病毒感染的实验室诊断PPT课件
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流感病毒感染的诊断、治疗和预防PPT课件
乙型流感病毒
变异较少，主要引起局部 暴发。
丙型流感病毒
较为稳定，主要引起散发 或小范围流行。
感染途径与易感人群
感染途径
主要通过飞沫传播，也可通过接 触污染物品传播。
易感人群
普遍易感，尤其是儿童、老年人 、孕妇及有基础疾病的人群。
临床表现及分型
单纯型流感
胃肠型流感
起病急，高热，寒战，头痛，乏力，食欲 减退，全身肌肉酸痛等中毒症状明显，上 呼吸道卡他症状较轻。
除发热外，以呕吐、腹痛、腹泻为显著特 点，儿童多于成人。
肺炎型流感
中毒型流感
表现为高热不退，咳嗽，咳血痰和脓性痰 ，呼吸急促，发绀，肺部可闻及湿啰音。
表现为高热、休克、呼吸衰竭、中枢神经 系统损害及弥漫性血管内凝血（DIC）等严 重临床综合征。
02 诊断方法与策略
实验室检查方法
病原学检查
通过病毒分离培养、核酸检测等技术 手段，检测流感病毒的存在。
对症治疗措施
解热镇痛药
如对乙酰氨基酚、布洛芬等，用 于缓解发热、头痛、肌肉酸痛等
症状。
止咳祛痰药
如氨溴索、复方甘草片等，用于 改善咳嗽、咳痰等症状。
通气支持
对于重症患者，可能需要机械通 气支持以维持呼吸功能。
免疫调节治疗
免疫增强剂
如胸腺肽、干扰素等，可增强机体免疫力，提高 抗病毒能力。
炎症抑制剂
流感病毒的变异
流感病毒容易发生变异，导致疫苗效 果减弱，需要不断更新疫苗以应对新 的病毒株。
抗病毒药物研发
目前针对流感病毒的抗病毒药物有限 ，且容易出现耐药性，因此需要加大 抗病毒药物研发力度。
基层医疗水平参差不齐
一些基层医疗机构在流感病毒感染的 诊断、治疗和预防方面存在不足，需 要加强培训和技术支持。
病毒—病毒感染的检测方法(动物微生物课件)
某些病毒的血凝素纤突,能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种 凝集红细胞的现象称为血凝（hemagglutination，HA）,也称直接血凝 反应（红细胞不流淌）,利用这种特性设计的试验称血凝试验。
病
毒
红
颗
细
粒
胞
（二）血凝抑制试验（HI）原理：
当病毒悬液（抗原）中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗 粒的血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触 。这时红细胞的凝集就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血 凝抑制反应。
（1）免疫凝集电镜技术
抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚集成 团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏感性，确 定病毒的血清学性质。
（2）免疫电镜定位技术
特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标 记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察 到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。
++：约有半数红细胞凝集，凝集的红细胞在孔壁上铺成薄膜，面积较 小；未凝集的红细胞（约50%）沉积在孔底中心聚成小圆点。如第一排 第9孔。 +：只有少数红细胞凝集；未凝集的红细胞（约75%）沉积在孔底中心聚 集形成小圆盘状，凝集的红细胞在此小圆盘周围。如第一排第10孔。 -：红细胞不凝集，沉积于孔底，形成一圆盘状或钮扣状，边缘整齐。 如第12孔、11孔。
死体积 液样
活塞 套筒
吸嘴（一次性）
外置活塞式移液器
外置活塞式移液器
这种移液器是采用外置式活塞，活塞设计在吸 头内部，直接与液体接触，活塞与液体之间没 有空气段。
三、 电子显微镜检查
病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电 子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非 常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者 接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微 镜检查，直接观察病毒粒子。
病
毒
红
颗
细
粒
胞
（二）血凝抑制试验（HI）原理：
当病毒悬液（抗原）中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗 粒的血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触 。这时红细胞的凝集就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血 凝抑制反应。
（1）免疫凝集电镜技术
抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚集成 团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏感性，确 定病毒的血清学性质。
（2）免疫电镜定位技术
