嗜热脂肪芽孢杆菌使用说明
利于嗜热脂肪芽孢杆菌平板计数的培养方法
利于嗜热脂肪芽孢杆菌平板计数的培养方法作者：万爱玉刘璇万欣来源：《环球市场》2018年第04期摘要：本文研究了嗜热脂肪芽孢杆菌平板计数方法，通过培养基类型、平板培养基的使用量，培养时的温湿度及时间的控制，使得嗜热脂肪芽孢杆菌能够在平板上形成可观察的单菌落，利于进行计数。
关键词：嗜热脂肪芽孢杆菌；培养基；平板计数嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermo—philus）属嗜热性需氧芽孢杆菌，但兼有厌氧的特性。
该菌株运动性强，培养温度高，在平板上生长扩散快，很难形成单菌落[1]。
购买来的生物指示剂，要对其芽孢量进行测定，以判断是否符合灭菌程序的验证要求。
为此对利于嗜热脂肪芽孢杆菌平板计数的培养方法进行了研究，以方便进行生物指示剂的孢子量确认。
一、材料和方法（一）菌种嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC7953（压力蒸汽灭菌生物指示剂，D121值1.3-1.9），孢子量F0≥8（103/只）。
（二）培养基1.营养琼脂培养基（g/L）：蛋白胨10.0，牛肉浸出粉3.0，氯化钠5.0，琼脂14.0，pH值7.2±0.2（25'E）。
121℃高压灭菌15分钟备用。
2.胰酪大豆胨琼脂培养基（g/L）：胰酪胨15.0，大豆木瓜蛋白酶消化物5.0，氯化钠5.0，琼脂15.0，pH值7.3±0.2（25℃）。
121℃高压灭菌15分钟备用。
3.溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂培养基（g/L）：蛋白胨10.0，葡萄糖5.0，溴甲酚紫0.012，pH值7.0-7.2（25℃）。
115℃高压灭菌30分钟备用。
（三）方法将孢子量为103/只的嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC7953（压力蒸汽灭菌生物指示剂）用0.9%氯化钠溶液十倍稀释法稀释[2]，取O.1ml适当稀释度的菌悬液涂布于营养琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂培养基平板上，置于不同条件下培养。
二、结果（一）培养基类型嗜热脂肪芽孢杆菌对培养基的要求较低，本实验室所使用计数培养基通常为营养琼脂培养基和胰酪大豆胨琼脂培养基，考虑到嗜热脂肪芽孢杆菌的特殊性，经查阅资料，将溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂培养基加入选择当中。
高压蒸汽灭菌生物指示菌使用标准操作规程
1.目的建立高压蒸汽灭菌生物指标菌—嗜热脂肪杆菌芽胞菌片的使用标准操作规程，保证其正确使用，并对高压蒸汽灭菌效果进行验证。
2.范围本规程适用于高压蒸汽灭菌生物指标菌—嗜热脂肪杆菌芽胞菌片对高压蒸汽灭菌效果进行的监测。
3.职责生化检验员对本规程的实施负责。
4.程序4.1采用生物灭菌指标菌来检查高压蒸汽灭菌效果是最科学、可靠的检测方法。
嗜热脂肪杆菌芽胞是国际公认的生物指标菌。
该菌具有以下特点：4.1.1最适生长繁殖温度为56℃，培养24小时即可形成菌落。
4.1.2该菌为需氧芽胞杆菌，其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上呈米黄色。
4.1.3该菌无致病性、无热原、无毒，压力蒸汽抗性稳定，在4℃冰箱下保存6个月抗力无明显下降，在常温下（20℃左右）可保存1个月。
4.1.4在121℃饱和蒸汽作用下，存活时间≥3.9min，杀灭时间≤19min，D10值1.3～1.9min，符合国际标准和国家标准的规定。
4.2结构本生物指示剂由菌片、恢复培养基和外管组成，菌片由嗜热脂肪杆菌芽胞制备而成，染菌量为5.0×105～5.0×106cfu/片。
4.3使用方法4.3.1本生物指示剂适用于各型压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测。
4.3.2使用时，将生物指示剂放入标准检测包的中心或待灭菌物品包的中心，置于灭菌器的规定位置。
4.3.3按规定的灭菌温度和时间进行灭菌处理。
4.3.4灭菌完毕，即刻将生物指示剂取出，盖朝上垂直握于手中，用专门工具或一夹子夹住菌管下部，将管内安瓿挤碎，让培养液流出浸没菌片。
然后将菌管放于56℃恒温培养箱内或配套的微型培养器内培养24小时观察初步结果，48小时观察最终结果。
4.4结果判定培养后生物指示剂的培养液由紫色变为黄色即表示有菌生长，判定为灭菌不合格；仍为紫色者为无菌生长，判定为灭菌合格。
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的原理
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的原理以嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的原理为标题，本文将探讨嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的原理及其应用。
