小球藻常用培养基 SE培养基

小球藻常用培养基 SE培养基
小球藻常用培养基 SE培养基

SE (Brostol’s solution)

Component Amount Stock Solution

(1) NaNO3 1 mL/L 25 g/100mldH2O

(2) K2HPO4 1 mL/L 7.5 g/100 mL dH2O

(3) MgSO4·7H2O 1 mL/L 7.5 g/100 mL dH2O

(4 ) CaCl2·2H2O 1 mL/L 2.5 g/100 mL dH2O

(5 ) KH2PO4 1 mL/L 17.5 g/100 mL dH2O

(6 ) NaCl 1mL/L 2.5g/100ml dH2O

(7) FeCl3. 6H2O 1mL/L 0.05g/100ml dH2O

(8) EDTA-Fe 1mL/L

1N HCl: 取4.1ml浓盐酸用蒸馏水稀释至50ml

1N EDTA-Na 2称取0.9306g 溶解至50ml 蒸馏水中

称取FeCl3. 6H2O 0.901g 溶于10ml以上步骤已经配制完成的1N HCl 中,然后

与10ml已经配制完成的0.1N EDTA-Na 2混合,加入蒸馏水稀释至1000ml。

(9) Trace mental solution 1ml/L

H3BO3 2.86g/L dH2O

MnCl2·4H2O 1.86g/L dH2O

ZnSO4·7H2O 0.22g/L dH2O

Na2MoO4.2H2O 0.39g/L dH2O

CuSO4. 5 H2O 0.08g/L dH2O

Co(NO3)2.6 H2O 0.05g/L dH2O

(10)土壤提取液40 mL/L

土壤提取液配制方法:

取花园土未施过肥200g置于烧杯或三角瓶中,加入蒸馏水1000毫升,瓶口

用透气塞封口,在水浴中沸水加热3小时,冷却,沉淀24小时,此过程连续进行3次,然后过滤,取上清液,于高压灭菌锅中灭菌后于4℃冰箱中保存备用。

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后, 定容至50 ml。 3. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract, 1%(W/V)NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH(约0.2 ml),调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后,4℃保存。

几种常见培养基作用

1.中国蓝平板:含有牛肉粉、蛋白胨、乳糖、琼脂、氯化钠、中国蓝、玫瑰红等成份。是一种弱选择性(亦有学者称为无抑制性)选择培养基。成份中的中国蓝为指示剂,玫瑰红为弱抑制剂,仅能抑制革兰阳性菌生长,而对大肠杆菌没有抑制作用,发酵性革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同,在此平板上的菌落颜色不同,便于鉴别菌种。根据菌落形态,可做出相应的处理或报告。例如:大肠埃希菌菌落呈蓝色;痢疾志贺菌呈淡红色;鼠伤寒沙门菌呈淡红色。 2.巧克力平板:普通营养琼脂成份添加进氯化血红素,万古霉素,辅酶A。用途:除可以分离奈瑟菌,嗜血杆菌外,由于加入了万古霉素,可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长,在分离培养上具有重要意义,不能用血平板来替代。巧克力平板含有嗜血杆菌生长需要的营养因子X因子和V因子。其原理为:绵羊血中的V因子通常处于被抑制状态,加热到80~90℃12Min即可破坏红细胞膜上的不耐热抑制物,可使V因子释放,故嗜血杆菌在加热的血琼脂培养基即巧克力琼脂培养基上生长较佳。 3. TCBS:含酵母膏粉蛋白胨氯化钠柠檬酸钠硫代硫酸钠胆酸钠牛胆粉蔗糖柠檬酸铁溴麝香草酚兰麝香草酚兰琼脂;其中:氯化钠可刺激弧菌的生长;蔗糖是可发酵的糖类;胆酸钠、牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠及较高的pH(8.6)可抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群;霍乱弧菌对酸性环境比较敏感,因此该pH值可增强其生长;硫代硫酸钠与柠檬酸铁反应作为检测硫化氢产生的指示剂;溴麝香草酚兰和麝香草酚兰是pH指示剂。利用指示剂来区分是否发酵蔗糖:副溶血性弧菌不发酵蔗糖,菌落呈蓝绿色。霍乱弧菌发酵蔗糖产酸,菌落呈黄色。TCBS常用于致病性弧菌的选择性分离,是GB2008、SN标准指定培养基。 4.MAC平板:即麦康凯琼脂培养基,用于大肠杆菌和大肠菌群的分离培养(05药典),主要成分:蛋白胨脙胨猪胆盐(或牛、羊胆盐) 氯化钠琼脂乳糖1%结晶紫水溶液0.5%中性红水溶液。麦康凯平板的原理:利用胆盐来抑制革兰阳性细菌的生长,而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用.利用乳糖发酵,中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区别开.沙门菌及志贺菌呈无色菌落,大肠埃希菌呈桃红色菌落. SS培养基 2.原理 培养基中牛肉膏、蛋白胨等为营养物;煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等抑制非病原菌生长,而胆盐能促进某些病原菌生长。因大肠埃希菌等能迅速分解乳糖产酸并与胆盐结合成胆酸,故形成中心混浊的粉红色菌落;病原菌不能分解乳糖。菌落呈透明无色,枸橼酸铁能指示硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色。硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺菌及沙门菌的有害作用并中和煌绿和中性红染料的毒性作用,且能使大肠埃希菌的红色菌落颜色鲜明。 3.用途 用于分离肠道致病菌。 SS琼脂培养基是分离沙门菌及志贺菌属的强选择性培养基,它对大肠埃希菌有较强的抑制 作用,而对肠道病原菌则无明显抑制作用。因此,可以增加粪便等标本的接种量,从而提高病原菌的检出率,是目前公认比较满意的培养基。 附注:大肠埃希菌属细菌在此培养基虽不易生长,但亦不被杀灭,故挑选病原菌菌落时,应仅挑取菌落的中心部分,否则易将其四周的杂菌一并挑入,影响结果。

