凝血因子Ⅷ抑制物的实验室检测
注射用重组人凝血因子Ⅷ说明书
使用说明 使用本品包装中所提供的预装注射器中的稀释剂（0.9 %氯化钠溶液）复溶冻干粉后，进行静
脉注射给药。 配制：
在进行下列操作前须洗净双手。
Version No: 20120816
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在复溶操作中应采用无菌操作（即洁净和无菌）。 本品复溶和给药所用的所有物品应在开启其无菌包装后尽快使用，以减少在空气中不必要的
系统 器官分类 （异 常）
表 2. 不良反应和发生率*
很常 见 ≥10%
常见 ≥1%
免疫系统异常
心脏异常
实验室检查
神经系统异常
代谢和营养异常 肌肉骨骼和结缔 组织异常
血管异常
呼吸、胸和纵隔 异常 胃肠道异常 皮肤和皮下组织
少见 ≥0.1%且
<1%
罕见 ≥0.01%且<0.1%
非常罕见 <0.01%
过敏反应
不良反应和发生率系统器官分类异常很常见10常见1少见01且1罕见001且01非常罕见001免疫系统异常过敏反应心脏异常心绞痛心动过速心实验室检查f抗体实验室值升高中国仓鼠卵巢细胞cho蛋白抗体实验室值升高磷酸肌酸激酶cpk升高天冬氨酸氨基转移酶升高丙氨酸氨基转移酶升高胆红素升高神经系统异常头痛头晕神经病变出汗增加嗜睡味觉改代谢和营养异常厌食肌肉骨骼和结缔组织异常关节痛血管异常出血血肿潮红血压血管舒张呼吸胸和纵隔异常咳嗽增加呼吸困难胃肠道异常呕吐恶心腹泻腹痛皮肤和皮下组织瘙痒皮疹荨麻疹20150120系统器官分类异常很常见10常见1少见01且1罕见001且01非常罕见001异常全身异常和用药部位异常发热乏力寒战永久性静脉通路导管并发症注射部位疼痛注射部位反应注射部位炎症因子抑制物?既往未接受过治疗的患既往接受过治疗的这些不良反应汇总了所有研究的不良事件和血友病事件不论与研究药物是否相关
凝血因子检测及临床意义
凝血因子检测及临床意义一、凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的促凝活性测定（一）正常值（一期法）1、凝血因子Ⅱ：72.9%~118.9%。
2、凝血因子Ⅴ：64.5%~140.3%。
3、凝血因子Ⅶ：85.8%~123.2%。
4、凝血因子Ⅹ：89.5%~120.3%。
（二）影响因素1、血和抗凝剂比例应准确。
2、标本要及时送检，不能久置，时间长了活性减低。
（三）临床意义测定单一凝血因子缺乏和缺乏程度，用于先天性或获得性凝血因子缺乏疾病的检查。
1、血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ增高，意义同内源性凝血因子测定，但肝病除外。
2、血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ减低，见于先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症，但较少见，获得性减低者见于维生素K缺乏症、肝脏疾病，DIC和口服抗凝剂等。
二、凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的促凝活性测定（一）正常值（一期法）1、凝血因子Ⅷ：77.3%~128.7%。
2、凝血因子Ⅸ：67.6%~128.5%。
3、凝血因子Ⅺ︰C：81.6%~118.4%。
4、凝血因子Ⅻ︰C：71.7%~113.1%。
（二）影响因素1、血和抗凝剂比例应准确。
2、标本要及时送检，不能久置，时间长了活性减低。
（三）临床意义可测定单一凝血因子缺乏和缺乏程度，用于先天性或获得性凝血因子缺乏疾病的检查。
1、血浆量：Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ增高，主要见于高凝状态和血栓性疾病，尤其是静脉血栓形成性疾病，如深静脉血栓形成、肺栓塞、肾病综合征、口服避孕药、妊娠高血压综合征、恶性肿瘤、肝病时Ⅷ升高。
2、血浆中凝血因子Ⅷ降低，见于血友病A。
按减低的程度分为重（＜2%）、中型（2%~5%）、轻型（5%~25%）以及亚临床型（25%~45%），血管性血友病（vWD）的降低程度不如血友病明显，一般在20%~40%，DIC时凝血因子Ⅷ被消耗，故也减少。
3、凝血因子Ⅸ降低，见于血友病B，临床分型同血友病A，其次见于肝脏疾病、维生素K缺乏症：CDIC和口服抗凝剂等。
4、凝血因子Ⅺ降低，见于凝血因子Ⅺ缺乏症、肝脏疾病和DIC等。
Nijmegen法检测凝血因子Ⅷ抑制物的临床应用
