细菌芽孢染色及酵母菌的观察

细菌芽孢染色及酵母菌的观察

一、实验目的

1、学习芽孢染色法，了解芽孢的形态特征。

2、观察酵母菌的形态及出芽方式，区分酵母菌的死活细胞。

3、学习酵母子囊孢子的观察方法。

二、实验原理

1、用美兰浸片法染酵母菌的原理：由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。

2、孢子染色原理：孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。

3、芽孢染色原理：芽孢壁厚、透性差、不易着色，无法用单染色的方法使其着色用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，当用对比度大的复染色剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，是芽孢和菌体更易区分

三、菌种

芽孢：枯草芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌

酵母：酿酒酵母（产孢培养基）

四、实验步骤

1、观察枯草芽孢杆菌及梭状芽孢杆菌的形态特征

（1）涂片：用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上，涂成薄膜

(2) 加热干燥固定

（3）木夹夹住，孔雀绿覆盖，微火加热，有蒸汽时开始计时5分钟，期间可用孔雀绿补染

（4）冷却水洗

（5）复染：用番红复染2分钟

（6）镜检：干燥后用油镜观察

2、观察酵母菌

（1）美兰浸片（观察其出芽的形式以及辨别酵母菌的死活）

①在载玻片中央加一滴美兰试剂

②用接种环接种酿酒酵母

③盖上盖玻片

④放置三分钟的时候用40倍镜观察

⑤放置三十分钟的时候再观察一次

（2）酵母菌子囊的观察

①涂片②开始涂片③用孔雀绿覆盖一到一分钟半④水洗⑤用番红染色30秒到一分钟⑥水洗干燥镜检

五、实验结果

1、枯草芽孢杆菌及梭状芽孢杆菌的形态结构

A:梭状芽孢杆菌 B：枯草芽孢杆菌

2、酵母菌的出芽方式及酵母菌死活细胞的分辨

3min中（美兰浸片） 30min（美兰浸片）

矩形部分为无色的为酵母活细胞，椭圆区域为酵母死细胞，通过前后对比可观察到，可观察到酵母的出芽生殖。

3、酵母菌子囊的观察

无法观察到酵母子囊

结果分析：通过梭状芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌的观察可以发现梭状芽孢杆菌为短梭状。而枯草芽孢杆菌形似枯草，为长棒状这在以后的观察中较易区分开来。美兰浸片的观察：细胞刚开始活细胞较多，且芽孢很少出现出芽生殖，多为单个

独立个体。30分钟后蓝色细胞增多，且细胞出现一长串，此即为酵母的出芽生殖。

酵母子囊的观察：该实验经重复2次实验还是无法观察到子囊，可能是因为酵母培养中没得到子囊。