超声波逆转肿瘤细胞多药耐药优化参数的筛选

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青蒿琥酯逆转多发性骨髓瘤细胞株多药耐药的实验研究

（３０２４．８５．４－１５７．３３），差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论ＳＰ２／０／ＡＤＭ细胞株是成功的骨髓瘤耐药细胞株；ＡＲＴ能逆转ＳＰ２／０／ＡＤＭ细胞对ＡＤＭ耐药；ＡＲＴ抑制Ｐ — ｇＰ蛋白表达是其重要作用机制。关键词青蒿琥酯；骨髓瘤；耐药；阿霉素
浓度加量持续诱导法建立耐药细胞株；罗丹明１２３（Ｒｈ１２３）排出实验观察ＳＰ２／０／ＡＤＭ细胞对药物外排情况；采用四甲
基偶氮唑蓝（ＭＴＦ）实验分析ＳＰ２／０／ＡＤＭ细胞株耐药谱和
符祥俊，姚红霞，林丽娥，吴从明，陈文婷，王述文，杨晓阳，李世辉
摘要目的建立小鼠骨髓瘤耐阿霉素（ＡＤＭ）细胞系ＳＰ２／
ＡＤＭ低
十分清楚。该研究拟建立耐阿霉素（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，
安徽医科大学学报
ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ２０１３Ｓｅｐ；４８（９）
・１０７５・
青蒿琥酯逆转多发性骨髓瘤细胞株多药耐药的实验研究
至４．２６ｇ／ｍｌ，耐药逆转倍数为４．１５倍（Ｐ＜０．０５）。随
ＡＲＴ作用时间延长，ＳＰ２／０／ＡＤＭ细胞Ｐ — ｇＰ蛋白表达水平呈

细胞筛选个人整理

细胞筛选一嘌呤霉素(一)确定最优筛选浓度当用于筛选特定细胞的嘌呤霉素合适浓度未知时，需进行滴定，或制定针对那种细胞的嘌呤霉素杀菌曲线。

一般而言，嘌呤霉素浓度范围在2-10微克/毫升时是足以杀灭大多数未转染的哺乳动物细胞系。

1.培养待转染（而不是转染后）的细胞。

（筛选的目的是杀灭未转染的细胞）2.取对数生长期的细胞（一般在铺满培养器皿底部的70%~80%时），用新鲜无抗无血清的培养基制成1.5×105个/ml 的细胞悬液。

3.向96孔培养板中加细胞悬液，每孔100微升（使每孔细胞数在1.5×104个），然后向每孔加新鲜无抗无血清的培养基适量，培养箱中静置培养过夜。

（这样做是为了保证在固定细胞密度下确定最佳G418药物筛选浓度。

）4.第二天用嘌呤霉素浓度分别为0, 2, 4, 6, 8, 10微克/毫升的新鲜无抗无血清培养基溶液替换各孔中的旧的培养基。

（每个浓度可用两个复孔，相当于每个浓度测定三次）。

（注意：对于多数细胞种类而言，过量的嘌呤霉素能引起许多非必需的表型的反应。

）5.每日检查细胞活力，根据细胞活力，每三天( 即每隔两天)更换含嘌呤霉素的新鲜无抗无血清培养基溶液一次。

如细胞生长过快，可以缩短换液时间（每隔一天）。

6.在正常的实验操作规程时，一种细胞最优筛选浓度的确立时间随细胞的生长率和一般生存时间而定，大概需3到14天。

在所需时间之后，嘌呤霉素的导致所有细胞死亡的最小浓度就是应该用于该细胞和该实验的浓度。

最优浓度为在3-5天内杀死所有细胞的浓度。

(二)转染细胞1.第一天：在60mm培养皿内种植细胞，细胞密度为能使第二天细胞融合能达到70%-80%的密度，CO2孵箱过夜培养。

2.第二天：准备3ml无抗生素无血清培养基，加入Polybrene使其终浓度为8μg/ml。

将已经制备的病毒颗粒0.5 ml加至上述培养基，轻吹混匀。

去除60mm培养皿内的旧的培养基，加入含病毒培养基。

体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验的具体步骤及方法

体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验的具体步骤及方法体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性，最终筛选出具有
一定抗性的细胞克隆。

培养条件
一、
用含10%小牛血清的DMEM培养液，5%CO2，37℃培养。

实验步骤
二、
1. 将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中，先用DOX（阿霉素）0.01
ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。

