血酶时间（TT）试剂。
首先将待测血浆与PT试剂混合，记录凝血时间。
然后将待测血浆与TT试剂混合，同样记录凝血时间。
最后通过计算公式，即可得出血凝效价。
二、机械法
机械法是一种自动化程度较高的血凝效价计算方法。
该方法需要使用自动凝血分析仪，将待测血浆加入分析仪中，由仪器自动完成凝血过程并计算出凝血时间。
该方法具有操作简便、结果准确等优点，因此在临床应用中越来越广泛。
三、比色法
比色法是一种基于光学原理的血凝效价计算方法。
该方法需要使用特定的比色试剂，将待测血浆与试剂混合后，通过比色计测量光密度变化，从而计算出凝血时间。
该方法具有灵敏度高、结果稳定等优点，但需要较为精密的仪器和操作技巧。
以上三种方法均为简易计算法，相对于传统的复杂计算方法具有更高的效率和实用性。
但需要注意的是，这些方法仅适用于特定的凝血因子检测，对于某些凝血因子缺陷或异常的情况可能无法得出准确结果。
因此，在实际应用中需要结合患者的具体情况选择合适的方法进行血凝效价的计算和评估。
冻干人血浆凝血因子Ⅷ效价检测条件探讨
冻干人血浆凝血因子Ⅷ效价检测条件探讨
胡东;张荣波;许礼发;王瑜;吴静;李朝品
【期刊名称】《国际检验医学杂志》
【年(卷),期】2005(026)007
【摘要】目的明确由于标准品不同及样品的处理不同而带来的差异,建立一种重复性好、可行性强的凝血因子Ⅷ效价测定的适宜方法.方法采用部分凝血活酶时间(APTT)法测定人凝血因子Ⅷ效价,同时对该方法的精密度、准确度进行分析.结果凝血因子Ⅷ为预稀释液效价检测回收率为1.0102,高于白蛋白CA BUFFER(回收率=1.0605);冷冻人干凝血因子Ⅷ为标准品明显低于标准血浆(t=8.536,P＜0.000 5).结论对于凝血因子效价检测,标准品及样品处理的统一规定是必要的.
【总页数】2页(P474-475)
【作者】胡东;张荣波;许礼发;王瑜;吴静;李朝品
【作者单位】232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R5
【相关文献】
1.人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨
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4.人凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨
5.人凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨
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人凝血因子Ⅷ效价测定一步法
人凝血因子Ⅷ效价测定一步法1 试剂1.1样品稀释液：取1容积的3.8%枸橼酸钠液加入5容积咪唑缓冲液。
1.1.1 咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17g氯化钠溶于100ml蒸馏水中，加入42.2ml 0.1mol/L盐酸，然后被加入蒸馏水至200ml,pH为7.3。
1.1.23.8%枸橼酸钠溶液称9.5g枸橼酸钠溶解于250ml蒸馏水中。
1.2 血小板代用品“兔（人）脑组织的氯仿抽提液”。
用前用生理盐水稀释至适当倍数。
1.3白陶土生理盐水混悬液称0.5g白陶土加生理盐水至100ml即可使用。
1.4 基质血浆取人凝血因子Ⅷ含量低于2%的血友病病人血浆或人工基质血浆，然后分装于5ml安瓿，冻干或-30℃保存。
1.50.05mol/L氯化钙溶液称111g氯化钙溶于1000ml蒸馏水中，配制成1mol/L氯化钙贮存液，用前进行20倍稀释，配成0.05mol/L氯化钙溶液。
1.6 人凝血因子Ⅷ标准品及标准血浆人凝血因子Ⅷ国家标准品或经国家标准品标化的工作标准（定量分装冻干，置-30℃保存，一般2IU/ml左右），用前取样品稀释液溶解成1IU/ml。
标准血浆系取30份新鲜正常人血浆等量混合后，分装于小瓶内，置-30℃保存。
自采血后至分浆冻结整个过程不得超过4小时。
1.7待测样品按标示量加入注射用水溶解，测定时稀释成1IU/ml。
2 测定2.1取2支试管，每管加入0.1ml基质血浆和0.1ml样品稀释液，混匀，再加0.1ml血小板代用品和0.1ml白陶土悬液，混匀，将试管置37℃水浴保温一定时间（一般2～6分钟），然后加入0.1ml0.05mol/L氯化钙溶液，记录凝固时间，2管平均值为基质血浆的“空白”值（一般应大于3分钟）。
2.2 标准品或标准血浆用样品稀释液分别进行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀释，用不同稀释浓度标准品代替2.1项试验中样品稀释液，按上述方法分别测定凝固时间。
2.3 待测样品稀释成约0.02～0.04IU/ml，代替2.1项试验中样品稀释液，同时分别测定凝固时间。
凝血因子Ⅷ定性检测试剂盒(凝血块溶解法)
凝血因子Ⅷ定性检测试剂盒(凝血块溶解法)简介：凝血因子Ⅷ在Ca 2+的参与下，能使可溶于尿素或单氯乙酸溶液的可溶性纤维蛋白单体聚合物变为纤维蛋白，因此含因子Ⅷ的血浆凝固后不再溶解于上述溶液。