特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标 记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察 到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。
++：约有半数红细胞凝集，凝集的红细胞在孔壁上铺成薄膜，面积较 小；未凝集的红细胞（约50%）沉积在孔底中心聚成小圆点。如第一排 第9孔。 +：只有少数红细胞凝集；未凝集的红细胞（约75%）沉积在孔底中心聚 集形成小圆盘状，凝集的红细胞在此小圆盘周围。如第一排第10孔。 -：红细胞不凝集，沉积于孔底，形成一圆盘状或钮扣状，边缘整齐。 如第12孔、11孔。
死体积 液样
活塞 套筒
吸嘴（一次性）
外置活塞式移液器
外置活塞式移液器
这种移液器是采用外置式活塞，活塞设计在吸 头内部，直接与液体接触，活塞与液体之间没 有空气段。
三、 电子显微镜检查
病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电 子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非 常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者 接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微 镜检查，直接观察病毒粒子。
EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用PPT课件
3
EB病毒持续感染示意图
• 原发感染后， EBV 在人体B淋巴细胞建 立潜伏感染，只表 达潜伏抗原，受感 染者成为终生病毒 携带者
• EBV健康携带者咽 部不定时排毒
• 在机体免疫功能下 降和某些因素触发 下 ， 潜 伏 的 EBV 可 以被再激活，引起 病毒复制及临床症 状
Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305–319
在罕见的病例中抗CA 抗体(IgM)会持续阳 性
20-30% 的EBV新近感染 抗 EA抗体（IgG）阴 性
抗EBNA抗体(IgG)阴 性
14
实验室指标四：EBV病毒核酸检测
• Real-time PCR是目前最主要的监测EBV载量的方法，可以指导治 疗和判断疗效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等
• 人群感染率高，终身潜伏感染， 具有感染-潜伏-活化的特性
• 肿瘤相关病毒，每年EBV相关 肿瘤死亡病例达15-20万
• 与很多疾病相关，几乎可引起 所有脏器和组织的相关疾病
• 细胞免疫非常重要
Khan G et al. Infectious Agents and Cancer, 2014, 9:38.
6
临床实践诊断EBV感染时需要回答的问题
• 是否感染EBV? • EBV感染的时相？ • 是否EBV活动性感染？ • 组织或器官中EBV感染的细胞定位如何？
7
EBV感染相关的实验室指标
• 血常规：淋巴细胞比例＞50%（学龄以上儿童）
• 嗜异凝集抗体 • 异型淋巴细胞
非特异 性指标
• EBV特异性抗体
• 荧光定量PCR检测EBV核酸 • EBERs原位杂交实验：EBV感染受累的组织学证据
特异性 指标
EB病毒持续感染示意图
• 原发感染后， EBV 在人体B淋巴细胞建 立潜伏感染，只表 达潜伏抗原，受感 染者成为终生病毒 携带者
• EBV健康携带者咽 部不定时排毒
• 在机体免疫功能下 降和某些因素触发 下 ， 潜 伏 的 EBV 可 以被再激活，引起 病毒复制及临床症 状
Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305–319
在罕见的病例中抗CA 抗体(IgM)会持续阳 性
20-30% 的EBV新近感染 抗 EA抗体（IgG）阴 性
抗EBNA抗体(IgG)阴 性
14
实验室指标四：EBV病毒核酸检测
• Real-time PCR是目前最主要的监测EBV载量的方法，可以指导治 疗和判断疗效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等
• 人群感染率高，终身潜伏感染， 具有感染-潜伏-活化的特性
• 肿瘤相关病毒，每年EBV相关 肿瘤死亡病例达15-20万
• 与很多疾病相关，几乎可引起 所有脏器和组织的相关疾病
• 细胞免疫非常重要
Khan G et al. Infectious Agents and Cancer, 2014, 9:38.
6
临床实践诊断EBV感染时需要回答的问题
• 是否感染EBV? • EBV感染的时相？ • 是否EBV活动性感染？ • 组织或器官中EBV感染的细胞定位如何？
7
EBV感染相关的实验室指标
• 血常规：淋巴细胞比例＞50%（学龄以上儿童）
• 嗜异凝集抗体 • 异型淋巴细胞
非特异 性指标
• EBV特异性抗体
• 荧光定量PCR检测EBV核酸 • EBERs原位杂交实验：EBV感染受累的组织学证据
特异性 指标
感染性疾病实验室诊断ppt演示课件
②败血症
③毒血症 ④脓毒血症
. 6
(三）按病原体来源
外源性感染
内源性感染
.
7
三、感染性疾病的实验诊断
（一）一般实验检测 WBC常规检查 C-反应蛋白（CRP）
血清降钙素原（PCT）
器官功能改变的检测
.
8
（二）病原学实验诊断 临床病原体检查目的
明确感染病原体 指导治疗，预防，判断预后
.
9
第二节 感染性疾病的常用病原学检测
体外联合药物敏感试验
.
51
第三节 常见感染性疾病的实验诊断
.
