医学微生物学实验指导
医学微生物学实验指导皖南医学院微生物学和免疫学教研室2006年5月微生物学实验的目的与要求医学微生物学的实验课是本课程学习中的重要环节。
医学微生物学实验课的目的：在于使学生加深和巩固对讲课内容的明白得和体会，并在系统学习理论的基础上，使学生学习并把握微生物学的差不多操作技术，培养独立摸索的能力，为今后的临床实践及科学研究工作打下良好的基础。
为了提高实验课的成效，应做到以下几点：一、每次实验前作好预习，明确实验目的，内容，操作中注意点及其理论依据，幸免或减少错误发生。
二、在实验过程中，应持严肃认确实科学态度，并要注意合理地分配和利用时刻。
三、在微生物学的整个实验过程中，应严格加强“无菌观念”的培养和训练。
四、实验结果须真实记录，进行分析，得出结论。
如实验结果与理论不符，应探讨缘故，训练科学思维的能力。
实验完成后，要写出实验报告。
微生物学实验室规则微生物学实验的对象大多是病原微生物，因此必须严格贯彻“无菌观念”，防止实验中自身感染和环境污染是微生物学实验室的最重要原则。
一、尽量不带个人一辈子活、学习用品入实验室，必要的用具带入后，应放在远离操作的位置。
二、进入实验室后穿上工作衣，离室时脱下反叠带走。
在实验室内应保持安静、整洁、有秩序，不得高声谈笑，随便走动或拆卸仪器、搬弄标本。
三、实验室内严禁吸烟、进食、饮水，严禁用嘴吸移液及润湿标签，尽量不要用手触摸头面部及躯体其他暴露部位。
四、如遇不慎而打破菌种管或使有菌材料污染皮肤、衣物、桌面等情形，应赶忙报告指导教师，切勿隐瞒或自行处理。
五、被污染过且需要回收的吸管、滴管、试管、玻片等物应用完后赶忙投入已预备的消毒液中，不得放在桌面上或水槽内。
六、爱护公物，节约试剂材料，不得将实验室任何物品私自带走。
如遇仪器、用品损坏，应报告指导教师并按规定予以赔偿。
七、实验完毕，整理桌面，值日生打扫室内卫生，最后离开的同学应注意关好水电、门窗，洗手后离室。
实验一自然界与人体的微生物检查实验目的：了解微生物在空气、物体表面及正常机体表面的分布，增强消毒及无菌操作的观念。
实验材料：一般琼脂平板、无菌棉棒、无菌生理盐水、蜡笔、酒精灯。
实验内容：一、空气中微生物的检查：取无菌一般琼脂平板一只，打开后暴露在空气中，30分钟后盖好，置37℃温箱孵育24小时，观看各种菌落的特点。
二、皮肤、粘膜及其它物品表面微生物的检查：取一般琼脂平板一只，用蜡笔在皿底玻璃上划分四区，将标签纸贴于正中，分别注明皮肤、粘膜、硬币或钢笔等字样。
然后反转，打开平板：1、用手指在注明“皮肤”处琼脂上轻轻擦拭。
2、把沾取了无菌生理盐水的湿棉棒在管壁上挤干水，擦拭咽部或鼻腔粘膜，然后轻轻抹在“粘膜”处琼脂上。
3、分别取硬币或钢笔等物在相应区域内抹擦。
盖好平板，置37℃温箱内孵育24小时后，观看菌落的生长情形。
实验报告：观看与记录结果。
实验二油镜的使用实验目的：熟悉显微镜的使用方法。
实验材料：标本片、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯。
实验原理：使用油镜时，需在玻片上滴加香柏油。
这是因为油镜的放大倍数较高，而透镜专门小，光线通过不同密度的介质物体（玻片→空气→透镜）时，部分光线会发生折射而散失，进入镜筒的光线少，视野较暗，物体观看不清。
如在透镜与玻片之间滴加和玻璃折射率（n=1.52）相仿的香柏油（n=1.515），则使进入油镜的D’图1 油镜的原理示意图实验方法：1、用油镜时，勿将镜臂弯曲倾斜，以免油滴或菌液流淌外溢，阻碍观看造成污染。
2、用低倍镜对光，自然光线用平面镜（光源不宜采纳直射日光，因直射日光的强度太大容易刺激眼睛），人工光源用凹面镜，同时调剂集光器和光圈以获得最适亮度。
染色标本油镜检查时，应将光圈完全打开，集光器上升至载物台相平，使光亮度专门强。
3、标本片放在载物台上，用标本推进器或压片夹固定。
4、低倍镜找出标本的范畴，然后在待检部位上加一滴香柏油，转动镜头转换器，将油镜头置于工作位置，从侧面观看并缓慢转动粗调剂器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，然后眼睛移至目镜，缓慢向上移动粗调剂器（只应上升，不能下降，以免压碎标本和损坏镜头），待看到模糊物象时，再用细调剂器转动至物象完全清晰为止。
