逆转多药耐药的实验操作步骤
逆转多药耐药的实验操作步骤
逆转多药耐药的实验操作步骤逆转耐药性的实验步骤: （孵育时间为48h）多柔比星也叫阿霉素1.各种给药组(多柔比星组,多帕菲,空白制剂,多西胶束制剂)对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株的IC50值2.多帕菲组，空白制剂，多西胶束制剂对MCF-7和MCF-7/ADR 细胞株，细胞存活率达到90%以上的剂量3.联合培养：针对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株，多帕菲组，空白制剂，多西胶束制剂加入存活率90%以上的剂量（比如设4个浓度梯度，并固定此浓度，调节多柔比星的浓度，计算多柔比星的IC50值），孵育1h后，加入不同浓度梯度的多柔比星溶液（浓度设定范围应在其IC50值以下，必须包含IC50这一浓度，可以再加一个高一点的浓度）注意：药物联合时，配制终浓度的阿霉素时，要从母药中只取一次，减少取药多次造成误差；每一次筛药，板子上都要设空白组、单独加药阿霉素组、单独加逆转剂药物组。
4.计算耐药倍数和逆转指数。
耐药倍数=耐药细胞IC50/敏感细胞IC50；逆转指数=使用逆转剂前IC50/使用逆转剂后IC50。
耐药倍数，是分析耐药细胞耐药性的。
实验中用到的是逆转倍数（对耐药细胞叫做逆转倍数=使用逆转剂前IC50/使用逆转剂后IC50）；增敏倍数（联合剂与阿霉素联合对敏感细胞的增敏倍数=使用联合剂前IC50/使用联合剂后IC50）。
比较这两个倍数，如果都大于1（我们一般看逆转倍数至少在2以上才有效，越大越好），且逆转倍数更大，说明具有逆转耐药的作用的同时还具有增敏作用。
如果两个倍数一样，说明你的药物只具有增敏作用。
如果增敏倍数为1，逆转倍数大于1（我们一般看逆转倍数至少在2以上才有效，越大越好），说明你的药物具有逆转耐药的作用。
肿瘤多药耐药机制与逆转策略
肿瘤多药耐药机制与逆转策略一、引言肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病，其发生和发展是由多种复杂的因素影响而成。
药物治疗是目前肿瘤治疗的主要方法之一，然而，肿瘤细胞对药物的多药耐药现象往往会导致治疗效果不佳，甚至治疗失败。
因此，了解肿瘤多药耐药机制，并探索逆转策略，对于提高肿瘤治疗效果具有重要意义。
二、肿瘤多药耐药机制1. ABC转运蛋白ABC转运蛋白是一类跨膜蛋白，在多药耐药中扮演重要角色。
这些蛋白负责细胞内外的物质转运，包括化疗药物。
当肿瘤细胞中ABC转运蛋白表达增加时，会导致药物从肿瘤细胞内外的迅速流动，减少药物在细胞内的蓄积，从而影响药物的疗效。
2. DNA修复机制DNA修复机制是维持细胞基因组稳定性的重要机制。
肿瘤细胞中DNA修复机制异常活跃，导致化疗药物对DNA的损害被高效修复，从而减少了药物的疗效。
3. 肿瘤干细胞肿瘤干细胞是一种具有自我更新和分化潜能的细胞群，它们对化疗药物具有较高的耐药性。
肿瘤干细胞具有较高的自我更新能力，能够快速恢复并再次形成肿瘤，是肿瘤多药耐药的重要机制之一。
4. 其他机制除了以上几种机制外，肿瘤多药耐药还涉及细胞凋亡逃逸、代谢异常、微环境因素等多种细胞和分子水平的因素。
三、肿瘤多药耐药的逆转策略1. 靶向ABC转运蛋白针对ABC转运蛋白过度表达的现象，可以通过设计靶向这些蛋白的药物来抑制其功能，从而增加化疗药物在肿瘤细胞内的蓄积。
目前，已有多种靶向ABC转运蛋白的药物被应用于临床，取得了一定的疗效。
2. 抑制DNA修复机制通过干扰DNA修复机制的正常功能，可以增加化疗药物对DNA的作用，提高药物对肿瘤细胞的杀伤力。
一些靶向DNA修复机制的药物已经在临床中得到应用，展现出一定的逆转多药耐药效果。
3. 消灭肿瘤干细胞针对肿瘤干细胞的耐药性，可以设计特定的药物或治疗方案来快速清除肿瘤干细胞，遏制肿瘤的再生。
目前，针对肿瘤干细胞的研究正在逐步深入，相关药物也在不断涌现。
非致死剂量高强度聚焦超声逆转K562／AO2细胞多药耐药的实验研究
