抗菌药物敏感性分析
抗菌药物敏感试验
纸片扩散法（KirbyBauer法）
原理：
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼 脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减 的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试 菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈 即为抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏 感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
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操作方法：
1.挑取16～20h的菌落 2.用无菌生理盐水制备成0.5麦氏比浊管浊度的菌液。
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3.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻 轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向平均涂抹 琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平 板内缘涂抹一周。
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4.用镊子将E-TEST试条的抗菌药物的一面贴向琼脂表 面，有刻度的一面向外，直径140mm的平板可放置 6条，90mm平板只能放置1～2试条 。
5.孵育，置平板于35℃孵育16～24h。
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6.孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交 处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC) 。
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第九节 细菌的分类命名
一、分类原则:细菌的分类原则上分为传统 分类和种系分类。
分类方法： （1）人为分类法：
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嗜麦芽窄食单胞菌：甲氧苄啶/磺胺异噁唑、左氧氟沙 星、米诺环素 ；
嗜血杆菌属：氨苄西林、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、头孢 他啶、美罗培南、阿奇霉素、环丙沙星、头孢克洛；
淋病奈瑟菌：头孢曲松、环丙沙星、青霉素、大观霉素、 四环素 ；
肺炎链球菌：红霉素 、苯唑西林 、甲氧苄啶/磺胺异噁唑、 克林霉素、左氧氟沙星、四环素、万古霉素 ；
抗菌药物敏感性试验(药敏试验)
平板接种
用无菌棉拭子蘸取菌液
在管壁上方旋转挤压几次去掉过多水分 用拭子涂布整个M-H培养基表面，反
复几次，每次将平板旋转60° 最后沿平皿周边绕两圈以保证涂布均匀
制备好的菌液必须在15min内使用 贴纸片前可将培养皿盖半开3-5min以使
表面过多水分被吸收但不超过15min
孵育
必须用35℃孵箱（苛氧菌药敏平板应置 于5% CO2 环境）
箱内平板最好单独摆放，不超过两个叠在 一起，否则中间的平板因达不到孵箱温度 而产生预扩散的作用。
平板孵育规定时间（一般为18-24h）后读 取结果，葡萄球菌和肠球菌必须孵育24h以 检测苯唑西林和万古霉素的耐药性。
孵育16-18h 后检查每一块平板
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
浓度（MIC） 将MIC与机体血清或体液中可获得药物浓度