52
一、血流感染
（一）引起血流感染常见微生物与常见疾病
常见微生物
革兰阳性球菌：葡萄球菌、 链球菌、肠球菌 革兰阴性杆菌：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷 伯菌、沙门菌
真菌：
病毒：HBV、HCV
血流感染常见疾病
细菌：菌血症、败血症、脓毒血症 真菌：真菌血症
.
47
2. 外毒素的测定
（1）体内毒力试验
若先给动物注射抗毒素，然后再注射外毒素，则动物
细菌外毒素对机体的毒性作用，可被相应抗毒素中和， 不产生中毒症状。
.
48
（2）体外毒力试验
以细菌外毒素的特异性免疫血清为抗体与被检细菌外毒素(抗 原)进行抗原抗体反应，来检测外毒素，从而鉴定细菌是否产生 该种毒素。 白喉棒状杆菌的Elek平板毒力测定 （３) 免疫学方法：如ELISA法
PNA-FISH PCR
Serological detection
Direct microscopic examination
First report
诺如病毒研究进展及一起邮轮诺如病毒感染疫情的实验室检测课件.ppt
中的诺瓦克样病毒特异性IgG抗体检测表明，北京市诺瓦
克样病毒抗体总检出率为88.8％以上。太原市总检出率在
78.6％以上。
1998-2002在福州地区用RT-PCR方法对288份腹泻患者粪
便标本诺瓦克样病毒病原检测显示，诺瓦克样病毒基因组I
的阳性率为11.1％，主要是7岁以上儿童及成人；诺瓦克样
病毒基因组Ⅱ的阳性率为 28.8％，主要是6月龄至3岁婴幼
elementary school in Norwalk OH: 50% of students and teachers
developed gastroenteritis
➢ Kaplan used immune electronmicroscopy to identify viral particles
in the stools of volunteers infected with the “Norwalk” strain
➢ Virus initially classified as small round viruses, later reclassified as
caliciviruses when genome cloned
的阳性率只有20%左右。固相免疫电镜的方法是将特异性抗体直接包被载网，同时加入蛋
白A增加抗体与标本中抗原结合的机会，从而提高检测的灵敏度。上述三种方法都要求观察
者具有丰富的经验，同时，精密的检测仪器、较大的劳动强度，都制约了该方法在NVs检测
中的应用。
免疫学检测（EIA）主要通过检测标本中的抗原来确认诺如病毒。该方法操作
•
•
•
•
Dr. Albert Kapikian
1972, electron microscopy
克样病毒抗体总检出率为88.8％以上。太原市总检出率在
78.6％以上。
1998-2002在福州地区用RT-PCR方法对288份腹泻患者粪
便标本诺瓦克样病毒病原检测显示，诺瓦克样病毒基因组I
的阳性率为11.1％，主要是7岁以上儿童及成人；诺瓦克样
病毒基因组Ⅱ的阳性率为 28.8％，主要是6月龄至3岁婴幼
elementary school in Norwalk OH: 50% of students and teachers
developed gastroenteritis
➢ Kaplan used immune electronmicroscopy to identify viral particles
in the stools of volunteers infected with the “Norwalk” strain
➢ Virus initially classified as small round viruses, later reclassified as
caliciviruses when genome cloned
的阳性率只有20%左右。固相免疫电镜的方法是将特异性抗体直接包被载网，同时加入蛋
白A增加抗体与标本中抗原结合的机会，从而提高检测的灵敏度。上述三种方法都要求观察
者具有丰富的经验，同时，精密的检测仪器、较大的劳动强度，都制约了该方法在NVs检测
中的应用。
免疫学检测（EIA）主要通过检测标本中的抗原来确认诺如病毒。该方法操作
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Dr. Albert Kapikian
1972, electron microscopy
2024版最新传染病诊断标准ppt课件
性。
有些传染病还有季节性或地方性。
常见传染病类型
01
02
03
04
按照病原体不同，传染病可分 为病毒性传染病、细菌性传染
病、寄生虫性传染病等。
常见的病毒性传染病包括流感、 艾滋病、病毒性肝炎等。
常见的细菌性传染病包括肺结 核、细菌性痢疾、伤寒等。
常见的寄生虫性传染病包括血 吸虫病、疟疾等。
发病机制和传播途径
丙型肝炎
多数患者无明显症状，部分患者可出现乏力、食欲减退等 症状。实验室检测丙型肝炎病毒抗体阳性，或病毒核酸检 测阳性。
性传播疾病诊断标准
01
梅毒
硬下疳、梅毒疹等皮肤损害表现，可伴有发热、头痛等全身症状。实验
