实训二十四 大肠杆菌、沙门菌属血清学鉴定
肠杆菌的鉴定t
实验结果
生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（M—甲基红）
依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门菌（+）、可疑志贺菌（-）
实验结果
生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（Vp）
从左至右依次为： 可疑大肠杆菌（-）、可疑沙 门菌（-）、可疑志贺菌（-）
实验结果
生化反应鉴定——西蒙枸橼酸盐琼脂斜面（C）
可疑大肠杆菌（-）、可疑沙门菌（-）、可疑志贺菌（-）
B3
B4 B5
+ +
（⊕产酸产气，+产酸不产气，-不产酸也不产气）
实验结论
根据B3和B4、B6的EMB菌落特点可初步判断这三个菌落为致病菌落。 经过双糖铁纯化培养后，B3和B6为H2S阳性，可初步诊断B3和B6为沙门菌属。
B4的双糖铁纯化后为K/A及H2S阴性，可初步诊断为志贺菌属。
分别对B3和B4进行血清学鉴定，结果与初步诊断的预测一致，即B3在沙门菌 属血清中发生凝集反应，B4在志贺菌属血清中发生凝集反应，由此可以肯定B3 为沙门菌属。 根据实验结果记录，B5号菌的EMB菌落特点和双糖铁生长现象符合大肠杆菌 的特征，初步确定为可疑的大肠杆菌。 经过生化反应鉴定，B5的IMViC反应为++--，五种糖发酵结果均为阳性，可以 断定B5确实为大肠杆菌。
有白色凝集
无凝集现象
实验结果
动力测试（普通肉汤半固体培养）
大肠杆菌和可疑沙 门菌均有运动趋势， 琼脂显浑浊。 可疑志贺菌则紧沿 穿刺路线生长。
大 肠 杆 菌
可 疑 沙 门 菌
可 疑 志 贺 菌
实验结果
生化反应鉴定——蛋白胨水（I—吲哚）
从左至右依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门（+）、可疑志贺（-）
血清学鉴定实验
位相变异试验的方法
简易平板法
1.配制0.7~0.8%的半固体琼脂培养基，然后倾注平板烘干表面水分。 2.在平板内滴上一滴已知的第1相或第2相血清因子，并作好标记。 3.待血清吸收到琼脂内，在标记部位的中间点种已知第1相或第2相的新鲜 待检菌株。 4.培养后，其已知相细菌的动力受到抑制，解离出另一相的细菌，并向周 围蔓延生长，形成一个大的菌落。 5.检查其菌落的边缘部分，即可确定该菌株的另一相H抗原。 6.该方法通常1~3天内可以有结果。
A-F群 多价O
Hw Hx H5
Hz H7
A-F群 多价O
Hz6 Hz10 Heh Hgp
Hz13 Hz15 Hz28 Hz29 H2
Hlv HA
HB
HC HD Vi
Henx
H1.2.3.
5
血清学实验材料分配
分组 4人 /组
菌种
诊断血清
待测菌种一支
1盒 /组
写实验报告
写明实验判定结果（即阴性或阳性），并描 述整个实验过程及注意事项。
抗原抗体反应条件
1. 抗原
2. 抗体
3. 环境因素： （1）电介质：0.85%NaCI； （2）温度：37或56 （3）pH值：7.0 （4）振荡：适当的机械振 （5）反应时间
抗原抗体反应的特点
特异性和交叉性 若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交 叉反应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高 。
例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表.
鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12）， 第Ⅰ相H抗原（i） 第Ⅱ相H抗原(1,2)。 它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，2）
[ ]内的O抗原可能存在或不存在。 [ ]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。
实训二十三 大肠杆菌、沙门菌属生化反应试验
四、结果分析
1、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一套肠
编码
鸟 赖 葡 纤 山 侧 鼠 木 蔗 丙 甘 氨 氨 磷 维 梨 金 李 糖 糖 二 露 酸 酸 胨 二 醇 盏 糖 酸 醇 水 糖 花 盐 醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿 拉 伯 糖 蛋 七 半 氨 白 叶 固 基 胨 苷 体 酸 水 对 照 1 13 14 15 2 4 2 1
4 2 1
－
+ 3
+
－
+ 2
－ －
+ 2
－ － + + 3
+
+ 7+来自 该菌序号为32237
2、鸟氨酸、赖氨酸、氨基酸对照需要加石蜡
封口（氨基酸对照不能变色，如不变色，鸟 氨酸与氨对同色，为阴性；不同色，为阳 性）； 3、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一支 KIA； 4、放置温箱37度24h培养后观察结果。
实验十一、大肠杆菌、沙门菌属 生化反应试验
一、目的：
1、掌握肠道杆菌鉴定方法和原则； 2、掌握肠道杆菌生化反应（肠编码）名称、
试验原理。
二、内容：
1、观察记录上次试验结果－画图、描述菌落
特点、颜色； 2、挑取可疑单个菌落接种生化反应培养基； 3、记录生化培养基初始颜色。
三、操作：
沙门菌血清学鉴定流程及结果判读
沙门菌血清学鉴定流程及结果判读下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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大肠杆菌与沙门氏菌鉴定
大肠杆菌与沙门氏菌的鉴定08动检1班：魏静翟阿官李盼盼尚延丽田方方崔亚婷一、实验目的与要求1、通过本实验了解大肠杆菌及沙门氏菌的主要生化特性与培养特性2、掌握大肠杆菌与沙门氏菌的鉴别方法二、实验器材及试剂温箱、显微镜、载玻片、营养琼脂、接种环、灭菌平皿、麦康凯培养基、无菌试管、伊红美兰培养基、三糖铁培养基、革兰氏染色剂、棉签、火柴等三、实验内容1、直接镜检法：1）操作步骤：a）用棉签沾取适量样液直接涂在载玻片上b）用革兰氏染色剂染色c）显微镜下观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：大肠杆菌为革兰氏阴性菌，中等大小，两端略圆的短粗杆菌，成单个存在，也有成双排列；周身鞭毛，能运动，有时两端着色较浓，要注意与巴氏杆菌区分开来。
b）沙门氏菌：沙门氏菌也为革兰氏阴性菌，无芽孢，大小通常为0.7~1.5um*2.0~5.0um，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。
2、分离培养法：将样液分别划线接种在麦康凯培养基、伊红美兰培养基上，温箱培养24h后观察生长情况，根据菌落的形态、颜色、大小等方面的差异来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。
1）麦康凯培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润；b）沙门氏菌：无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。
2）伊红美兰培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：紫黑色菌落，有的有金属光泽b）沙门氏菌：形态特征与在麦康凯培养基上的相似2、三糖铁培养基穿刺试验1）操作方法：将待检样液穿刺接种于三糖铁培养基中，培养18~24h后，取出观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：穿刺后不变黑，表面呈黄色b）沙门氏菌：穿刺底部有气体，穿刺后变黑，中间为黄色表面为红色3、乳糖发酵试验1）操作方法：将待检样液接种于乳糖发酵管内放于温箱内培养18h后，观察结果2) 预期实验结果：a）大肠杆菌：产酸产气b）沙门氏菌：不产酸产气。
肠道杆菌的实验报告
一、实验目的1. 熟悉肠道杆菌的基本生物学特性。
2. 掌握肠道杆菌的分离与鉴定方法。
3. 学会使用生化反应和显微镜观察等方法对肠道杆菌进行鉴定。
二、实验原理肠道杆菌是一类革兰氏阴性细菌，广泛存在于人体肠道中。
它们分为条件致病菌和致病菌两大类。
本实验通过观察肠道杆菌的形态特征、生化反应和血清学试验等方法，对分离到的肠道杆菌进行鉴定。
三、实验材料1. 实验菌株：大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等。
2. 培养基：普通琼脂培养基、双糖铁培养基、血清学反应用培养基等。
3. 试剂：革兰氏染色液、生化试剂、血清等。
4. 仪器：显微镜、接种环、酒精灯、培养箱等。
四、实验方法1. 菌株分离（1）将实验菌株接种于普通琼脂培养基上，在37℃培养箱中培养18-24小时。
（2）用接种环挑取单菌落，接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况。
2. 形态观察（1）将分离得到的菌株涂片，进行革兰氏染色。
