CHINA 凝血因子检测
凝血因子检测及临床意义
凝血因子检测及临床意义一、凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的促凝活性测定（一）正常值（一期法）1、凝血因子Ⅱ：72.9%~118.9%。
2、凝血因子Ⅴ：64.5%~140.3%。
3、凝血因子Ⅶ：85.8%~123.2%。
4、凝血因子Ⅹ：89.5%~120.3%。
（二）影响因素1、血和抗凝剂比例应准确。
2、标本要及时送检，不能久置，时间长了活性减低。
（三）临床意义测定单一凝血因子缺乏和缺乏程度，用于先天性或获得性凝血因子缺乏疾病的检查。
1、血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ增高，意义同内源性凝血因子测定，但肝病除外。
2、血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ减低，见于先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症，但较少见，获得性减低者见于维生素K缺乏症、肝脏疾病，DIC和口服抗凝剂等。
二、凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的促凝活性测定（一）正常值（一期法）1、凝血因子Ⅷ：77.3%~128.7%。
2、凝血因子Ⅸ：67.6%~128.5%。
3、凝血因子Ⅺ︰C：81.6%~118.4%。
4、凝血因子Ⅻ︰C：71.7%~113.1%。
（二）影响因素1、血和抗凝剂比例应准确。
2、标本要及时送检，不能久置，时间长了活性减低。
（三）临床意义可测定单一凝血因子缺乏和缺乏程度，用于先天性或获得性凝血因子缺乏疾病的检查。
1、血浆量：Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ增高，主要见于高凝状态和血栓性疾病，尤其是静脉血栓形成性疾病，如深静脉血栓形成、肺栓塞、肾病综合征、口服避孕药、妊娠高血压综合征、恶性肿瘤、肝病时Ⅷ升高。
2、血浆中凝血因子Ⅷ降低，见于血友病A。
按减低的程度分为重（＜2%）、中型（2%~5%）、轻型（5%~25%）以及亚临床型（25%~45%），血管性血友病（vWD）的降低程度不如血友病明显，一般在20%~40%，DIC时凝血因子Ⅷ被消耗，故也减少。
3、凝血因子Ⅸ降低，见于血友病B，临床分型同血友病A，其次见于肝脏疾病、维生素K缺乏症：CDIC和口服抗凝剂等。
4、凝血因子Ⅺ降低，见于凝血因子Ⅺ缺乏症、肝脏疾病和DIC等。
凝血因子抗体检测(王学锋)
• 免疫法检测不适合于抗体测定，因为其不能区分 所检测的抗体是否具有生物学活性
抗体类型
• 时间依赖型抗体：FVIII
• 时间非依赖性抗体：其他相关凝血因子抗 体
抗体检测临床意义
• 抗体阳性：获得性 因子替代治疗后产生抗体
• 指导免疫抑制剂的使用 • 指导所需因子的使用量 • 监测出血倾向
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Factor VIII activity 110 120 110 120 113 110 110 112
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在使用时，需将Nijmegen血浆进行稀释，使其终浓 度为100%
3.检测：
准备患者血浆、标准品和质控品，若怀疑 FVIII抗体滴度较高，需将患者血浆进行一定 比例的稀释，常用稀释度为：1/2，1/4，1/8， 1/16，加入等量Nijmegen血浆后置于37℃水 浴2小时（加盖）
Brand: Pacific Haemostasis Lot No:800-601x Expiry Date:01/2009 Blank
Brand: Dade Lot No:536550 Expiry Date:22/11/2008 Blank Brand: Technoclone Lot No:486900D Expiry Date:31/12/2008 Blank
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人凝血因子检验方法
人凝血因子检验方法引言人凝血因子是一组在血液凝固过程中起关键作用的蛋白质。
凝血因子检验是评估一个人的凝血功能是否正常的重要方法。
本文将介绍人凝血因子检验的方法，包括常用的实验室检测方法和新兴的分子诊断技术。
1. 凝血因子简介人体内共有13种已知的凝血因子，它们按照其参与凝血反应的顺序被编号为Ⅰ至ⅩⅢ。