室检测梅毒螺旋体抗体阳性，或暗视野显微镜检查发现梅毒螺旋体。
02
淋病
尿道口红肿、流脓性分泌物等尿道炎表现，可伴有发热、头痛等全身症
伤寒
持续发热、表情淡漠、相对缓脉、玫 瑰疹、肝脾肿大等临床表现。实验室 检测伤寒杆菌抗体阳性，或血培养伤 寒杆菌阳性。
血液系统传染病诊断标准
艾滋病
发热、盗汗、淋巴结肿大等急性期症状，随后出现机会性 感染和肿瘤等临床表现。实验室检测HIV抗体阳性，或病 毒核酸检测阳性。
乙型肝炎
乏力、食欲减退、恶心、呕吐等症状，部分患者可出现黄 疸。实验室检测乙型肝炎病毒表面抗原阳性，或病毒核酸 检测阳性。
发热、咳嗽、流涕等卡他症状， 眼结合膜炎，特征性皮疹。实验 室检测麻疹病毒抗体阳性，或病
毒核酸检测阳性。
消化道传染病诊断标准
细菌性痢疾
甲型肝炎
发热、腹痛、腹泻等急性胃肠炎症状， 粘液脓血便。实验室检测痢疾杆菌阳 性。
急性起病，发热、乏力、食欲不振、 恶心、呕吐等症状。实验室检测甲型 肝炎病毒抗体阳性，或病毒核酸检测 阳性。
有些传染病还有季节性或地方性。
常见传染病类型
01
02
03
04
按照病原体不同，传染病可分 为病毒性传染病、细菌性传染
病、寄生虫性传染病等。
常见的病毒性传染病包括流感、 艾滋病、病毒性肝炎等。
常见的细菌性传染病包括肺结 核、细菌性痢疾、伤寒等。
常见的寄生虫性传染病包括血 吸虫病、疟疾等。
发病机制和传播途径
丙型肝炎
多数患者无明显症状，部分患者可出现乏力、食欲减退等 症状。实验室检测丙型肝炎病毒抗体阳性，或病毒核酸检 测阳性。
性传播疾病诊断标准
01
梅毒
硬下疳、梅毒疹等皮肤损害表现，可伴有发热、头痛等全身症状。实验
室检测梅毒螺旋体抗体阳性，或暗视野显微镜检查发现梅毒螺旋体。
02
淋病
尿道口红肿、流脓性分泌物等尿道炎表现，可伴有发热、头痛等全身症
伤寒
持续发热、表情淡漠、相对缓脉、玫 瑰疹、肝脾肿大等临床表现。实验室 检测伤寒杆菌抗体阳性，或血培养伤 寒杆菌阳性。
血液系统传染病诊断标准
艾滋病
发热、盗汗、淋巴结肿大等急性期症状，随后出现机会性 感染和肿瘤等临床表现。实验室检测HIV抗体阳性，或病 毒核酸检测阳性。
乙型肝炎
乏力、食欲减退、恶心、呕吐等症状，部分患者可出现黄 疸。实验室检测乙型肝炎病毒表面抗原阳性，或病毒核酸 检测阳性。
发热、咳嗽、流涕等卡他症状， 眼结合膜炎，特征性皮疹。实验 室检测麻疹病毒抗体阳性，或病
毒核酸检测阳性。
消化道传染病诊断标准
细菌性痢疾
甲型肝炎
发热、腹痛、腹泻等急性胃肠炎症状， 粘液脓血便。实验室检测痢疾杆菌阳 性。
急性起病，发热、乏力、食欲不振、 恶心、呕吐等症状。实验室检测甲型 肝炎病毒抗体阳性，或病毒核酸检测 阳性。
病毒及病毒类疾病的实验室诊断—病毒的特性和致病性(动物微生物技术课件)
动物微生物应用技术
任务三：病毒的特性和致病性
任务三：病毒的其他特性和致病性
一、干扰现象和干扰素
干扰现象：当两种病毒感染同一细胞或机体时，一种病毒抑制另 一种病毒的进入或复制，称病毒的干扰现象。 先进入细胞的病毒干扰后进入的病毒；死的干扰活的；缺陷病
毒干扰完整病毒。 干扰现象的机制：
① 诱导干扰素的产生，抑制被干扰病毒的生物合成； ② 占据表面受体或改变宿主细胞代谢途径； ③ 竞争干扰，病毒增值时，消耗了宿主细胞的原料等。
8/27/2023
12
任务三：病毒的其他特性和致病性
五、病毒的致病性——感染途径
急性感染：一般病程较短，病毒常随疾病的痊愈而被消灭 或自体内排除。
持续感染：病毒在体内较长时间存在，在一定时期内无明
显症状。（1）慢性感染（2）潜伏感染（3）慢病毒感染
局部感染
全身感染 细胞外、细胞间、细胞核播散
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
14
8/27/2023
10
任务三：病毒的其他特性和致病性
四、病毒的遗传与变异
病毒遗传的特点：遗传方式简单；受宿主细胞影 响；易产生突变。
病毒变异的类型：突变；重组；重配；表型混合。
病毒基因组研究的意义：保护性表位的研究；高变 区的研究；毒力相关基因的研究、耐药性的研究。
8/27/2023
11
任务三：病毒的其他特性和致病性
4
任务三：病毒的其他特性和致病性
一、干扰现象和干扰素
干扰素：当机体活细胞受病毒感染或干扰素诱生剂刺激 后产生的能干扰病毒复制的一种小分子蛋白质。
动物体内干扰素基因 活化 干扰素mRNA
翻
干扰素诱生剂
译
▪ 干扰素诱生机理 干扰素
任务三：病毒的特性和致病性
任务三：病毒的其他特性和致病性
一、干扰现象和干扰素
干扰现象：当两种病毒感染同一细胞或机体时，一种病毒抑制另 一种病毒的进入或复制，称病毒的干扰现象。 先进入细胞的病毒干扰后进入的病毒；死的干扰活的；缺陷病
毒干扰完整病毒。 干扰现象的机制：
① 诱导干扰素的产生，抑制被干扰病毒的生物合成； ② 占据表面受体或改变宿主细胞代谢途径； ③ 竞争干扰，病毒增值时，消耗了宿主细胞的原料等。
8/27/2023
12
任务三：病毒的其他特性和致病性
五、病毒的致病性——感染途径
急性感染：一般病程较短，病毒常随疾病的痊愈而被消灭 或自体内排除。
持续感染：病毒在体内较长时间存在，在一定时期内无明
显症状。（1）慢性感染（2）潜伏感染（3）慢病毒感染
局部感染
