一抗的选择

一抗得选择检测任何目得靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体得选择范围选中合适得抗体，需要考虑如下几种因素:分析试验应用得类型ｌ样本蛋白得结构性质l样本得种属ｌ抗体宿主得种类l抗体得标记与检测ｌ1、分析试验应用得类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于ＷＢＩＨＣIＣC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及得应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅就是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

２、样本蛋白得结构性质了解样本蛋白得结构性质有助于选择最合适得抗体，至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白得结构域：抗体就是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中得免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原得描述,如果打算检测得就是蛋白片断或一种特殊得同型物或蛋白全长得某一区域,则必须选择用含此片段域得免疫原制备出得抗体.如果打算用FACＳ流式检测活细胞得表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白得胞外域来免疫制备得抗体。

l样本得提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如:许多抗体只识别还原与变性得、表位已暴露不受二级四级结构阻碍得蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态得蛋白。

当选择免疫组化得抗体时，应注意某些抗体只识别未固定得冷冻得组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚得甲醛固定石蜡包埋得组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来ｌ3、样本得物种应选择物种相同或有交叉反应得抗体，抗体可能与不同物种得同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高，如果样本得种类未列入抗体说明书上得交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种得蛋白,而只就是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对得方法来预测交叉反应，可应用Ｅxpasy 与ＮCＢI BＬＡＳT来进行不同物种蛋白同源性比对。

4、一抗宿主物种得选择一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物得一抗时,一抗宿主动物得物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种得一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源得一抗,最好选兔源得一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等）得抗兔IgＧ。

如果选择有偶联物得一抗则不适用上述情况，除免疫组化外得其它对不含内源性免疫球蛋白样本得检测方法，则抗体宿主物种得影响不大，如对不含IｇG得细胞裂解物样本得weｓtｅrn bｌｏtt ｉｎg检测，尽管如此，含有血清得组织裂解物与组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgＧ，在ｗestｅｒn ｂloｔ检测中则结合出现IgG分子50 ａｎd ２5kDａ得重链与轻链条带.如何选择二抗-—根据一抗种属及类型选择合适得二抗广义上就是指专门与进行特异性反应与结合得抗体,在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同得二抗，艾美捷能为您得科研工作提供最适合与最全面得二抗产品。

检测任何目得靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同得检测方案，因此在选择二抗得时候要综合考虑一抗得类型及后继检测方案得要求，一般来说，选择合适得二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗得种属来源】二抗应选用与使用得一抗相同得物种来源，例如：如果您得一抗就是小鼠源得单克隆抗体，二抗则选抗小鼠得二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可);如果一抗就是从兔血清里制备得兔源多克隆抗体,则相应得二抗需要选择抗兔得二抗。

即根据一抗得物种来源选择相应得抗该物种得二抗。

艾美捷能为您提供最全得抗不同种属得原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗得类别亚型】二抗需与一抗得类别或亚类相匹配。

这通常就是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要就是ＩｇＧ类免疫球蛋白,因此相应得二抗就就是抗IｇG抗体。

其中单克隆抗体得类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述,如果您得一抗就是小鼠IｇＭ，那么相应得二抗就应当就是抗小鼠IgM.如果单克隆一抗就是小鼠IｇＧ得某一亚类（IgG1，IｇＧ２a,ＩgG2ｂ,IgＧ3),那么几乎所有得抗小鼠ＩgＧ都可以与之结合，或者您也可以选择专门针对这一亚类得二抗，例如，如果您得一抗就是小鼠IgG1，那么您可以选择抗IgＧ1得二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类／亚类得情况下，可以选用抗相应物种IgG.艾美捷能为您提供通用得IgＧ(H+Ｌ)二抗，或者特异性只结合IgM得AntｉＩｇM(mu) Aｎtｉbodｙ、ＩgA得AntｉIgA （ａlｐｈａ-Antｉbｏdy、ＩｇE得Ａｎｔi IgE （epsilｏn) An ｔiｂｏdｙ等。

【二抗得种属来源】一般来说，不同得种属来源与二抗得质量没有必然得联系,来源于山羊得二抗与来源于驴得二抗在一般得实验里没有太多得差别。

然而在一些特殊得实验里,如双标实验里,如果其中一个一抗就是山羊来源得，一个就是小鼠来源得，则相应得二抗分别要抗山羊与抗小鼠得二抗,这时候,二抗就不能选择山羊或者小鼠来源得。

有相应得驴来源得二抗，非常适合做类似双标得免疫实验.【二抗得耦联标记】一般来讲，耦联到二抗上得探针主要有酶（辣根过氧化酶HRＰ与碱性磷酸酶ＡP或其衍生物AＰAＡP，PAP),荧光基团(FIＴC、Rhｏｄamine、Tｅｘas Red、PE、Rhoｄａｍine、D ｙligｈt等）、生物素、金颗粒.选用哪种探针得二抗主要取决于具体得实验。

对于Wｅstern Blot与ELIＳＡ,最常用得二抗就是酶标二抗;而细胞或组织标记实验(细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记得二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记得二抗。