培养基的配置和灭菌

培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置原则和方法。 3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基:是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌:主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1.药品:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿:天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 (一)玻璃器皿的洗涤和包装 1.玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中.用毛刷刷洗,然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡,再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2.灭菌前玻璃器皿的包装 (1)培养皿的包扎:培养皿由一盖一底组成一套,可用报纸将几套培养皿包成一包,或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内,加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 (2)移液管的包扎:在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉),它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内,并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右,棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时.可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜,吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条,然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端,约成45℃角,折叠纸条包住尖端,用左手握住移液管身,有手将移液管压紧.在桌面上向前搓转,以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条,折叠打结,准备灭菌。 (二)液体及固体培养基的配制过程1.液体培养基配制 (1)称量(假定配制1000ml培养基) 按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯(或1000ml刻度搪瓷杯)中.牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。 (2)溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量(如约700ml),用玻棒搅匀,然后,在石棉网上

细胞培养基种类

细胞培养基的选择及常用数据库 日期:2012-04-13来源:未知作者:网友点击:次细胞实验技术 经典的培养基有很多种,Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。 ◆MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的,其中增加了组分的范围及 浓度。 ◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于 贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要,将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L,这就是大家常说的低糖和高糖了。 ◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸,它可广泛应用于各种细 胞类型,包括对营养成分要求苛刻的细胞。 ◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于 克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。 ◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的,现在已广泛应用于悬浮细胞 的培养。 以前经常听到有人问,这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单,也可以好复杂。此话怎讲?如果这种细胞是购自ATCC或其他的细胞库,那很简单,问供应商就行了。或者找到相关的文献,作为参考。Invitrogen网站上有一个Cell Line Database的工具,也很好用。选择你感兴趣的细胞类型,它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等,有时还有优化好的转染步骤,很方便。Sigma网站上也有一个Media Expert,包括了培养基所有成分的功能描述、使用推介和参考文献等,它还

常用细菌培养基配方

常用抗生素 氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林(methicillin)(100mg/ml) 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml) 溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素(streptomycin)(50mg/ml) 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml) 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素(tetracyyline)(10mg/ml) 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml

实训五 常用培养基的制备

实训五常用培养基的制备 目的要求熟悉培养基制备的基本程序,会制备常用的培养基,会测定并矫正培养基的pH。 仪器及材料高压蒸汽灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、标准比色管、精密pH试纸、纱布、牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉、氯化钠、氢氧化钠、脱纤绵羊血等。 方法与步骤培养基制备的基本程序配料→溶化→测定及矫正pH→过滤→分装→灭菌→无菌检验→备用。 (一)肉膏汤培养基 1.成分牛肉膏3~5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。 2.制法将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加水后,加热溶解。矫正pH至7.4~7.6,过滤分装。置高压蒸汽灭菌器内,121.3℃20min灭菌即成。 3.用途可供一般细菌生长,同时也是制作一般培养基的基础原料。 (二)营养琼脂培养基 1.成分肉膏汤1000ml,琼脂粉20~30g。 2.制法将琼脂粉加入肉膏汤内,煮沸使其完全溶解,矫正pH7.4~7.6,过滤分装于试管或三角烧瓶中,以121.3℃灭菌20min。可制成试管斜面、高层培养基或琼脂平板。 此培养基可供一般细菌的分离培养、纯培养,观察菌落特征及保存菌种等,也可作特殊培养基的基础。 (三)血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至45~50℃,以无菌操作,加入5%~10%的无菌血液(或脱纤血),然后倾注灭菌平皿或分装试管制成斜面。供营养要求较高的细菌分离培养,亦可供溶血性的观察和保存菌种用。 (四)半固体培养基肉汤培养基中加入0.3%~0.5%琼脂粉制成,用于菌种的保存或细菌运动性观察。 (五)肉渣汤(疱肉)培养基于每支试管中加入2~3g牛肉渣及肉膏汤5~6ml,液面盖以一薄层石蜡油,经121.3℃20~30min灭菌后保存冰箱备用。此培养基用于厌氧菌的培养,必须注意,此培养基在使用时,将肉渣培养基置水浴锅煮沸10min,以驱除管内存留的氧气。 (六)pH的测定与矫正 1.精密pH试纸法取精密pH试纸一条,浸入欲测的培养基中,半秒后取出与标准比色卡比较,如为酸性,滴加1mol/L氢氧化钠中和酸。在滴加1mol/L氢氧化钠后,应充分摇匀,再用试纸测定,直至调到pH在所需的范围内。 2.标准比色管法 (1)取与标准比色管大小一致的试管2支,按(实图5-1)每管内加入不同的溶液。①培养基5ml(对照管);②标准比色管;③培养基5ml加0.02%酚红指示剂0.25ml;④蒸馏水管。 (2)对光观察比较两侧观察孔内颜色是否相同,培养基若为酸性(一般呈酸性),则向③管中慢慢加0.1mol/L氢氧化钠,每滴一次,将试管内液体摇匀,直至③④两管

实验室常用培养基的配制方法

五、实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度100 mg/ml Ampicillin 配制量50 ml 配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。 3.用0.22 μm过滤膜过滤除菌。 4.小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml) 组份浓度24 mg/mL IPTG 配制量50 mL 配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。 3.用0 22 μm过滤膜过滤除菌。 4小份分装(1 ml,份)后,-20℃保存。 X-Gal (20 mg/ml) 组份浓度20 mg/ml X-Gal 配制量50 ml 配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50 ml。 3.小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光保存。 LB培养基 组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨),0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物),1%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法 1.称取下列试剂,置于l L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1),调节pH值至7.0。 4.加去离子水将培养基定容至1 L。 5高温高压灭菌后,4。C保存。 LB/Amp培养基 组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin

植物常用培养基附加配制说明

备注:培养基和激素母液配制方法 (1)母液配制时,先向容量瓶中注入1/3定容体积的蒸馏水,再一一称取各种盐放入烧杯中溶解,装入容量瓶, 不得一次称取所有盐,混合溶解!在配制大量母液时,氯化钙最后加入。 (2)200×Fe盐溶液 称取1.39g FeSO4?7H2O溶于水(A液);称取1.865 g Na2?EDTA溶于热水(B液); 将A液缓慢倒入正在加热的B液中,加水接近250ml,煮沸,混合液颜色变深,冷却到室温,定容到250ml后,置于棕色试剂瓶内4℃保存。 (3)0.5mg/ml 2,4-D母液的配法 称取50mg 2,4-D,置于小烧杯内;加少量无水乙醇或95%乙醇使之完全溶解; 加水定容至100ml,4℃保存。如果出现沉淀,需要重新配置。 (4)0.5mg/ml α-NAA母液的配法 称取100mgNAA置于小烧杯内;用1N的KOH溶液溶解NAA;用水定容至200m l,4℃保存。 (5)0.5mg/ml 6-BA母液的配法 称取100mg 6-BA置于小烧杯中;加少量的浓盐酸,用玻棒研磨成糊状,再加入少量浓盐酸,使之完全溶解;用水稀释并定容至200ml,4℃保存。 (6)100mM乙酰丁香酮(As)的配制 称取196.2mg As,用5ml DMSO直接溶解,再加水定容至10ml,过滤灭菌后,分装入无菌小管,-20℃冰冻保存。使用前加入灭菌培养基。 (7) 0.5mg/ml KT和ABT的配法 称取50mg kenetin或ABT生根粉,先用少量1N KOH溶解,再用水稀释定容至100ml,4℃保存。 (8)其他附加物的溶解及配制 A、称取吗啉乙磺酸(MES)5g溶于水中,定容至10mL。4℃保存。 B、称取1g L-半胱氨酸(Cys) 溶于2mL 0.2mol/L或10%的NaOH溶液, 用蒸馏 水稀释定容至10mL,现用配制。4℃保存。 C、称取850mg硝酸银,用蒸馏水溶解后定容至100mL。4℃保存。 D、头孢霉素(cefotaxime)2500mg,用蒸馏水溶解后定容至10mL。4℃保存。 E、潮霉素(Hyg B),商品已溶解,筛选时一般加5、8、12mg/L梯度浓度。

第五章 微生物的营养和培养基习题整理

第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于:() A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于:() A.光能自养 B. 光能异养C.化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是:() A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A,B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是:() A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有:() A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于()型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是:() A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是:() A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是:() A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量,后者需要能量 C. 前者不需要载体,后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子(生长因素)是:() A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B,C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供:() A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为:() A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的:() A. 10% B. 30% C. 50% D.70%

实验室常用培养基大全

表皮葡萄球菌 产气肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 单核增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.360docs.net/doc/9417257666.html, 金黄色葡萄球菌 酿酒酵母菌 脑心浸出液肉汤(BHI) 品红亚硫酸钠液体培养基 MFC肉汤 CFU培养基基础 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基蛋白胨 胰蛋白胨 胰酪蛋白胨 酵母浸粉 大豆蛋白胨 酸水解酪蛋白 明胶蛋白胨 马铃薯浸粉 琼脂粉 琼脂粉 动物组织胃蛋白酶消化物 肉胃酶消化物 牛肉浸粉 牛肝浸粉 牛肝浸粉 牛心浸粉 多价蛋白胨(多聚蛋白胨) 月示蛋白胨 玉米浸出粉 一次性培养皿 表面接触碟 一次性培养皿(密理博浮游菌采样)表面接触碟/表面接触皿 https://www.360docs.net/doc/9417257666.html, 金属玻璃培养皿(可重复使用) 金属玻璃表面接触碟

嗜热脂肪肝菌芽孢菌片(ATCC7953 枯草杆菌黑色变种芽孢菌片(ATCC9372)121度高压灭菌化学指示卡 132℃压力蒸汽灭菌指示卡 葡萄糖 氯化钠 L-半胱氨酸盐酸盐 氧化酶试剂 三磷酸腺苷二钠盐(ATP) 费尔休林(无吡啶) SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE上样缓冲液5倍 考马斯亮蓝R-250染色套装 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 产气肠杆菌 乙型副伤寒沙门氏菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.360docs.net/doc/9417257666.html, 黑曲霉 生孢梭菌 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉? 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白消化液培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 无菌大豆酪蛋白琼脂培养基 卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础 胰化大豆坚固绿琼脂(TSFA) 营养肉汤(NB) 营养琼脂(NA) 0.5%葡萄糖肉汤培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 三糖铁琼脂培养基(TSI) 三糖铁琼脂培养基 R2A琼脂