嗜热脂肪芽孢杆菌是一种厌氧芽孢杆菌，广泛存在于土壤、水体和动植物体内。
该菌对高温环境适应能力强，能够在70°C至80°C的温度下存活生长。
由于其在高温环境下的生长特性，嗜热脂肪芽孢杆菌常被用作指示剂，用于检测高温灭菌过程中的杀菌效果。
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的原理是基于该菌在高温下的存活特性。
在制备指示剂时，嗜热脂肪芽孢杆菌的孢子会被固定在载体上，如滤纸或玻璃片。
制备完成的指示剂会呈现为白色或黄色，这是由于固定的嗜热脂肪芽孢杆菌孢子的存在。
在高温灭菌过程中，如果灭菌条件不足或操作不当，嗜热脂肪芽孢杆菌孢子会存活下来。
为了检测灭菌的效果，可以将嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂放置在被灭菌物品的不同位置，如内部和外部。
经过灭菌过程后，若指示剂上的孢子仍然存活并呈现白色或黄色，则说明灭菌过程存在问题，杀菌效果不理想。
相反，如果指示剂上的孢子变为黑色，则表明灭菌过程有效，杀菌效果良好。
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的应用范围广泛。
它常被用于医疗机构、实验室、食品加工厂等场所进行高温灭菌过程的监测。
通过使用指示剂，可以及时发现灭菌设备是否正常运行以及灭菌效果是否达标，帮助保障工作环境的安全和产品的质量。
除了在高温灭菌过程中的应用，嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂还可用于研究嗜热脂肪芽孢杆菌的生态学特性和抗菌机制。
通过对指示剂上存活的孢子进行分离和培养，可以进一步研究嗜热脂肪芽孢杆菌的生长条件和生理代谢特点。
此外，还可以利用嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂进行抗菌药物的敏感性测试，评估不同抗菌药物对嗜热脂肪芽孢杆菌的抑菌效果。
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂是一种基于嗜热脂肪芽孢杆菌在高温环境下存活特性的指示剂。
它广泛应用于高温灭菌过程的监测，可以及时发现灭菌问题并保障工作环境的安全和产品的质量。
BT21-产品介绍
型 号： BT21产品名称： 孢子安瓿瓶生物指示剂用 途： 121℃~134℃蒸汽/水浴/SAM 灭菌过程监测（液体、密闭液体程序）菌 种： ATCC 7953嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（来自美国典型培养物保藏中心）含 菌 量： 106/105/104 D 值： 121℃不低于1.5分钟 Z 值： 不低于6℃ 存活时间： (log No -2) × D 杀灭时间： (log No +4) × D包 装： 每箱200支+20支阴性对照品。
有 效 期： 24个月执行标准： ISO 、美国药典标准；EN ISO11138-1:2007 和EN ISO11138-3:2009；IRAM 37102-1:1999和 IRAM 37102-3:1999产品分类： 1类，根据风险认证资质： ISO 9001:2008 、 ISO 13485:2012、ANMAT PM-1614-1安 瓿 瓶： 40mm 高，外径：7mm ，壁厚：0.25mm ，培养液量：0.6毫升，紫色储运条件： 温度4—8℃，放在阴暗的地方，不能冷冻、不能放置在灭菌剂附近。
安瓿瓶能在运输期间，30℃以下保存15天。
阴性对照： 在同一批次中每十个单位要有一个没有孢子的培养液作为阴性对照。
它可以伴随孢子安瓿瓶整个过程，灭菌后作为阴性结果的标准颜色。
使用说明：1从冰箱中取出Bionova ® BT21，在室温下至少放置一小时。
2把Bionova ® BT21连同阴性对照品一同放到一个含有液体的容器内灭菌，或者是装有液体的相似容器里。
这些要灭菌的容器应该型号相同，装有的液体量相同。
3像平时一样灭菌。
4灭菌过程完成后打开灭菌室的门，等五分钟然后将生物指示剂从容器中取出。
（警告：将生物指示剂BT21从灭菌后的容器中取出时要带上防护眼镜和手套）5在60±2℃的环境下培养安瓿瓶最长不超过24小时。
（每次要用一个没有灭过菌的生物指示剂同样条件下培养作为阳性对照）6 每10小时观察一次，如果生长指示培养液的颜色变黄说明这次灭菌过程失败，如果24小时后指示剂没有颜色变化，证明结果呈阴性（这次灭菌过程是可接受的）。
嗜热脂肪芽孢杆菌-淀粉酶
嗜热脂肪芽孢杆菌-淀粉酶嗜热脂肪芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus），是一种广泛存在于自然环境中的细菌，其特点是喜好生长于高温环境，并且具有较高的耐热性。
淀粉酶是嗜热脂肪芽孢杆菌产生的一种酶类物质，具有重要的应用价值。
淀粉酶是一类在淀粉颗粒水解过程中起关键作用的酶类。
它能够催化淀粉分子内部的α-1,4-葡萄糖键断裂，从而将淀粉分解为较低聚的糊精、麦芽糊精和麦芽糖等产物。
由于淀粉是一种常见的多糖类物质，在食品工业、饲料工业和生物技术等领域具有广泛的应用前景。