这些凝血因子在正常情况下相互协作，形成一个复杂而精确的平衡系统，以维持正常的止血和溶栓过程。
2. 常用实验室检测方法2.1 凝血酶原时间（PT）PT是评估外源性凝血通路功能的指标。
该测试使用钠柠檬酸抗凝剂处理患者的血液样本，然后添加磷酸钙和组织因子来启动凝血反应。
通过计算患者样本中形成凝块所需时间来确定PT值。
2.2 部分凝血活酶时间（APTT）APTT是评估内源性凝血通路功能的指标。
该测试使用钠柠檬酸抗凝剂处理患者的血液样本，然后添加磷酸钙和活化的部分凝血活酶来启动凝血反应。
通过计算患者样本中形成凝块所需时间来确定APTT值。
2.3 血小板计数和出血时间除了凝血因子本身，血小板也是维持正常止血过程中不可或缺的组成部分。
进行完整的凝血功能检查时，还需要评估患者的血小板计数和出血时间。
3. 分子诊断技术近年来，随着分子生物学技术的不断发展，越来越多的新兴检测方法被应用于人凝血因子检验中。
3.1 多重PCR多重PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种高效且灵敏的分子生物学技术，可以同时检测多个基因突变。
在人凝血因子检验中，多重PCR可以用于快速筛查常见突变引起的凝血因子缺陷。
3.2 基因测序基因测序是一种直接测定DNA序列的方法。
通过对凝血因子相关基因进行全序列测定，可以发现罕见突变或新的基因变异，为凝血功能异常的诊断提供更准确的依据。
3.3 基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量的基因分析方法，可以同时检测上千个基因。
在人凝血因子检验中，基因芯片技术可以用于快速筛查多个凝血相关基因的变异。
凝血因子抗体检测
凝血因子抗体检测凝血因子抗体检测是一种检测机体是否出现对凝血因子产生抗体的方法。
凝血因子是血液中参与凝血过程的一类蛋白质，它们在正常情况下能够协同作用，形成血凝块，并阻止血液过多流失。
而当机体出现对凝血因子产生抗体时，会造成凝血功能异常，导致出血倾向或血栓形成等疾病。
凝血因子抗体检测主要用于排除或诊断先天性或后天性凝血因子缺乏症、自身免疫系统性疾病和其他疾病引起的抗凝血因子免疫血液病。
其中，自身抗凝血因子免疫血液病是一类自身免疫性疾病，常见的有抗磷脂抗体综合征（APS）、自身抗凝血酶抗体综合征（CAC）、抗凝血酶抗体和抗磷脂抗体同时存在等。
凝血因子抗体检测一般包括两个方面：常规凝血因子抗体和磷脂抗体的检测。
常规凝血因子抗体检测可以检测循环中凝血因子特异性抗体，用于诊断先天性或后天性凝血因子缺乏症。
而磷脂抗体检测主要用于检测一些自身免疫性疾病，如APS，由于自身产生的抗体可与凝血系统相关的磷脂结合，导致凝血系统功能异常。
常规凝血因子抗体检测主要包括凝血因子八、凝血因子九、凝血因子十一、凝血因子十二、凝血因子十三等凝血因子的抗体检测。
这些抗体的检测一般采用酶联免疫吸附试验（ELISA），通过对患者血清中的抗体与特定凝血因子抗原进行结合，然后用特定的辅助试剂检测反应的产物，从而判断血液中的抗体含量。
磷脂抗体检测一般采用磷脂筛选试验和磷脂抗体定量试验。
磷脂筛选试验通常采用凝集试验、凝血试验等方法，通过观察血浆与磷脂之间的凝集程度来判断是否存在磷脂抗体。
而磷脂抗体定量试验则可以进一步确定磷脂抗体的水平。
常用的磷脂抗体定量试验有凝血抑制试验、酶联免疫吸附试验等。
凝血因子抗体检测的结果可以帮助医生判断病情、指导治疗以及评估疗效。
对于先天性或后天性凝血因子缺乏症患者来说，抗体检测可以帮助确定凝血因子缺乏的类型和程度，并制定相应的治疗方案。
对于自身免疫性凝血功能障碍患者来说，抗体检测可以帮助明确诊断，并指导治疗。
人凝血因子Ⅷ效价检验标准操作规程
人凝血因子Ⅷ效价检验标准操作规程1目的严格规范操作者的检测方法，使操作者能够快速有效和安全准确地完成检验操作，特制定本操作规程。
2适用范围本操作规程适用于冷沉淀、人凝血因子Ⅷ洗脱原液、原液、半成品、冻干及成品等含有人凝血因子Ⅷ的供试品效价检测。
3制定依据《中华人民共和国药典》（2015年版）三部，附录3521人凝血因子Ⅷ效价测定法（一期法）。
4职责4.1检验人员按本SOP对供试品进行检验和计算。
4.2复核人对检验中的计算进行复核。
4.3确认人按本SOP对检验过程及结果进行相应确认和判定。