细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性 HBSS的配制和使用攻略

常用培养基及基本特性 1、RPMI-1640 Medium RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。 2、Minimum Essential Medium(MEM) 也称最低必需培养基,它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单,可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型,而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。 3、DMEM-高糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。 4、DMEM-低糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。 5、DMEM/F12 DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂,含有多种微量元素,和DMEM以1:1结合,称为DMEM/F12培养基(DME/F12medium),作为开发无血清配方的基础,以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力,改良之一是在DMEM/F12(1:1)中加入15mM HEPES缓冲液。 6、McCoy’s 5A McCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计,可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长,除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。 7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM) Guilber 和Iscove将Dulbecco’Medium 改良为Iscove’s Medium,用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞,LPS刺激的B细胞,骨髓造血细胞,T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液,因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。 8、M-199 Medium

实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌

实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1学会常用器皿包扎方法 2学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 3学会实验室灭菌锅的使用方法 二、常用器具和仪器 试管(testtube),德汉氏小管(Durhamtube),玻璃吸管 (glasspipette),吸器,微量加样器(micropipette),吸嘴(tip),培养皿(petri dish),三角瓶(erlenmeyer flask),接种铲(inoculatingshovel),玻璃涂布器(glassspreade),接种环(inoculatingloop),接种钩(inoculating hook),接种针(inoculating needle),小塑料离心管(Eppendorf tube),滴瓶(dropper bottle ),双层瓶(double bottle),酒精灯⑻ cohol burner),煤气喷头(coal gas sprinklerhead,试剂瓶,量筒,烧杯,温度计,石棉网,漏斗,烘箱,卧式灭菌锅,手提式灭菌锅,无菌操作台/ 室,过滤除菌设备,厌氧操作设备,小型发酵罐,离心机,培养箱/摇床,冷冻干燥机,蒸馏水器,超声波清洗仪,磁力搅拌器。 三、玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装方法一:用旧报纸密密包紧,一般以5-8 套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。 方法二:将培养皿放入金属(不锈钢)筒内,干热灭菌。金属筒配有盖子,内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出,以便装取培养皿。 包好的培养皿 金属筒和内部的框架 塑料培养皿架 2、吸管的包装

细胞培养基的基本知识

培养细胞的完全培养基由基础培养基(如MEM)和添加剂(如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子)组成,培养基的配方一直在改进,其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。 一、基础培养基 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。MEM/F12 这两种培养基各取 1/2,形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足。例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应。 在所有这些培养基中,谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度,这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(若培养基中这两种物质缺乏时)。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡,DMEM 含更高浓度的NaCO3,要用10%的CO2来平衡,当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的,但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。 原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长,该培养基采用了与众不同的BSS作基础,它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力,培养基中使用半乳糖作碳源,以阻止培养基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的,特别是在保持较高CO2有困难时,例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元,但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。

实验室常用培养基配方

031*-2./4,+ 5 86779\_V_[_PUY\RQTXYWYS^QO\OWYS YXWUXR:bkkiNIIlllHk_d_j_H`hfH`g Ofic`ceecg EKJJ faIfeF rqq 74p 76z 7:5256658vq 76 ro Jf v 4z 7:5256658-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA UZ\S ELM faIfeF su 74p 76*./}vq 76 ro Jf ros 4*./}-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA ]GS_e ELJ faIfeF nsq BIVGMA r + ro Jlwgt\E -} r +rH .A so ]q~yqq 76Nme 0uEKR_FoaA to O]v ,,1-~C~qos 76@EP`:~+,xoq A uo ]me 0u^j{[Qp ,r +A vo TvTzicYEdn ,svA wo ]q r 76z 7:5256658C rqq 74p 76DYb *ZXA xo u BGMA

