叶绿素的提取分离和测定(精)
叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定
过滤入三角瓶中
观察荧光现象 透射光 色，反射 光 光。
定性实验 无需移液管量 皂化反应(约1ml)
加KOH数片剧烈摇均， 加石油醚1ml和H2O 1ml 分层后观察 上层呈 吸收 下层呈 吸收 色，为 光。 色,为 光。 ， ,
取代反应（约1mL）
在400-700nm处扫描光谱，分别测定类胡萝 卜素和叶绿素的吸收峰
• 3．叶绿素定量分析：
称取鲜叶0.1g，加1.9mlH2O，磨成匀浆，取2份 0.2ml 分别加95%酒精4.8ml,摇匀，8000转离心 5min, 上清液在 649 ， 652 ， 665 测定 OD ，计算 Chla,Chlb 和Chl总量的值。
5、定量分析：叶绿素吸收红光和兰紫光，红
光区可用于定量分析，其中665 和649用于定量 叶绿素a,b及总量，而652可直接用于总量测定
180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 400 500 Waverlength(nm) 600 700
a
b
• 实验步骤 1．定性分析：
加醋酸约1ml，变褐 为_________叶绿素 , 取1/2加醋酸铜粉,加热变 色，为 叶绿素。
2、叶绿素和类胡萝ຫໍສະໝຸດ 素的吸收光谱测定：皂化反应的上层 黄色石油醚溶液 弃上层，反复用石油醚萃取,直 到无类胡萝卜素, 得叶绿素(盐)
（稀释470nm OD 0.5-1） （稀释，665nm OD 0.5-1）
• 五、实验数据记录和处理
• Ca(mg/L)=13.95A665-6.88 A649 • Cb (mg/L) =24.96A649-7.32 A665 • CT (mg/L) = Ca+ Cb 或A6521000/34.5
叶绿素的提取和分离实验报告
叶绿素的提取和分离实验报告叶绿素的提取和分离实验，这可真是个有趣的课题。
想象一下，阳光下的小植物，满身的绿色，就像穿着翠绿衣裳的小精灵。
你可知道，叶绿素可不是简单的东西，它可是植物的“魔法武器”。
今天咱们就来聊聊这个实验，顺便看看怎么把叶绿素提取出来，真是让人充满期待啊。
准备工作可得做足。
找几片新鲜的绿叶，最好是一些比较嫩的，比如菠菜或者其他绿叶蔬菜。
小伙伴们，记得洗干净哦，卫生第一。
然后，撕碎这些叶子，越小越好，这样才能让叶绿素更容易释放出来。
这一过程就像是在给小植物“做美容”，哈哈。
撕的过程中，脑海里不禁浮现出那些清新的味道，真是让人忍不住想咬一口。
咱们要用到一些工具。
把撕碎的叶子放进研钵里，加入一些酒精，建议用乙醇。
酒精可真是个好帮手，它能把叶绿素从叶子里“撇”出来。
用杵子慢慢研磨，直到叶子变成绿油油的糊状。
这一刻，感觉自己就像是个小炼金术士，手里的东西似乎在变得神奇。
油绿的汁液渐渐渗出来，真是让人心花怒放。
这时候，你会发现，液体的颜色开始变得浓郁。
小心翼翼地把混合物过滤到一个试管里，别让那些叶子的渣滓混进来哦，咱们要的可是纯粹的叶绿素。
就像在筛选黄金一样，真是小心翼翼。
一过滤，看到清澈的液体，那一瞬间，心里不禁乐开了花，感觉这就是成功的象征。
可以用薄层色谱法来分离叶绿素。
想象一下，在薄层板上，一滴滴的液体就像小小的水滴，兴奋地准备出发。
小心地把试管里的液体滴在板上，然后将薄层板放入含有溶剂的小容器里。
那一刻，真的感觉自己像是在观看一场精彩的表演。
随着时间的推移，液体在板上缓缓移动，颜色也在不断变化。
简直是科学和艺术的结合，太美了！经过一段时间，取出薄层板，看到上面的色带，一条条的，绿的、黄的、甚至还有些微微的蓝色。
这时候，心里默念：“这就是大自然的调色板！”咱们可以用尺子量量这些颜色的距离，分析一下不同色带的组成，原来叶绿素还有好几种呢。
真是让人意外，看来这小小的绿叶，藏着的秘密可真不少。
叶绿素的快速提取与精密测定
叶绿素的快速提取与精密测定一、本文概述本文旨在探讨叶绿素的快速提取与精密测定的方法。
叶绿素是绿色植物中的重要色素，不仅赋予植物鲜明的绿色，而且在光合作用中扮演着关键角色。
因此，叶绿素的提取与测定对于理解植物生理学、生态学和环境科学等领域的研究具有重要意义。
本文将详细介绍叶绿素的提取过程，包括材料的选取、提取剂的选用、提取条件的优化等，并阐述精密测定叶绿素的原理和方法，以提高测定的准确性和可靠性。
通过本文的阐述，读者可以了解叶绿素的提取与测定技术，为相关研究提供有益的参考和指导。
二、叶绿素的快速提取方法叶绿素的提取是植物生理学和生态学研究中不可或缺的一环，其准确性和效率直接影响到后续的分析结果。
传统的提取方法往往耗时较长，且提取效果不尽如人意。
因此，我们开发了一种快速、高效的叶绿素提取方法，以期满足现代科学研究对速度和精度的双重需求。
本方法采用有机溶剂萃取法，通过优化溶剂种类、温度和时间等参数，实现了叶绿素的快速提取。
具体来说，我们将新鲜植物叶片剪碎，加入预热的有机溶剂（如丙酮、甲醇等）进行浸泡和搅拌。
在适当的温度下，叶绿素分子能够迅速从植物组织中溶解到有机溶剂中，从而实现快速提取。
