一抗、二抗的选择
荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求
荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验，这名字听起来就很炫酷，对吧？其实它就是一个让我们能同时看到两种不同标记物的实验。
没错，就是让我们在显微镜下像变魔术一样，看到细胞中的不同成分。
为了能让这个实验顺利进行，我们得好好挑选一抗和二抗，别小看这两个“小家伙”，它们可是实验成功的关键哦。
接下来，我们就来聊聊挑选一抗和二抗的那些事儿。
1. 选择一抗的基本要求首先，一抗是我们的“主角”，它负责直接和目标抗原结合。
为了让实验更靠谱，我们在挑选一抗的时候有几个基本要求。
首先，得确保一抗的特异性。
简单来说，就是一抗要能够准确地识别目标抗原，不会跟其他东西搭上关系。
你可以把它想象成找一个能只看中你家猫的侦探，千万别让它误认成了邻居家的狗狗。
此外，一抗的亲和力也很重要。
亲和力高的话，一抗就能牢牢地抓住目标抗原，不容易掉链子。
就像是找一个有“强烈吸引力”的好朋友一样，这样才能在关键时刻依靠得住。
1.1 一抗的来源选择一抗时，来源也要考虑清楚。
市面上的一抗分为很多种，有的是从小鼠身上提取的，有的是从兔子身上提取的，甚至还有从山羊身上提取的。
每种来源的一抗都有自己的优点和缺点。
例如，小鼠单克隆抗体常常具有高度的特异性，但可能在某些实验条件下效果不如其他来源的抗体好。
像兔子或者山羊的抗体则可能在灵敏度上表现得更好。
了解这些，才能找到最适合你实验的一抗。
1.2 一抗的纯度一抗的纯度也不能忽视。
想象一下，如果你的试剂里混杂了很多其他东西，就像是在派对上有太多不认识的人一样，肯定会让实验结果变得扑朔迷离。
因此，选择纯度高的一抗非常重要，它能让你减少实验中的干扰，提高结果的准确性。
选择纯度高的一抗，就像在举办一个小型的、只有好友参与的派对，所有人都知道自己干嘛的，大家都玩得开心。
2. 选择二抗的基本要求说完了一抗，接下来咱们聊聊二抗。
二抗是我们的“帮手”，它负责和一抗结合，并且带上荧光标记。
二抗的选择也有讲究，首先是它的特异性。
荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求
荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求，听起来好像很专业的样子，但是其实很简单，就是让我们的实验数据更加清晰明了。
那么，我们该如何选择合适的一抗和二抗呢？接下来，就让我来给大家普及一下吧！我们要明确什么是一抗和二抗。
一抗，就是第一抗体，也就是我们要检测的目标物质；二抗，就是第二抗体，它可以与一抗结合，形成一种复合物，从而使我们能够看到目标物质的存在。
那么，如何选择合适的一抗和二抗呢？1.1 选择一抗选择一抗的时候，我们要考虑到以下几个方面：(1)特异性：一抗要能够准确地识别目标物质，不能误识别其他物质。
这就好比是我们要找一个人，但是他长得像很多人，我们不能因为他长得像别人就把他当成那个人。
(2)灵敏度：一抗要有足够的敏感性，能够在低浓度下检测到目标物质。
这就好比是我们要在人海中找到一个特定的人，但是他的出现频率很低，我们不能因为他出现的次数少就忽略了他。
(3)稳定性：一抗要具有一定的稳定性，不会因为外界因素的影响而失去活性。
这就好比是我们要找一个人，但是他总是在关键时刻消失不见。
选择合适的一抗就是要找到一个既能准确识别目标物质，又有足够敏感性和稳定性的人。
1.2 选择二抗选择二抗的时候，我们要考虑到以下几个方面：(1)特异性：二抗要能够准确地识别一抗，不能误识别其他一抗或者背景分子。
这就好比是我们要找一个人，但是他长得像很多人，我们不能因为他长得像某个特定的人就把他当成那个人。
(2)灵敏度：二抗要有足够的敏感性，能够在低浓度下检测到与一抗结合的复合物。
这就好比是我们要在人海中找到一个特定的人，但是他出现的频率很低，我们不能因为他出现的次数少就忽略了他。
(3)稳定性：二抗要具有一定的稳定性，不会因为外界因素的影响而失去活性。
这就好比是我们要找一个人，但是他总是在关键时刻消失不见。
选择合适的二抗就是要找到一个既能准确识别一抗，又有足够敏感性和稳定性的人。
2.1 一抗和二抗的选择时机在进行荧光双染实验时，我们需要根据实际情况来选择合适的一抗和二抗。
WB检测抗体如何选择(下)
WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。
例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。
二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。
然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。
WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。
在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。
为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。
内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。
此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。
当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。
WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。
例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。
内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。
一抗的选择
随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。
面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。
当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。
抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。
一、抗体选择总体原则1. 关于特异性的选择特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。
（1）蛋白特异性针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。
如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。