嗜热脂肪芽孢杆菌产生的淀粉酶具有多种优点，使其在工业上得到了广泛的应用。
首先，嗜热脂肪芽孢杆菌的生长温度适应范围较宽，能够在较高的温度下生长，从而提高了淀粉酶的生产效率。
其次，嗜热脂肪芽孢杆菌产生的淀粉酶在高温下仍保持较高的活性，能够在高温条件下进行淀粉的水解反应，提高了工业生产的温度范围。
此外，嗜热脂肪芽孢杆菌产生的淀粉酶对底物的亲和力较高，能够高效地水解淀粉颗粒，提高酶的利用率。
淀粉酶的应用领域非常广泛。
在食品工业中，淀粉酶可以用于面包、饼干、饼子等面点制品的生产中，通过调控面团中淀粉的水解程度，改善产品的质地和口感。
在饲料工业中，淀粉酶可以用于动物饲料的加工中，通过降低饲料中的淀粉含量，提高饲料的消化率和营养价值。
在生物技术领域，淀粉酶可以用于生物燃料的生产中，通过将淀粉转化为可发酵的糖类物质，为生物燃料的产生提供原料。
除了在工业应用中，淀粉酶还具有一定的医学价值。
研究发现，淀粉酶对人体消化系统中的淀粉消化起到重要的作用。
通过补充淀粉酶，可以改善人体对淀粉的消化吸收，从而缓解消化不良等相关问题。
总结来说，嗜热脂肪芽孢杆菌-淀粉酶是一种具有重要应用价值的酶类物质。
它在工业生产中具有广泛的应用前景，在食品工业、饲料工业和生物技术领域发挥着重要作用。
同时，淀粉酶在医学领域也具有一定的价值。
未来的研究和应用将进一步拓展淀粉酶的应用领域，为人类的生产和生活带来更多的便利和效益。
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的原理(一)
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的原理(一)嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂什么是嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂？•嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂是一种用于检测和验证高温灭菌的指示剂。
•它基于嗜热脂肪芽孢杆菌的孢子生存和灭活的特性。
嗜热脂肪芽孢杆菌的特性•嗜热脂肪芽孢杆菌是一种耐高温的细菌，它的孢子在高温灭菌条件下依然能够存活。
•孢子的形成是细菌在不利环境下的生存策略，可以保护细菌免受外界环境的伤害。
•因此，在高温灭菌过程中，如果嗜热脂肪芽孢杆菌的孢子仍然存活，说明灭菌效果不佳。
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的原理•嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂中使用的是已经被灭活的嗜热脂肪芽孢杆菌孢子。
•这些孢子在正常情况下不会生长或繁殖，只有在灭菌过程中，高温条件下的杀菌力才能激活这些孢子。
•当高温灭菌杀菌力有效时，嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂中的孢子会被彻底杀灭，导致指示剂的颜色不变。
•如果灭菌过程中存在问题，孢子仍然存活，指示剂会发生颜色变化，从而提醒操作人员灭菌过程可能存在问题。
使用嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的步骤1.将嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂放置于高温灭菌设备中，与所需灭菌物品一同处理。
2.进行标准的高温灭菌过程，包括设定适当的温度和时间。
3.灭菌完成后，观察嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂颜色变化。
4.如果指示剂颜色未发生变化，说明高温灭菌过程有效。
5.如果指示剂颜色发生变化，说明高温灭菌过程可能存在问题，需要进一步检查和调整设备或灭菌条件。
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂的应用范围•嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂广泛应用于医疗机构、实验室和食品工业等领域。
•它可以用于验证高温灭菌设备的效果，保证器械、培养基等物品的无菌状态。
•同时，嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂也可以为操作人员提供灭菌过程的可视化反馈，帮助他们更好地掌握灭菌的效果。
结论•嗜热脂肪芽孢杆菌孢子指示剂是一种用于验证高温灭菌效果的指示剂。
•它基于嗜热脂肪芽孢杆菌孢子的生存和灭活特性，通过颜色变化来反映灭菌过程的有效性。
嗜热脂肪芽孢杆菌标准操作规程
嗜热脂肪芽孢杆菌标准操作规程
1 嗜热脂肪芽孢菌芽孢（ATCC7953）所制成的生物指示剂，能正确反映压力蒸
汽灭菌过程中时间、温度和灭菌效果之间的关系。
适用于检查压力蒸汽灭菌锅的效能。
压力蒸汽灭菌方法的正确性和压力蒸汽灭菌效果的判断。
1.1 耐热参数：121℃压力蒸汽灭菌死亡时间不超过19分钟，存活时间不少于
3.9分钟，121+0.5℃，饱和蒸汽测得D121=2.2.