Nijmegen法检测凝血因子Ⅷ抑制物的临床应用高硕;夏永泉;徐学静;张燕;张葵【摘要】目的观察血友病A(HA)及获得性HA (AHA)患者凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物的产生情况,探讨Nijmegen法结合APTT纠正试验在FⅧ抑制物检测中的应用及对临床诊断和治疗的指导意义.方法用一期凝固法对42例临床患者进行凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及FⅧ活性检测,进一步采用APTT纠正试验进行筛选,阳性患者用Nijmegen法进行FⅧ抑制物浓度的测定,并结合临床资料进行分析.结果 42例均为FⅧ活性减低患者.39例HA患者中有2例存在FⅧ抑制物(5.1％),浓度分别为3.7 BU/mL和83.2 BU/mL.3例非HA患者经APTT纠正试验未能纠正到正常范围,其中2例AHA患者的抑制物浓度分别为3 686 BU/mL和61 BU/mL,另1例SLE患者APTTF纠正试验结果不具有时间依赖性,抑制物浓度仅为0.1 BU/mL.结论 Nijmegen法结合APTT纠正试验检测FⅧ抑制物,方法简便准确,可为FⅧ活性减低患者的临床诊断和治疗提供指导.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2015(033)003【总页数】4页(P190-192,199)【关键词】凝血因子Ⅷ;凝血因子Ⅷ抑制物;活化部分凝血活酶时间;APTF纠正试验;Nijmegen法;血友病A;获得性血友病A【作者】高硕;夏永泉;徐学静;张燕;张葵【作者单位】南京大学医学院附属鼓楼医院检验科,南京210008;南京大学医学院附属鼓楼医院检验科,南京210008;南京大学医学院附属鼓楼医院检验科,南京210008;南京大学医学院附属鼓楼医院检验科,南京210008;南京大学医学院附属鼓楼医院检验科,南京210008【正文语种】中文【中图分类】R446血友病 A(hemophilia A，HA)是一种凝血因子Ⅷ(FⅧ)缺乏所导致的出血性疾病，属于X连锁隐性遗传性疾病，男性发病率高，以自发性关节出血和深部位组织出血为特征[1]。
重组人凝血因子Ⅷ在中国血友病A患者的有效性及抑制物产生的观察
血栓 与 止 血 学 ２ ０ ０ ８年第 １ 第 ６期 ４卷
・２ ５７ ・
重 组 人 凝 血 因 子 Ⅷ 在 中 国 血 友 病 Ａ 患 者 的 有 效 性 及 抑 制 物 产 生 的 观 察
李文 孙 即， 竞 ， 孙德华 李 ， 强 赵 ， 洁
（ ．南方 医科大学 附属 南方 医院血液 科 ， １ 广州 ５０ １ ，．南方医科大学附属南方 医院检验科 ） １５５ ２
ｄ ｔｃｅ ｅＦｖ ｎ ｉｉ ｒｉ ｅ ｒ ｏｌｗ． ｐ ｗｉ ｈｓ ｌ ａｉｎｓ ｅｅ ｔｄ ｔ ｍ ｉｈｂｔ ２ ｙ ａｓｆｌ ｈ ｏ ｎ ｏ ｕ ｔ ｔ ｉ １ｐ ｔ ｔ．Ｒｅ ｕｔ Ｉ ｗ ｓｏ ｓｒｅ ｈ ｔｔｅＦⅧ ｈ ｅ ｓ ｌｓ ｔ ａ ｂ ｅｖ ｄｔ ａ ｈ
ｗｅ ｋｓａ ｄ ２ ｙ ａ ｓｆ ｌｏ ｄ ｕ ｅ ｎ ｅ ｒ ｏ ｌｗｅ ｐ． Ｔ ｌｏ ｏ ｔｎ ｈｅ ｂ ｏ ｄ ｒ ｕｉ ｅ，ｕ ｉ ｅ ａ ｄ ｓｏ １ｒ ｕ ｉ ｅ，ｌｖ ｒｆ ｎ ｔｏ ｎ ｅ ａ ｕｎ ｔｏ ｒｎ ｎ ｔｏ ｏ ｔｎ ｉｅ ｕ ｃｉｎ ａ ｄ ｒ ｎ ｌｆ ｃｉｎ．
况 。其 中 １ １例患者在用药前后进行血 、 尿便常规 、 肾功 、 清病毒学 （ Ｂ ＨＣ Ｈ Ｖ） Ｆ 抑制物 、 Ⅷ活性检 测 ， 肝 血 Ｈ Ｖ、 Ｖ、 Ｉ 、 Ⅷ Ｆ 并 于第 １次用药后 １ ｉ 、０ｒｉ ０ｒ ｎ６ ｎ检测 Ｆ ａ ａ Ⅷ活性 ； 同时随访 ２年检测 Ｆ Ⅷ抑制物 。结果 较 用药前 Ｆ ￥ Ｖ 活性 明显提 高 ， 达到或接近预期升高值 ； 所有 ３ ０例患 者用药后 出血症状停 止 ， 效率达 １０ 。每次 出血 显 ０％ 事件 约 ８ ．％ 的患 者在 ≤３次输注 即可 较好 的控制症状 ， ６７ 提示具有 较好 的有效 性 。３ ０例患 者共输注重 组 Ｆ ７ Ⅷ ０次 ， 总 计 ５ ９ ， １２４ ｕ 在用药期间无任何不 良反应 出现 。本研究发现 １ 患者 在用 药后 ４周 产生 Ｆ 例 Ⅷ抑制物 ， 提示 短期抑制物 产 生率为 ３ ３ （／ ０ ，１ ２年 随访未见抑制物产 生增加趋 势 。结论 ．％ １３ ） １ 例
血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定
血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定摘要】目的讨论血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定。
方法对样本进行临床检验。
结论参考范围(一期法)FⅧ：C 54.29%～168.51%，FⅨ：C 50.09%～222.05%，FⅪ：C 81%～118%， FⅫ：C 61 %～148%。