如果待检血浆中缺乏因子Ⅷ，则聚合物可溶解于上述溶液。
Leagene 因子Ⅷ用于定性检测人、动物血浆中凝血因子Ⅷ。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 离心机2、 计时器3、 水浴锅操作步骤(仅供参考)：1、 制备待测血浆：取新鲜待测静脉血，与柠檬酸钠抗凝剂混合，轻轻混匀。
离心，收集上层液(缺乏血小板的血浆)，转移至塑料试管或离心管，以防止血小板被激活。
同时应设正常对照血浆。
2、 取待测血浆(包括正常对照血浆)、CaCl 2(25mM) l ，混匀。
3、 置于水浴，期间轻轻混匀数次，直至凝块形成。
4、 将凝块转移至F Ⅷ溶液，每5min 观察1次，共计2h ；2h 后每2～4h 观察1次，共计24h 。
参考区间： 24h 内纤维蛋白凝块不溶解则为阳性注意事项： 编号 名称 TC0321 100T Storage 试剂(A): 柠檬酸钠抗凝剂 30ml RT 试剂(B): CaCl 2(25mM) 10ml 4℃ 试剂(C): F Ⅷ溶液 10ml 4℃ 使用说明书 1份1、以上操作，应同时测定正常对照。
2、获得样本后，应及时检测，一般不应超过1h，4℃不应超过4h。
3、应精确控制孵育温度在37±1℃，过高或过低均会影响结果。
4、抽血要顺利，抗凝要充分。
5、分离血浆应在3000g离心10min，务必去除血小板。
6、本检测试剂盒敏感性低，特异性高。
有效期：6个月有效。
相关：编号名称CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)CS0201 细胞线粒体分离试剂盒DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)DM0002 姬姆萨染色液(Giemsa stain,1:9)PW0040 Western blot一抗稀释液TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。
凝血因子活性测定
凝血因子活性测定凝血因子活性测定介绍：凝血因子活性测定是对人体内的各种凝血因子进行活性测定，凝血因子在血液凝固过程中，起着非常重要的作用，测定各个凝血因子的活性，有助于判断血友病的类型，血友病的轻重程度以及某些病理情况下的凝血状况。
凝血因子活性测定正常值：因子Ⅱ：C 、因子Ⅴ：C 、因子Ⅶ：C 、因子Ⅶ：C 、因子Ⅸ：C、因子Ⅹ：C、因子Ⅺ：C、因子Ⅻ：C均为 0.80～1.20因子Ⅷ：C为 0.60～1.60凝血因子活性测定临床意义：异常结果：降低：1. Ⅷ：C降低见于血友病A，血管性血友病，弥散性血管内凝血等;2.因子Ⅸ：C降低见于血友病C，肝脏疾病，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血，口服抗凝药等;3.因子Ⅺ：C降低可见于先天性因子Ⅺ缺乏，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血等;4.因子Ⅻ：C降低可见于先天性因子Ⅻ缺乏，弥散性血管内凝血，肝脏疾病等;5.因子Ⅱ：C ，因子Ⅴ：C ，因子Ⅶ：C ，因子Ⅹ：C降低，见于先天性凝血因子缺乏或获得性凝血因子降低，如肝脏疾病，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血，口服抗凝药及血液中存在抗凝物质等。
升高：见于血液高凝状态和血栓性疾病，如深部静脉血栓形成，肺栓塞，肾病综合征，妊娠高血压综合征，恶性肿瘤等。
因子Ⅷ也见于肝脏疾病。
需要检查的人群：患有血液病的人群。
凝血因子活性测定注意事项：不合宜人群：长期服用阿司匹林的人群。
检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。
血液中的酒精成分会直接影响检验结果。
体检前一天的晚八时以后，应禁食。
禁止服用阿司匹林，检查前禁止服用各种药物，以免造成影响。
检查时要求：抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。
凝血因子活性测定检查过程：取标准品，用生理盐水配制成效价(U/mL)分别为5、6、7、8、9、10的标准品溶液。
另取1×10 cm的塑料试管6支，各加入0.1 %纤维蛋白原溶液450 μl，置37℃水浴预热5 min，再分别取已37℃预热的上述6个浓度的标准品溶液各50 μl，迅速加入上述各试管中，立即计时并摇匀，记录凝固时间。
医学检验·检查项目：凝血因子活性测定(因子Ⅷ∶C、Ⅸ∶C)_课件模板
医学检验·各论：凝血因子活性测定(因子Ⅷ∶C、Ⅸ∶C) >>>
ห้องสมุดไป่ตู้临床意义：
∶C或Ⅸ∶C小于2%，中型2%～5%，轻型 5%～25%，亚临床型25%～45%。因子Ⅷ∶C 降低还见于血管性血友病、DIC和抗因子 Ⅷ∶C抗体所致的获得性血发病甲;因子 Ⅸ∶C降低还见于肝脏疾病、维生素K缺乏 症、DIC和口服抗凝剂等。
