免疫细胞分离及检测技术
贝克曼免疫 方法学
贝克曼免疫方法学
贝克曼免疫方法学是一种用于研究免疫系统的方法学，它主要
用于分析和测定细胞表面分子的表达情况、细胞的功能状态以及免
疫细胞的亚群。
贝克曼免疫方法学主要包括流式细胞仪和细胞分选
技术，它们通过利用荧光标记的抗体与细胞表面特异性抗原结合，
然后通过激光激发荧光信号，从而实现对细胞的分析和分选。
在流式细胞仪中，细胞通过流式细胞仪的流动系统单个通过激
光光束，荧光标记的抗体与细胞表面特异性抗原结合后产生荧光信号，流式细胞仪通过检测这些荧光信号来分析细胞表面分子的表达
情况，细胞的功能状态以及免疫细胞的亚群。
而细胞分选技术则是
在流式细胞仪的基础上，通过激光束的定向和细胞排序系统，实现
对特定类型的细胞进行单个分选和分离。
贝克曼免疫方法学在免疫学研究、临床诊断和治疗等领域具有
广泛的应用。
在免疫学研究中，可以通过贝克曼免疫方法学对免疫
细胞的表面标记物进行分析，从而研究免疫细胞的功能和特性；在
临床诊断中，可以利用流式细胞仪对患者的免疫细胞进行表型分析，帮助医生诊断疾病；在治疗方面，贝克曼免疫方法学也可以用于监
测患者接受免疫治疗后免疫细胞的变化情况，指导治疗方案的调整。
总之，贝克曼免疫方法学作为一种重要的免疫学研究工具，在免疫学研究、临床诊断和治疗等领域发挥着重要作用，为我们深入了解免疫系统、诊断和治疗疾病提供了有力的技术支持。
抗体制备及免疫检测技术的原理和应用
抗体制备及免疫检测技术的原理和应用抗体是一种重要的生物分子，可以与抗原作用而具有极高的特异性。
由于抗体分子本身拥有极强的特异性和亲和力，因此被广泛应用于蛋白质分离、酶联免疫吸附试验、免疫荧光分析、免疫印迹、流式细胞术以及疫苗研究等诸多领域，也成为了生物分子分离、分析、诊断和治疗的重要工具。
本文将介绍抗体制备及免疫检测技术的原理和应用。
一、抗体制备的原理抗体是由机体B细胞分泌的一类免疫球蛋白，它由两部分组成：重链和轻链。
重链和轻链各有一端为变异区和恒定区。
抗体的制备主要有两种方法：多克隆和单克隆。
多克隆抗体是指利用多个免疫细胞杂交而制得的抗体，它的产生需要一定的时间。
单克隆抗体则是利用一个免疫细胞杂交制得的抗体，它具有较高的特异性。
使用抗体制备需要对抗原进行选择，产生抗体的条件是抗原分子必须能诱导机体产生免疫反应，即具有免疫原性。
同时，抗原还必须具有一定的抗原特异性，使得诱导机体产生的抗体具有特定的亲和性。
在制备抗体过程中，还需要进行抗体亲和纯化和抗体标记等处理，以便用于各种免疫学实验和临床诊断。
二、免疫检测技术的原理免疫学检测技术的核心原理是利用抗体和抗原之间的相互作用，检测样品中特定抗原的存在与否。
在此过程中，选择合适的检测方法可以根据不同的具体要求来设定；同时，要选取合适的抗原和抗体以确保检测的准确性和敏感性。
免疫检测技术有很多种类，其中最重要的包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射性免疫检测、免疫荧光分析、免疫印迹和流式细胞术等。
酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的分析方法，可用于测定血清、唾液和尿液等生物体中特定抗体或抗原的含量。
ELISA原理是利用酶标记的抗体或抗原，检测样品中特定抗体或抗原的存在。
放射性免疫检测则是采用放射性标记的抗体分子，通过测定放射性计数来检测样品中的抗原分子。
这种方法的优点是高灵敏度和准确性，但不适用于现场检测。
免疫荧光分析是利用荧光标记的抗体与荧光标记的抗原相互作用，检测样品中特定的抗原或抗体。
巨噬细胞流式分选操作步骤
巨噬细胞流式分选操作步骤
流式细胞术是一种常用的细胞分选技术，可以分离、分析和纯化复杂的细胞群体。