内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。
磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。
（2）种属特异性同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。
目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。
需要参照说明书注明的可反应种属信息。
一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。
（3）实验方法特异性目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。
具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。
但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。
免疫荧光一抗二抗的选择及其技巧
免疫荧光一抗二抗的选择及其技巧据一抗种属及类型-如何选择二抗?如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。
检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。
即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。
艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。
【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。
这通常是针对单克隆抗体而言。
多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。
其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。
如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。
在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。
艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon） Antibody等。
一抗的选择
一抗的选择检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：分析试验应用的类型l样本蛋白的结构性质l样本的种属l抗体宿主的种类l抗体的标记和检测l1。
分析试验应用的类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2。
样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
l样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。
当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来l3.样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过,应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。
一抗二抗的选择
一抗二抗的选择
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• IgM抗体检测用于传染病早期诊疗中。间接 法ELISA普通仅适合用于检测总抗体或IgG抗 体。如用抗原包被间接法直接测定IgM抗体， 因标本中普通同时存在较高浓度IgG抗体， 后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗 体不能结合到固相上。所以如用抗人IgM作 为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本 用A蛋白或抗IgG抗体处理，以除去IgG干扰。
一抗、二抗选择
一抗二抗的选择
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一抗选择
• 1.分析试验应用类型 WB（Western Blot 免疫印迹 ） IHC （immunohistochemistry免疫组织化学） ELISA（enzyme-linked immunoadsordent assay
酶联免疫吸附试验 ）
一抗二抗的选择
IgA增高：在慢性肝病，亚急性或慢性感染性疾病（如结核、真菌感染等）、本身免疫性疾病（如 SLE、类风湿关节炎）、囊性纤维化、家族性嗜中性粒细胞降低症、乳腺癌、IgA肾病、IgA骨髓瘤等 情况下；
IgA降低：在遗传性或取得性抗体缺乏症、免疫缺点病、选择性IgA缺乏症、无γ－球蛋白血症、蛋白 丢失性肠病、烧伤、抗IgA抗体综合症、免疫抑制剂治疗、妊娠后期等情况下。
一抗二抗的选择
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• 免疫球蛋白在不一样疾病浓度高低
IgG
正常情况下，脐血IgG含量为7.6～17g/L；血IgG含量新生儿为7.0～14.8 g/L，0.5～6个月为3～10.0 g/L，6个月～2岁为5～12 g/L，2～6岁为5～13g/L，6～12岁为7～16.5g/L，12～16岁为7～15.5g/L， 成人为6～16g/L。
外来抗原进入呼吸道或消化道，局部免疫系统受到刺激后， 无需中央免疫系统参加，本身就可进行免疫应答，产生分 泌型抗体，即SIgA。
WB检测抗体如何选择(下)
WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。
例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。
二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。
然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。
WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。
在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。
为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。
内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。