5、观看完毕，取下标本片，赶忙用擦镜纸顺一个方向旋转擦拭镜头上的油。
若油已干，应先用二甲苯滴在擦镜纸上擦净镜头，再用另一洁净擦镜纸拭去镜头上沾有的二甲苯。
6、显微镜擦净后，降低物镜并将其转成八字形，集光器下降，反光镜推平，光圈关上，归还显微镜室。
实验三细菌的差不多形状和专门结构实验目的：把握细菌的差不多形状和专门结构。
材料及方法：一、细菌的差不多形状（示教）1、球菌：葡萄球菌，革兰氏染色阳性。
2、杆菌：大肠杆菌，革兰氏染色阴性。
3、弧菌：霍乱弧菌，革兰氏染色阴性。
二、细菌的专门结构（示教）1、荚膜：肺炎球菌，成双排列，菌体四周不着色的透亮圈即是荚膜所在处。
经荚膜染色后，菌体与背景出现紫色，荚膜为无色。
2、鞭毛：伤寒杆菌，菌体四周有周鞭毛。
经鞭毛染色后，菌体和周鞭毛均呈紫色。
3、芽胞：破伤风杆菌，菌体细长，顶端可见一正圆形芽胞。
经芽胞染色后，菌体为蓝色，芽胞为红色。
实验报告：1、绘图说明各种形状细菌的大小、形状、排列方式，并注明染色性及放大倍数。
2、绘图说明细菌的专门结构，并注明染色性及放大倍数。
实验四基础培养基的制备培养基是依照微生物生长繁育时对营养物质的需要而配制的营养制品，含有营养物质及适宜的酸碱度，经灭菌后使用。
常用的培养基按用途分为：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基及厌氧培养基。
按物理性状分为固体、半固体和液体三种。
实验目的：了解常用的液体、固体、半固体培养基的成分、制备方法和用途。
实验材料：牛肉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、0.1mol/lNaOH溶液、酚红指示剂、蒸馏水等。
实验方法：一、肉汤培养基1、将鲜牛肉除去筋膜和脂肪，切成小块后用绞肉机绞碎，以每500g碎牛肉加1000ml蒸馏水的比例混合后，置4℃冰箱过夜。
2、次日取出浸泡物倒入容器内煮沸半小时，使肉渣凝固，也可煮沸一小时不经冰箱过夜。
3、用纱布和脱脂棉过滤，除去肉渣，即成肉浸汁。
加入1%蛋白胨及0.5%氯化钠，加热溶解并用蒸馏水补足蒸发失去的水分。
4、待冷至50℃左右时，调该溶液的pH至7.4~7.6。
校正pH的方法为：①取三支与标准比色管（pH7.6）相同的空比色管，其中一管内盛放蒸馏水5ml；另外两管各加入欲测的肉汤培养基5ml，其中一管内加0.02%酚红指示剂0.25ml （滴定管），摇匀。
②按图2所示排列，举起比色架，对光观看。
若滴定管色调较淡或为黄色，即表示培养基偏酸性，需滴加0.1mol/L NaOH矫正；若呈深红色，即表示偏碱性，应滴加0.1mol/L HCl矫正；使之与标准比色管色泽相同为止。
通常未矫正前的肉汤均呈酸性。
记下用去的NaOH（或HCl）溶液量，由此运算出矫正全量培养基时所需NaOH（或HCl）溶液量。
图2 pH比色架5、酸碱度矫正后，加热煮沸10分钟，用滤纸过滤，补足水分，再调一次pH值。
6、分装肉汤于三角烧瓶或试管，瓶口、管口加棉塞并用纸包扎。
7、置高压灭菌器内103.43Kpa20分钟灭菌备用。
可用市售的牛肉膏代替牛肉，用量为0.3%，其余成分相同（如蛋白胨、氯化钠等）加热溶解，调剂pH至7.6左右，煮沸10分钟，补充失水、过滤、分装，灭菌后备用。
二、固体培养基1、在上述制备的肉汤中加入2-3%的琼脂。
琼脂为海藻中提取的一种多糖类物质，本身无营养作用，不能被细菌利用。
因其加热到100℃后可溶化，冷却至40℃左右又可凝固，故可作为赋形剂。
加热溶化，脱脂棉过滤，补足失水，分装三角烧瓶和试管。
2、置高压灭菌器内103.43Kpa灭菌20分钟，取出后趁热将试管倾斜一定角度放置，待琼脂凝固即成琼脂斜面培养基（图3）。
三角烧瓶内培养基冷至50-60℃时在超净台或无菌室内将其倾注于灭菌平皿内（15-20ml），凝固后即成琼脂平板。