巨噬细胞是一类重要的免疫细胞，具有多种生物学功能，在研究免疫学、炎症和感染等方面具有重要应用价值。
本文介绍了巨噬细胞流式分选的操作步骤。
1. 细胞准备
首先需要从组织或培养物中收集巨噬细胞，一般采用胶原酶或丝裂霉素等酶类消化酶来分离细胞。
收集细胞后，需要进行胞外标记，以便在流式细胞仪中进行检测和分选。
可以使用荧光素、荧光素同工酶、抗体等标记物质。
2. 流式细胞检测
将标记后的细胞悬浮于缓冲液中，加入适当的抗体，进行流式细胞检测。
在流式细胞仪中，通过激光器激发标记物质，检测细胞的荧光信号，并进行细胞计数和分析。
3. 巨噬细胞分选
根据细胞检测结果，可以设置分选门限，选择特定的细胞群体进行分选。
巨噬细胞分选可以采用荧光激活细胞分选或者磁珠分选等技术。
在分选过程中，需要注意细胞的稳定性和纯度，以保证实验结果的准确性。
4. 分选后细胞的处理
分选后的巨噬细胞可以用于一系列的细胞学、免疫学、分子生物学等实验中，如细胞培养、基因表达分析、蛋白质分析等。
需要注意
的是，在使用分选后的细胞时，应该避免细胞的冻融和处理时间过长等因素对细胞的影响。
总之，巨噬细胞流式分选是一项重要的实验技术，它可以帮助研究者更深入地了解巨噬细胞的生物学功能和免疫调节机制。
在实验中，需要严格按照操作步骤进行，保证实验结果的准确性和可重复性。
现代医学中的免疫学鉴定技术
现代医学中的免疫学鉴定技术随着科技的不断发展，现代医学已经发展到了一个新的高度。
免疫学作为现代医学中一个重要的领域，对于诊断、治疗和预防疾病都有着重要的作用。
在现代医学中，有很多免疫学鉴定技术被广泛应用。
本文将分别介绍其中的几种技术。
1. 酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA是一种非常常见的免疫学鉴定技术。
ELISA可以用于测定样本中某种特定的蛋白质或抗体，从而对疾病进行诊断。
该技术通常是通过酶标记的抗体来实现的。
它具有敏感度高、特异性好等优点，已被广泛应用于癌症、艾滋病、结核病等疾病的检测。
2. 免疫印迹（Western Blotting）Western Blotting是一种用于验证抗体特异性的技术，通常是用于分析血清中的抗体反应。
该技术的基本原理是将分离出的蛋白质进行电泳分离，再将其转移到膜上，并进行固定和印迹处理。
最后，用与特定蛋白质结合的抗体标记来检测目标蛋白质是否存在。
该技术在艾滋病、乳腺癌等疾病的鉴定中被广泛使用。
3. 免疫荧光技术（IFA）IFA是一种通过荧光显微镜来检测抗体或抗原的技术。
具体来说，IFA应用特定的抗体标记对待检测的细胞或病原体进行染色，并通过荧光显微镜来观察目标蛋白质是否存在。
IFA通常用于季节性感冒、风疹等疾病的诊断中。
4. 免疫电泳免疫电泳是一种通过电泳将具有不同电荷的蛋白质分离开，并通过抗体与特定的蛋白进行反应，从而诊断某种疾病的技术。
免疫电泳通常用于血液蛋白质异常的检测、肾病的诊断等。
5. 免疫荧光细胞排序（FACS）免疫荧光细胞排序是一种通过荧光激发分选单个细胞或微粒的技术。
FACS可以通过多种荧光标记来分别测定特定蛋白质的表达、淋巴细胞分类、溶酶体活性等。
该技术在肿瘤研究、免疫细胞研究等领域被广泛应用。
综上所述，现代医学中的免疫学鉴定技术具有广泛的应用，可以用于人类疾病的预防、治疗和诊断。
虽然每种技术有着自身的优缺点，但是这些技术的发展和应用，将在未来几年中对人类的健康产生更为深远的影响。
单个细胞分离技术PBMC
临床免疫学实验指导
海南医学院
实验六 单个核细胞分离及细胞免疫功能检测 【实验目的】 1.熟悉淋巴细胞分离方法 2.了解T淋巴细胞亚群测定方法及其临床意义
T细胞介导的免疫应答特征：是T细胞辅助细胞（Th1）介导的 单个核细胞（L, M），以浸润为主的炎症反应与细胞毒性T细胞
（CTL或TC）发生特异性细胞毒效应.