全身感染 细胞外、细胞间、细胞核播散
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
14
8/27/2023
10
任务三：病毒的其他特性和致病性
四、病毒的遗传与变异
病毒遗传的特点：遗传方式简单；受宿主细胞影 响；易产生突变。
病毒变异的类型：突变；重组；重配；表型混合。
病毒基因组研究的意义：保护性表位的研究；高变 区的研究；毒力相关基因的研究、耐药性的研究。
8/27/2023
11
任务三：病毒的其他特性和致病性
4
任务三：病毒的其他特性和致病性
一、干扰现象和干扰素
干扰素：当机体活细胞受病毒感染或干扰素诱生剂刺激 后产生的能干扰病毒复制的一种小分子蛋白质。
动物体内干扰素基因 活化 干扰素mRNA
翻
干扰素诱生剂
译
▪ 干扰素诱生机理 干扰素
感染性疾病实验诊断ppt课件
组织病理学诊断
组织病理学诊断是通过采集病变组织样 本，进行病理学检查，观察组织结构和 细胞形态的变化，从而确定感染性疾病
的一种实验诊断方法。
组织病理学诊断可以用于确诊各种感染 性疾病，如肝炎、肺炎、肿瘤等。
组织病理学诊断的优点是能够直接观察 病变组织和细胞形态的变化，有助于明 确诊断。缺点是需要采集病变组织样本
感染性疾病的传播途径多样，包括空 气传播、接触传播、血液传播等。
感染性疾病是全球范围内的主要疾病 负担，对人类健康构成严重威胁。
实验诊断的重要性
实验诊断是感染性疾病诊断的 重要手段，通过实验室检测可 以快速、准确地确定病原体的 种类和感染程度。
实验诊断有助于指导临床治疗 ，为制定合理的治疗方案提供 科学依据。
微生物培养的优点是能够直接观察病原体的生长和繁殖情况，有助于明确诊断。缺 点是培养时间较长，需要一定的实验室设备和经验。
免疫学检测
免疫学检测是通过检测人体内的抗原或抗体，间接推断是否存在感染的一种实验诊断方法。
常见的免疫学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析试验、间接免疫 荧光试验等。
THANKS
感谢观看
优化检测流程
对检测流程进行优化，减 少操作环节和时间，降低 误差率，提高检测效率。
标准化试剂和仪器
推动试剂和仪器的标准化 ，确保不同实验室之间的 检测结果具有可比性。
加强实验室质量控制
建立质控体系
制定严格的质量控制标准 和质量管理体系，确保实 验室操作的规范性和数据 的可靠性。
定期质控检查
对实验室的仪器、试剂、 操作过程等进行定期检查 和校准，及时发现并纠正 问题。
多重检测与高通量检测
多重检测
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3.无菌送检
• 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 • 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉菌素
YY
4
二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒分离和鉴定的一般程序
标本采集
标本处理后接种
动物接种 观察发病 抗原检测 抗体检测 病理检查
YY
组织培养
CPE EM
病毒感染的实验室诊断
YY
1
病毒感染的实验诊断方法
➢病原学诊断
➢病毒分离培养 ➢显微镜检查 ➢抗原检测 ➢核酸检测
➢血清学诊断
➢ 抗体检测 IgM、IgG
YY
2
一、标本采集与运送
（一）标本采集 ➢采集时间：尽早采集（越早越好） ➢标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择
YY
3
（二）标本的运送与保存
接种途径 按病毒侵袭部位选择相应的接种途径：
• 乙型脑炎病毒及狂犬病毒 小鼠脑内接种 • 柯萨奇病毒 乳鼠腹腔接种 • 乙肝病毒 黑猩猩静脉注射 • 流感病毒 鼻腔滴种
用途
• 分离鉴定病毒，制备疫苗，制备抗血清
YY
11
（三）病毒的鉴定
病毒的初步鉴定
• 动物感染范围及ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ伏期 • 对鸡胚的敏感性 • 在细胞培养中的表现 • 理化性质的测定
1.低温送检
• 4℃可保存数小时 •-70℃可长期保存 • -10 ～ -20℃下病毒易灭活，不可用于保存病毒标本 • 对冷冻标本应避免反复冻融
2.保湿送检
• 50%甘油盐水保存送检 • 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）含0.5%明
胶或牛血清白蛋白的Hank’s液
受感染的宿主细胞膜含 病毒抗原（血凝素），可吸附 鸡、豚鼠或猴红细胞
如果在培养瓶中加入相应 的血凝素抗血清，则不出现红 细胞吸附现象，即红细胞吸附 抑制试验阳性
YY
18
（6）血凝及血凝抑制试验
含有血凝素的病毒能吸附一定种类的哺乳动物或禽类的 红细胞，使红细胞凝集。该现象可被相应的血凝素抗体抑制， 称为血凝抑制试验，可用于分型。
病毒感染引起的死细胞的区域。一个空斑由一个病毒颗粒 感染 所致，利用空斑可纯化病毒。
• 不同种类病毒形成 的空斑大小和形状不同，可用于鉴定
病毒。
YY
16