此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。
当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。
WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。
例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。
内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。
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IgM
正常情况下，脐血IgM含量为40～240mg/L，血内IgM含量新生儿为50～300mg/L，0.5～6个月为 150～1090mg/L，6个月～2岁为430～2390mg/L，2～6岁为500～1990mg/L， 6～12岁为500～ 2600mg/L，12～16岁为450～2400mg/L，成人为400～3450mg/L。 IgM增高：在胎儿宫内感染、新生儿TORC H综合症、慢性或亚急性感染、疟疾、传染性单核细胞 增多症、支原体肺炎、肝病、结缔组织疾病、巨球蛋白血症，无症状性单克隆IgM病等情况下，； IgM降低：在遗传性或获得性抗体缺乏症、混合性免疫缺陷综合症、选择性IgM缺乏症、蛋白丢失 性肠病、烧伤、抗Ig抗体综合症（混合性冷球蛋白血症）、免疫抑制等情况下，。
一抗、二抗的选择
一抗的选择
• 1.分析实验应用类型 WB（Western Blot 免疫印迹 ） IHC （immunohistochemistry免疫组织化学） ELISA（enzyme-linked immunoadsordent assay 酶联免疫吸附试验 ）
• 2.样本蛋白的结构性质
样本蛋白的结构域 全长蛋白、蛋白片段、多肽、 细菌、细胞
蛋白片断或一种 特殊的同型物或 蛋白全长的某一 区域 用FACS流式检 测活细胞的表面 蛋白
用含此片段域 的免疫原制备 出的抗体。 用含该表面蛋 白的胞外域来 免疫制备的抗 体。
样本的提取和处理过程 某些抗体要求样本经过某些特殊处理， 例如：许多抗体只识别还原和变性的、 表位已暴露不受二级四级结构阻碍的 蛋白样本， 某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。 当选择免疫组化的抗体时，应注意某 些抗体只识别未固定的冷冻的组织， 另一些抗体则适用于无需抗原修复解 交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，
IgG
• 人体血清免疫球蛋白IgG是初级免疫应答中最持久、 最重要的抗体，它仅以单体形式存在。 • 大多抗菌性、抗毒性和抗病毒抗体属于IgG，它在 抗感染中起到主力军作用，它能够促进单核巨噬 细胞的吞噬作用（调理作用），中和细菌毒素的 毒性（中和毒素）和病毒抗原结合使病毒失去感 染宿主细胞的能力（中和病毒）。 • IgG 在机体合成的年龄要晚于IgM，在出生后第3 个月开始合成，3-5 岁接近成年人水平。 • 它是唯一能通过胎盘的Ig，在自然被动免疫中起 重要作用。此外，IgG 还具有调理吞噬和结合 SPA等作用。
【Anti-IgG还是Anti-IgG, F（ab’）2 fragment】
Hale Waihona Puke 在一些如胸腺、脾脏、血液的组织以及造血细胞、淋巴细胞、B细胞 等细胞内，通常含有较多的Fc受体，这时候选择二抗时最好选择AntiIgG, F（ab’）2 fragment这样的特异性二抗，这样就消除了由于Fc部 分与IgG的非特异性结合。 常规的Anti-IgG （H+L）二抗与IgG的重链和轻链都有结合反应，即 与IgG的Fc的F（ab’）2片段都能结合； 由于IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域，因此Anti-IgG （H+L） 与它们都有交叉反应。而Anti-IgG, F（ab’）2 fragment经过了IgG Fc 片段的吸附，因此只与IgG的F（ab’）2片段结合。
• 5.二抗的类别亚型 IgM是体液免疫应答首先产生的Ig。 IgA是机体黏膜防御感染的重要因素。 IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗 体，它仅以单体形式存在。大多抗菌性、 抗毒性和抗病毒抗体属于IgG IgE是同速发型过敏反应发生有关的Ig。 IgD以膜结合形式存在于B细胞，在B细胞分 化发育中起重调节有作用
• 3.样本的物种
选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与 不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸 序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说 明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体 不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种 尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方 法来预测交叉反应，可应用 Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同 源性比对。
二抗的选择
• 1.一抗的种属来源 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，
• 2.二抗的种属来源 一般来说，不同的种属来源与二抗的质量 没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来 源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的 差别。 在一些特殊的实验里，如双标实验里，如 果其中一个一抗是山羊来源的，一个是小 鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和 抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择 山羊或者小鼠来源的。
• 3二抗的偶联标记