（2）在显微镜下观察菌体的形态、大小、染色特性等。
3. 生化反应（1）将分离得到的菌株接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况和颜色变化。
（2）根据菌落生长情况和颜色变化，判断菌株的生化反应类型。
4. 血清学试验（1）将分离得到的菌株与相应的血清进行玻片凝集试验。
（2）观察凝集反应，判断菌株的血清学类型。
五、实验结果1. 菌株分离实验菌株在普通琼脂培养基上生长良好，菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为白色。
2. 形态观察革兰氏染色结果显示，实验菌株为革兰氏阴性菌，菌体呈短杆状，大小约为0.5×1.5μm。
3. 生化反应双糖铁培养基结果显示，实验菌株能够发酵葡萄糖，产生酸和气体，不发酵乳糖，不还原硝酸盐。
4. 血清学试验玻片凝集试验结果显示，实验菌株与相应的血清发生凝集反应，判断为该血清学类型。
六、实验讨论本实验通过对肠道杆菌的分离与鉴定，掌握了肠道杆菌的基本生物学特性和鉴定方法。
实验结果表明，分离得到的菌株为革兰氏阴性菌，能够发酵葡萄糖，不发酵乳糖，不还原硝酸盐，且与相应的血清发生凝集反应，符合肠道杆菌的生物学特性。
大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查
青岛农业大学实验论文题目：大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查姓名：学院：动物科技学院专业：动物科学班级：学号：指导教师：任慧英2014年 4 月 8 日大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查摘要：大肠杆菌是肠杆菌科中埃希氏菌属的代表种。
大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特性，如形态、染色特性等。
但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。
关键词：生化特性、埃希氏菌、共同特性、鉴别诊断引言：根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌菌株分为不同的血清型。
沙门氏菌属是由一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对人和多种动物均有致病性，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。
1.材料与方法1.1材料菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液。
增菌液：亚硒酸盐亮绿增菌液、四硒酸钠增菌液。
普通培养基：肉汤、普通琼脂、沙门试液诊断学清：A~E群多价O血清及单半固体培养基。
鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。
生化培养基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。
1.1.2 试剂生化试剂：MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原剂等、革兰氏染液。
1.1.3器材显微镜、吸管等。
1.2方法1.2.1 直接分离培养：将A菌种与B菌种的混合菌液用常规划线方法，接种麦康凯琼脂平板和SS琼脂平板各一个，置37℃温箱内培养24h后取出，观察每种平板上两种菌的生长情况。
形态观察：以无菌接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板上新鲜培养的A菌种和B菌种的单个菌落，在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色，镜检。
观察两种菌的形态、大小与排列方式，并作比较。
这两种菌都是革兰氏阴性、两端钝圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不明显。
培养特性观察：将A菌种和B菌种的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。
沙门菌的分离鉴定及血清学分型
H2S producing and urea nagative
脲酶试验阴性，产H2S。 Methyl red and Simmons citrate positive
甲基红、枸橼酸盐试验阳性
Facultative anaerobe
兼性厌氧菌
Motile with peritrichous flagellae
Salmonella may have been injured or decrease in amount by heat process or food preservation.
So that should be add Pre–enrichment step and Selective-enrichment step before the Selective solid media.
subspecies indica
种II. Salmonella bongori
总计 (沙门菌属)
1998
2,443
1,454 489 94 324 70 12 20
2,463
2001
2,480
1,478 498 94 327 71 12 21
2,501
2007
2,557
1,531 505 99 336 73 13 22
第三步 选择性固体培养基培养 (选择性鉴定培养基 )
Step 4 Identification step 第四步 鉴定
Step 5 Confirmation step 第五步 确证