计数池区域 一个计数全池 大方格 白细胞中方格 红细胞中方格 红细胞小方格 边长（mm） 3 1 0.25 0.20 0.05 面积（mm2） 池深（mm） 9 1 0.0625 0.0400 0.0025 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 体积（mm3 ul） 0.90 0.10 0.00625 0.00400 0.00025
细 胞 计 数 原 则 计 左 上 ， 不 计 右 下
血细胞计数板
血细胞计数板上四个角的 四个大方格
1个大方格中16个中方格 计数血细胞计数板上四个角的 四个大方格内单个核细胞总数。 （只计算上边和左边的压线细胞， 右边和下边压线细胞不计算）
单个核细胞总数计算： 是指最终制备的每ml细胞缓冲液内的 单个核细胞的密度（数量）
E+淋巴细胞百分率测定：正常人参考值： 60%-80%
由于干扰因素较多，主观因素影响，临床意义不明显
结果不稳定，重复性不高等原因，很少做。
T细胞总数测定——Et花环沉降法（E+淋巴细胞百分率：60-80%）
人类T细 胞的主要 标志 的CD2、 CD3和 TCR均 能吸附 绵羊红 细胞于淋 巴周
围，形
4个大方格内 细胞总数 4 × 稀释倍数 ×104
单个核细胞总数/ml=
单个核细胞总数/ml = X/4×10×(稀释倍数) ×103 =X×104 关于稀释倍数：这里不是指血液稀释倍数。是指最后洗涤 离心弃去上清液后的单个核细胞沉淀中，加入缓冲液1.0ml后。
免疫学实验技术新进展
免疫学实验技术新进展免疫学作为生命科学的重要分支，一直以来都是医学和生物学研究的热点领域。
随着科学技术的不断发展，免疫学实验技术也在不断创新和完善，为免疫学研究和临床应用提供了更强大的工具和手段。
本文将介绍一些近年来免疫学实验技术的新进展。
一、单细胞免疫分析技术单细胞免疫分析技术是近年来免疫学领域的一项重大突破。
传统的免疫分析方法通常是对大量细胞群体进行平均化的测量，无法揭示单个细胞之间的异质性。
而单细胞免疫分析技术能够在单个细胞水平上对免疫细胞的表型、基因表达、蛋白质分泌等进行精确分析，为深入了解免疫系统的复杂性和多样性提供了有力的手段。
例如，单细胞 RNA 测序技术（scRNAseq）可以同时检测数千个单个细胞中的基因表达谱，帮助研究者发现新的免疫细胞亚群和细胞状态转换。
流式细胞术与单细胞分选技术的结合，可以对特定的免疫细胞进行分离和后续的深入分析。
此外，质谱流式细胞术（CyTOF）能够同时检测大量蛋白质标志物在单个细胞中的表达，提供了更全面的细胞免疫表型信息。
二、免疫组库分析技术免疫系统的多样性主要体现在 T 细胞受体（TCR）和 B 细胞受体（BCR）的基因重排上，形成了庞大的免疫组库。
免疫组库分析技术通过对 TCR 和 BCR 的基因序列进行测序和分析，可以了解免疫系统在不同生理和病理状态下的动态变化。
新一代测序技术（NGS）的应用使得大规模、高通量的免疫组库分析成为可能。
通过对 TCR 和 BCR 的可变区基因进行测序，可以评估免疫细胞的克隆多样性、克隆扩增情况以及抗原特异性等。
免疫组库分析在肿瘤免疫、自身免疫性疾病、感染性疾病等领域都具有重要的应用价值，有助于揭示免疫系统与疾病发生发展的关系，为疾病的诊断和治疗提供新的靶点和策略。
三、成像技术在免疫学中的应用成像技术在免疫学研究中的应用越来越广泛，为直观地观察免疫细胞在体内的分布、迁移和相互作用提供了重要手段。
共聚焦显微镜和双光子显微镜能够在细胞水平上实时观察免疫细胞与靶细胞之间的相互作用，以及细胞内的信号转导过程。
免疫学检验和免疫学分析
免疫学检验和免疫学分析免疫学是一门研究生物体对病原微生物及其产生的毒素、异种细胞及故障细胞等的免疫反应以及抗原与抗体之间相互作用和免疫调节的基础科学。