非 致 死 剂 量 高强 度 聚 焦 声 逆 转 Ｋ ６ ／ ０ 超 ５２ Ａ ２ 细 胞 多 药耐 药 的实验 研 究
叶欣 徐 兴 鲁 沈绍 华 杨 雪 于连玲 王军 赵梅 葛 忠 民 杨 宪勇 亓春 花
【 摘要】 目的 探讨非致死剂量 高强度 聚焦超声 （ Ｉ ）逆转 Ｋ ６／ ０ 细胞多药耐药 （ Ｄ ） ＨＦ Ｕ ５２Ａ ２ Ｍ Ｒ
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【 关键词 】 超声 疗法 ；５２细胞 ； Ｋ６ 药物耐受性 ； 高强度 聚焦超声
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姜黄素逆转多药耐受糖蛋白介导的膀胱肿瘤多药耐药的实验研究
似物 及挥发 油是 姜 黄 主要 活性 成 分 ， 有 抗 炎 、 具 抗 菌 、 肝 、 疗 创 伤 、 癌 、 病 毒 等 活 性 。 其 抗 保 治 抗 抗 肿 瘤 作 用及 机 制 正 受 到 日益 重 视 。 有 文 献 表 明 ， 黄 素 对 人 类 恶 性 肿 瘤 细 胞 有 诱 姜 导 分 化 和 增 殖 抑 制 作 用 。 近 年 研 究 表 明 ， 黄 “， 姜 素 可 促 进 肿 瘤 细 胞 凋 亡 、 且 与 Ｄｏ 、 裂 霉 素 并 ｘ丝 具 有 协 同 作 用 。 ；ｅ ｓｌ等 （ ９ ６ 认 为 其 具 有 化 Ｉｒｅ １９ ） 疗 增 敏 作 用 。本 实 验 结 果 显 示 ， 黄 素 可 以 有 效 逆 姜 转 膀 胱 肿 瘤 的 ＭＤＲ， 黄 素 组 Ｂ Ｕ一 ７ ＡＤＭ 对 阿 姜 Ｉ ８／ 霉 素 的 敏 感 性 是 对 照 组 的 ４倍 。Ｐ ｇ － ｐ具 有 ＡＴＰ依 赖 的生 物 膜 泵 功 能 ， 将 胞 内 药 物 泵 至 胞 外 而 产 生 能
（ Ｄｅ ａ ｔ ｎ ｆ Ｕｒ ｌ ｇ Ｕｎｏ ｓ ｉａ ，Ｔｏ ｇ ｉＭ ｅ ｉａ ｌ ｇ ｐ ｒ ｍｅ ｔｏ ｏｏ ｙ， ｉｎ Ｈｏ ｐ ｔ ｌ ｎｊ ｄ ｃ ｌＣｏ ｌ ｅ， Ｈｕ ｚ ｏ ｇ Ｕｎ ｖ ｒ ｉｙ ｏ ｅ ａ ｈ ｎ ｉｅ ｓｔ ｆ
Ｔｅ ｈｎｏ ｏｇｙ ａ ｃ ｌ ｎｄ ｉ ｎｃ ， ｕｈａ Ｓｃ ｅ ｅ Ｗ ｎ，４ ０２２， ３０ Ｃｈｉ ａ） ｎ
复方三根制剂逆转多药耐药的实验研究
复方三根制剂逆转多药耐药的实验研究冯正权;郭勇;朱宁希;吕庆华;沈敏鹤;吴良村;王泽时【期刊名称】《中国肿瘤》【年(卷),期】2003(12)6【摘要】[目的]探讨复方三根制剂逆转K562/ADR、K562/VCR细胞株耐药性的机制。
[方法]细胞K562、K562/ADR、K562/VCR培养于RPMI鄄1640安全培养液中。
MTT法测定两株细胞的抗药性。
RT鄄PCR法测定给药处理后24h、48h、72h后两耐药细胞株MDR1表达量。
[结果]复方三根制剂和维拉帕米对K562/ADR和K562/VCR不同时段表达MDR1的量有显著差异。
[结论]推测复方三根制剂逆转多药耐药机制为在转录水平下调MDR1mRNA,从而降低多药耐药细胞P鄄gp的表达。
【总页数】2页(P370-371)【关键词】中药;三根制剂;多药耐药;逆转录多聚酶链反应【作者】冯正权;郭勇;朱宁希;吕庆华;沈敏鹤;吴良村;王泽时【作者单位】浙江中医学院;浙江省中医院;浙江大学肿瘤研究所【正文语种】中文【中图分类】R73－31【相关文献】1.携多药耐药基因1反义RNA重组腺病毒逆转肝癌多药耐药细胞的实验研究 [J], 梅英;石毓君;丁雄;吴传新;简华刚;龚建平;刘长安2.中药复方肝癌-1号逆转肝癌多药耐药的实验研究 [J], 李起;刘作金;张俊;石毓君;龚建平3.环氧化酶-2选择性抑制剂逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药的实验研究 [J], 韩正祥;刘念龙;杜秀平;高向阳;张敬川4.丁硫氨酸亚砜胺和利尿酸逆转人膀胱癌细胞多药耐药相关蛋白介导的多药耐药实验研究 [J],5.NHE-1特异性抑制剂DMA逆转HL-60/ADM细胞多药耐药的实验研究 [J], 常城;孔佩艳;陈幸华;彭贤贵;刘林;刘红;曾东风;梁雪;王庆余因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