相比较来确定恰当的临床疗效
MIC的对数与抑菌环直径关系 ——近似线性负相关
CLSI药物选择原则
A组 常规和首选药物，其结果应常规报告 B组 首选试验选择性报告。包含一些临床
生β-内酰胺酶。 β-内酰胺酶试验更为迅速，为确认质粒介
导耐药性的好方法。
肺炎链球菌和其他链球菌
培养基 含5%脱纤维羊血的M-H琼脂 肺炎链球菌用苯唑西林测定对青霉素的敏
感性，抑菌环直径≤19mm应测其MIC而不 是直接报告对青霉素中介或耐药
肺链以外的链球菌不推荐用苯唑西林试验 对于草链，青霉素（或苯唑西林）纸片扩
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
药物敏感性试验报告
药物敏感性试验报告试验目的：本试验旨在评估细菌对不同抗生素类药物的敏感性，为临床治疗提供参考。
试验方法：采用Kirby-Bauer法进行药敏试验。
从临床感染病例中获得15株细菌，分别为5株金黄色葡萄球菌、5株大肠杆菌、5株肺炎克雷伯菌。
在Mueller-Hinton琼脂培养基上均匀涂布细菌悬液，按照国家标准标准放置氧气易感性酵母菌平板中央，随机抽取敏感性试药盘，按标准方法培养24h。
试验结果：以致药典药物敏感标准为参考，细菌对不同药物的抗生素敏感情况如下表：细菌药物名称敏感耐药其他金黄色葡萄球菌青霉素√ × 6mm红霉素√ × 12mm氯霉素√ × 26mm庆大霉素√ × 15mm万古霉素√ × 20mm大肠杆菌青霉素× √ 0mm红霉素√ × 11mm氯霉素√ × 24mm庆大霉素√ × 17mm万古霉素√ × 23mm肺炎克雷伯菌青霉素× √ 0mm 红霉素√ × 10mm氯霉素√ × 20mm庆大霉素√ × 13mm万古霉素√ × 18mm分析：本试验结果显示，15株细菌对不同抗生素类药物具有不同的敏感性和耐药性。
其中，金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素敏感性较弱；大肠杆菌和肺炎克雷伯菌对青霉素无敏感性反应。
而对红霉素、氯霉素和万古霉素的敏感性较好，且有所差异。
在临床治疗中需根据细菌对不同药物的敏感性进行选择。
结论：本次试验结果为临床治疗提供了细菌药敏信息，有助于合理选用药物进行精准治疗。
同时，也为细菌抗药性研究提供了参考数据。
针对本试验的数据结果，我们建议在临床治疗中应注意抗生素的合理应用，避免滥用和乱用，降低细菌耐药性发展速度，为临床治疗提供更好的保障。
抗菌药物敏感性分析
一概况2011年第二季度我院送检的细菌培养标本共766份，阳性203例（阳性率26.5%）阳性率较一季度略有上升；其中血培养225例，阳性34例（阳性率15.1%）；其他培养541份，阳性193例（阳性率35.7%）。
阳性率排在前几位的细菌依次是：1）肠杆菌科细菌共57例，其中：大肠埃希菌25例，肺炎克雷伯菌12例，沙雷菌7例，阴沟肠杆菌5例，奇异变形杆菌6例，产气肠杆菌2例； 2）非发酵菌55例，其中铜绿假单胞菌26例，鲍氏不动杆菌18例，洋葱伯克霍尔德菌11例；3）真菌47例（其中白色念珠菌37例，光滑8例，克柔2例；4）葡萄球菌属34例（其中金葡8例，凝固酶阴性葡萄球菌26例）。
二本季度常见细菌抗生素敏感性分析表1葡萄球菌属（共32例）抗生素敏感性分析抗生素金葡菌（n=8）凝固酶阴性葡萄球菌（n=24）敏感株数敏感率% 敏感株数敏感率%PEN 青霉素0 0 1 4.2 TSU 复方新诺明7 87.5 16 66.7 GEN 庆大霉素 4 50 11 45.8 ERY 红霉素0 0 4 16.7 CLI 克林霉素 3 37.5 10 41.7 TET 四环素 5 62.5 17 70.8 MIN 米诺环素7 87.5 21 87.5 VAN 万古霉素8 100 24 100 RFA 利福平 5 62.5 20 83.3 NOR 诺氟沙星 3 37.5 10 41.7 LVX 左氧氟沙星 5 62.5 11 45.8 FUR 呋喃妥因8 100 24 100 QDA 喹奴普汀达福普汀8 100 23 95.8本季度检出的革兰染色阳性球菌未发现万古霉素耐药株；MRSA的检出率为62.5%（5/8），MRCNS的检出率为75%（18/24）。