2. 然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml，接着进行DOX低浓度的筛选。

3. 随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC1作CHO和RC1对DOX的剂量-反应
曲线，求CHO和RC1的IC50值。

4. 抗性倍数即为RC1的IC50与CHO的IC50。

三、注意事项
1. 要具备培养细胞的实验室条件，谨防污染。

2. 通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC50值，以确定其实诱导浓度。

3. 采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株，对阿霉素等产生抗性的细胞株，
往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。

mtt评价法

mtt评价法摘要：1.MTT 评价法的定义和背景2.MTT 评价法的核心理念3.MTT 评价法的具体操作步骤4.MTT 评价法的优点和局限性5.MTT 评价法在实际应用中的案例分析正文：一、MTT 评价法的定义和背景MTT 评价法，全称“最小肿瘤杀伤浓度评价法”，是一种用于评估抗肿瘤药物活性的实验方法。

该方法起源于20 世纪60 年代，由美国国立癌症研究所（NCI）的Murray 等人首次提出。

其目的是为了在药物筛选阶段，找到对肿瘤细胞具有最佳杀伤效果的药物，同时确保药物对正常细胞的毒性较低。

二、MTT 评价法的核心理念MTT 评价法的核心理念是通过测量药物对肿瘤细胞和正常细胞的毒性来评估药物的活性。

该方法基于细胞呼吸的原理，通过检测细胞内的脱氢酶活性来判断细胞是否存活。

三、MTT 评价法的具体操作步骤1.细胞种植：首先将肿瘤细胞种植在96 孔板中，每孔细胞数量适宜。

然后将不同浓度的药物加入不同孔的培养液中。

2.培养：将96 孔板放入培养箱中，按照实验要求进行培养。

3.检测：培养一定时间后，取出96 孔板，加入MTT 溶液，继续培养1-4 小时。

4.酶标仪检测：用酶标仪检测各孔中MTT 的吸光度，以反映细胞存活率。

5.数据处理：以药物浓度为横坐标，MTT 吸光度为纵坐标，绘制剂量- 反应曲线，计算半数抑制浓度（IC50）和95% 抑制浓度（IC95）。

四、MTT 评价法的优点和局限性优点：1.操作简单，易于实现自动化；2.可以快速评估药物的活性；3.对细胞类型和药物种类适用性广泛。

局限性：1.不能完全反映药物在体内的药效和毒性；2.对细胞状态要求较高，细胞状态不佳时，结果可能不准确；3.受试剂质量、操作方法等因素影响较大。

五、MTT 评价法在实际应用中的案例分析案例：研究某种新型抗肿瘤药物X 对肺癌细胞A549 的活性。

步骤：1.将A549 细胞种植在96 孔板中，每孔细胞数量适宜。

2.将不同浓度的药物X 加入不同孔的培养液中。

G418筛选稳定表达细胞系构建技术原理

G418筛选稳定表达细胞系构建技术原理原理分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。

外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80％的进入核内的外源DNA得到瞬时表达。

极少数情况下，进入细胞的外源DNA通过系列非同源性分子间重组核连接，形成巨大的***结构最终整合进细胞染色体。

细胞基因组自由部分表达，所以整合并不一定意味着表达，只有整合到表达区的基因才会表达，而且整合到不同的染色体区段的外源基因的表达的量也是不同的。

由于摄取、整合、表达外源基因是小概率事件，通常根据新表型筛选稳定转染体。

一般情况下这种新表型由共转染的编码抗生素抗性基因提供。

细菌Tn5转座子序列（neo抗性基因）携带的氨基糖苷磷酸转移酶可以将G418转变成无毒形式。

G418是一种氨基糖类抗生素，其结构与新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，它通过影响80S核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞都有毒性 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞,也包括原生动物和蠕虫。

是稳定转染最常用的选择试剂。

当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。

Ｇ418的这一选择特性,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

在进行转染时细胞膜受到影响，抗生素可能对细胞产生较大影响，加上G418有杀菌作用，所以有人主张转让时不加其它抗生素。

其实G418本身有很好的杀菌效果，在用G418进行筛选的过程中很少会发生污染。

但有一点，其实我觉得问题也不是很大，那就是：在老外的一本实验手册中提到，在脂质体转染时所用培养基中最好不加任何抗生素。

我想他的想法可能是脂质体对细胞膜有影响，可能此时加抗生素对细胞损伤较大。

因为庆大霉素、链霉素、G418均是氨基糖甙类药物，其药理作用完全一样。

超声设备参数调整方案

超声设备参数调整方案
超声设备是一种常用的医疗设备，用于检查人体内部的器官和组织，对于调整设备参数的方案，可以采取以下措施：
1.根据不同的检查对象和检查目的，调整超声设备的频率和探头。