图3 琼脂斜面培养基另外，实际工作中现多使用合成营养琼脂干燥粉末制剂。
其方法为：称取41克营养琼脂干燥粉末加入1000ml冷蒸馏水中混合放置10分钟，隔石棉铁丝网微火煮沸使其完全溶解，分装于中试管中（约5~7ml）或三角烧瓶，103.43kPa （121℃）灭菌15分钟，即可备用。
三、半固体培养基1、操作方法同固体培养基，但琼脂加入量较少，仅0.3-0.5%。
2、分装试管，灭菌后使试管直立，冷凝后即成半固体培养基。
实验五细菌的分离与培养实验目的：把握在各种培养基上的接种方法并观看生长现象。
实验材料：菌种、一般琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基、接种环、接种针、酒精灯。
实验内容：一、平板划线接种法（分离培养法）原理：通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁育，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。
若需从平板上猎取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。
用途：分离出纯种细菌，以利作纯培养。
操作方法（三区划线法）：1、右手拿接种环，烧灼冷却后，取菌液一环。
2、左手抓握琼脂平板（让皿盖留于桌上），在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入，右手将已沾菌的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/5-1/6，此为第一区。
划线时接种环与琼脂呈30-40度角轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。
3、接种环上余外的细菌可烧灼（每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定），待冷后，在划线末端重复2-3根线后，再划下一区域（约占1/4面积），此为第二区。
4、第二区划完后可不烧灼接种环，用同样方法划第三区，划满整个平皿。
5、划线完毕，将平板扣入皿盖并作好标记，置37℃温箱孵育18-24小时观看琼脂表面菌落分布情形，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特点（如大小、形状、透亮度、色素等）。
图4-1 平板分区划线法图4-2 培养后菌落分布情形二、液体培养基接种法用途：凡肉汤、蛋白胨水，各种单糖发酵均用此法接种。
能够观看细菌不同的生长性状、生化特性以供鉴别之用。
操作方法：右手执笔式握住接种环，灭菌冷却后取单个菌落。
1、左手拇指、食指、中指托住液体培养基之下端，右手小指和无名指（或手掌）拔取试管塞，将管口移至火焰上旋转烧灼。
2、将沾菌的接种环移入培养基管中，在液体偏少侧接近液面的管壁上轻轻研磨，沾取少许液体与之调和，使菌液混合于培养基中（图5）。
3、管口通过火焰，塞好试管塞，将接种环灭菌后放下，经37℃温箱孵育18-24小时，取出观看生长情形。
三、半固体穿刺接种法用途：观看细菌动力，储存菌种。
方法：1、以无菌操作用接种针挑取单个菌落，赶忙垂直插入培养基中心至接近管底处循原路退回。
微生物学和微生物学检验的目的要求
微生物与微生物学检验实验指导医学技术系微生物与免疫检验教研室微生物与微生物学检验实验的目的要求1．通过实验来验证理论，使课堂效果更为生动，学到的知识更为巩固。
2．通过学生亲自动手操作，得到比较全面的微生物学基本操作技术的训练。
3．在微生物学实验课的过程中，帮助学生建立无菌观念，掌握无菌操作技术。
4．帮助学生熟悉和掌握常见病原微生物的生物学性状、分离培养和鉴定的方法以及各种临床标本的微生物学检查的基本程序。
5．在实验过程中培养学生独立操作、独立思考、分析问题和解决问题的能力。
微生物学实验室规则及注意事项一、微生物学实验室规则在进行微生物学实验时，须时刻牢记实验的对象是病原微生物，任何疏忽都可能导致严重的后果，不仅自身有可能被感染，而且有可能将病原微生物传给他人。