免疫学检验是通过检测血液中的免疫指标，评估免疫系统功能的分析方法。
免疫学分析则是通过对病原微生物的免疫应答进行分析，得出感染情况的方法。
一、免疫学检验1.ELISA检测法ELISA（酶联免疫吸附法）是一种常见的免疫学检验方法。
它通过特异性的抗体或抗原结合来检测血液中的特定蛋白质。
这种技术被广泛应用于检测感染、过敏以及许多其他疾病。
ELISA至少需要一种抗体，它可以与要检测的蛋白质结合。
当抗体与蛋白质结合时，一个标记基团（通常是酶）可以被添加到检测中。
当试剂在光谱仪或显微镜下检测时，标记基团将发出可见的荧光或颜色变化，从而指示检测结果。
2.流式细胞仪流式细胞仪也是一种常见的免疫学检验方法。
它是一种高通量细胞分析方法，可以在极短的时间内分析大量的细胞，并且可以同时对多个类型的细胞进行分析。
在流式细胞仪中，细胞或者微生物会被自动注入流通式悬浮液中，在通过一些物理和化学的方法后，可以将细胞/微生物区分为不同的亚群，从而对其匹配的表型或生化特征进行评估。
这种方法在检测癌症、感染和自身免疫疾病方面很有用。
3.其他免疫学检验方法除了ELISA和流式细胞仪外，还有许多其他的免疫学检验方法，如放射免疫测定法、荧光免疫测定法、蛋白质芯片等。
这些方法的实现依靠于特异性抗体和/或抗原的结合，以便鉴定出感染、肿瘤、自身免疫疾病等等。
二、免疫学分析1.用于诊断活动性病毒感染的分析随着人口的增长和社会的发展，病原体感染已经成为一个重要的公共卫生问题。
制定有效的病原体检测和分析技术对于预防疾病、降低医疗成本和提高患者生存率等方面都有很大的意义。
在病原体感染的检测中，分子诊断和免疫学分析是两种常见的方法。
分子诊断技术可以检测病原体的特异性核酸序列，包括PCR、实时PCR、RT-PCR等。
免疫检测技术
基本步骤
原理
1
包被
洗涤
3 使结合在固相
上
的抗原抗体复 合物
2
反应
加入待测抗
体或
抗原和酶标 抗原
4
或抗体
底物显色
定性或定量的分 析
五种常见的检测方法
1 双抗夹心法（测定抗原） 2 测定抗体的间接法 3 竞争法（测定抗原） 4 捕获包被法测IgM抗体 5 ABS-ELISA法
1 双抗夹心法测抗原
适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗 原及低于二价的小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心
3.免疫电泳技术
免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。 这种技术有两大优点：一是加快了沉淀反应的速度， 二是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分 开，再分别与抗体反应，以此作更细微的分析。
免疫电泳包括:血清免疫电泳、对流免疫电泳、 火箭电泳、免疫印迹等
血清免疫电泳
将抗原混合物（病人血清）在凝胶中用电泳 分离后，沿电泳方向挖一平行的小槽，加入 抗血清，进行双向扩散。沉淀线的特点显示 病人血清与正常人血清存在的差异，即血清 蛋白组分的缺少或增加。
2 间接法测抗体
几种标记/检测技术灵敏度的比较
灵敏度(mol/L)
10-18 10-15 10-12 10-9
酶标
荧光
放免
发光
几种标记/检测试剂的有效期比较
有效期（月）
18
15
12
9
6
3
酶标
荧光
放免
发光
人人民民币币
100,000 80,000 60,000 40,000 20,000 0
放免
三、补体结合实验 （2个系统，5种成分）