与传统方法相比，本方法具有显著的优势。
提取时间大大缩短，通常只需几分钟至十几分钟即可完成整个提取过程。
提取效率显著提高，能够更充分地释放叶绿素分子，减少损失。
本方法还具有操作简便、安全可靠等特点，适用于批量样品的快速处理。
为了验证本方法的准确性和可靠性，我们进行了多组对比实验。
结果表明，本方法提取的叶绿素含量与传统方法相比无显著差异，且重现性良好。
我们还对提取过程中可能出现的干扰因素进行了系统分析，并提出了相应的解决方案，以确保提取结果的准确性。
本方法是一种快速、高效、简便的叶绿素提取方法，适用于各种植物叶绿素的提取和分析。
我们相信，这一方法的推广应用将有力推动植物生理学和生态学等相关领域的研究进展。
三、叶绿素的精密测定技术在完成了叶绿素的快速提取之后，接下来就需要对提取的叶绿素进行精密测定。
叶绿素含量测定方法(精)
叶绿素含量测定方法---丙酮法由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。
藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。
叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。
取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。
采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5 min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL容量瓶中。
按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。
定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）：叶绿素a含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数叶绿素b含量用以下公式进行计算：Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数叶绿素总含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。
此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。
叶绿素提取方法提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英周百成底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼 1987 18（3）295--300.一、直接浸提法：1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min （根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min倒上清；留藻泥。
叶绿素的提取与分析测定
植物叶绿体色素的分析一、实验目的：1、学会叶绿体色素的分离方法。
2、掌握叶绿素的定量测定。
一、3、了解高等植物叶绿体色素的种类组成、性质。
二、实验原理：1、叶绿体色素的提取：（1）原理：叶绿体色素是植物捕获太阳能进行光合作用的重要物质，高等植物的叶绿体色素一般由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素等组成。
叶绿体色素的提取是利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性,将待测的植物叶片用研钵研磨让植物组织破碎，利用丙酮的溶解能力将叶绿体色素溶于丙酮中，通过用滤纸过滤分离植物组织碎片，即可以得到叶绿体色素的丙酮粗提液。
（2）步骤：称取新鲜的植物叶子(菠菜等)4g，放入研体中加5ml80%丙酮，少许碳酸钙和石英砂,研磨成匀浆,再加入20ml丙酮，以漏斗过滤到棕色瓶中备用2、叶绿体色素的分离：（1）原理：叶绿体色素的分离提纯一般用层析的方法，其中纸层析是最简单的一种。
当溶剂不断地从纸上流过时，由于混合物中各成分在流动相和固定相间具有不同的分配系数，引起它们的移动速度不同，因而使混合物分离。
（2）步骤：1）取滤纸条(6.5×30cm),在离纸边1.5cm处用铅笔划一直线，在另一端两角分别拴上一根线(见图1)，用毛细管取吸绿素提取液沿着铅笔线划一条样带，使样带宽度在3mm以内，如色素过淡用电吹风吹干后再点数次，直到样带呈深绿色为止。
2）在层析缸中加入四氯化碳20ml及少许无水硫酸钠,然后将滤纸吊在层析缸中,使下端浸入溶剂中,色素点要略高于液面,滤纸条边缘不可碰到层析缸璧(如图2)用聚乙烯薄膜两层封住层析缸,直立于暗处层析。
3）0.5小时后，观察色素带分布(最上端是橙黄色的胡萝卡素，其次是黄色的叶黄素，然后是兰绿色的叶绿素a和黄绿色的叶绿素b)，记录色谱图。