因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性检测与Ⅱ：C、V：C、Ⅶ：C、X： C等一样，都是以相当正常人的百分活性来表示的，故工作参考值很重要，志愿者以100例为好，且年龄段分布要有代表性，制成的混合血浆在一30℃下也只能保持3个月。
每次检测都必须制作标准曲线。
【关键词】血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定参考范围(一期法)FⅧ：C54.29%～168.51%，FⅨ：C50.09%～222.05%，FⅪ：C81%～118%，FⅫ：C61 %～148%。
结果评价1.生理情况血浆凝血因子Ⅷ曾称为抗血友病因子(antihemophilic factor，AHF)或抗血友病球蛋白(antihemophilic globulin，AHG)，正常人血浆浓度很不稳定，一般为0.1mg/L，分子质量为3330000，肝脏可能是主要的合成场所，其基因定位于X性染色体(Xq28)，长度为186kb。
凝血因子Ⅸ也称为凝血活酶成分(plasma thromboplastin com-ponent，或叫christmas因子，分子质量为56000，正常血浆浓度为3～4mg/L，为肝脏合成的维生素K依赖性凝血因子，其基因定位于X染色体(Xq27.1)，长度为34kb。
凝血因子Ⅺ，又称血浆凝血活酶前质(plasma thromboplastin antecedent，PTA)，是一种较为稳定的凝血蛋白，血浆正常浓度为4～6mg/L，分子质量为160 000，由肝脏合成，基因定位于4号染色体(4q35)，长度为23kb。
因子Ⅻ，也称Hageman因子，正常血浆浓度为29mg/L，分子质量为80 000，主要由肝脏合成，基因定位于第5号染色体(5q33-ter)，长度为11.9kb。
凝血五项检验项目指标释义
凝血五项检验项目指标释义一、血浆凝血酶原时间（prothrombin time，PT）正常参考值：12-16秒。
临床应用：凝血酶原时间是检查外源性凝血因子的一种过筛试验，是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原、和凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的缺陷或抑制物的存在，同时用于监测口服抗凝剂的用量，是监测口服抗凝剂的首选指标。
还可作为肝脏合成蛋白质功能的检测。
据报道，在口服抗凝剂的过程中，维持PT在正常对照的1-2倍最为适宜。
1.延长：>3秒①广泛而严重的肝脏实质性损伤，如急性重症肝炎及肝硬化②先天性外源凝血因子Ⅱ、V、Ⅶ、Ⅹ减少及纤维蛋白原的缺乏。
③获得性凝血因子缺乏，如：急性DIC消耗性低凝期、原发性纤溶亢进、阻塞性黄疸、维生素K 缺乏。
④血循环中有抗凝物质存在：如服用口服抗凝剂、肝素、FDP和香豆素等抗凝剂。
2.缩短：①DIC早期呈高凝状态②血栓栓塞性疾病和其它血栓前状态（凝血因子和血小板活性增高及血管损伤等）③口服避孕药④先天性凝血因子V增多监控：抗凝治疗监控：口服抗凝剂“华发令”，预期值约为参考植的2倍。
PT活动度参考值为75%-120%，降低到＜40%可能有出血倾向PIR参考值：1+0.15，PI延长至正常对照2倍时，PTR约增至2INR正常参考值范围为0.8-1.5用药维持范围2.0-4.0。
二、国际标准化比值（international normalized ratio，INR）正常参考值：0.8-1.5。
临床应用：INR是病人凝血酶原时间与正常对照凝血酶原时间之比的ISI 次方（ISI：国际敏感度指数，试剂出厂时由厂家表定的）。
同一份在不同的实验室，用不同的ISI试剂检测，PT值结果差异很大，但测的INR值相同，这样，使测得结果具有可比性。
目前国际上强调用INR来监测口服抗凝剂的用量，是一种较好的表达方式。
世界卫生组织（WHO）规定应用口服抗凝剂时INR的允许范围如下：临床适应症INR允许范围预防静脉血栓形成①非髋部外科手术前1.5—2.5②髋部外科手术前2.0—3.0③深静脉血栓形成2.0—3.0④治疗肺梗塞2.0—4.0⑤预防动脉血栓形成3.0—4.0⑥人工瓣膜手术3.0—4.0监控：INR为2-4时为抗凝治疗的合适范围。
出凝血功能异常患者的术前评估和准备
6.冷沉淀物：主要用于凝血因子尤其是FⅦ和纤维蛋白原缺乏所致的出凝 血功能异常病人，如血友病、纤维蛋白原缺乏症、尿毒症性血小板功 能紊乱等。
药物治疗
1.VitK 〔1〕纠正VitK缺乏：补充VitK是纠正因VitK缺乏所致出凝血功能异常的
有效方法。 假设病人无出血倾向或手术可择期进行，可皮下或肌注VitK110mg。
症或药物引起的血小板功能障碍，的手术病人围术期异常出血。
4.肝素：主要用于高凝状态患者。在术前积极去除高凝状态的诱因如提 前数周停用避孕药、纠正心衰、降低血液粘稠度等前提下，对高凝状 态手术病人可给予适量肝素治疗。