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实验室常用培养基

实验用培养基配制 > 1 .牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养)7.6 ~1000mL ,pH7.4 10g ,NaCl 5g ,水牛肉膏3g ,蛋白胨) 用于放线菌培养号培养基 ( 2. 高氏 1 可溶性淀粉20g ,KNO 3 1g ,NaCl 0.5g ,K 2 HPO 4-·3H 2 O 0.5g ,MgSO 。~7.6 ,水1000mL ,pH7.4 7H 2 O 0.5g, 4 ·,FeSO4 ·7H 2 O 0.01g 配制时注意,可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。)培养基(用于从土壤中分离真菌).马丁氏( Martin 3 K 2 HPO 4 1g ,MgSO 4 ·7H 2 O 0.5g ,蛋白胨5g ,葡萄糖10g ,1/3000 孟。30min 121 ℃湿热灭菌100mL, 水900mL ,自然pH ,加拉红水溶液 30 μg/mL). 链霉素含量为时加入链霉素( 待培养基融化后冷却55 ~60 ℃) 用于霉菌或酵母菌培养马铃薯培养基(PDA)( 4. 1000mL ) 20g, 水去皮)200g, 蔗糖( 或葡萄糖马铃薯( 配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液. 酵母菌用葡萄糖霉菌用蔗糖, 1000mL, 加糖, 再补足至自然pH. ) )( 用于霉菌培养 5. 察氏培养基 ( 蔗糖硝酸钠培养基蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 ·7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 ·7H 7.2 ~2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ) ( 用于支原体培养培养基6. Hayflik ~15g, pH7.8 琼脂10g, NaCl 5g, 蛋白胨)1000mL, 或浸出液( 牛心消化液. 8.0, 分装每瓶70mL, 121 ℃湿热灭菌15min, 待冷却至80 ℃左右, 每70mL 中加入马血清 20mL,25% 鲜酵母浸出液10mL, 15 醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素 G 钾盐水溶液(20 万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意: 醋酸铊. , 需特别注意安全操作是极毒的药品 ) 醋酸钠培养基培养基 (McCLary) ( 7 .麦氏葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ,酵母膏0.25g ,醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g ,蒸馏水 15min 。℃湿热灭菌l00mL 。溶解后分装试管,1l5 ) .反应和甲基红试验用于 V.P 8 .葡萄糖蛋白胨水培养基 ( 蛋白胨0.5g ,葡萄糖0.5g ,K 2 HPO 4 0.2g ,水100mL, pH7.2, 1l5 ℃湿热20min 。灭菌 ) ( 用于吲哚试验9 .蛋白胨水培养基。湿热灭菌20min ~7.4, 121 ℃蛋白胨10g, NaCl 5g, 水1000mL ,pH7.2 ) ( 用于细菌糖发酵试验10 .糖发酵培养基蛋白胨0.2g, NaCl 0.5g, K 2 HPO 4 0.02g ,水100mL ,溴麝香草酚蓝( 质量分数1% 水溶液) 0.3mL ,糖类lg 。分别称取蛋白胨和NaCl 溶于热水中,调pH 至7.4 ,再加入溴麝香草酚蓝( 先用少量质量分数95% 乙醇溶解后,再加水配成质量分数1% 水溶液) ,加入糖类,分装试管,装量 4 ~5cm 高,并倒放入一杜氏

常用培养基及基本特性

常用培养基及基本特性+L/A i*B*Z$h 1、RPMI-1640Medium,j*x%C"A#y.{"J5S RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用 2、Minimum Essential Medium(MEM);J3~2E8|#{.r7};E 也称最低必需培养基,它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单,可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型,而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。"]* 3、DMEM-高糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。,}%A5~'Q"_.t-v*P0c 4、DMEM-低糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。 5、DMEM/F12"a!a(o3?2W0O9N$c%@*d DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂,含有多种微量元素,和DMEM 以1:1结合,称为DMEM/F12培养基(DME/F12medium),作为开发无血清配方的基础,以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力,改良之一是在DMEM/F12(1:1)中加入15mMHEPES缓冲液。1~#B'n'e1D 6、McCoy’s5A9r8B9v2?/K,Z(h%n(Q McCoy’s5A Medium主要为肉瘤细胞的培养所设计,可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长,除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。 7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium(IMDM) Guilber和Iscove将Dulbecco’Medium改良为Iscove’s Medium,用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞,LPS刺激的B细胞,骨髓造血细胞,T 细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液,因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。 8、M-199Medium 1950年,Morgan成功研制出具有确定化学成分的细胞培养液,即M-199,主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。4S4[&],d&w+U"] 9、Leibovitz Medium(L-15)&h:O8m&_'b)G1@/T L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养,用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系,氨基酸组成进一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。 10、Ham’s F-10培养基:适应小鼠细胞、人类二倍体的培养。 11、Ham’s F-12培养基:可以在加入很少血清的情况下应用,特别适合单细胞培养和克隆化培养,是无血清培养中常用的基础培养液。(q!Q3E!W6B 12、William’s Medium E:用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。