5仪器及器具5.1仪器5.1.1凝血仪5.1.2电子天平5.1.3电子分析天平5.1.4漩涡混匀器5.2器具5.2.1微量移液器5.2.2吸头5.2.3移液管5.2.4洗耳球5.2.5试管5.2.6试管架5.2.7砂轮5.2.8凝血仪耗材（比色盘、供试品杯等）6试剂及试液6.1试剂6.1.1人凝血因子VIII国家标准品6.1.2人凝血因子VIII比较品6.2试液6.2.1人凝血因子Ⅷ缺乏血浆6.2.2稀释液（咪唑稀释液/因子稀释液/样本稀释液）6.2.3激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂6.2.4氯化钙溶液7操作步骤7.1供试品溶液、比较品溶液及标准品溶液的制备7.1.1供试品及比较品溶液的制备7.1.1.1供试品及比较品的预稀释用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将供试品预稀释成约1IU/ml（冻干制品先按标示量加入水溶解；冷沉淀先取1~2g，加水溶解约为20倍。
具体稀释过程如下：7.1.1.2供试品预稀释液的工作稀释（供试品溶液）将上述含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml的供试品预稀释液用稀释液稀释6倍、8倍、10倍。
具体稀释过程如下：先取500μl已预稀释成含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml的供试品预稀释液，加500μl稀释液，稀释成含人凝血因子Ⅷ约0.5IU/ml，混匀，再分别从中取200μl移到3支试管中，分别加400μl，600μl和800μl稀释液。
凝血因子调研报告范文
凝血因子调研报告范文凝血因子是一类在血液凝固过程中起关键作用的蛋白质，在体内起着止血的重要作用。
凝血因子的异常功能或缺乏会导致出血倾向的疾病。
本次调研报告旨在对凝血因子进行调研，了解其功能、检测方法以及应用领域等方面的情况。
一、凝血因子的功能凝血因子是指参与血液凝固过程的蛋白质，其中包括凝血酶和一系列辅助因子。
它们通过一系列酶促反应，最终使血液凝固，形成血栓，实现止血的目的。
凝血因子的异常功能或缺乏会导致出血倾向的疾病，如血友病等。
二、凝血因子的检测方法凝血因子的检测主要有以下几种方法：1. 国际标准化比率（INR）：常用于检测凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ和凝血酶原时间，通常用于抗凝剂治疗的监测。
2. 部分凝血活酶时间（APTT）：常用于检测凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和凝血酶失活时间。
通过测定血浆的凝血时间来评估凝血因子的功能。
3. 血小板功能分析：利用血小板功能分析仪检测血小板数量、形态和功能的异常，以评估凝血功能的异常情况。
4. 凝血酶原时间（PT）：常用于检测凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ和凝血酶原时间，与INR相似，用于抗凝剂治疗的监测。
5. 特异性因子酶活动测定：通过测定某种特定因子的酶活性来评估凝血功能的异常情况。
三、凝血因子的应用领域凝血因子的异常功能或缺乏与多种疾病相关，其中最典型的是血友病。
血友病是一种由凝血因子Ⅷ或Ⅸ缺乏引起的常染色体隐性遗传病。
此外，凝血因子的异常还与血栓性疾病、出血性疾病和肝脏疾病等有关。
四、凝血因子的临床意义凝血因子的异常功能或缺乏对疾病的诊断和治疗具有重要意义。
通过凝血因子的检测，可以明确诊断血友病，指导治疗方案的选择和调整。
在手术、产科、创伤等情况下，凝血因子的检测也能够指导出血风险的评估和止血措施的制定。
五、凝血因子的研究进展目前，凝血因子的研究主要集中在凝血功能的调控机制、凝血因子的基因突变与疾病的关联以及基因治疗等领域。
通过对凝血因子基因的突变进行研究，可以揭示凝血疾病的致病机制，为新药开发和治疗手段的创新提供理论基础。
项目14凝血因子检查
【参考区间】 12～14s（一期法）
采血后宜在1小时内完成，置冰箱保存不能超过4h。
血纤维交织成网，将很多血细胞网罗在内，形成血凝块。血液凝固后1-2小时，血凝块又发生回缩，并释出淡黄色的液体，称为血清。
血液离体，血细胞下沉。上层析出的黄色清亮液体是血清？ 还是血浆？
血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，即血浆。
血清：离体的血液凝固之后，经血凝块聚缩释出的液体，即血清。
APTT的长短反映了血浆中内源凝血系统凝血因子（Ⅻ、Ⅺ、Ⅸ、Ⅷ）、共同途径中凝血酶原、纤维蛋白原和因子Ⅴ、Ⅹ的水平。
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本试验是目前最常用的检查内源凝血系统敏感的筛选试验。