（4） 干扰现象
当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时，其中一种 病毒可抑制另一种病毒的增殖，称为病毒的干扰现象。
YY
17
（5）红细胞吸附及吸附抑制试验
最后鉴定
• 血清学鉴定: 中和试验、补体结合试验、血凝抑制
试验等 分离的新病毒，必须进行系统的鉴定
YY
12
病毒在细胞培养中的表现
（1）细胞代谢作用改变（培养液颜色变化） 正常细胞代谢： 培养液由红变黄 病毒增殖，抑制细胞代谢：培养液颜色不变或更红
YY
13
（2）细胞病变效应（cytopathic effect ，CPE）
YY
19
病毒的理化性质测定
主要用于新发现病毒的鉴定 （1）病毒的大小及形态 电镜直接观察 （2）核酸类型
5-溴-2-脱氧尿苷（BUDR）能抑制DNA复制，而不抑 制RNA病毒。 （3）乙醚敏感试验
有包膜病毒对乙醚敏感，经乙醚作用后，失去感染性 （4）耐酸试验
肠道病毒耐酸，在pH3的环境下稳定，鼻病毒不耐酸， 在pH3的环境下被灭活
（2）器官培养 人胚气管－呼吸道病毒；人胚肠－肠道病 毒
（3）细胞培养 最常用
– 原代和次代细胞培养 – 二倍体细胞培养 – 传代细胞培养
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原代和次代培养细胞
动物新鲜组织（人胚肾等）→胰酶消化→营养液培养→ 单层细胞（原代细胞） 原代细胞→胰酶消化→转种培养（次代培养细胞） 对病毒敏感，但制备费时费力，只能传2～3代。 • 二倍体细胞株 原代细胞反复传代（50～70代）仍保持二 倍体染色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。 • 传代细胞系 来源于肿瘤细胞或突变的二倍体细胞，能在 体外无限增殖。增殖快，不易衰老，易于传代保存。常用 于病毒的分离鉴定，但不能用于制备疫苗。
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病毒的血清学鉴定
• 中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等
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三、病毒的血清学诊断
单份血清IgM测定 早期诊断 双份血清IgG测定 4倍以上增长，有诊断意义
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病毒血清学试验常用方法
（一）中和试验
原理 抗体与相应病毒结合后，能够使病毒失去感染性。 V.＋Ab → 失去感染易感细胞的能力 一定量抗体可中和一定量病毒。 中和试验的必要条件：
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2. 鸡胚培养
常用于粘病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养
接种途径及方法
38～39℃
新鲜受精卵
7～13d
卵黄囊接种 羊膜腔接种 接种病毒 尿囊腔接种 绒毛尿囊膜接种
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绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤
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3. 动物接种
常用动物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。不同病对 动物的敏感性不同，根据病毒种类加以选择。
1. 活病毒 2. 敏感细胞、鸡胚或动物
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中和试验的常用方法：
•固定V.，稀释血清，测定抗体效价 （常用） • 固定血清，稀释V.，求中和指数
中和试验的优缺点
• 特异，敏感，既可检测抗体，也可测定抗原（定属、定型）。 • 既可用细胞培养做，也可用动物或鸡胚接种，以细胞最常用。 • 检测IgG，不能用于早期诊断，常用用于流行病学调查。
• 病毒在细胞内增殖后，使宿主的形态发 生不同程度改变，这种由病毒增殖引起 的细胞形态变化，称为细胞病变效应。
• 细胞变圆、融合、肿胀、细胞空泡、核 浓缩、形成嗜酸性或嗜碱性包涵体等。
• 某些病毒感染细胞后不出现CPE
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（3）空斑现象
• 空斑（plaque）是指在单层细胞中，由活细胞包围的由
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（二）补体结合试验
• 检测IgM，常用于早期诊断。 • 不需活细胞，比中和试验简单，省时。
（三）IF及ELISA
• 方法简单、快速、敏感性高。
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四、病毒感染的快速诊断