2 使用方法
2.1 将ATCC7953制成的生物指示剂，和被灭菌制品一起放置在灭菌柜（锅）
内上，中下层或者排气口（冷点处）灭菌后取出，然后直接放于56-60
℃培养24-48小时，并另取一支未灭菌的生物指示剂，一起放于56-60
℃培养，作为阳性对照。
2.2 结果判断：根据颜色反应判断灭菌效果，培养后全部保持紫色为灭菌合
格，若由紫变黄判为灭菌不合格。
对照管应由紫变黄判为该指示剂有
效。
3 规格
3.1 Fo﹥8残存概率法：适用于115℃-117℃湿热灭菌的药品监控及验证。
黄盖头包装。
3.2 Fo﹥12过度灭菌法：适用于121℃，30分钟或132-134℃，4-6分钟过度
杀灭的物品，如包装材料，无菌衣等监控及验证。
白盖头包装。
4 注意事项
4.1 本品使用前应0-4℃避光贮存。
4.2 本品制成的生物指示剂，若使用后由紫色变黄色时，须经高压灭菌后，才能弃去。
嗜热脂肪杆菌芽孢菌片使用说明书
北京索莱宝科技有限公司
嗜热脂肪杆菌芽孢菌片使用说明书
货号：LA8990
规格：5×105～5×106CFU/片，50片/包
菌株编号：SSI,K31
贮藏条件：2～8℃冰箱保存
有效期：1年
产品用途：用于压力蒸汽灭菌效果检测
使用方法：
1、使用时将装有菌片的小纸袋放在被灭菌的物品中心部位（每锅放置菌片数按卫生部规
定或其它相关标准规定），视需要也可将小纸袋盛于试管等特定容器中再进行灭菌
2、灭菌后，无菌操作取出小纸袋中的菌片，投放到溴甲酚紫蛋白胨培养液中。
同时将未
经灭菌的菌片投入另一管培养液中作对照。
3、56℃±1℃培养48小时，观察结果，对照管呈黄色：若灭菌后菌片培养液呈紫色，则
阴性，表示灭菌彻底；若灭菌后菌片培养液呈黄色，则为阳性，表示灭菌不彻底。
4、嗜热脂肪芽孢杆菌为G+杆菌，芽孢染色为孔雀绿着色。
配套试剂：
1、溴甲酚紫蛋白胨培养液。
按使用说明配制，分装试管，5ml/支，灭菌后4℃保存备用。
2、芽孢染色液
第1页，共1页。
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嗜热脂肪芽孢杆菌
编号 名称
北京华越洋生物NRR00390 嗜热脂肪芽孢杆菌
基本信息：
名称：嗜热脂肪芽孢杆菌
规格：300ul甘油菌
储存温度：-‐80℃
基因组：
嗜热脂肪芽孢杆菌
简介：
嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）属嗜热性需氧芽孢杆菌，但兼有厌氧的特性，细菌繁殖体为革兰氏阳性。
其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好，表面粗糙呈米黄色。
其最低生长温度为28℃，最高生长温度70～77℃。
最适生长繁殖温度为56～65℃，培养24h即可形成菌落，37℃下24h看不到菌落。
嗜热芽孢杆菌存在抗药性质粒；嗜热脂肪芽孢杆菌（60℃）含有多种抗药性隐蔽质粒。
操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。
也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
冷冻管开封：
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。
轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。
做好标识，在适宜温度下培养。
细菌在30-‐35℃培养箱中培养24-‐48h，真菌在23-‐28℃培养箱中培养24-‐72h （必要时，可适当延长培养时间）。
菌株传代：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
注意事项：
1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放
置会导致菌种衰退；
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长；
4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问；
5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态；
6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-‐10%CO2 促进生长；
7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。
8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。
保藏条件：
-‐20℃保存（复溶液于2-‐8℃保存）
保藏时间：
2-‐10 年，应根据菌种状况及时转接。