如图所示：3、叶绿体色素的性质（一）荧光现象：叶绿体色素在吸收光能以后可以从基态跃迁到激发态，当处于第一单线态（激发态）的电子再回到基态时其携带的能量将以光的形式放射出来产生荧光，叶绿素荧光的颜色是红色的。
实验四叶绿体色素的提取、分离及叶绿素a、b含量的测定
实验四：叶绿体色素的提取、分离及叶绿素a、b含量的测定实验目的1、了解叶绿素分离与提取的原理和方法2、了解它们的光学特性和理化性质3、了解叶绿素a、b含量测定的方法。
实验原理1.脂溶性叶绿体色素提取：可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
2.分离：（1）叶绿体色素的分离＜纸层析法＞因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。
纸层析是以滤纸纤维为固定相，而以有机溶剂作为流动相。
由于样品中各物质有不同的分配系数，移动速度因此而不同，从而达到分离的目的。
（2）叶绿素与类胡萝卜素的分离<皂化反应>叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇与叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。
3.叶绿素a、b含量的测定：根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其溶液浓度c和液层厚度L成正比，即：A=φCL(φ为吸光系数) 因此，根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，用公式即可计算出提取液中各色素含量。
测定663nm 和645nm两个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b在对应波长下的吸光系数即可求出叶绿素a、b含量。
其校正过的公式为：Ca＝12.7A663－2.69A645 Ca:叶绿素a浓度,mg/LCb＝22.9A645－4.68A663 Cb:叶绿素b浓度,mg/LCT＝Ca + Cb CT:叶绿素总浓度,mg/L实验器材：1、仪器：剪刀、漏斗、烧杯、分光光度计、分液漏斗、铁架台、移液管、吸耳球、试管、毛细管、平底大试管、天平、研钵、滤纸2、试剂：石英砂、碳酸钙、丙酮、乙醚、四氯化碳、无水硫酸钠、30%KOH-甲醇溶液3、材料：菠菜实验步骤：1、叶绿素的提取称取去中脉叶片2g左右，剪碎放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成浆，再加入丙酮10ml，用漏斗过滤即为色素提取液，暗处备用。
叶绿体色素的提取、分离及定量测定
叶绿体色素的提取、分离及定量测定一、实验结果1、 滤纸带纸层析：2、 圆形滤纸层析：3、 叶绿素a 、b 含量的测定Ca=12.7A663—2.69A645 Cb=22.9A645—4.68A663推动剂边缘 胡萝卜素 叶黄素叶绿素a （蓝绿色）叶绿素b （黄绿色） 叶绿素b （黄绿色）叶绿素a （蓝绿色）叶黄素胡萝卜素推动剂边缘次数组数Ca=31.35（稀释后数据计算）Cb=15.04（稀释后数据计算）二、问题思考1、大部分植物依靠光合作用合成自身生长繁殖所需的有机物。
光合作用所需色素主要有类胡萝卜素和叶绿素。
其中直接参与光合的是叶绿素a，中心色素，其余为天线色素。
2、叶绿素为双羧酸的酯，一个羧基被甲醇酯化，另一个羧基被叶绿醇酯化。
不溶于水而溶于有机溶剂如酒精、丙酮、石油醚。
叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色。
结构的基本特点为拥有一个卟啉环头部及一条叶醇链尾部。
其卟啉环头部由四个甲烯基和四个吡咯环连接而成，大环中央有一个镁原子和四个氮原子结合。
镁原子带正电荷，相连的氮原子偏于带负电荷，因此卟啉环呈极性亲水，可以与蛋白质结合。
尾部叶醇基具有疏水性，为脂溶性物质。
叶绿素a、b结构基本相同，以-CHO代替CH3即为叶绿素b。
叶绿素吸收光谱3、纸层析可行原因：a、色素可提取b、色素可以溶解于某些溶剂中c、不同类型色素在同一溶剂中溶解度不同d、色素分子不会吸附滤纸纤维上e、色素分子可以在体外条件下稳定存在4、本次实验叶绿素a、b含量比值偏低，说明实验有误差。
而由于叶绿素a含有醛基，易于被氧化，亦可导致a的含量下降。
同时由于实验在11月末进行，植物中叶绿素含量下降，a，b的比值可能会受影响。
5、实验注意事项：a、叶片要选取绿色较深的部位，去除叶脉；b、尽量先剪碎，便于之后的研磨；c、研磨前加入二氧化硅和碳酸钠，注意用量。
量少研磨不充分，叶绿素会被液泡中的有机酸破坏；量大不易过滤完全且会使色素层析时颜色变淡；d、过滤时所用棉花不可过多，否则滤液完全被棉花吸收。
叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定