（一）病毒的形态学检查
1.光学显微镜检查 病变组织中找包涵体。
包涵体 空斑试验 红细胞吸附 中和试验
鸡胚接种
卵黄囊膜 尿囊液 羊膜腔液 绒毛尿囊膜
观察囊膜病变 血凝试验 血凝抑制试验
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（二）病毒的分离
• 组织培养 • 鸡胚培养 • 动物接种
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1.组织培养
将人或动物离体的活组织或分散的活细胞在体外人工控制的 条件下使其生长繁殖的一种技术。
组织培养的类型
（1）组织块培养
• 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 • 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉菌素
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二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒分离和鉴定的一般程序
标本采集
标本处理后接种
动物接种 观察发病 抗原检测 抗体检测 病理检查
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组织培养
CPE EM
病毒感染的实验室诊断
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病毒感染的实验诊断方法
➢病原学诊断
➢病毒分离培养 ➢显微镜检查 ➢抗原检测 ➢核酸检测
➢血清学诊断
➢ 抗体检测 IgM、IgG
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一、标本采集与运送
（一）标本采集 ➢采集时间：尽早采集（越早越好） ➢标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择
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（二）标本的运送与保存
接种途径 按病毒侵袭部位选择相应的接种途径：
• 乙型脑炎病毒及狂犬病毒 小鼠脑内接种 • 柯萨奇病毒 乳鼠腹腔接种 • 乙肝病毒 黑猩猩静脉注射 • 流感病毒 鼻腔滴种
用途
• 分离鉴定病毒，制备疫苗，制备抗血清
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（三）病毒的鉴定
病毒的初步鉴定
• 动物感染范围及ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ伏期 • 对鸡胚的敏感性 • 在细胞培养中的表现 • 理化性质的测定
1.低温送检
• 4℃可保存数小时 •-70℃可长期保存 • -10 ～ -20℃下病毒易灭活，不可用于保存病毒标本 • 对冷冻标本应避免反复冻融
2.保湿送检
• 50%甘油盐水保存送检 • 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）含0.5%明
胶或牛血清白蛋白的Hank’s液
受感染的宿主细胞膜含 病毒抗原（血凝素），可吸附 鸡、豚鼠或猴红细胞
如果在培养瓶中加入相应 的血凝素抗血清，则不出现红 细胞吸附现象，即红细胞吸附 抑制试验阳性
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（6）血凝及血凝抑制试验
含有血凝素的病毒能吸附一定种类的哺乳动物或禽类的 红细胞，使红细胞凝集。该现象可被相应的血凝素抗体抑制， 称为血凝抑制试验，可用于分型。
病毒感染引起的死细胞的区域。一个空斑由一个病毒颗粒 感染 所致，利用空斑可纯化病毒。
• 不同种类病毒形成 的空斑大小和形状不同，可用于鉴定
病毒。
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（4） 干扰现象
当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时，其中一种 病毒可抑制另一种病毒的增殖，称为病毒的干扰现象。
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（5）红细胞吸附及吸附抑制试验
最后鉴定
• 血清学鉴定: 中和试验、补体结合试验、血凝抑制
试验等 分离的新病毒，必须进行系统的鉴定
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病毒在细胞培养中的表现
（1）细胞代谢作用改变（培养液颜色变化） 正常细胞代谢： 培养液由红变黄 病毒增殖，抑制细胞代谢：培养液颜色不变或更红
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（2）细胞病变效应（cytopathic effect ，CPE）
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病毒的理化性质测定