因此决不能有丝毫侥幸心理，冒任何不必要的危险。
迸入实验室时必须遵守下列规则。
1．进实验室时必须穿自大衣，离室时脱下反折，白大衣要经常清洗消毒。
2．每次实验后均要用肥皂洗手，必要时用消毒药水泡手。
3．书包、衣物等勿带入实验室，必要的文具、实验指导、笔记等带入后，放在指定的地方。
4．每次实验后均用消毒药水擦洗工作台面，并用紫外线灯照射过夜。
5．在实验室内不准吃东西、喝饮料和吸烟，不可把任何东西放入嘴中，也不要用手抚摸头面等部位。
6．进入实验室后要保持安静，禁止高声谈话，不准打闹嘻笑。
7．必须按照老师指定的方法，小心地处理传染性材料、培养物和污染的物质，要正确地使用存放污染器材的各种消毒容器。
8．接种环使用前后必须进行烧灼灭菌。
9．必须小心地避免任何有菌材料的溅出，若不慎污染了工作台、手、眼、衣服和地面等处，应立即报告老师，以便及时作适当处理。
10．培养物和传染性材料须放在工作台的安全部位，尽可能保持台面的清洁整齐。
11．爱护公物，合理使用实验材料和器材，如不慎损坏了某些器具，应及时报告老师，听候处理。
12．实验完毕后值日生清理台面，将需培养的标本及时放入培养箱，并打扫地面，关闭水、电、煤气和门窗，带课教师检查合格后方可离开实验室。
微生物学实验报告--第八周
年级：2009 专业：医学检验班级：一班姓名：赵富海学号：2009221792实验八、细菌的药物敏感试验【K-B法】菌种（均为幼龄菌）：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠埃希菌1.5×108/ml药物纸片：青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星方法：1.涂菌（棋盘划线法），室温放10min；2.贴药敏纸片，注意间距（大于24mm）和边距（大于15mm）；3.置35℃ 24h判读结果。
结果如图所示：金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果实验结论：金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素、新诺明、环丙沙星敏感。
【试管稀释法】菌种：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠b1.5×108/ml抗生素：庆大霉素32u/ml方法：1.对倍稀释抗生素2.加菌液0.1ml/管，摇均35℃ 16—18h3.判读MIC试验操作如下图所示：注意 :设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管和质控菌生长对照管) 结果判断: 不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对该细菌的MIC. 如图：实验结论：MIC=原药物浓度(32u/ml) ×稀释倍数(1:24)=2u/ml【联合药敏试验】（示教）金黄色葡萄球菌大肠b结果判断：金黄色葡萄球菌联合药敏试验结果判读：①青+链=青单+链单→相加作用②青+红=青单+红单→相加作用③青+万=青单+万单→相加作用④青+林＞青单+林单→协同作用大肠b联合药敏试验结果判读：①青+红=青单+红单→相加作用②青+链=青单+链单→相加作用③青+林=青单或林单→无关作用④青+南＞青单+南单→协同作用【实验讨论】1．K-B法原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。
纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。
微生物学实验-1培养基的制备与高压蒸汽灭菌
2. 放回内层锅，并装入待灭菌物品。 放回内层锅，并装入待灭菌物品。
3. 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的 加盖， 排气槽内。 排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相 对的两个螺 栓。
