乳酸测定方法
乳酸 检测标准
乳酸检测标准
1.范围
2.本标准规定了乳酸的检测方法，适用于各种样品中乳酸含量的测定。
3.原理
4.本方法采用高效液相色谱法，通过色谱柱分离乳酸与其他组分，使用紫外
检测器检测乳酸的峰面积，从而计算乳酸的含量。
5.试剂
3.1 乳酸标准品：纯度应大于99%。
3.2 甲醇：色谱纯。
3.3 超纯水：电阻率大于18MΩ·cm。
6.仪器
4.1 高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2 色谱柱：C18反相色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm。
4.3 恒温水浴锅：温度波动±0.5℃。
7.样品制备
5.1 称取适量样品，加入超纯水制成溶液。
5.2 将溶液过膜，供高效液相色谱分析。
8.分析条件
6.1 流动相：甲醇+水=70+30（体积比）。
6.2 流速：1mL/min。
6.3 检测波长：210nm。
6.4 柱温：30℃。
6.5 进样量：10μL。
9.操作步骤
7.1 打开高效液相色谱仪，预热30分钟。
7.2 将乳酸标准品和样品分别注入色谱柱中。
7.3 记录色谱图，得到乳酸的峰面积。
7.4 根据峰面积计算乳酸含量。
10.结果表示
11.根据峰面积计算乳酸含量，可以使用以下公式进行计算：
12.乳酸含量（%）= （峰面积/标准品峰面积）×标准品浓度×100%
13.其中，标准品浓度为乳酸标准品的浓度，单位为mg/mL。
乳酸含量的测定
乳酸的测定—中和滴定法应用范围：本方法采用滴定法测定乳酸(C3H6O3)的含量。
方法原理：供试品加水溶解后，再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，酚酞指示液变红时停止滴定，读出硫酸滴定液使用量，计算乳酸含量。
试剂：1. 水（新沸放置至室温）2. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）3. 硫酸滴定液（0.5mol/L）4. 酚酞指示液5. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液6. 乙醇7.基准邻苯二甲酸氢钾8.基准无水碳酸钠试样制备：1. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL。
标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。
每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。
根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。
C(NaOH)=m/0.2042*(V1-V2)M——邻苯二甲酸氢钾的质量；V1——氢氧化钠的消耗量；V2——空白贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。
2.酸滴定液（1 mol/L）配制：取硫酸30mL，缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。
标定：取在270-300℃干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL 使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。
每1mL硫酸滴定液（1mol/L）相当于53.00mg的无水碳酸钠。
根据本液消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得。
乳酸测定
安捷伦6890气相色谱仪，FID检测器，色谱柱为HP-FＦＡP19０９1F-４13型(30m*0.32mｍ＊0.25μm）毛细管柱。
色谱定量结果：乙酸（记为A乙ｇ／L)下同、丙酸(A丙g／L）、丁酸(A丁ｇ/L）、异丁酸（A异丁g/L)、戊酸(A戊g/L)、己酸（Ａ己g/Ｌ)、庚酸(A庚g/L）、辛酸（Ａ辛g/Ｌ）。
样品
测定值(ｍg/L）
平均值
SＤ
ＲSD(％）
1
2
3
４
5
6
7
乳酸
271.15
271.5３
272.33
27２.１9