ETS1基因沉默逆转MCF-7ADR多药耐药的实验研究的开题报告
ETS1基因沉默逆转MCF-7ADR多药耐药的实验研究的开题报告一、研究背景与意义多药耐药是肿瘤治疗中常见的问题，也是肿瘤患者治疗失败的主要原因之一。
研究表明，多药耐药与肿瘤细胞中特定基因的表达失调等因素有关。
ETS1基因作为一种转录因子，在多种肿瘤中表达异常，并且与肿瘤细胞的增殖、转移和耐药性等方面密切相关。
因此，探究ETS1基因在多药耐药中的作用机制，对于寻找肿瘤治疗新靶点，提高治疗效果具有重要的意义。
二、研究内容本研究将采用质粒介导的siRNA技术沉默MCF-7ADR细胞中的ETS1基因，观察ETS1基因沉默对MCF-7ADR细胞耐药性以及细胞增殖、转移能力的影响，并研究ETS1基因沉默对多种耐药基因的表达变化及其调控机制。
三、研究方法1、建立沉默ETS1基因的MCF-7ADR细胞株：通过质粒介导的siRNA技术，构建含有ETS1基因特异性siRNA的质粒，并将其转染到MCF-7ADR细胞中，筛选出效果最佳的siRNA序列，建立沉默ETS1基因的细胞株。
2、细胞增殖和转移能力的检测：采用CCK-8法和Matrigel侵袭实验，测定沉默ETS1基因的MCF-7ADR细胞的增殖和转移能力。
3、耐药基因的表达变化：利用qRT-PCR技术，检测沉默ETS1基因的MCF-7ADR细胞中多种耐药基因的表达变化。
四、预期结果我们预计，ETS1基因沉默可逆转MCF-7ADR细胞的多药耐药性，并抑制细胞增殖和转移能力。
同时，ETS1基因沉默可能通过影响多种耐药基因的表达，参与细胞的多药耐药性形成与发展。
五、研究意义本研究有望为肿瘤治疗的新靶点的寻找提供重要线索，为寻找治疗耐药性的新策略提供理论依据，进一步拓展肿瘤治疗的可能性。
肿瘤耐药机制与逆转方法
肿瘤耐药机制与逆转方法引言：近年来，癌症的发病率逐渐增加，而且在治疗过程中很多肿瘤患者面临着耐药性的问题。
这导致了许多治疗手段失效，因此了解和克服肿瘤耐药机制变得至关重要。
本文将介绍肿瘤耐药机制的原理和一些已知的逆转方法。
一、肿瘤耐药机制1. 多药耐药（MDR）机制多药耐药是指细胞对多种化疗药物的抵抗性发展。
它主要通过以下几种方式实现：a) ABC转运体家族：ABC（ATP-binding cassette）转运体通过使用ATP能量从细胞内向外排泄化学物质，从而减少化疗药物在细胞内积累。
其中P-gp、MRP 和BCRP是三个重要的ABC转运体。
b) 凋亡信号途径：肿瘤细胞常常通过调节Bcl-2家族蛋白、Caspase活性以及Fas/FasL信号路径等来干扰化疗药物诱导的细胞凋亡。
2. 靶向信号通路肿瘤耐药也常与细胞的信号通路异常激活有关。
某些关键的信号通路包括PI3K/Akt、RAS/RAF/MAPK和JAK/STAT等，当这些通路异常激活时，会导致肿瘤细胞对化疗药物的耐受性增加。
二、肿瘤耐药逆转方法1. 组合治疗组合化疗是目前常用的一种逆转肿瘤耐药的方法。
通过同时使用多种具有不同作用机制的抗肿瘤药物，可以减少肿瘤细胞对单一化疗药物产生的抵抗性。
此外，还可以考虑将放射治疗、免疫治疗和靶向治疗与化学治疗相结合，以达到更好的治疗效果。
2. 修饰药物分子结构通过修改已有化学结构或设计出新型小分子化合物，可以提高药物在肿瘤细胞中进入和积累的能力。
例如改变药物理化性质、结构基团调整以及针对特定肿瘤受体进行修饰等，都是常用的逆转耐药方法。
3. 使用多靶点抑制剂由于肿瘤细胞的信号通路异常激活与耐药性增加密切相关，因此使用多靶点抑制剂可以有效逆转肿瘤耐药。
这些抑制剂可以同时或依次作用于不同通路上的关键蛋白，从而干扰肿瘤细胞内的异常信号传导。
4. 基因治疗基因治疗是近年来发展迅速的一种逆转肿瘤耐药机制的方法。
该方法通过操纵和修复细胞内关键基因表达水平，调节自身免疫应答以及恢复凋亡通路等来逆转耐药性。
多药抗药基因实验具体步骤及详细方法