FDA统计5年间所发生的30例硬膜外麻醉后应用低分子肝素预防血栓 形成而发生血肿的病例〔75％为女性〕，发现血肿多发生在硬膜外穿 刺、置管部位。由此建议，蛛网膜下腔或硬膜外腔麻醉穿刺应于末次 注射低分子量肝素后12h后进行。
不稳定的FⅧ在全血中保存24h后，活性下降50％，FⅤ保存3天后损 失超过50％。
3.新鲜冰冻血浆〔FFP〕: 含有全血中所有凝血因子，通常10～15ml/kg可使血浆凝血因子活性
增加30％。由于多数凝血因子活性提高25％～30％即可到达止血作 用，故FFP输注剂量不宜过大，首次量为10ml/kg，维持量减半。 ASA推荐FFP用于以下情况
4.DIC：围手术期并发DIC者，手术创面严重渗血难止同时伴有身体其它部位 广泛出血发生率近达90％，血压降低或休克的发生率约占74％。
5.血友病：本病原则上应防止手术，尤其是循环血中存在FⅧ抑制物时，严 禁常规手术。必需进行手术时，应于术前足量补充所缺乏的凝血因子， 其中血友病A需用新鲜血液和/或新鲜血浆，血友病B可用库血和/或FFP。
出凝血功能异常患者的术前评估和准备
4.肝素：主要用于高凝状态患者。在术前积极去除高凝状态的诱因如提 前数周停用避孕药、纠正心衰、降低血液粘稠度等前提下，对高凝状 态手术病人可给予适量肝素治疗。
美国FDA统计5年间所发生的30例硬膜外麻醉后应用低分子肝素预防血 栓形成而发生血肿的病例（75％为女性），发现血肿多发生在硬膜外 穿刺、置管部位。由此建议，蛛网膜下腔或硬膜外腔麻醉穿刺应于末 次注射低分子量肝素后12h后进行。
不稳定的FⅧ在全血中保存24h后，活性下降50％，FⅤ保存3天后损 失超过50％。
3.新鲜冰冻血浆（FFP）: 含有全血中所有凝血因子，通常10～15ml/kg可使血浆凝血因子活性
增加30％。由于多数凝血因子活性提高25％～30％即可达到止血作 用，故FFP输注剂量不宜过大，首次量为10ml/kg，维持量减半。 ASA推荐FFP用于下列情况
凝血新模式（凝血－抗凝－纤溶网络学说）
出凝血功能实验室测试项目
PLT计数：（100～300）×109/L 当检测结果低于正常参考值时，须通过末稍血涂片镜检加以证实。 正常人每天PLT波动幅度可达6％～10％。剧烈运动、饱餐后和晚期妊 娠升高，月经期偏低。 目前临床上广泛使用的全自动血细胞计数仪，往往是根据体积大小将 PLT与其它颗粒区分开来，检测中常会出现测定值过高或过低。如当存 在过多的小球型RBC、RBC碎片和WBC碎片、细菌污染时，PLT检测 值会高于实际值；而当遇到采血不顺利、冷凝聚或黏附在中性/单核粒细 胞表面时，可出现假性PLT计数减少。
2.鱼精蛋白（PTM）： 用药时注意
注射肝素4～6h者，通常无需再用PTM拮抗 皮下注射肝素吸收慢，PTM剂量只需静注肝素剂量的50％～75％，
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APTT纠正试验
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全自动化、快速、重复性好、易于标准化 易受干扰
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抑制物定义： 将受检血浆与或正常人血浆混合， 37℃温育2h后，
检测剩余因子Ⅷ的活性，以Bethesda单位（BU）来计算 抑制物的含量，1BU相当于灭活50%因子Ⅷ的量。 检测方法： 1. APTT纠正试验 2. Nijmegen 法、Bethesda法、ELISA法等
经典方法，耗时费力，重复性差，标准化程度差
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重复性
定量检测性能评价
N=10 Level 1 Level 2 Level 3 Level 4 Level 5 Level 6 Mean 0.12 0.68 6.30 16.76 21.10 63.31
SD 0.01 0.09 0.40 0.79 1.68 5.04 CV% 11.23 13.46 6.29 4.72 7.96 7.96
凝血因子Ⅷ抑制物的实验室检测
南方医科大学南方医院检验科
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FⅧ抑制物检测的临床意义： 1. 替代治疗并发症（20%～30% ） 2. 监测出血倾向 3. 指导免疫抑制剂的合理使用 4. 因子剂量的使用指导 5. 获得性血友病的诊断
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3C
23.6 36.7 56.3
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4D 5E
2.6
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2.0
