叶绿素的提取和分离实验 ppt
绿叶中色素的提取和分离实验ppt课件
Ⅰ、提取叶绿素
•
• Ⅱ、探究pH对叶绿素稳定性的影响 取一些叶绿素粗产品，配成一定浓度的溶液，于室温（约25℃）下进行实验，方法和 结果如下表：
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• 小李想了解叶绿素粗产品中是否含有其他色素，请你提供检测方法并说出主 要步骤
参考答案： 纸层析法 。 主要步骤：1.制备滤纸条； 2.画色素液 细线；
操作目的 使滤液中叶绿素的含量高 有助于研磨充分和保护叶绿素
防止溶剂挥发，并充分溶解色素 使分离的色素分层，防止色素重叠 使分离的色素带清晰，便于观察 防止滤液溶解到层析液中，无法分离
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实验拓展、能力提升 1、用毛细吸管划滤液细线时很难保证细且直，有什么解决办法？ 2、课下搜集资料，探究其他色素提取和分离的方法 。
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设计实验
分离色素的原理
各种色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的随 层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢，从而使各种 色素相互分离。
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实验步骤
两角
1cm
毛细吸管 细齐 直
一两
适量 滤液细线
滤液细线
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分组实验，探究要点
1、制备滤纸条时为什么要剪去两角，否则会出现什么现象？ 2、滤液细线为什么不能浸到层析液中？ 3、画滤液细线为什么要细且直，并待干后重复几次？ 4、为什么装有滤液和层析液的试管一定要用棉塞塞严？ 5、实验后滤纸条上出现了几条色素带?分别是什么颜色? 6、从上往下色素带顺序如何？各色素带宽窄如何？这些说明了什么？
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典例分析 （2012上海）图6表示叶绿体色素提取分离实验中纸层析的结果，据图判断用作
实验材料的叶片颜色为 • A．红色 B．黄色 • C．绿色 DB．紫色
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• 【实践应用】
叶绿体色素的提取与分离实验
3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽旳一 条色素带旳颜色是（ ） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能旳色素和构造
（一）捕获光能旳色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占1/4
吸收可见 旳太阳光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素旳提取和分离试验中在滤纸条上扩散速度 最快旳色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色旳溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表达加，“—”表达不加。
处理
二氧化硅（少许） 碳酸钙（少许）
95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（1）A处理得到旳溶液颜色是 黄绿色 ，原因是__叶__绿__素_被__破__坏__________
（6）色素分离旳成果：相邻色素带间距最宽旳是 他们旳颜色是 橙黄色 和 黄色 ，主要吸收 蓝紫
胡萝卜素 和 叶黄素 ， 光。
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取：称取5 g的绿叶，剪碎，放入研钵中→加入少量二氧化硅、碳酸钙和10 mL无水乙醇→研磨→过滤→收集到试管内并塞严试管口。
准备过滤纸条：将过滤纸条剪成略小于试管长度和直径的过滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，在距离剪角一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
画滤细线：用毛细管吸取少量滤液，并沿铅笔线均匀划出一条细线，待滤液干后再画1~2次。
叶绿素分离：在试管中倒入适量层析液。
得到滤纸上的四种颜色、不同宽度的色素带。
叶绿素提取注意事项：
准备滤纸时，要将滤纸的一端剪去两角，这样可使色素扩散到滤纸上，以便于观察实验结果。
过滤时不用滤纸过滤而用单层尼龙布过滤是因为滤纸对色素具有吸附作用，若用其过滤，会导致收集到的滤液色素含量少，使实验效果不明显或失败。
实验二-叶绿素的提取与分离
实验二-叶绿素的提取与分离实验二叶绿素的提取和分离一、实验目的从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素，并在薄层层析板上点样使叶绿素显示不同颜色。