Enrichment medium 增菌培养基
1. Pre-enrichment: BPW = Buffered Peptone Water
实验五大肠杆菌与沙门氏菌
0.02g 60mL 40mL
• V-P试剂
甲液：α萘酚酒精溶液 （α萘酚5g无水乙醇100mL）
乙液：KOH溶液 （KOH 40g，水100ml）
将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。
五、结果观察
1. 大肠杆菌的生长表现
普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落， 直径约2~3mm；
• 在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。
② V-P试验： 某些细菌能发酵
粉
碱
红
+ 二乙酰 色
葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 2,3-丁二烯醇
+
化 合
胨中的胍基化合物 物
注意：通常M.R和V-P试验是密切相关： 如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。
• M.R试剂
甲基红 95％酒精 蒸馏水
3. 生化管接种培养
① 糖发酵试验：
葡乳麦甘蔗
② H2S试验； ③ 尿素酶试验； ④ 枸橼酸盐利用试验。
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
大肠杆菌
沙门氏菌
大肠杆菌 沙门氏菌 置 37℃培养
4. 吲哚试验
① 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中， 置37℃培养3-5d；
＋(－) ；＋(－)
3. 细菌的染色、镜检
大肠杆菌
沙门氏菌
G－直杆菌，大小0.4-0.7×2-3μm， 无芽胞，两端钝圆，散在或成对。
4. 生化管接种培养
大肠杆菌
沙门氏菌
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕/- － － －
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
⊕－ ⊕ ⊕ － ＋ － ＋
微生物检验技术专业实践能力模拟题14含答案
微生物检验技术专业实践能力模拟题14一、最佳选择题1. 空斑试验用于测定病毒的A.核酸种类B.感染力C.数目D.类型E.黏附力答案：B空斑试验常用来检测病毒感染力。
将适当浓度的病毒悬液接种到生长单层细胞的玻璃平皿或扁瓶中，当病毒吸附于细胞上后，再在其上覆盖一层溶化的半固体营养琼脂层，待凝固后，孵育培养。
当病毒在细胞内复制增殖后，每一个感染性病毒颗粒在单层细胞中产生一个局限性的感染细胞病灶，病灶逐渐扩大，若用中性红等活性染料着色，在红色的背景中显出没有着色的“空斑”，清楚可见。
2. 2003年在我国内陆的SARS疫情中，山西省属于A.输出病例区B.未发生病例区C.输入病例区，并引起当地传播D.输入病例区，未引起当地传播E.流行区，并输出病例引起其他地区感染答案：C2003年我国内陆的SARS疫情中，山西省的SARS病例是由外地传入，属于输入病例区，并在当地引起传播。
3. 对疑似霍乱弧菌感染患者的粪便标本，采用压滴法，用普通光学显微镜观察A.细菌壁B.线粒体C.芽胞D.动力E.荚膜答案：D压滴法观察霍乱弧菌的动力，可发现霍乱弧菌呈流星样或穿梭样运动，具有鉴定价值。
4. 诊断流感病毒常用的血清学方法是A.沉淀试验B.补体结合试验C.血凝与血凝抑制试验D.试管凝集试验E.玻片凝集试验答案：C用血清学方法诊断流感病毒，取发病3d内和2～4周后双份血清做血凝抑制试验或补体结合试验，测定急性期和恢复期血清抗体，升高4倍以上有诊断意义。
最常用和最简单的方法是血凝抑制试验，必要时采用补体结合试验。
5. 荚膜肿胀试验可快速诊断A.肺炎链球菌感染B.乙型溶血性链球菌感染C.甲型溶血性链球菌感染D.军团菌感染E.布鲁菌感染荚膜肿胀试验可作为肺炎链球菌的快速诊断，用于痰液、脓汁或脑脊液中肺炎链球菌的鉴定。
6. 食品大肠菌群乳糖初发酵试验，待检样品接种量在1ml以上者，用A.双料乳糖胆盐发酵管B.单料乳糖胆盐发酵管C.单料乳糖蛋白胨发酵管D.双料乳糖蛋白胨发酵管E.乳糖蛋白胨发酵管答案：A食品大肠菌群乳糖初发酵试验，将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；接种量在1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。
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该菌序号为32237 2、玻片凝集实验（需作阴性对照） 先多价血清，若阳性再作单价因子血清（先0
单价血清，再H单价血清） 3、放置温箱37度24h培养后观察结果。
四、结果分析
甲型副伤寒沙门菌－O2+Ha； 乙型副伤寒沙门菌－O4+Hb； 伤寒沙门菌――――O9+Hd。
实验十二、大肠杆菌、沙门菌属 血清学鉴定
一、目的：
1、掌握肠道杆菌生化反应判定方法（肠编
码）； 2、掌握肠道杆记录1、2、3、4号菌各套肠编码结果； 2、从双糖铁培养基挑取细菌作血清学鉴定；
三、操作：
1、记录颜色判断肠编码结果 鸟 赖 葡 纤 山 侧 鼠 木 蔗 丙 甘 氨 氨 磷 维 梨 金 李 糖 糖 二 露 酸 酸 胨 二 醇 盏 糖 酸 醇 水 糖 花 盐 醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿 拉 伯 糖 蛋 七 半 氨 白 叶 固 基 胨 苷 体 酸 水 对 照 1 13 14 15 2 4 2 1