主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍 生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC、Rhodamine、 Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等）、生物素、 金颗粒。 选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。 对于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗； 细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流 式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗， 免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的 二抗。 如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用 Biotin/Avidin检测系统。 在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记； 金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。
IgA
正常情况，脐血IgA含量为0～50mg/L; 血内IgA含量新生儿为0～22mg/L，0.5～6个月为3～ 820mg/L，7个月～2岁为140～1080 mg/L，2～6岁为230～1900mg/L，6～12岁为290～2700mg/L， 12～16岁为810～2320mg/L，成人为760～3900mg/L。 IgA增高：在慢性肝病，亚急性或慢性感染性疾病（如结核、真菌感染等）、自身免疫性疾病（如 SLE、类风湿关节炎）、囊性纤维化、家族性嗜中性粒细胞减少症、乳腺癌、IgA肾病、IgA骨髓瘤 等情况下； IgA降低：在遗传性或获得性抗体缺乏症、免疫缺陷病、选择性IgA缺乏症、无γ－球蛋白血症、蛋 白丢失性肠病、烧伤、抗IgA抗体综合症、免疫抑制剂治疗、妊娠后期等情况下。
IgM
• IgM是由五个单体组成的五聚体，含10个重链和10个轻链， 具有10个抗原结合价，由于空间位置的影响，只表现为五 个抗原结合价。IgM分子量约为900000，IgG分子量约为 150000。 • 机体被微生物感染后，先产生IgM抗体，然后产生IgG抗 体。经过一段时间，IgM抗体量逐渐减少而消失，而IgG 抗体可长期存在，在疾病痊愈后可持续数年之久。 • IgM抗体一般为保护性抗体具有免疫性。因此IgM抗体的 测定，对某些传染病如甲型肝炎有较高的临床诊断价值。 • IgM 是抗原刺激诱导体液免疫应答中最先产生的Ig ，IgM 不是细胞，但可结合补体，主要分布于血清中。由于IgM 有较高的结合价，所以是高效能的抗生物抗体，其杀菌、 溶菌、促吞噬和凝集作用比IgG 高500- 1000 倍，IgM 在 机体的早期防御中起着重要的作用。
• IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。 间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或 IgG抗体。如用抗原包被的间接法直接测定 IgM抗体，因标本中一般同时存在较高浓度 的IgG抗体，后者将竞争结合固相抗原而使 一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如 用抗人IgM作为二抗，间接测定IgM抗体， 必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理， 以除去IgG的干扰。
• 免疫球蛋白在不同疾病的浓度高低
IgG
正常情况下，脐血IgG含量为7.6～17g/L；血IgG含量新生儿为7.0～14.8 g/L，0.5～6个月为3～ 10.0 g/L，6个月～2岁为5～12 g/L，2～6岁为5～13g/L，6～12岁为7～16.5g/L，12～16岁为7～ 15.5g/L，成人为6～16g/L。 IgG增高：患慢性肝病、亚急性或慢性感染、结缔组织疾病、IgG骨髓瘤、无症状性单克隆IgG病等； IgG降低：在遗传性或获得性抗体缺乏症、混合性免疫缺陷综合征、选择性IgG缺乏症、蛋白丢失性 肠病、肾病综合症、强直性肌营养不良、免疫抑制剂治疗等情况下。
IgA
IgA 分血清型和分泌型两种， 血清型多为单体，也有二聚体，血清型IgA可介导调理吞 噬ADCC 作用； 分泌型的都是二聚体，且含有分泌片。 分泌型IgA（SIgA）是机体粘膜防御系统的主要成分，覆 盖在鼻、咽、气管、肠和膀胱粘膜的表面，它能抑制微生 物在呼吸道上皮附着，减缓病毒繁殖，是粘膜重要屏障， 对某些病毒、细菌和—般抗原具有抗体活性，是防止病原 体入侵机体的第一道防线。 外来抗原进入呼吸道或消化道，局部免疫系统受到刺激后， 无需中央免疫系统的参与，自身就可进行免疫应答，产生 分泌型抗体，即SIgA。 已有研究证明，呼吸道分泌液中SigA 含量的高低直接影 响呼吸道粘膜对病原体的抵抗力，两者呈正相关。 初乳中含有分泌型的sIgA 。 IgA的凝聚物可以通过经典途径激活补体。
• 4.一抗宿主物种的选择 • 一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗 宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可 能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本 内源性免疫球蛋白产生交叉反应， • 例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一 抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子 （酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。 • 如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化 外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗 体宿主物种的影响不大，如对不含IgG的细胞裂解物样本 的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解 物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含 IgG，在western blot检测中则结合出现IgG分子 50 and 25 kDa的重链和轻链条带。
• 针对某一种属的抗体可能会和其他一些种属 有交叉反应。牛血清白蛋白和奶粉可能含有 与抗牛IgG、抗山羊IgG、抗马IgG、抗绵羊 IgG等抗体反应的IgG，因此如果使用它们作 为封闭液或抗体稀释液的成分，会增加背景 染色和降低抗体的效价。 • 简单说，如果用的是抗牛IgG、抗山羊IgG、 抗马IgG、抗绵羊IgG的二抗，那么封闭过程 中就尽量不要用牛血清白蛋白和奶粉，以免 交叉反应造成背景染色增加和抗体效价降低。