植物生理学实验报告实验题目：叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定姓名班级学号一、实验原理和目的目的：1.练习叶绿素提取和分离的方法2.进一步了解叶绿素色素成分提取、分离原理：1、溶解性。
叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取2、吸附性。
滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。
二、实验器具和步骤材料:新鲜植物叶片器具：研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm)一个，圆形滤纸（11cm和7cm)各一张，滤纸条一张试剂：95%乙醇，石油醚步骤：1.色素提取（乙醇粗提液）a.取新鲜叶片洗净擦干，去中脉称1g左右剪碎于研钵b.研钵中加3-5ml95%乙醇研磨成匀浆过滤于刻度试管残渣用少许乙醇冲洗一并过滤定容至10ml2.荧光观察将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光3.色素萃取（石油醚提取液）取乙醇提取液5ml与另一支试管加2ml石油醚摇荡静止片刻上层深绿色为石油醚提取液4.色素分离a.将（11cm)圆滤纸中间剪一小圆孔取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘与纸芯紧贴且露出少许，最好相平）用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端待风干后再滴加几次b.将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央将插上纸芯的滤纸放在培养皿上纸芯下端浸入石油醚迅速盖好培养皿。
c.推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置和名称三、实验数据和作业四、数据分析研磨叶片不充分，提取的叶绿体色素溶液浓度稀，荧光现象不明显分离色带较少的原因：提取的叶绿素的浓度稀胡萝卜素叶黄素。
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解方程式得
(二）步骤
1、称取0.5g叶片，剪碎后置于玻璃匀浆 器中加纯丙酮5mL，研成匀浆，用80%丙 酮10mL洗匀浆器，用80%丙酮定容到25mL， 避光静置5min。用移液管吸取上面的绿 色清液1mL置于一大试管中，加入丙酮 4ml稀释，摇动试管，作测定用。
2、测量光密度值
研钵、吸管、小烧杯、试管、培养皿等 95%酒精、石油醚
碳酸钙
（三）步骤
1、用天平称取15g鲜叶，剪碎放入研钵 中，加少量的CaCO3粉末及95%酒精510mL研成糊状，再加95%酒精20mL，充 分混匀以提取叶片匀浆中的色素，5-10 分钟后，过滤入三角烧瓶中加塞待用。
2、取一张色层分析纸或定性滤纸代用， 剪成圆形，直径应略大于培养皿的直径； 将圆形滤纸平放在培养皿上，用滴管吸 取叶绿素提取液，滴在滤纸的中心位置， 稍干后，再重复操作几次；然后取另一 滴管吸取石油醚，慢慢地推动叶绿素提 取液，不久即可看到分离的各种色素的 同心圆环,由内到外依次为：叶绿素a为 蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、叶黄素呈 鲜黄色、胡萝卜素为橙黄色。
取上述提取液以80%丙酮作为空白对照，于 663及645nm下读取光密度值
三、实验结果
计mg/L） 最后计算时需考虑稀释因子 *25*2/1000
叶绿素a含量（mg/g鲜重）=CA*5
=0.25CA
叶绿素b的含量（mg/g鲜重）=0.25CB
叶绿素总含量（mg/g鲜重）
实验四 叶绿素的提取、分离和含量测定
一、叶绿素的提取、分离
（一）原理 叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a 和b、胡萝卜素及叶黄素）。这些色素 均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用 酒精或丙酮等提取。并可根据它们在不 同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附 剂上的吸附能力不同，将它们彼此分离 开。
（二）仪器和药品
=0.25CT
二、叶绿素a和b含量的测定
（一）原理 叶绿素a、b在长波方面的最大吸收峰 分别为为663nm和645nm。 同时在该波长时叶绿素a 、b比吸收系 数k为已知，根据Lambert—Beer定律列出 浓度C与光密度OD之间的关系式：
OD663=82.04Ca+9.27Cb OD645=16.75Ca+45.6Cb Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度，单位mg/L Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663