二、实验原理要求同学们先查询资料，了解叶绿素相关知识，实验课上老师讲解。
三、实验材料、器具研钵、托盘天平、分液漏斗、干燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4四、实验步骤1、叶绿素的提取在中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以．如果是冷冻的，解冻后包在纸中轻压吸左水分)。
加入10mL2:1石油醚和丙酮混合液，适当研磨。
将提取液用滴管转移至分液漏斗中，加入10mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质，分去H2O层，再用蒸馏水洗涤两次。
将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加2g无水Na2SO4，通风处理。
处理后的液体倾至另一锥形瓶中(如溶液颜色太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩)。
2、点样用一根内径1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1cm处，平行点两点，两点相距1cm左右。
若一次点样不够，可待样品溶剂挥发后．再在原处点第二次，但点样斑点直径不得越过2mm。
3、展开先在小烧杯中放入展开剂[用石油醚和丙酮按3：1的比例进行混合作为展开剂，再将薄层板斜靠于层析缸内壁。
点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中，密闭层析缸。
待展开剂上升到距薄层板另一端约1cm时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，在空气中晾干或用电吹风吹干薄层。
毛细管点样薄层色谱展开4、观察层析板并记录实验结果。
薄层层析时Rf值表示的是原点到层析斑点中心的距离与原点的到展层溶剂的前沿距离包括扩散最快的是什么，扩散最慢的是什么最宽的色素带是什么，最窄的色素带是什么哪两个色素带距离相距最远，哪两个最近等等各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快，反之则慢。
最快：胡萝卜素次之：叶黄素次之：叶绿素A最慢：叶绿素B颜色分别为：橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，最宽的是叶绿素A最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近实验十四、植物色素的提取和薄层色谱分析一、实验目的：1、了解薄层色谱的基本原理和应用。
高三总复习生物课件 绿叶中色素的提取和分离、光合作用的基本过程
1．分析“绿叶中色素的提取和分离”实验中的异常现象
异常现象
原因分析
①未加石英砂(二氧化硅)，研磨不充叶绿素)太少； 绿色过浅 ③一次加入大量的无水乙醇，提取液浓度太低(正确做法：分次加入少量 无水乙醇)；
④未加碳酸钙或加入过少，色素分子被破坏
滤纸条色 ①滤液细线不直；
细线
待滤液干后，再画一两次 增加色素附着量，使分离出的色素带分明
层析
加盖 层析液不能触及 滤液细线
防止层析液挥发 防止色素溶解在层析液中
(3)实验结果
色素种类
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素 a 叶绿素 b
色素 颜色 橙黄色 黄色 蓝绿色 黄绿色
色素 含量 最少 较少 最多 较多
溶解 度
最高 较高 较低 最低
()
A．培养蓝细菌研究光合作用时，需提供葡萄糖作为碳源
B．叶绿素 f 主要分布在蓝细菌叶绿体类囊体薄膜上
C．叶绿素 f 能够吸收、转化红外光，体现了蓝细菌对环境的适应
D．在正常光照条件下，蓝细菌会同时吸收可见光和红外光进行光合作用
解析：蓝细菌是自养生物，不从外界吸收葡萄糖，培养蓝细菌研究光合作用时，不需提 供葡萄糖作为碳源，A 错误；蓝细菌是原核生物，没有叶绿体，B 错误；某些蓝细菌在 近红外光环境下生长时，含有叶绿素 f 的光合系统会启动。进一步研究发现，叶绿素 f 能吸收、转化红外光，用于光合作用，体现了蓝细菌对环境的适应，C 正确；在正常光 照条件下，蓝细菌光合作用依赖叶绿素 a 来收集、转化可见光，用于光合作用，不能吸 收红外光进行光合作用，D 错误。
能力二 围绕光合色素的种类和功能，考查科学思维能力
3．(2021·潍坊二模)通常情况下，光合作用依赖叶绿素 a 来收集、转化可见光，用于光
叶绿素含量测定实验PPT课件
2.3 仪器与器皿： 分光光度计、台秤、剪刀、研钵、移液管、
漏斗、大试管
三. 实验步骤
1．取样：清洗叶片并擦干,称取0.5g叶片， 剪碎后放入研钵中。（在正规实验中应 各重复3次，本实验为减少乙醇或丙酮向 环境中的排放，故不设重复）。注意取 样时要避开大的叶脉。
4．结果计算：将645、663、652nm处测得的吸光 度代入公式（3）、（4）、（5）、（6）中计 算叶绿素a、b浓度和总浓度。再将叶绿素a、b 浓度和总浓度代入公式（7）中求出所测材料 单位重量或单位面积的叶绿素a、b含量和总含 量。
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓
称0.5g叶用乙醇或丙酮研磨 ↓