4. 通电加热，待冷空气完全排尽后，关上排气 通电加热，待冷空气完全排尽后， 阀。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维 当锅内压力升到所需压力时，控制热源， 持压力至所需时间。本实验用 持压力至所需时间。本实验用0.1Mpa，121.5℃， ， ℃ 20min灭菌。 灭菌。 灭菌 5. 灭菌所需的时间到后，关闭电源，让灭菌锅 灭菌所需的时间到后，关闭电源， 内温度自然下降，当压力表降至“ 时 内温度自然下降，当压力表降至“0”时，打开排 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 6. 将取出的灭菌培养基放入 ℃温箱培养 将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h， ， 经检查若无杂菌生长，即可待用。 经检查若无杂菌生长，即可待用。
6. 加塞 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染，并保 证有良好的通气性能。 证有良好的通气性能。 7. 包扎 在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时 在棉塞外包一层牛皮纸， 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。注明培养 基名称、组别、配制日期。 基名称、组别、配制日期。 8. 灭菌 将上述培养基以 0.103 MPa 121℃ ， ℃ 20min高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌
实验目的
了解高压蒸汽灭菌的基 本原理及应用范围。 本原理及应用范围。 学习高压蒸汽灭菌的操 作方法。 作方法。
《微生物学实验》教学大纲
《微生物学实验》教学大纲实验中文名称：微生物学实验实验英文名称： Microbiology experiment课程类别：专业课课程编号： 101225面向对象：制药工程、药物制剂专业本科生开课系（室）：化学与药学系总学时：32学时是否为独立设课：是（√）否（）一、课程任务和目的微生物学实验是配合微生物教学开设的一门培养学生动手能力和综合素质的实验课程，通过实验使学生加深对所学知识的理解和掌握，使学生掌握微生物实验技术的基本操作和技能，同时使学生初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的学科前沿接轨。
掌握微生物纯培养的一般步骤和方法，学习无菌操作技术；观察细菌、霉菌、放线菌的形态结构，掌握各种染色和观察的方法；掌握细菌鉴定的方法；联系实际，使学生了解微生物的应用，理解微生物对人类有利的一面。
二、与其它课程的联系先修课程：微生物学后续课程：三、主要实验仪器高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、恒温震荡培养箱、鼓风干燥箱、超净工作台、电热炉、生物显微镜、低温冰箱、冰箱、抽滤瓶、四、教材及实验指导书《生物学基础实验教程――普通生物学基础实验》主编：滕利荣，孟庆繁；出版单位：吉林科学技术出版社《生物学基础实验教程――生物学基础技术实验》主编：滕利荣，孟庆繁；出版单位：吉林科学技术出版社五、实验方式与基本要求课前准备与预习：每次实验前，学生应对实验内容进行预习，写预习报告，了解实验的目的，原理和方法课内要求：实验时小心仔细，严格按照操作要求进行。
在实验过程中认真及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要继续观察的实验，则需要记下再次观察的现象和结果，以便分析。
认真思考、分析实验过程出现的现象和问题，学会整理和归纳实验数据和结果。
课后要求：实验后，认真总结实验数据和现象，分析实验结果并作出解释，最后认真书写并按时递交实验报告。