对于浅层组织和婴儿检查，可以选择高频率的超声探头，而对于深层组织和肥胖患者，可以选择低频率的超声探头。

2.调整超声设备的增益和增强功能。

增益可以调整超声图像的
亮度和对比度，增强功能可以增强超声波在组织中的回声，提高图像的清晰度和分辨率。

3.调整超声设备的深度和聚焦。

深度可以控制超声波的穿透深度，聚焦可以调整超声波的聚焦点，从而获得清晰的图像和详细的结构信息。

4.根据检查部位和需求，调整超声设备的扫描模式和角度。

可
以选择B超模式、彩色多普勒模式或者三维超声模式，通过
不同的角度扫描来获取全面的图像。

5.根据患者的条件和体位，调整超声设备的参数和位置。

例如，对于肥胖患者可以适当增加超声波的功率和减小探头的触压力，对于呼吸急促的患者可以选择快速扫描模式。

6.定期校准超声设备的参数，确保其精确性和稳定性。

可以通
过与标准模型进行对比，调整设备的校准参数，保证测量结果的准确性。

总之，超声设备参数的调整方案需要根据不同的检查对象和检查目的，灵活运用超声设备的各种功能和模式，确保获取到清晰、准确的超声图像和数据，为医生提供准确的诊断依据。

核酸适配体

a b s t r a c t
Herein, we have successfully built up connections between nanoparticles and nanoclusters, and further constructed a surface-enhanced ﬂuorescence (SEF) strategy based on the two types of nanomaterials for selectively assaying carcinoembryonic antigen (CEA). Speciﬁcally, silver nanoclusters provided the original ﬂuorescence signal, while gold nanoparticles modiﬁed with DNA served as the ﬂuorescence enhancer simultaneously. On the basis of this proposed nano-system, the two nanomaterials were linked by CEA–aptamer, thus facilitating SEF occurring. Nevertheless, more competitive interactions between CEA and CEA–aptamer emerged once CEA added, leading to SEF failed and their ﬂuorescence decreased. Signiﬁcantly, this creative method was further applied to detect CEA, and showed the linear relationship between the ﬂuorescence intensity and CEA concentrations in the range of 0.01–1 ng mL À 1 with a detection limit of 3 pg mL À 1 at a signal-to-noise ratio of 3, demonstrating its sensitivity and promising towards multiple applications. On the whole, this approach we established may broaden potential ways of combining nanoparticles and nanoclusters for detecting trace targets in bioanalytical ﬁelds. & 2014 Elsevier B.V. All rights reserved.