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用 多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或二甲基 亚砜等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素 在特定提取溶液中对特定波长的光有最 大吸收，用分光光度计测定在该波长下 叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度)，再 根据叶绿素在该波长下的吸收系数即可 计算叶绿素含量。
叶绿素a、b在长波的最大吸收峰分别在663nm、 645nm，据Lamber-Beer 定律，可得浓度C与光密 度D间的关系式：
实验二. 叶绿素含量的测定
高等植物光合作用过程中利用的光能是 通过叶绿体色素(光合色素)吸收的。叶绿 体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素 和叶黄素组成。
在植物光合生理、发育生理和抗性生理 研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿 素含量也是指导作物栽培生产和选育作 物品种的重要指标。
一.实验原理
3．读取吸光度：取厚度为lcm的洁净比色皿，注 意不要用手接触比色皿的光面，先用少量色素 提取液清洗2~3次，注意清洗时要使清洗液接触 比色皿内壁的所有部分，然后将色素提取液倒 入比色皿中，液面高度约为比色皿高度的4/5， 将撒在比色皿外面的溶液用滤纸吸掉（注意不 能擦），再用擦镜纸擦干擦净。
实验十二菠菜叶中叶绿素的提取和分离
实验十二菠菜叶中叶绿素的提取和分离实验十二菠菜叶中叶绿素的提取和分离(07-05-26) 一实验目的1(掌握从菠菜叶中提取叶绿素的方法;2(了解薄层层析的原理，掌握薄层层析的一般操作和定性鉴定方法二实验原理1(叶绿素提取高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要包括叶绿素a (CHONMg)、叶绿素b(CHONMg)、β—胡萝卜素(CH)和叶黄素(CHO)等4种。
562叶绿素a和叶绿素b为吡咯衍生物与金属镁的配合物，胡萝卜素是一种橙色天然色素，属于四萜类，为一长链共轭多烯，有α、β、γ三种异构体，其中，β异构体含量最多。
叶黄素为一种黄色色素，与叶绿素同存在于植物体中，是胡萝卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在乙醚中溶解度较小。
根据它们的化学特性，可将它们从植物叶片中提取出来，并通过萃取、沉淀和色谱方法将它们分离开来。
RR=H; 叶黄素 R= OH 2(薄层色谱薄层层析是快速分离和定性分析微量物质的一种极为重要的实验技术，具有设备简单、操作方便而快速的特点。
它是将固定相支持物均匀地铺在玻片上制成薄层板，将样品溶液点加在起点处，置于层析容器中用合适的溶剂展开而达到分离的目的。
用此法分离时几乎不受温度的影响，可采用腐蚀性显色剂，而且可在高温下显色，特别适用于挥发性小或在较高温度下易发生反应的物质，同时也常用来跟踪有机反应或监测有机反应完成的程度。
薄层层析按分离机制不同可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等，最常用的为吸附薄层层析，在此主要讨论。
吸附层析中样品在薄层板上经过连续、反复的被吸附刑吸附及展开剂解吸附过程，由于不同的物质被吸附剂吸附的能力及被展开剂解吸附的能力不同，放在薄层上以不同速度移动而得以分离。
通常用比移值(Rf)表示物质移动的相对距离:色斑最高浓度中心至原点中心的距离,R f展开剂前沿至原点中心的距离1CH2RCH3CH3NNMg R=CH; 叶绿素a;3NNCHCH33R=CHO; 叶绿素b;HHOCOOCHO3OCH3CH3CH3 CH3 Rf值计算示意图叶绿素:吡咯衍生物和镁的配合物，是植物进行光1(起点线; 2. 展开剂前沿合作用必需的催化剂，易溶于石油醚等非a. 色斑最高浓度中心至原点中心的距离极性溶剂中。
新版人教版 生物 实验绿叶中色素的提取和分离(共23张 ppt)学习演示PPT课件
3、滤纸条一端为什么要剪去两角？
4、画滤液细线时应注意什么？
5、为什么不能让滤液细线触及层析液？
1.提取：绿叶中的色素都能溶解于有机溶剂无水乙 醇中，所以可以用无水乙醇提取绿叶中的色素。
2.分离：纸层析法
色素有多种，都能溶于层析液中，但不同色素在层析液 中的溶解度不同； 溶解度高→在滤纸上扩散快 溶解度低→在滤纸上扩散慢
碳酸钙作用：防止叶绿体中色素被破坏二氧化硅作用：使研磨更充分
1、滤纸条上色素带宽窄不同的原因有哪些？
不同种类的色素在绿叶中的含量不同，含量多的 在滤纸条上呈现的色素带宽，反之色素带窄。
2、试分析分离色素时色素带颜色过浅的原因。
(1)叶片颜色太浅。(2)叶片放置时间太久。 (3)研磨不充分。(4)未加CaCO3。 (5)加入提取液量太多。(6)研磨时间太长。
D．紫色
溶解度低→在滤纸上扩散慢
答：滤液细线上的色素会溶解到层析液中，从而无
用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀划出一条细线，
2、为什么研磨时要迅速？为什么研磨时加入碳酸钙和二氧化硅？
2、通过动手操作，体验成功的喜悦，培养乐于思考与创新的精神，逐步提升生物科学素养。
色素是有机物,只能溶于有机溶剂,如无水乙醇。
制备滤纸条
将干燥的定性滤纸剪成略小于试管长与