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【试剂】
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受检血浆 以0.109mol/L枸橼酸钠溶液1:9抗凝，3000r/min，离心5～10min，获贫血小板血浆。
体格检查：体温36℃，脉搏96次/分，呼吸22次/分，血压13/8kPa。神清，发育正常，营养中等，轻度贫血貌。四肢皮肤均见有较大面积的暗红色丘疹，伴脱屑与结痂，未见出血点或淤斑。浅表淋巴结无肿大，头颅五官无畸形，巩膜无黄染。颈软，颈静脉无怒张，甲状腺不大，气管居中。胸廓无畸形，胸骨无压痛，双肺呼吸音清，未闻及干湿性啰音，心率96次/分，心律齐，心尖部可闻及Ⅱ/6级收缩期杂音。腹平软，全腹无压痛，未扪及包块，肝脾不大，肠鸣音正常。右大腿明显肿胀并见有大片淤斑。右大腿下1/4处周径为44cm（左侧39cm），右腓肠肌周径为33cm（左侧27cm），触痛明显。四肢关节无肿胀畸形，生理反射存在，未引起病理反射，脑膜刺激征阴性。
凝血四项内容及正常值
凝血四项内容及正常值：一•凝血因子测定：1活化部分凝血活酶时间（APTT ）:秒数：25-37，需与正常对照比较超过10s以上异常2凝血酶原时间（PT）:秒数:11-14，需与正常对照超过3s 以上异常。
活动度：80-120% INR:0.8-1.23纤维蛋白原（FIB）: 2-4 g/L二.纤维蛋白溶解检测：4凝血酶时间（TT）:秒数:12-16需与正常对照超过3s以上异常各项意义：PT：主要反映外源性凝血系统状况，其中INR常用于监测口服抗凝剂。
延长见于先天性凝血因子nvrax缺乏及纤维蛋白原缺乏，后天凝血因子缺乏主要见于维生素K缺乏、严重的肝脏疾病、纤溶亢进、DIC、口服抗凝剂等；缩短见于血液高凝状态和血栓性疾病等；APTT :主要反映内源性凝血系统状况，常用于监测肝素用量。
增高见于血浆因子忸、因子区和因子XI水平减低：如血友病A、血友病B及因子XI缺乏症；降低见于高凝状态：如促凝物质进入血液及凝血因子的活性增高等情况；TT:主要反映纤维蛋白原转为纤维蛋白的时间。
增高见于DIC纤溶亢进期，低（无）纤维蛋白原血症，异常血红蛋白血症，雪中纤维蛋白（原）降解产物（FDPs）增高；降低无临床意义。
FIB :主要反映纤维蛋白原的含量。
增高见于急性心肌梗死减低见于DIC消耗性低凝溶解期、原发性纤溶症、重症肝炎、肝硬化；凝血酶原时间（PT）:秒数:11-14，需与正常对照超过3s以上异常。
活动度:80-120% INR:0.8-1.2PT:凝血酶原时间是检查外源性凝血因子的一种过筛试验，是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原、和凝血因子V、％、X的缺陷或抑制物的存在，其中INR用于监测口服抗凝剂的用量，是监测口服抗凝剂的首选指标活化部分凝血活酶时间（APTT ）:秒数：25-37，需与正常对照比较超过10s以上异常APTT检查内源性凝血因子的一/种过筛试验，是用来证实先天性或获得性凝血因子忸、区、幻的缺陷或是否存在它们相应的抑制物，同时，APTT也可用来凝血因子刈、激肽释放酶原和高分子量激肽释放酶原是否缺乏，由于APTT的高度敏感性和肝素的作用途径主要是内源性凝血途径，所以APTT成为监测普通肝素首选指标。
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Why do we measure FVIII 为什么我们要做FVIII检测
Diagnosis of Haemophilia and VWD 诊断血友病和VWD
Factor VIII Concentrate potency 因子 VIII浓缩剂的强度 Post-Infusion recovery samples 输注后恢复的标本 Thrombophilia 血栓 Pharmacokinetic studies in Haemophilia 血友病的药代动
Coagulation times are inversely proportional to the factor VIII concentration 凝血时间与因子VIII的浓度成反比。
Bioassays: Design生物学检测法：设计
Ensures that Standard and Test preparations are compared under identical conditions, taking into account any factors which may lead to biased potency estimates.确保标准样品和检测样品在相同条件下 进行比较，考虑所有可能引起测试偏倚的因素