六、实验成绩评定：实验习惯10％，预习实验报告10%，实验报告20％，实验考试成绩30％，实验操作及实验结果30%。
遵义医学院《医学微生物学与寄生虫学》实验教学大纲
（一）介绍实验室规则 （二）细菌基本形态特殊结构（示教）
基本形态：链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、创伤弧菌、淋球菌（玻片标本）；特殊结构：肺 炎双球菌的荚膜；变形杆菌的鞭毛；破伤风杆菌的芽胞；炭疽杆菌的芽胞。 （三）细菌涂片制备及革兰染色（1 份/人）
模拟标本制备细菌涂片，革兰染色，油镜下观察。 （四）结核痰标本抗酸染色 （1 份/人）
3
Ⅳ 教学时数分配表
实验内 容
实验一 实验二 实验三
1.细菌基本形态特殊结构(示教) 2.细菌涂片制备及革兰染色(1 份/人) 3.痰液抗酸染色(1 份/人) 4.观察细菌代谢产物（讲解） 5.微生物学的基本操作技术（录像） 1.人体、物品中细菌检查（1 份/组） 2.飞沫、空气中细菌检查（1 份/桌） 3.细菌接种法（1 套/组） 4.紫外线杀菌作用（示教） 5.细菌对抗菌药物的敏感性实验（示教） 6.真菌检查法（示教） 7.性病防治（录像） 总则、人体重要寄生虫、病例分析
遵义医学院
《医学微生物学与寄生虫学》实验教学大纲
（供四年制本科护理学专业使用）
Ⅰ 前言
《医学微生物学与寄生虫学》主要是研究与医学有关的病原生物的生物性状、感染与免疫的 机理、病原生物学检查与特异防治一门学科。它是临床医学等专业必修的基础医学课程,通过本 课程的教学,使学生掌握微生物学的基本理论、基本知识和基本技能。为学习本专业其他基础课 和临床医学,特别是传染病的诊断、预防和治疗奠定基础。
Ⅱ 正文
实验一 微生物的形态检查法及代谢产物观察
一 教学目的
在学习细菌学基本理论知识的基础上，通过实验了解细菌微生物学检查法，同时树立无菌观 念。
二 教学要求
（一）掌握：油镜的使用及保护；细菌标本制备、革兰染色方法及抗酸染色法。 （二）熟悉：细菌的基本形态及特殊结构。 （三）了解：细菌代谢产物的观察。
微生物实验教程
实验 1—1 普通光学显微镜的使用……………………………………………………………
实验 1—2 细菌的形态结构观察 (简单染色、革兰氏染色、抗酸染色) ……………………
实验 1—3 细菌的特殊结构和运动性观察 (芽胞染色、荚膜染色、鞭毛染色) ……………
实验 1—4 放线菌的形态结构观察 …………………………………………………………
一滴镜油作为介质。国产显微镜的油镜常标有“油”字，国外产品则常用“oil”（oil Immersion）
或“HI”（Hemcyeneous Immersion）字样，以供识别。物镜上通常标有放大倍数、数值孔径
（亦称镜口率）、工作距离等主要参数。
3、聚光器：也叫集光器，由聚光镜和可变光阑组成。聚光镜由一片或数片透镜组成，
面是平面镜，另一面是凹面镜，其作用是使光源发出的光或自然光射向聚光镜。光强时用平
面镜，光弱时用凹面镜。有的显微镜的人工光源安装在镜座内，其反光镜也固定在镜座内。
（三） 普通光学显微镜的光学原理
心
由单透镜构成的放大镜和由几块透镜组成的实 体显微镜（解剖镜）称单式显微镜生物学教学及科 研所用的光学显微镜一般是复式显微镜。
高学生的综合能力与创新意识。
教
验
实 3. 提高学生分析问题和解决问题的能力。根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本
学 特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的
问题点样分析，
范
师
京
南
第一节 微生物的形态结构观察
微生物的个体微小，肉眼难以看见，必须借助显微镜才能观察到。因此．显微镜就成为 微物学研究工作者不可缺少的基本工具，从事有关微生物学教学、科研和生产的人员，都应 该了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握不同显微镜的使用方法。
药品微生物实验室规范指导原则