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临床意义：
(1)因子Ⅷ∶C或Ⅸ∶C水平增高：见 于高凝状态和血栓性疾病。尤其是静脉血 栓形成，如深静脉血栓形成、肺栓塞、肾 病综合征、口服避孕药、妊娠高血压综合 征、恶性肿瘤以及肝功能衰竭时因子 Ⅷ∶C水平增高。 (2)因子Ⅷ∶C或Ⅸ∶C 水平降低：见于血友病甲或血友病乙，按 其降低程度分为：重型Ⅶ
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正常值： 因子Ⅷ∶C 78%～128%；因子Ⅸ∶C
68%～128%。
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相关检查： 维生素E、红细胞聚集性、血小板聚集试 验（PAgT）、血清黏度（SV）、乙醇凝胶 试验、活化部分凝血活酶时间（APTT）。
谢谢！
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相关症状： 拔牙后伤口经久不愈、弥漫性出血、血液 粘滞度增高、凝血因子功能的障碍、延髓 出血、面颊及上胸部充血。
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相关疾病：
丘疹紫癜性手套和短袜样综合征、妊娠合 并血栓性疾病、产科播散性血管内凝血、 肝硬化、小儿播散性血管内凝血、丘疹性 血管增生、皮肤骨髓纤维化。
人凝血因子Ⅷ效价凝固检测法的验证及应用
２ ４・
微生物学免疫学进展
２ ０ １ ３年第 ４ １卷第 ３期
Ｐ ｒ ｏ ｇ ｉ ｎ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ Ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｏ ｌ Ｊ ｕ ｎ ．２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ４ １ ， Ｎ ｏ ． ３
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人 凝 血 因子 Ⅷ效 价凝 固检 测 法 的 验 证 及 应 用
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人凝血因子Ⅷ效价测定一步法
1 试剂
1.1样品稀释液：取1容积的3.8%枸橼酸钠液加入5容积咪唑缓冲液。
1.1.1 咪唑缓冲液
称0.68g咪唑和1.17g氯化钠溶于100ml蒸馏水中，加入42.2ml 0.1mol/L盐酸，然后被加入蒸馏水至200ml,pH为7.3。
1.1.23.8%枸橼酸钠溶液
称9.5g枸橼酸钠溶解于250ml蒸馏水中。
1.2 血小板代用品“兔（人）脑组织的氯仿抽提液”。
用前用生理盐水稀释至适当倍数。
1.3白陶土生理盐水混悬液
称0.5g白陶土加生理盐水至100ml即可使用。
1.4 基质血浆
取人凝血因子Ⅷ含量低于2%的血友病病人血浆或人工基质血浆，然后分装于5ml安瓿，冻干或-30℃保存。
1.50.05mol/L氯化钙溶液
称111g氯化钙溶于1000ml蒸馏水中，配制成1mol/L氯化钙贮存液，用前进行20倍稀释，配成0.05mol/L氯化钙溶液。
1.6 人凝血因子Ⅷ标准品及标准血浆
人凝血因子Ⅷ国家标准品或经国家标准品标化的工作标准（定量分装冻干，置-30℃保存，一般2IU/ml左右），用前取样品稀释液溶解成1IU/ml。
标准血浆系取30份新鲜正常人血浆等量混合后，分装于小瓶内，置-30℃保存。
自采血后至分浆冻结整个过程不得超过4小时。
1.7待测样品
按标示量加入注射用水溶解，测定时稀释成1IU/ml。
2 测定
2.1取2支试管，每管加入0.1ml基质血浆和0.1ml样品稀释液，混匀，再加0.1ml血小板代用品和0.1ml白陶土悬液，混匀，将试管置37℃水浴保温一定时间（一般2～6分钟），然后加入0.1ml0.05mol/L氯化钙溶液，记录凝固时间，2管平均值为基质血浆的“空白”值（一般应大于3分钟）。
2.2 标准品或标准血浆
用样品稀释液分别进行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀释，用不同稀释浓度标准品代替2.1项试验中样品稀释液，按上述方法分别测定凝固时间。
2.3 待测样品稀释成约0.02～0.04IU/ml，代替2.1项试验中样品稀释液，同时分别测定凝固时间。
2.4测定时要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均值10%，否则重测。
3 计算
将标准品5个不同稀释度所含人凝血因子Ⅷ单位（IU/ml），分别取其对数值，再将其各相应浓度所测得凝固时间（秒），也分别取对数值，然后按照统计学方法作直线回归方程。
方程式：log y=b olg x+a
其中x代表人凝血固子Ⅷ单位数，y代表测得相应凝固时间（秒）。
将测试样品所得到凝固时间（秒）代入方程式计算x值。
然后将所得x值乘以样品稀释的倍数，即为每ml中人凝血因子Ⅷ含量。