力学研究
The Factor VIII Assay Problem 因子VIII检测的问题
Number of published studies showing FVIII levels in post-infusion samples to be 20-50% higher when measured by chromogenic as opposed to 1-stage assay. 一些已发表的研究显示，用显色法检测输注后样本的因子 VIII水平要比一期法检测高20-50%
One-Stage Assay 一期法 Two-Stage Assay 二期法 Chromogenic Assay 显色法
One-Stage Factor VIII Bioassay
（一期法因子VIII生物学检测）
Based on the APTT First described by Langdell et al 1953 By studying ratios of Haem A and NP that the APTT is linearly related to the logarithm of the FVIII concentration 基于APTT检测。首次由Langdell 等人在1953年发表。通过研究Haem A 和 NP 比值，发现APTT与FVIII 浓度的对数呈线性相关。
Log Dose
One-Stage Factor VIII Bioassay
T S
25% 100%
Factor VIII Concentration (Log )
One-Stage Factor VIII Bioassay
T S
50% 100%
Non-parallel
converging lines
Dilution range: Should cover the linear part of dilution curve as widely as possible 稀释范围：应该尽可能宽地包括稀释曲线的线 形部分
Number of dilutions: 稀释度数量 Standard CurveAt least three dilutions（标准曲线-至少三个稀释度） Test curveat least two and preferably three points（检测曲线-至少两个，最好 三个点）
Equal volumes of plasma dilution and Factor VIII-deficient plasma are mixed together and an APTT is performed for each mixture 等体积混合血浆稀释液和乏因子VIII血浆，随后检测每个混合体的APTT。
suggest the
presence of an inhibitor非平行的 相交线提示有抑 t) 过度治疗（花费）
Standardisation of results between different laboratories. 不同实验室之间结果标准化
Clotting Factor Assays 凝血因子检测
In vitro assays that measure the coagulant activity of the inactive circulating protein (zymogen) by artificially simulating in vivo activation and then measuring the response. 体外检测未活化的循环蛋白（酶原）的凝血活性可通过人 工刺激其类似体内的活化，随后检测其反应。
Correction of the APTT of a plasma severely deficient in factor VIII by adding dilutions of Std or test plasma. 通过在严重缺乏因子VIII的血浆中加入不同稀释度的标准或测试血浆稀释液， 纠正其APTT
Also differences in pharmacokinetic data 药代动力学的数 据也存在差异
Most pronounced in BDD-rFVIII (Refacto) 最明显的是BDD-rFVIII
Clinical Ramifications 临床后果
Under treatment (risk of bleeding) 缺乏治疗（出血风险）