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30.6 40.2 62.5
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50.3
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80.6
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6F
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7G
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8H
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稀释倍数
1
2
4
8
16
32
64
128 256 512 1024
与正常对照血浆比值应价于30-60%之间 最好接近50%.
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FⅧ抑制物自动化筛查的方法学研究
1. 以SYSMEX CA1500为检测平台 2. 以凝固法为检测原理 3. 分别设定即刻纠正试验（APTT1）及孵育后纠正
试验（APTT2）程序 4. 所有试剂均为商品化试剂 5. FⅧ抑制物筛查所需时间小于20min
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定量检测性能评价
阳性率：61.19%，Bethesda方法为64.31% 经配对卡方检验：P＝0.144 一致性检验：Kappa=0.715， P＝0.000 灵敏度：87.22% 特异度：85.71% 阴性预测值：78.83% 阳性预测值：91.67% 诊断符合率：86.69%
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立即封板，37 ℃ 2h
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IDΒιβλιοθήκη 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1A
106
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100
2B
80.6
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0.20BU/mL
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1.30BU/mL
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41.60BU/mL
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160.0BU/mL
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指标性能评价(n=261)：
定性检测性能评价
经ROC曲线分析(0.939)，APTTD（APTT2-APTT1）CUT-OFF值为1.6sec
APTTCI纠正指数CUT-OFF值为0.55(APTTCI=APTT*APTT1*APTT2* APTTD3/106)
孵育90min)
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定量检测性能评价
参考范围：0-0.39BU/mL (n=195) 验证最大稀释倍数：8倍 临床可报告范围：0-204.8BU/mL
指标性能评价(n=353)： 经ROC曲线分析，CUT-OFF值为0.31BU/mL 经配对t 检验： P＝0.779，R2＝0.884（抑制物滴度水平）
阳性率：21.84%，Bethesda方法为20.31%
经配对卡方检验：P＝0.481
一致性检验：Kappa=0.793，P=0.000;
灵敏度：86.79%
特异度：94.71%
阴性预测值：96.57%
阳性预测值：80.70%
诊断符合率：93.10%
自动化、快速、易于标准化、不受肝素或其它非时间依赖性抗体干扰
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FⅧ抑制物自动化检测的方法学研究
1. 以SYSMEX CA1500为检测平台 2. 以凝固法为检测原理 3. 设定FⅧ抑制物自动化定量检测程序 4. 以Bethesda方法阳性标本作为标准品，建立标准曲线 5. 所有试剂均为商品化试剂 6. FⅧ抑制物定量检测所需时间小于2h(待测血浆需58℃