微生物实验室常用仪器设备清单 (1)

微生物实验室常用仪器设备清单 微生物学实验室是生物学领域的一个基本实验室,对于一个完备的微生物学实验室,我们需要配置哪些仪器呢? 1、超净工作台 微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养,那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。 2、培养箱? 培养箱有多种类型,它的作用在于为微生物的生长提供一个适宜的环境。生化培养箱只能控制温度,可作为一般细菌的平板培养;霉菌培养箱可以控制温度和湿度,可作为霉菌的培养;CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养。 ES5000-6S型智能配平仪 3、天平 天平用于精确称量各类试剂。实验室常用的是电子天平,电子天平按照精度不同有不同的级别。 4、微生物均质器 用于从固体样品中提取细菌。用微生物均质器制备微生物检测样本具有样品无污染、无损伤、不升温、不需要灭菌处理,不需洗刷器皿等特点,是微生物实验中使用较为方便的仪器。 5、菌落计数器 菌落计数仪可协助操作者计数菌落数量。通过放大,拍照,计数等方式准确的获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可连接电脑完成自动计数的操作。 6、微波炉/电炉? 用于溶液的快速加热,微生物固体培养基的加热溶化。 7、高压灭菌锅? 微生物学所用到的大部分实验物品、试剂、培养基都应严格消毒灭菌。灭菌锅也有不同大小型号,有些是手动的,有些是全自动的。用户需要根据自己的需要选购。 8、移液器? 液体量器用于精密量取各类液体。常见的液体量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯。? 9、低温冰箱? 冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存,有些要求是负20度保存,实验人员一定要看清试剂的保存条件,放置在恰当的温度下保存。? 10、生物安全柜? 微生物实验中涉及的试剂和样品微生物有些是有毒的,对于操作人员来说伤害较大。为了防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散,可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全保护。? 11、摇床? 摇床是实验室常用的一种仪器,在微生物实验操作过程中,液体培养基培养细菌时需要在特定温度下振荡使用。 12、纯水装置? 超纯水器,制造出各精密检测无杂质、无污染的纯水,

实验室常用培养基

实验用培养基配制> 1 .牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养) 牛肉膏3g,蛋白胨10g , NaCI 5g,水1000mL , pH7.4 ?7.6 2. 高氏1 号培养基(用于放线菌培养) 可溶性淀粉20g , KNO 3 1g , NaCI 0.5g , K 2 HPO 4- 3H 2 O 0.5g , MgSO 4 7H 2 O 0.5g, , FeSO4 -7H 2 O 0.01g,水1000mL , pH7.4 ?7.6。 配制时注意,可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3 .马丁氏(Martin )培养基(用于从土壤中分离真菌) K 2 HPO 4 1g , MgSO 4 -7H 2 O 0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g , 1/3000 孟加拉红水 溶液100mL,水900mL,自然pH , 121 C 湿热灭菌30min 。 待培养基融化后冷却55?60 C时加入链霉素(链霉素含量为30卩g/mL). 4. 马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养) 马铃薯(去皮)200g, 蔗糖(或葡萄糖) 20g, 水1000mL 配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸 30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液加糖, 再补足至 1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖. 5. 察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养) 蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 7H 2 O 0.5g, KCI 0.5g, FeSO4 7H 2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ?7.2 6. HayfIik 培养基(用于支原体培养)

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