由表1可见，二季度金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌的药物敏感性相似，葡萄球菌属对万古霉素、呋喃妥因、喹奴普汀达福普汀、米诺环素及复方新诺明的敏感率较高，而对青霉素、庆大霉素、红霉素、克林霉素及诺氟沙星的耐药性较为普遍，说明该几种药物已不适宜用于葡萄球菌引起的感染。
抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt生物技术实验教学中心课件
8.联合药物敏感试验
1）方法很多，其中纸片法最为常用。先将试验菌均 匀涂布于培养基表面，盖好平皿，放置5分钟，待 平板表面水分吸收后，将两种含药纸片贴于平板 上，两纸片中心距离2--4mm左右。然后35℃ 孵育 过夜，取出观察结果。
2）结果判断 联合药物敏感试验可出现四种结果： A.无关作用： 甲+乙=甲单或乙单 B.拮抗作用： 甲+乙＜甲单或乙单 C.相加作用： 甲+乙=甲单+乙单 D.协同作用： 甲+乙＞甲单+乙单
三、实验操作步骤
（一）纸片扩散法：
1. M-H平板：直径为90mm，厚度 4mm。 2. 菌悬液制备：无菌挑取菌落于无菌生理盐水中，校
正浊度至0.5 麦氏。 3. 用无菌棉签浸入细菌悬液中，将棉签在试管壁上轻
轻挤压以挤去过多的菌液，用棉签以连续划线的方 式均匀涂抹琼脂平板表面三次（每次转60℃）使 菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。盖上 平板的盖子，放置3~10min。
一、实验目的：
1. 掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结 果的判读及临床意义。
2. 了解各种稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作 方法、结果判读和临床意义。
3. 掌握纸片扩散法的质量控制，了解稀释法的质量 控制。
二、实验原理
1. 抗菌药物敏感性试验是测定抗生素或其他抗 微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力。这 种能力可以通过稀释或扩散方法来测定。
六、影响因素：
1. 培养基：厚度，PH，离子浓度，成份，添加剂； 2. 抗菌药物的配制方法，纸片的含量，大小，
渗透性，保存方式等； 3. 细菌的接种量； 4. 培养的环境，温度与时间； 5. 结果的判断及解释标准等。
4.每个孔加入100ul浓度为105菌悬液（大肠或金 葡），混匀，胶布封口，37°C培养。
抗菌药物药敏试验判断标准
抗菌药物药敏试验判断标准
抗菌药物药敏试验判断标准主要采用三级划分制度：
1. 敏感：当使用常规剂量的抗菌药物治疗细菌感染有效时，称该细菌对该抗菌药物具有高度敏感性。
说明在常规剂量下，药物在血液中的平均浓度超过该细菌MIC的5倍以上。
2. 中敏或中介：仅当使用大剂量的抗菌药物治疗细菌感染才有效，或者细菌仅在体内抗菌药物浓缩的体液（如尿液、胆汁）中被抑制时，表示这种细菌对该抗菌药物敏感性低，这种药可用于生理性浓集部位的感染。
3. 耐药：表示某种抗菌药物对该细菌的MIC等于或高于常规剂量下可获得的抗生素的血液或组织浓度，因此细菌不能被抑制。
检验科抗生素敏感性常见检测与分析方法
检验科抗生素敏感性常见检测与分析方法抗生素在医学领域中起着至关重要的作用，它可以有效地抑制和杀灭细菌，从而治疗各种感染性疾病。
然而，随着抗生素的广泛应用，细菌对抗生素的耐药性也在不断增加，因此对抗生素敏感性的检测变得至关重要。
本文将介绍检验科抗生素敏感性的常见检测与分析方法。
一、药敏试验药敏试验是最常用的抗生素敏感性检测方法之一，通过对病原菌在不同抗生素浓度下的生长情况进行观察，来判断该菌株对抗生素的敏感性。
常见的药敏试验包括纸片扩散法、微量稀释法和E测试等。
纸片扩散法是一种简单、快速的药敏试验方法，通过将含有不同抗生素的纸片覆盖在含有病原菌的琼脂平板上，观察形成的抑菌圈直径大小来判断病原菌对抗生素的敏感性。
微量稀释法则是通过在微孔板中逐渐稀释抗生素和病原菌悬液，观察最低抑菌浓度来判断病原菌对抗生素的敏感性。
