一抗的选择

一抗的选择

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适

的抗体，需要考虑如下几种因素：

分析试验应用的类型I

样本蛋白的结构性质I

样本的种属I

抗体宿主的种类I

抗体的标记和检测I

1•分析试验应用的类型

一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，女口：可以应用于WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，

则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

2•样本蛋白的结构性质

了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑

待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：

全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需

要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。I

样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原

和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然

折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗

体说明书上应用部分标示出来I

3•样本的物种

应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy和NCBI BLAST来进行不同物种蛋白

同源性比对。

4.一抗宿主物种的选择

一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫

球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选

兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本

的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG的细胞裂解物样本的western blotting 检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本

中含IgG，在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa的重链和轻链条带。

如何选择二抗一一根据一抗种属及类型选择合适的二抗

广义上是指专门和进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择

不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋

白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗

的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下

面几个方面考虑：

【一抗的种属来源】

二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔

源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种来源选择相应的抗该

物种的二抗。艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、

山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】

二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG

类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在

产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM ,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗lgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。艾美捷能为您提供通用的

IgG （H+L ）二抗，或者特异性只结合IgM 的Anti IgM （mu）Antibody、IgA 的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE 的Anti IgE （epsilon）Antibody 等。

【二抗的种属来源】

一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的

二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果其中

一个一抗是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。有相应的驴来源的二抗，非常适合做类似

双标的免疫实验。

【二抗的耦联标记】

一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生

物APAAP，PAP）,荧光基团（FITC、Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight 等）、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，

流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性

磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用Biotin/Avidin检测系统。

在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记；而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。艾美捷能为您提供上述所有不同类型标记的二抗。

【是否经过血清吸附过的二抗】

为减少二抗与样本的非特异性结合，艾美捷还能为您提供不同血清吸附的原装进口二抗。如您的检测样本是人源的蛋白，一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗就需要选择抗小鼠源的二抗，

如果您对实验的特异性要求很高，那我们向您推荐经过人血清吸附过的抗小鼠源的二抗，这种二抗由于经过人血清吸附而排除了与人源组织（如IgG等）可能发生非特异性反应的IgG，