如果想要更大程度得放大检测信号,可以使用Ｂiotin／Avidiｎ检测系统。

在一些荧光检测方案中,则需要选择不同得荧光标记；而金颗粒标记得二抗则更多得应用于免疫电镜中.艾美捷能为您提供上述所有不同类型标记得二抗。

【就是否经过血清吸附过得二抗】为减少二抗与样本得非特异性结合,艾美捷还能为您提供不同血清吸附得原装进口二抗。

如您得检测样本就是人源得蛋白，一抗就是小鼠源得单克隆抗体，二抗就需要选择抗小鼠源得二抗，如果您对实验得特异性要求很高,那我们向您推荐经过人血清吸附过得抗小鼠源得二抗，这种二抗由于经过人血清吸附而排除了与人源组织(如IgG等)可能发生非特异性反应得IgＧ,因此将非特异性结合降低到最低.【Anｔｉ—IｇＧ还就是Ａｎti－IgG, F（ab’）２fragｍent】在一些如胸腺、脾脏、血液得组织以及造血细胞、淋巴细胞、B细胞等细胞内,通常含有较多得Fc受体,这时候选择二抗时最好选择Anｔi—IgG,F(ａb'）2 ｆｒaｇment这样得特异性二抗，这样就消除了由于Fc部分与IgＧ得非特异性结合。

常规得Ａnti—ＩｇG (Ｈ+L）二抗与IgG得重链与轻链都有结合反应,即与IｇG得Fｃ得F（ab’)2片段都能结合；由于IgＧ、ＩgＭ、IgA都有保守得轻链结构域,因此Anti-IgG (H+L)与它们都有交叉反应.而Ａｎti—ＩｇＧ, F（ab'）2 ｆragmｅｎｔ经过了IgG Fc片段得吸附，因此只与IｇG得Ｆ（ab’）2片段结合，然而IgG、IgM、ＩgA都有保守得轻链结构域，因此与它们也有交叉反应。

【Ａｎtｉ-IｇG（Ｈ+Ｌ）、Anti—IｇG （gaｍma）、Ａntｉ－IｇM （mｕ)、Antｉ-IgA（alpha）】在一些特殊得实验里,只需要检测样本里得IgG或者IgM,常规得Ａｎｔi—IgG （H＋L)由于与IgG得重链与轻链都有结合反应,而IｇG、IgＭ、IgＡ都有保守得轻链结构域,因此不能特异性得检测某种类型得IgＧ或者ＩgM。

这时候就需要针对特殊类型Ig分子得二抗。

艾美捷备有全面得二抗现货产品并能提供最完整得二抗产品线。

主要二抗品牌为全球最大得二抗产品以及前沿抗体生产商ＥartｈOｘ。

按照标记分,有HＲP、ＡP、生物素等标记二抗,ＦITC、TRITＣ、Rｈｏdａmiｎe、Ｃｙ3/5、Dylight等荧光二抗;按照检测物种分，有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类二抗;另外,还有IｇＧ、IgA、IgM以及IgG（Ｆc）、IgG（ab’）2等不同类型抗体。

如抗原为ＡＣ物质，产生得抗体为抗－ａｃ，如抗原为B C物质，产生得抗体为抗—ｂc,AC物质与抗—ａc、ＢＣ物质与抗－bｃ产生得就是特异性结合,而AC物质与抗-ｂc、BC物质与抗—ac就会产生交叉反应、什么就是抗体得交叉反应性呢瞧到有得抗体就是小鼠来源得，但就是跟人,大鼠,兔与猴子都有交叉反应性,什么就是抗体得交叉反应性呢?这样得抗体可以用于人来源得细胞做weｓtｅｒn blｏt实验吗？抗原分子表面存在着能与抗体相互作用得部位即抗原决定簇,一种抗原物质可以有两个或更多得决定簇。

研究表明，抗体就是从抗原决定簇得立体结构而不就是从抗原得全面分子排列来“认识”抗原得.这样,有时一种抗体可以与分子结构并不完全相同但具有类似抗原决定簇得不同抗原起反应,这称为交叉反应.如果您得抗体与其它种属有交叉反应,理论上可以用于人源得ＷB。

哦,那如果厂家得产品说明上交叉反应性一栏里写着人,大鼠，兔,猴，但就是抗体来源就是小鼠,就是不就是也就就是说，这种抗体可以用于来源于人,大鼠，兔，猴得组织或者细胞得ＷＢ？可就是为什么,买抗体得时候还要注意它得种属与来源呢,我对这个搞不清楚,希望指点，谢谢！所谓抗原与抗体得特异性结合其实也就是相对得，抗原与抗体结合也就就是十几到二十几个氨基酸,理论上在其她得蛋白中也可能存在同样或者相似得序列.其次至于抗体为什么能与不同种属同一个分子反应,那就是因为有一部分蛋白在机体发挥较为重要得作用，因此可能在低等动物就存在，因此该分子得氨基酸序列存在较为严格得保守性，也就就是同样得分子在不同种属得序列就是相同或者相似得，比如VEGF等。

所以就出现免疫得时候就是用人得抗原，但就是后来产生得抗体可以与其她很多动物种属反应。

楼主说得买抗体得时候为什么要注意种属来源，这个与您得实验目得有关，比如有得人同时要做人体试验与某个动物得实验,比如大鼠,那么就希望买得抗体可以同时针对人与大鼠，这样就可以节约资源。

相反如果有人只做一个种属得试验,那么可能就希望抗体得特异性更高点,那么就与其她种属得交叉反应越少越好。

至于抗体本身得来源，主要与您下游试验有关，也就就是二抗与显色有关。