多药抗药基因的表达实验具体步骤及详细方法大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。
多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测这些特定基因的过度表达。
一、细胞总RNA提取1. 收集约5x107个细胞，冷PBS洗涤。
2. 加入400 ul RNA提取液（含6 mol/l 的异硫氰酸肽，0.5%十二烷基肌酸钠，0.025 mol/l 构橼酸钠pH7.0，0.25 mol/l 乙酸钠，pH4.0，0.5%二疏基乙醇，50%萘酸），混匀。
3. 加入400 ul 氯仿，混匀，以13 000 r/min 于4℃离心15 min。
4. 取上清液加入等体积的异丙醇，4℃放置30 min。
5. 然后以13 000 r/min 离心15 min，吸上清，将RNA成点用75%的乙醇洗涤1次，溶于100 ul 的无菌双蒸馏水中6. 并用紫外分光光度计检测RNA纯度（A260/A280应为1.8~2.0）后备用。
二、反转录及PCR扩增1. 引物2. 取细胞总RNA10 ul 加入20 ul AMV逆转录酶反应体系中，42℃保温30 min 进行反转录，合成cDNA。
3. 然后置95℃，3 min 终止反转录。
4. 接着在Taq酶的作用下，用mdr-1和β2-MG引物，对cDNA上的目的片段进行PCR5. 94℃预变性2 min，然后94℃变性1 min，50℃退火1 min，72℃延伸1 min，扩增35个循环。
6. 最终在60℃保温7 min，以保证产物充分延伸。
7. 取10 ul 扩增产物在3%琼脂糖凝胶电泳后，紫外灯下照相，与mdr-1 cDNA阳性对照，等位的DNA条带为阳性，反之为阴性。
注意事项1. 尽可能在低温下操作；2. 适量斟酌Trizon等的用量；3. 在每一次离心后除尽蛋白质、不溶物提取操作时必须戴手套、口罩等防止DNA酶的影响；4. 注意Trizon带有腐蚀性；5. 最重要的就是防止DNase的污染，手套、口罩必不可少，所用的枪头和EP管等也要RNA提取专用的，无DNA酶的。
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逆转耐药性的实验步骤: （孵育时间为48h）多柔比星也叫阿霉素
1.各种给药组(多柔比星组,多帕菲,空白制剂,多西胶束制剂)对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株
的IC50值
2.多帕菲组，空白制剂，多西胶束制剂对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株，细胞存活率达到
90%以上的剂量
3.联合培养：针对MCF-7和MCF-7/ADR细胞株，多帕菲组，空白制剂，多西胶束制剂加入
存活率90%以上的剂量（比如设4个浓度梯度，并固定此浓度，调节多柔比星的浓度，计算多柔比星的IC50值），孵育1h后，加入不同浓度梯度的多柔比星溶液（浓度设定范围应在其IC50值以下，必须包含IC50这一浓度，可以再加一个高一点的浓度）
注意：药物联合时，配制终浓度的阿霉素时，要从母药中只取一次，减少取药多次造成误差；每一次筛药，板子上都要设空白组、单独加药阿霉素组、单独加逆转剂药物组。
4.计算耐药倍数和逆转指数。
耐药倍数=耐药细胞IC50/敏感细胞IC50；逆转指数=使用逆
转剂前IC50/使用逆转剂后IC50。
耐药倍数，是分析耐药细胞耐药性的。
实验中用到的是逆转倍数（对耐药细胞叫做逆转倍数=使用逆转剂前IC50/使用逆转剂后IC50）；增敏倍数（联合剂与阿霉素联合对敏感细胞的增敏倍数=使用联合剂前IC50/使用联合剂后IC50）。
比较这两个倍数，如果都大于1（我们一般看逆转倍数至少在2以上才有效，越大越好），且逆转倍数更大，说明具有逆转耐药的作用的同时还具有增敏作用。
如果两个倍数一样，说明你的药物只具有增敏作用。
如果增敏倍数为1，逆转倍数大于1（我们一般看逆转倍数至少在2以上才有效，越大越好），说明你的药物具有逆转耐药的作用。