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第十三章免疫细胞分离及检测技术本章考点1.免疫细胞的分离2.淋巴细胞表面标志的检测3.淋巴细胞功能检测技术4.免疫细胞检测的临床意义第一节免疫细胞的分离一、外周血单个核细胞的分离1.原理：外周血中单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的比重与红细胞、多核白细胞及血小板不同，介于1.075～1.090之间，红细胞及粒细胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之间。
因而可利用一种比重介于1.075～1.092之间，而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。
2.试剂：常用的分层液有Ficoll与Percoll两种（1）Ficoll分层液法：主要用于分离外周血中单个核细胞，是一种单次密度梯度离心分离法，其分布由上到下依次为：稀释的血浆层，单个核细胞层，粒细胞层和红细胞层。
Ficoll分层液即聚蔗糖-泛影葡胺，是一种较理想的细胞分层液，其主要成分是一种合成的蔗糖聚合物，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。
操作时，将分层液置于试管下层，然后将肝素化的全血或白细胞悬液以Hanks或PBS液稀释后，轻轻铺于分层液面上，经2000rpm15-20min离心后，红细胞与粒细胞因比重大于分层液，故较快沉于管底。
血小板则比重小于分层液而悬浮于血浆中。
唯有与分层液比重相当的单核细胞和淋巴细胞密集于血浆层和分层液的界面中。
其分布由上到下依次为：稀释的血浆层，单个核细胞层，粒细胞层和红细胞层。
见下图。
图聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度梯度离心法外周血小分布示意图引自陶义训主编：免疫学和免疫学检验，人民卫生出版社1995年9月第1版第4次印刷（2）Percoll分层液法：是一种连续密度梯度离心分离法，其分布由上至下依次为：死细胞层，富含单核细胞组分层，富含淋巴细胞的组分层及红细胞与粒细胞组分层。
图连续密度梯度离心法分离单个核细胞中各细胞成分的分布示意图引自陶义训主编：免疫学和免疫学检验，人民卫生出版社1995年9月第1版第4次印刷二、淋巴细胞的分离1.纯淋巴细胞群的采集：利用单核细胞在37℃和Ca2+存在时，能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性，从单个核细胞悬液中除去单核细胞，从而获得纯淋巴细胞群。
主要的方法有：①粘附贴壁法；②吸附柱过滤法；③磁铁吸引法。
2.淋巴细胞亚群的分离原则：根据相应细胞的特性和不同的标志加以选择性纯化。
根据细胞的特性和标志选择纯化所需细胞的方法是阳性选择法，而选择性去除不要的细胞，仅留下所需的细胞为阴性选择。
常用的方法包括：①E花环沉降法；②尼龙毛柱分离法；③亲和板结合分离法；④磁性微球分离法及荧光激活细胞分离仪分离法。
三、淋巴细胞的保存与活力测定1.淋巴细胞的保存技术（1）短期保存技术：将分离的细胞用适量含10%～20%灭活小牛血清的Hanks、Tc-199、RPMIl640或其他培养液稀释重悬。
短期保存可置于4℃保存。
（2）长期保存技术：液氮深低温（-196℃）环境保存细胞，加入二甲亚砜作为保护剂。
2.活力测定：最简便常用的为台盼蓝染色法。
台盼蓝又称锥蓝，是一种阴离子型染料，这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，但死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色，通过死亡细胞与活细胞的百分比可反映细胞活力。