药品微生物实验室规范指导原则药品微生物实验室规范指导原则用于指导药品微生物检验实验室的质量控制。
药品微生物的检验结果受很多因素的影响，如样品中微生物可能分布不均匀、微生物检验方法的误差较大等。
因此，在药品微生物检验中，为保证检验结果的可靠性，必须使用经验证的检测方法并严格按照药品微生物实验室规范要求进行试验。
药品微生物实验室规范包括以下几个方面：人员、培养基、菌种、实验室的布局和运行、设备、文件、实验记录、结果的判断等。
人员从事药品微生物试验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的教育背景。
实验人员应依据所在岗位和职责接受相应的培训，在确认他们可以承担某一试验前，他们不能独立从事该项微生物试验。
应保证所有人员在上岗前接受胜任工作所必需的设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，经考核合格后方可上岗，同时，实验室应制定所有级别实验人员的继续教育计划。
检验人员必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的和结果评价。
微生物实验室的管理者其专业技能和经验水平应与他们的职责范围相符。
如：管理技能、实验室安全、试验安排、预算、实验研究、实验结果的评估和数据偏差的调查、技术报告书写等。
实验室应通过参加内部质量控制、能力验证或使用标准菌株等方法客观评估检验人员的能力，必要时对其进行再培训并重新评估。
当使用一种非经常使用的方法或技术时，有必要在检测前确认微生物检测人员的操作技能。
所有人员的培训、考核内容和结果均应记录归档。
培养基培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。
适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。
1．培养基的制备培养基可按处方配制，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基。
在制备培养基时，应选择质量符合要求的脱水培养基或单独配方组分进行配制。
脱水培养基应附有处方和使用说明，配制时应按使用说明上的要求操作以确保培养基的质量符合要求，不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基。
微生物学实验报告
微生物学实验报告（格式标准）(生命科学专业)*****目录索引实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测和分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八（综合实验）化能异养微生物的分离与纯化13课程名称：微生物学实验班级：化生系生命科学本科实验日期：指导教师：黎勇实验一油镜的使用和细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1. N·A=n·sinα2. D=λ/2N.A3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。
4. 用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的B.subtilis. S.arueus 菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕：（一）油镜的使用镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）仔细观察并绘图取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。
（二）细菌的简单染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察（三）细菌运动性的观察取洁净盖玻片，四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。