O-RADS对卵巢良恶性肿瘤诊断的效能并分析卵巢恶性肿瘤发生的影响因素

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【关键词】超声波；参数；肿瘤细胞；多药耐药【中图分类号】Ｒ７ — ３３３【文献标识码】Ａ【文章编号】１０－０（０００－９－０４５１２１）３２１３０００
Ｏｐｉｚｔｎｏｌｒｓｕｄｐｒｍｅｅｓｆｒｒｖｒｉｇｔｍｏｅｌｍｕｔｄｕｅｉｔｎｃ．ＡＧｏｄｎＳＡＯ－ｔｍｉａｏｆｕｔａｏｎａａｔｒｏｅｅｓｎｕｒｃｌｉｌｉｒｇｒｓｓａｅＸＩｕ — ｏｇ，Ｈ－Ｚｅ
四川医学２１００年３月第３ｌ卷（３期）Ｓｈａ第￣ｕｎＭｅ＆Ｊｕｎｌ２１Ｖ１３，ｏ３ｄｄｏｒａ，００，ｏ．１Ｎ．
・２９ｌ・
论著
超声波逆转肿瘤细胞多药耐药优化参数的筛选
夏国栋邵泽勇辛，，建周贤伍，，烽 △
ｍｉｅ１３ｗｓｄｔｒｎｄｂｏｙｏｔｏｅａｕｔｈｅｅａｆｃｅｃｆｕ￣ｓｕｄｏｐ／Ｒ．ｓｕｔＴｔｌｎ２ａｅｅｍｉｅｙｆｗｃｔｍｅｒｔｖａｅｔｅｒｖｒｌｅｉｎｙｏｌａｏｎｎＨｅＧ２ｌｙｌｓｉＲｅｌｓｏａｌ４ｙ
ｋｎｓｏｅｕｎｉｓｗｒｓｄ，ａｌ．０６，．ｎ．ＭＨｚａｎｈｃ．ＭＨｚｄｍｏｓｒｔｄｔｅｂｓｅｕｔＡｍｏｇａｉｄｆｆｑｅｃｅｅｅｕｅｎｍｅｙ０４，．０８ａｄ１７ｒｍｏｇｗｉｈ０６ｅｎｔｅｈｅｔｓｌａｒ．ｎ
６％脉冲比为最佳参数组合。较高声强具有较好的逆转耐药的效果。０
超声波逆脉冲之间不呈简单的直线对应关系，而是存在着最佳频率和最佳脉冲。对Ｈｐ２细胞而言，．Ｍ，ｅＧ０８Ｈｚ
逆药的效果优于其它３种频率。选用了１％、０、０、０、０、０、０、０、０、０％１脉冲波，６％０２％３％４％５％６％７％８％９％１００种以０
的脉冲波效果最佳。在不同的声强条件下，高声强具有更好的逆转耐药的效果。结论较
ＹａＹａＳｃｕｎ６５０Ｃｉａａｎ，ａｎ，ｉｈａ２００，ｈｎ
【ｂｔｃ】Ｏｊｔｅｏｂｅｅｈｆｅｃｆｒｔａｍｔｓｆｌａｕｄｏｉｒｅａｅｅｔｎｕｏｍｌ— ＡｓａｔｒｂｃｖＴｓｖｔｉｕｎｅｆｉｅｎｐｒｅｒｏｕｒｏｎｓｅｒｌｆｃｉｔｒｕｉｅｉｏｒｅｎｌｏｄｆｅａｅｔｓｎｔｖｍｔｓ
１３的摄入量，２间接反应超声波逆转耐药的效能。结果
以不
同频率、冲和声强的超声波照射亲本和耐药的人肝癌细胞株Ｈｐ２和Ｈｐ２Ｒ，脉ｅＧｅＧ／通过流式细胞术测定细胞对罗丹明在选用的０４０６０８１７ｚ．、．、．、．ＭＨ４种频率中，．ＭＨ０８ｚ的超声波
（．１泸州医学院附属医院消化内科，四川泸州６６０；．４００２雅安市人民医院消化内科，Ｉ四ＪＩ雅安６５０）２００
【要】目的观察不同参数对超声波逆转肿瘤细胞多药耐药效果的影响，摘筛选出最优化参数组合。方法
ｗｅｅｅｌｙｄｔａｉｔｕｎｈｐｔｅｌｌｒｃｌｌｅＨｃＧｎｔｌ — ｕｇｒｓｓａｔｓｂｉｅＨｅＧ／ＩｔｋｆＲｏａｒｍｐｏｅｏｒｄａｅｈｍａｃａｏｅｌａｅｌｉｐ２ａｄｉｍｕｔｄｒｅｉｔｕｌｐ２Ｒ．ｎａｅｏｈｄ — ｕｎｓｉｎｎ
ｙｎＸＮｉｎ，ｔ１１ＡｌｔｏｉｌｏｕｈｕＭｅｉｏｌｅＬｚｏ，ｉｕｎ６６０２ｈｅｐｏｉｏｇ，ＩＪｅａ．．ｆｉｅＨｓｔＬｚｏｄａＣｌｇ，ｕｈｕＳｈａ００；．ＴｅＰｏｌｓＨｓｔｏａｉａｄｐａｆｃｌｅｃ４ｅｐａｆｌ
ｄｕｅｉｔｎｅａｄｓｌｃｈｐｉｌｃｕｔａａｔｒ．ｅｈｄＡａｉｔｆｆｑｅｃｄｔｙｌｎｃｕｔｎｅｓｔｒｇｒｓｓａｃ，ｎｅｅｔｔｅｏｔｍａａｏｓｉｐｒｍｅｅＭｔｏｓｃｓｖｒｙｏｅｕｎｙ，ｕｙｃｃｅａｄａｏｓｉｉｔｎｉｅｒｃｙ