而E测试则是一种半定量的药敏试验方法，通过在琼脂培养基上贴有梯度浓度的试纸，根据试纸上最低抑菌浓度来确定病原菌对抗生素的敏感性。
二、分子生物学方法除了传统的药敏试验方法外，分子生物学方法也被广泛应用于抗生素敏感性的检测与分析。
其中，聚合酶链式反应（PCR）和测序技术是常见的分子生物学方法。
PCR技术可以快速检测病原菌中存在的抗生素耐药基因，从而帮助诊断医生选择更合适的抗生素治疗。
通过PCR扩增相关基因片段，可以快速、准确地判断病原菌对某种抗生素的敏感性。
而测序技术则可以对PCR扩增的基因片段进行测序分析，从而确定病原菌的抗生素敏感性和耐药性基因型。
三、流式细胞术流式细胞术是一种高通量、高灵敏度的细胞检测技术，也被应用于抗生素敏感性的检测与分析。
通过在流式细胞仪上检测病原菌的细胞膜完整性、细胞形态和代谢活性等指标，可以快速、准确地判断病原菌对抗生素的敏感性。
总结起来，药敏试验、分子生物学方法和流式细胞术是检验科抗生素敏感性常见的检测与分析方法。
这些方法不仅可以帮助医生选择更合适的抗生素治疗方案，还可以指导临床合理使用抗生素，减少耐药菌株的产生，为抗生素治疗提供重要参考依据。
医院感染菌与抗菌药物敏感度分析
医院感染菌与抗菌药物敏感度分析摘要:目的：调查感染病原菌分布率，分析感染病原菌耐药性。
方法：收集2018-2021年全年送检的6959 份标本，采用 API鉴定系统进行菌株鉴定，药敏试验采用琼脂扩散法敏感试验( K2B 法)，分析其耐药性。
结果：共分离出 2299株病原菌，检出率 27. 95% ，医院感染患者主要病原菌为大肠埃希菌(15.43 %)、肺炎克雷伯菌(17. 55 %)、铜绿假单胞菌(15.69 %) 、金葡菌(8.39%)等，主要革兰氏阴性杆菌对亚胺培南、厄他培南、哌拉西林他唑巴坦、头孢哌酮舒巴坦均有较高的敏感性；主要革兰氏阳性球菌对利奈唑胺、万古霉素、替加环素高度敏感。
结论：感染患者中分离的病原菌耐药率较高且呈多重耐药性，以革兰氏阴性杆菌为主，对常规抗菌药物耐药。
因此，控制医院感染耐药菌产生，合理使用抗菌药物具有十分重要的意义。
关键词:医院感染; 耐药菌分布; 耐药性分析随着广谱抗菌药物的广泛应用，细菌耐药性日趋严重，通过动态监测医院的病原菌分布及其对抗菌药物的耐药动向和变迁，掌握医院感染病原菌分布情况及耐药特点，对于指导临床抗菌药物的合理应用，最终达到有效控制耐药菌蔓延和降低医院感染发生率的目的具有重要意义。
1 资料与方法1. 1 资料来源收集 2018-2021年患者标本6959份，检出有病原菌的1945份，检出率为27.95%，检测到阳性菌株 2299株。
1. 2 方法1. 2. 2 菌株鉴定参照《全国临床检验操作规程》(第2版) ，将收集的临床菌株进行常规分离。
所有标本按常规接种羊血平板、麦康凯平板、SS平板，基础琼脂购自杭州天和微生物试剂厂按各自要求配制，分别置普通温箱、37 ℃环境孵育，获得单个纯菌落。
采用VITEK2---Compact全自动微生物鉴定和药敏分析仪（法国生物梅里埃公司研制）分析其耐药特性。
1. 2. 3 质控菌株大肠埃希菌 ( ECO) A TCC 25922、肺炎克雷伯菌 A TCC 700603、铜绿假单胞菌A TCC 27853、产 AmpC 酶标准阴沟肠杆菌 029(染色体介导去阻遏持续高产型) 、 ECO DH5A2919 (产质粒型 ACT21) 。
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一概况
2011年第二季度我院送检的细菌培养标本共766份，阳性203例（阳性率26.5%）阳性率较一季度略有上升；其中血培养225例，阳性34例（阳性率15.1%）；其他培养541份，阳性193例（阳性率35.7%）。
阳性率排在前几位的细菌依次是：1）肠杆菌科细菌共57例，其中：大肠埃希菌25例，肺炎克雷伯菌12例，沙雷菌7例，阴沟肠杆菌5例，奇异变形杆菌6例，产气肠杆菌2例； 2）非发酵菌55例，其中铜绿假单胞菌26例，鲍氏不动杆菌18例，洋葱伯克霍尔德菌11例；3）真菌47例（其中白色念珠菌37例，光滑8例，克柔2例；4）葡萄球菌属34例（其中金葡8例，凝固酶阴性葡萄球菌26例）。