临床微生物学尿培养操作规范
临床微生物学尿培养操作规范临床微生物学尿培养操作规范一、前言尿培养是临床常规检验项目之一，是对尿液中细菌及真菌等微生物的常规检测方法。
正确使用和掌握尿培养技术不仅可以提高检测灵敏度和准确度，还可帮助临床医生做出最恰当的诊断和治疗方案。
本文旨在规范尿培养技术操作步骤，以保证检测结果的准确可靠性。
二、实验仪器与试剂仪器：电热培养箱、高速冷冻离心机、平板计数仪试剂：马来酸钠-10%氯己定液（药理试剂厂）、甲酸双硫磺玫瑰素（药理试剂厂）、紫罗兰素（药理试剂厂）、尿淀粉酶试纸（岛津）、理化试剂。
三、样本采集1.尽量在早晨首次排尿后采集尿液，避免受到外界因素的干扰。
2.先用肥皂水清洗双手，再在外阴部进行局部清洁消毒。
3.使用无菌尿采集器，避免手直接接触采集容器。
4.采集尽量多的尿样（10-15ml），尽量在采集后30分钟内送检到检验中心。
四、实验操作1.尿样检测前要进行初步检查，确认样本是否过量、污染、外观是否清澈和pH 值是否大于7。
2.将10μl或1毫升尿样接种在含有营养物质的琼脂培养基中，用病原菌常见的三个品种的琼脂培养基，即血琼脂培养基、巴斯德-柯莫鲁琼脂培养基和香草琼脂培养基进行接种。
3.将接种好的琼脂培养基静置于37℃恒温箱中，并定期巡查。
4.在接种过程中需要进行质量控制，确保培养基无菌，培养条件一致。
5.进行培养后，根据培养的时间和菌落形态特征，鉴别出细菌和真菌等微生物的种类。
6.使用生化方法对特定细菌进行进一步鉴定。
7.仪器法进行微生物药敏实验，选择适当抗生素治疗染菌的感染。
五、操作注意事项1.操作时要保证安全，严禁直接接触有害物质，避免直接与琼脂培养基接触，避免手套过度受污染。
2.尽量避免病原菌的污染和受到外来物质的干扰，在完成培养基的接种之后，要在无菌条件下避免接触。
3.在接种之时，尽量进行无菌操作，并严格控制培养条件，避免温度、湿度、压力等因素对实验结果产生干扰。
4.对细胞菌落有任何疑问，应及时拍照记录，并联系负责人给予指导。
医院检验微生物作业指导书
1.目的规范微生物实验室内部质量控制，确保临床报告的质量。
2.适用范围微生物实验室的所有检验项目。
3.职责实验室检验人员均需熟知并遵守本程序。
4.程序4.1分析前质量控制4.1.1检验申请单：临床医生应按照《微生物检验项目申请程序》申请临床微生物检测口头申请追加样本检验项目，必须在样本有效期内申请.并补正式的检验申请单。
4.1.2生成微生物检验标本标签：护士应在核对医嘱患者信息和检验申请信息后，按照《微生物检验标本条形码程序》生成申请单和微生物检验项目标签，并将微生物检验项目标签正确张贴于标本容器上。
4.1.3样本采集手册：实验室应制订样本采集手册，指导正确采集和处理样本。
4.1.4样本采集和运输：样本采集人员应按照《采样前患者识别程序》确认患者，按照《标本采集、运送、保存程序》采集样本，并在规定的时间和温度范围内，使用指定的运输培养基，安全运送到微生物室。
4.1.5样本的接收：样本接收人员应严格按照《标本接收、标识及信息录人程序》《标本拒收程序》对样本接收或拒收，并记录。
4.1.6微生物检验标本信息输人：微生物实验室接种岗位检验人员严格按照相关的微生物标本检验信息输，人程序录人，核对患者信息和标本信息等资料。
4.1.7样本储存：微生物实验室接种岗位检验人员按照相关的微生物标本检验前储存程序正确铺存未能及时处理的标本，已经检验的样本应在保证其性质稳定的条件下，将样本以适当的方式保留到规定时间内，以便能在出具结果报告后可以复查，成做补无检食。
4.2分析中质量控制4.2.1试剂的质量控制4.2.1.1所有试剂用于检测标本前，必须做质控以验证试剂性能并记录质控结果，只有质控合格才可使用（表2-1-1）。
质控应遵循以下原则。
4.2.1.1.1使用中的染色剂（革兰染色、特殊染色和荧光染色），至少每周（若检测频率小于每周1次,则实验当日）用已知阳性和阴性（适用时）的质控菌株检测。
4.2.1.2平行试验：新批号试剂使用前须用老试利或参考材料平行试验。