２71．69
271.53
271.64
2７１.72
0.41
0.15
1.5.4回收率
取20ml样品各３份，其中1份作本底量,另外2份各添加已知量的标准液，经上述样品预处理后,测出乳酸在样品中的含量，并根据检测量计算出乳酸的回收率和精密度，结果表明样品的回收率及准确度满足分析要求，结果见表2。
3．3乳酸含量的求取
根据陈周平对浓香型白酒的测定,白酒中的有机酸含量有下列趋势:乙酸>己酸>乳酸>丁酸>甲酸>戊酸>棕榈酸>亚油酸>油酸>辛酸>异丁酸>丙酸>异戊酸>庚酸,而乙酸、己酸、乳酸、丁酸的含量加上辛酸、异丁酸、戊酸、庚酸、丙酸的含量占其总酸含量的９5％以上,其他的酸特别是高级脂肪酸的含量只有在发酵期较长的优质酒中才有一定的含量，在一般发酵期和一般质量的酒中，含量甚微,因此,未测出的有机酸基本都可以忽略不计。所以乳酸的含量求得为:
1．3试剂及标准溶液的配制
1.3.1内标溶液的配制
乳酸测定
乳酸的测定:
另取4支洁净、干燥的试管，编号，各加入浓硫酸2ml ，将试管置于冰浴中冷却。
用小滴管取各样品滤液2滴逐滴加到已冷却的上述浓硫酸溶液中，边加边摇动冰浴中的试管，避免局部过热。
将各管混匀后，放入沸水浴5min ，加入对羟基联苯试剂2滴混匀，冷却后，比较和记录各管溶液的颜色深浅。
编号 试剂 样品 空白
1
2
3
4
肌肉靡（g ） 0.5
20%三氯乙酸（ml ）
3 3
1/15M 磷酸缓冲液（ml ） 3 0.5%淀粉溶液（ml ）
1
充分摇匀，加液体石蜡封口隔绝空气，37℃水浴1h ，后吸出石蜡。
20%三氯乙酸（ml ） 3
3
饱和硫酸铜溶液（ml ） 1 氢氧化钙粉末（g ）
0.4
充分搅拌，放置10min,并不时搅动内容物，分别过滤，弃去沉淀。
五、实验结果：
肌糖原酵解作用实验结果
空白组（左，基本透明无色）样品组（右，紫罗兰色）
根据实验图判断，样品管中发生了肌糖元酵解，生成的乳酸转变为乙醛后与对羟基联苯反生明显的显色反应，呈现紫罗兰色，空白管因酶失活未发生反应，无颜色变化。
六、实验注意事项
1、实验中用淀粉代替了肌糖元，因为淀粉与肌糖元结构类似，均为葡萄糖分子的高聚糖，淀粉因支链少分解较糖原稍慢，应保证37度水浴时间充足。
2、滴加液体甘油石蜡不宜过多，避免后期过滤困难。
3、测定乳酸的试管必须保证干燥、洁净。
4、最后除糖及蛋白质步骤一定要彻底，保证滤液无杂质干扰，以免影响显色结果。
乳酸含量的测定
乳酸的测定—中和滴定法应用范围：本方法采用滴定法测定乳酸(C3H6O3)的含量。
方法原理：供试品加水溶解后，再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，酚酞指示液变红时停止滴定，读出硫酸滴定液使用量，计算乳酸含量。
试剂：1. 水（新沸放置至室温）2. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）3. 硫酸滴定液（0.5mol/L）4. 酚酞指示液5. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液6. 乙醇7.基准邻苯二甲酸氢钾8.基准无水碳酸钠试样制备：1. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL。
标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。
每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。
根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。
C(NaOH)=m/0.2042*(V1-V2)M——邻苯二甲酸氢钾的质量；V1——氢氧化钠的消耗量；V2——空白贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。
2.酸滴定液（1 mol/L）配制：取硫酸30m L，缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。
标定：取在270-300℃干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL 使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。