主要用于新发现病毒的鉴定 （1）病毒的大小及形态 电镜直接观察 （2）核酸类型
5-溴-2-脱氧尿苷（BUDR）能抑制DNA复制，而不抑 制RNA病毒。 （3）乙醚敏感试验
有包膜病毒对乙醚敏感，经乙醚作用后，失去感染性 （4）耐酸试验
肠道病毒耐酸，在pH3的环境下稳定，鼻病毒不耐酸， 在pH3的环境下被灭活
（2）器官培养 人胚气管－呼吸道病毒；人胚肠－肠道病 毒
（3）细胞培养 最常用
– 原代和次代细胞培养 – 二倍体细胞培养 – 传代细胞培养
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原代和次代培养细胞
动物新鲜组织（人胚肾等）→胰酶消化→营养液培养→ 单层细胞（原代细胞） 原代细胞→胰酶消化→转种培养（次代培养细胞） 对病毒敏感，但制备费时费力，只能传2～3代。 • 二倍体细胞株 原代细胞反复传代（50～70代）仍保持二 倍体染色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。 • 传代细胞系 来源于肿瘤细胞或突变的二倍体细胞，能在 体外无限增殖。增殖快，不易衰老，易于传代保存。常用 于病毒的分离鉴定，但不能用于制备疫苗。
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病毒的血清学鉴定
• 中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等
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三、病毒的血清学诊断
单份血清IgM测定 早期诊断 双份血清IgG测定 4倍以上增长，有诊断意义
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病毒血清学试验常用方法
（一）中和试验
原理 抗体与相应病毒结合后，能够使病毒失去感染性。 V.＋Ab → 失去感染易感细胞的能力 一定量抗体可中和一定量病毒。 中和试验的必要条件：
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2. 鸡胚培养
常用于粘病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养
接种途径及方法
38～39℃
新鲜受精卵
7～13d
卵黄囊接种 羊膜腔接种 接种病毒 尿囊腔接种 绒毛尿囊膜接种
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绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤
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3. 动物接种
常用动物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。不同病对 动物的敏感性不同，根据病毒种类加以选择。
1. 活病毒 2. 敏感细胞、鸡胚或动物
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中和试验的常用方法：
•固定V.，稀释血清，测定抗体效价 （常用） • 固定血清，稀释V.，求中和指数
中和试验的优缺点
• 特异，敏感，既可检测抗体，也可测定抗原（定属、定型）。 • 既可用细胞培养做，也可用动物或鸡胚接种，以细胞最常用。 • 检测IgG，不能用于早期诊断，常用用于流行病学调查。
• 病毒在细胞内增殖后，使宿主的形态发 生不同程度改变，这种由病毒增殖引起 的细胞形态变化，称为细胞病变效应。
• 细胞变圆、融合、肿胀、细胞空泡、核 浓缩、形成嗜酸性或嗜碱性包涵体等。
• 某些病毒感染细胞后不出现CPE
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（3）空斑现象
• 空斑（plaque）是指在单层细胞中，由活细胞包围的由
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（二）补体结合试验
• 检测IgM，常用于早期诊断。 • 不需活细胞，比中和试验简单，省时。
（三）IF及ELISA
• 方法简单、快速、敏感性高。
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四、病毒感染的快速诊断
（一）病毒的形态学检查
1.光学显微镜检查 病变组织中找包涵体。
包涵体 空斑试验 红细胞吸附 中和试验
鸡胚接种
卵黄囊膜 尿囊液 羊膜腔液 绒毛尿囊膜
观察囊膜病变 血凝试验 血凝抑制试验
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（二）病毒的分离
• 组织培养 • 鸡胚培养 • 动物接种
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1.组织培养
将人或动物离体的活组织或分散的活细胞在体外人工控制的 条件下使其生长繁殖的一种技术。
组织培养的类型
（1）组织块培养