直径的滤纸条，将滤纸条一__端__剪__去__两__角_ ，在距离剪角一端1 cm处用__铅__笔_
画一__条__细__的__横__线___
画滤液细线：用毛细吸管吸取少量的滤液，沿铅笔线均
匀地
画_一__条__细__线____，待滤液干后，再画一两次
3、关于叶绿体中色素的提取和分离实验的
5.4.1绿叶中色素的提取和分离实验
思考：
• 3.色素带的宽窄代表什么？ 色素带越宽，代表色素含量越
多，反之越少
• 4.色素带在滤纸条上的排布是怎样的？
从上到下分别是：胡萝卜素、 叶黄素、叶绿素a、叶绿素b 在层析液中的溶解度：胡＞黄＞a＞b
巩固练习
因为叶绿素中吸收最多的 是蓝紫光和红光
• 为什么不使用发绿色光 的灯管作补充光源？
叶绿素对绿光吸收最少
红色日光灯
现代温室大棚的“神器”
红色/蓝色LED灯
二氧化碳发生器
捕获光能的结构——叶绿体
外膜 内膜 基粒
类囊体 基质
★捕获光能的色素分布在_类__囊__体__的__薄__膜__上__ ★酶分布在类__囊__体__薄__膜__和__基__质_ 上
D．色素分子是有机物，不溶于水，所以研磨过程中加
入丙酮是为了溶解色素
2．在圆形滤纸的中央滴上叶绿体的色素滤液进 行色素分离，要看到近似同心环状的四个色素 圈，排列在最外圈的一个呈（ ）。
A. 蓝绿色 B. 黄绿色 C. 黄色 D. 橙黄色
胡萝卜素
叶黄素
叶绿素a
D
叶绿素b
二、色素的作用
➢为什么植物的叶片通常呈绿色？
（2）分离原理: 不同色素在层析液中_溶__解__度__的不同,溶解度__高__的随 层析液在滤纸上扩散得快,反之则慢。
（所以可以用层析液来分离色素）
2.实验的步骤是怎样？
（1）提取绿叶中的色素 （2）制备滤纸条
（3）画滤液细线
（4）分离绿叶中的色素
（5）观察和记录
3.怎样提取色素？提取过程中需要加入哪些试剂？各自 具有什么作用？
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分 离 实 验
绿 素 的 提 取
与
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1
捕获光能的色素
绿叶中会有哪些种类的色素呢？ 它们分别是什么颜色的？ 各种色素在绿叶的含量相同吗？
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2
实验：绿叶中色素的提取与分离
实验材料和用具 (1)材料：新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片) ; (2)用具：无水乙醇，层析液，二氧化硅，碳 酸钙；干燥的定性滤纸，烧杯(100ml)，研钵， 小玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，小试管， 培养皿盖，药勺，量筒(10ml)，天平。
(4)画滤液细线：用力要均匀，快慢要适中。滤液细线要细、 直，且干燥后重复画一两次，使滤液细线既有较多的色素，又使 各色素扩散的起点相同。
(5)色素分离：滤液细线不要触及层析液，否则滤液细线中
的色素分子将溶解到层析液中，滤纸条上得不到色素带。
-
14
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6
滤纸一端剪去两角，在距干燥滤纸条窄端1cm处画一条铅笔细线。
- 1cm
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3．画滤液细线
-
8
用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画出一条细、 齐、直的滤液细线。待干燥后重复2-3次。
滤液细线
- 1cm
9
４．分离色素
将滤纸条浸入层析液中，注意滤液细线不能浸入 层析液中。
层析液
滤液细线
-
10
重点三：实验结果（现象）：
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a
从上到下 胡黄 a b
叶绿素b 层析液
滤液细线
-
11
捕获光能的色素
绿叶中会有哪些种类的色素呢？ 它们分别是什么颜色的？ 各种色素在绿叶的含量相同吗？
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12
滤纸上色带的排列顺序如何？
实验讨论：
宽窄如何？说明什么？
捕 获 光
类胡萝 胡萝卜素 卜素 (占1/4) 叶黄素
能
的
叶绿素a
色
素
叶绿素
(占3/4)
叶绿素b
-
13
实验中的注意事项
(1)选材：应选取鲜嫩、颜色深绿的叶片，以保证含有较多 的色素。
(2)提取色素：研磨要迅速、充分，且加入几种物质（注意
SiO2和CaCO3）的量要成比例，以保证提取较多的色素和色素浓度 适宜。
(3)制备滤纸条：剪去两角，以保证色素在滤纸条上扩散均 匀、整齐，便于观察实验结果，否则，会形成弧形色素带。
-
3
实验：绿叶中色素的提取和分离
重点一：实验原理 (1)提取：叶绿体中的色素易溶于无水乙醇等 有机溶剂中。 (2)分离：叶绿体中的各种色素在层析液中溶 解度不同。
-4Βιβλιοθήκη 重点二：方法与步骤1．提取色素
SiO2：使绿叶 充分研磨。 CaCO3：防止研 磨时色素受到破坏。 过滤：单层尼 龙布
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2．制备滤纸条