第二节淋巴细胞表面标志的检测一、T细胞表面标志的检测1.特异性抗原检测：用单克隆抗体检测T细胞表面抗原的方法有两大类：一类是用标记抗体染色，如免疫荧光法、酶免疫法、ABC法及免疫金银染色法；另一类用抗体致敏的红细胞作花环试验。
2.特异性受体的检测原理：T细胞表面有特异性绵羊红细胞（E）受体，当人的T细胞与绵羊红细胞悬液按一定比例混合后，置4℃至少2小时或过夜，T细胞表面的E受体可与绵羊红细胞结合形成玫瑰花样的花环，称为活性E（Ea）花环。
检测Ea花环形成细胞可反映受检者的细胞免疫水平。
3.T细胞亚群检测：见第二十二章流式细胞仪分析技术。
二、B细胞表面标志的检测B细胞具有多种特异性抗原和受体，据此建立了相应的检测方法，一般用以研究B细胞各分化发育阶段的特性，也可藉以鉴定和计数各阶段B细胞在人外周血和淋巴样组织的分布以及疾病时的变化动态，为临床提供诊治相关疾病的有用信息。
1.B细胞表面抗原的检测：B细胞表面有CD19、CD20、CD21、CD22和CD29等分化抗原，其中有些系全部B细胞所共有，而有些仅活化B细胞所特有，据此可用相应的CD系列单克隆抗体，通过间接荧光免疫法、酶免疫组化或ABC法加以检测。
2.SmIg的检测：大多采用间接荧光免疫法或包括ABC法在内的酶免疫组化法，关键是选用高效价、高特异性和高亲和力的荧光或酶标记的多价抗人Ig抗体，也可分别用各种类型的Ig，即IgM、IgG、IgA、IgE 等抗血清，检测带有各种类型Ig的B细胞，在人外周血中以带有SmIgM的细胞数为最多。
B细胞经荧光标记的抗Ig抗体染色，细胞膜表面呈现的荧光着色可有不同的形式，开始均匀分布呈环状，其后集中在某些部位呈斑点状，然后又可集在一个部位呈帽状，最后可被吞饮入胞浆直至荧光消失。
这一现象是由于淋巴细胞膜由双层类脂组成，上嵌有蛋白分子，在体温条件下，膜呈半液体状，而镶嵌物能在其中移动。
当SmIg 抗体发生结合时，由于抗血清为双价，使SmIg出现交联现象，这种抗原与抗体结合物可连成斑点和帽状，时间过长，帽状结合物可脱落或被吞饮而消失，因此染色后，观察时间不能超过30min，或在染色时加叠氮钠防止帽状物形成或被吞饮。
三、自然杀伤细胞（NK）及功能的检测NK细胞表面至少存在CD2、CD11b、CD11c、CDl6、CD56和CD69等多种抗原，但均非NK细胞所特有，因此极少以CD系列抗原为指标鉴定和计数NK细胞，现多检测NK细胞活性，因NK细胞具有细胞介导的细胞毒作用，它能直接杀伤靶细胞。
测定人NK细胞活性多以K562细胞株作为靶细胞，而测小鼠NK细胞活性则用YAC细胞株，检测方法多种多样。
1.形态法：将效应细胞与靶细胞按一定比例混合温育，继用台盼蓝或伊红Y等活细胞拒染的染料处理，然后分别计数着染的死细胞和不着染的活细胞，推算NK细胞活性。
2.酶释放法：将效应细胞与靶细胞按一定比例混合温育，离心沉淀，取上清液检测靶细胞遭破坏后释放出的酶含量。
3.荧光法：用荧光素标记靶细胞，经与效应细胞共温后，离心去上清，用荧光计检测剩余的活靶细胞的荧光。
4.核素法：将效应细胞与靶细胞按一定比例混合共温后，离心检测上清液或剩余靶细胞放射性的量，间接反映其活性。
方法有靶细胞胞浆释放法和胞核释放法两种。
5.化学发光法：当效应细胞与靶细胞接触时，效应细胞呼吸暴发，生成极不稳定的O2-及OH-，放出光子，在发光剂存在条件下，可被光电倍增管接受和计数，发光量与NK细胞杀伤能力相关。
第三节淋巴细胞功能检测技术一、T细胞功能的检测1.T细胞增殖试验：又称T细胞转化试验。
T细胞在体外经某种物质刺激，细胞代谢和形态相继发生变化，在24～48h内细胞内蛋白质和核酸的合成增加，产生一系列增殖的变化，如细胞变大、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等，由淋巴细胞转变为淋巴母细胞。