二本季度常见细菌抗生素敏感性分析
表1葡萄球菌属（共32例）抗生素敏感性分析
抗生素
金葡菌（n=8）凝固酶阴性葡萄球菌（n=24）敏感株数敏感率% 敏感株数敏感率%
PEN 青霉素0 0 1 4.2 TSU 复方新诺明7 87.5 16 66.7 GEN 庆大霉素 4 50 11 45.8 ERY 红霉素0 0 4 16.7 CLI 克林霉素 3 37.5 10 41.7 TET 四环素 5 62.5 17 70.8 MIN 米诺环素7 87.5 21 87.5 VAN 万古霉素8 100 24 100 RFA 利福平 5 62.5 20 83.3 NOR 诺氟沙星 3 37.5 10 41.7 LVX 左氧氟沙星 5 62.5 11 45.8 FUR 呋喃妥因8 100 24 100 QDA 喹奴普汀达福普汀8 100 23 95.8
本季度检出的革兰染色阳性球菌未发现万古霉素耐药株；MRSA的检出率为62.5%（5/8），MRCNS的检出率为75%（18/24）。
由表1可见，二季度金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌的药物敏感性相似，葡萄球菌属对万古霉素、呋喃妥因、喹奴普汀达福普汀、米诺环素及复方新诺明的敏感率较高，而对青霉素、庆大霉素、红霉素、克林霉素及诺氟沙星的耐药性较为普遍，说明该几种药物已不适宜用于葡萄球菌引起的感染。
表2肠杆菌科细菌抗生素敏感性分析
抗生素敏感株数（n=57）敏感率%
美洛培南55 96.5
亚胺培南55 96.5
阿米卡星45 78.9
复方新诺明37 64.9
哌拉西林/他唑巴坦37 64.9
奈替米星31 54.4
头孢他啶30 52.6
庆大霉素28 49.1
环丙沙星27 47.4
妥布霉素27 47.4
头孢西丁27 47.4
头孢吡肟26 45.6
头孢噻肟25 43.9
阿莫西林/克拉维酸25 43.9
替卡西林/克拉维酸23 40.4
头孢呋辛20 35.1
哌拉西林16 28.1
头孢噻吩16 28.1
替卡西林14 24.6
阿莫西林11 19.3本次检出的肠杆菌科细菌共57例，其中：大肠埃希菌25例，肺炎克雷伯菌12例，沙雷菌7例，阴沟肠杆菌5例，奇异变形杆菌6例，产气肠杆菌2例。
大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌产ESBL率为45.7%（21/46）。
二季度针对大肠埃希菌敏感率较高的抗生素有：亚胺培南、美洛培南及阿米卡星；而耐药率较高的抗生素有：阿莫西林、哌拉西林、替卡西林及头孢噻吩。
与一季度相同。
铜绿假单胞菌除对粘菌素E全部敏感外，对其他常用药物均有不同程度的耐药。
而鲍曼不动杆菌除对亚胺培南和美洛培南敏感率较高外，对于其他抗生素表现为多重耐药。
本季度洋葱伯克霍尔德菌检出较多，均为ICU病人，提示应加强感控，根据CLSI规范，该菌推荐的抗菌药物有头孢他啶，美洛培南、米诺环素、复方新诺明、替卡西林/克拉维酸、左氧氟沙星和氯霉素。
药物敏感性详见表3。
表3 主要的非发酵菌抗生素敏感性分析
抗生素
铜绿假单胞菌
（n=26）
鲍曼不动杆菌
(n=18)
洋葱伯克霍尔德菌
(n=11)
敏感株数敏感率% 敏感株数敏感率% 敏感株数敏感率%
多粘菌素 E26100- - - - 舒普深1869.216 88.9 - - 阿米卡星1453.90 0 - - 美洛培南1453.916 88.9 6 54.6 亚胺培南1453.916 88.9 - - 环丙沙星1142.3 1 5.6 - - 头孢他啶1038.5 1 5.6 8 72.7 妥布霉素830.80 0 - - 庆大霉素519.20 0 - - 头孢吡肟519.2 1 5.6 - - 氨苄西林/舒巴坦00- - - - 复方新诺明00 4 22.2 11 100 阿莫西林/克拉维酸- - 1 5.6 - - 哌拉西林/他唑巴坦-- 1 5.6 - - 替卡西林/克拉维酸-- 1 5.6 0 0 注：-表示未检测或未作统计。
真菌及药物敏感率（%）
酵母菌对氟康唑天然耐药，非白丝酵母菌对氟康唑和依曲康唑的均表现为耐药。