因此，这种淋巴细胞增殖又称为淋巴细胞转化。
据此可判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态。
（1）非抗原性刺激物：如植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）、美洲商陆（PWM）、脂多糖（LPS），通称促有丝分裂原。
其中LPS刺激B细胞，PWM可刺激T和B类细胞，PHA和ConA刺激T细胞增殖。
（2）抗原性刺激物：如结核菌素、葡萄球菌毒素、破伤风类毒素、链球菌激酶、肿瘤抗原、同种异型组织抗原等。
2.T细胞增殖试验类型（1）形态法：其原则是将外周血液或分离的单个细胞与适量的植物血凝素（PHA）混合，置37℃培养72h，取培养细胞作涂片染色镜检。
据细胞的大小、核与胞浆的比例、胞浆的染色性和核结构以及有无核仁等特征，分别计数淋巴母细胞、过渡性母细胞和核有丝分裂相以及成熟的小淋巴细胞，以前三者为转化细胞，每份标本计数200个细胞，计算转化率。
（2）核素法：绝大多数外周血T细胞通常处于细胞周期的G0期，受特异性抗原或促有丝分裂原激活后，从G0期进入G1期，开始合成蛋白质、RNA和DNA前体物质等，为DNA复制准备物质基础，然后进入S期，细胞合成DNA量倍增，此时若在培养液中加入3H标记的TdR，后者掺入新合成的DNA中，据掺入的多少推测细胞增殖程度。
3.T细胞介导的细胞毒试验：T细胞介导的细胞毒试验是细胞毒性T细胞的特性，凡致敏T细胞再次遇相应靶细胞抗原，可表现出破坏和溶解靶细胞，它是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标。
该试验原则是选用适当的靶细胞（常用可传代的已建株的人肿瘤细胞如人肝癌、食管癌、胃癌等细胞株），经培养后制成一定浓度的细胞悬液，按一定比例与待检的淋巴细胞混合，共温育一定时间，观察肿瘤细胞杀伤的情况。
二、B细胞功能的检测1.B细胞早期活性指标的测定：B细胞经不同抗原激发即开始分化增殖，初期表现为体积增大，可用仪器加以检测。
激活的B细胞表面MHCⅡ类抗原的表达增多，可用相应的单克隆抗体通过荧光免疫或ABC法检测。
2.溶血空斑形成试验：经典的溶血斑试验用于检测实验动物抗体形成细胞的功能，其原理是将绵羊红细胞（SRBC）免疫小鼠，4天后取出脾细胞，加入SRBC及补体，混合在温热的琼脂溶液中，浇在平皿内或玻片上，使成一蒲层，置37℃温育。
由于脾细胞内的抗体生成细胞可释放抗SRBC抗体，使其周围的SRBC 致敏，在补体参与下导致SRBC溶血，形成一个肉眼可见的圆形透明溶血区而成为溶血空斑（plaque）。
每一个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。
这种直接法所测的细胞为IgM生成细胞，其他类型Ig由于溶血效应较低，不能直接检测，可用间接检测法，即在小鼠脾细胞和SRBC 混合时，再加抗鼠Ig抗体（如兔抗鼠Ig），使抗体生成细胞所产生的IgG或IgA与抗Ig抗体结合成复合物，此时能活化补体导致溶血，称间接空斑试验。
但是上述直接和间接空斑形成试验都只能检测抗红细胞抗体的产生细胞，而且需要事先免疫，难以检测人类的抗体产生情况。
如果用一定方法将SRBC用其它抗原包被，则可检查与该抗原相应的抗体产生细胞，这种非红细胞抗体溶血空斑试验称为空斑形成试验，它的应用范围较大。
现在常用的为SPA-SRBC溶血空斑试验。
SBA能与人及多数哺乳动物IgG的Fc段呈非特异性结合，利用这一特征，首先将SPA包被SRBC，然后进行溶血空斑测定，可提高敏感度和应用范围。
在该测试系统中，加入抗人Ig抗体，可与受检细胞产生的免疫球蛋白结合形成复合物，复合物上的Fc段可与连接在SRBC上的SPA结合，同时激活补体，使SRBC溶解形成空斑。