细胞内乳酸检测方法-概念解析以及定义
细胞内乳酸检测方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述细胞内乳酸检测方法在现代生物医学领域中扮演着重要的角色。
乳酸是一种产生于细胞内的有机酸，它在人体代谢过程中起着至关重要的作用。
细胞内乳酸水平的变化与多种疾病的发展和治疗效果密切相关，因此准确、快速地检测细胞内乳酸水平对于疾病的预防和诊断具有重要的意义。
目前，针对细胞内乳酸的检测方法已经有了相应的研究。
早期的检测方法主要借助于生化实验和组织切片的染色技术，但这些方法存在耗时长、需要大量细胞和昂贵的设备等缺点。
随着技术的进步，现代的细胞内乳酸检测方法不断涌现，包括光谱法、质谱法、生物传感技术等。
这些方法不仅能够准确测量细胞内乳酸的水平，还能够提供更多关于细胞代谢状态的信息。
然而，当前的细胞内乳酸检测方法仍然存在一些优缺点和局限性。
例如，某些方法需要使用特殊的标记物或昂贵的设备，限制了它们在临床实践中的应用范围；部分方法需要破坏细胞以获取样本，可能对细胞的完整性造成损伤。
此外，一些方法的灵敏度和准确性还有待进一步提高，以满足对微量乳酸变化的检测需求。
综上所述，细胞内乳酸检测方法在生物医学研究和临床应用中具有重要地位。
虽然现有的方法在不同程度上能够满足细胞内乳酸检测的需求，但仍有一些问题需要解决。
因此，进一步的研究和改进细胞内乳酸检测方法，以提高灵敏度、准确性和便捷性，将对未来的疾病预防、诊断和治疗产生积极的影响。
1.2 文章结构文章结构部分的内容如下:文章结构的主要目的是为读者提供一个清晰的指导，确保文章的逻辑性和条理性。
本文将按照以下结构进行论述。
首先，引言部分将概述细胞内乳酸检测方法的重要性，并简要阐述文章的结构和目的。
接着，正文部分将详细探讨细胞内乳酸的重要性。
我们将介绍乳酸在细胞内的生成和代谢途径，并解释其在细胞内能量代谢、肿瘤发展等方面的重要作用。
然后，我们将介绍现有的细胞内乳酸检测方法，包括传统的生化方法和近年来发展起来的新技术。
针对每种方法，我们将详细描述其原理、操作步骤以及优缺点。
乳酸的鉴别实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握乳酸的物理性质和化学性质。
2. 学会使用化学试剂和仪器对乳酸进行鉴别。
3. 提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理乳酸（Lactic Acid），化学式为C3H6O3，是一种有机酸，具有酸味。
在实验室中，可以通过以下几种方法对乳酸进行鉴别：1. 碳酸钙反应：乳酸与碳酸钙反应生成乳酸钙、水和二氧化碳气体。
2. 硫酸铜反应：乳酸与硫酸铜反应生成蓝色的硫酸铜络合物。
3. 碘液反应：乳酸与碘液反应，颜色由蓝色变为棕色。
三、实验材料1. 试剂：乳酸、碳酸钙、硫酸铜、碘液、蒸馏水、氢氧化钠溶液、酚酞指示剂等。
2. 仪器：试管、烧杯、滴管、酒精灯、铁架台、石棉网等。
四、实验步骤1. 碳酸钙反应（1）取一支试管，加入少量乳酸，滴加碳酸钙粉末，观察现象。
（2）观察是否有气泡产生，若有，说明乳酸与碳酸钙反应生成了二氧化碳气体。
2. 硫酸铜反应（1）取一支试管，加入少量乳酸，滴加硫酸铜溶液，观察现象。
（2）观察溶液颜色变化，若变为蓝色，说明乳酸与硫酸铜反应生成了蓝色的硫酸铜络合物。
3. 碘液反应（1）取一支试管，加入少量乳酸，滴加碘液，观察现象。
（2）观察溶液颜色变化，若由蓝色变为棕色，说明乳酸与碘液反应。
4. 硫酸铜络合物反应（1）取一支试管，加入少量乳酸，滴加氢氧化钠溶液，使溶液呈碱性。
（2）滴加酚酞指示剂，观察溶液颜色变化，若变为红色，说明溶液呈碱性。
（3）滴加硫酸铜溶液，观察现象。
（4）观察溶液颜色变化，若变为蓝色，说明乳酸与硫酸铜反应生成了蓝色的硫酸铜络合物。
五、实验结果与分析1. 碳酸钙反应：实验中观察到乳酸与碳酸钙反应生成了二氧化碳气体，证实了乳酸的酸性。
2. 硫酸铜反应：实验中观察到乳酸与硫酸铜反应生成了蓝色的硫酸铜络合物，证实了乳酸的酸性。
3. 碘液反应：实验中观察到乳酸与碘液反应，颜色由蓝色变为棕色，证实了乳酸的还原性。
4. 硫酸铜络合物反应：实验中观察到乳酸与硫酸铜反应生成了蓝色的硫酸铜络合物，证实了乳酸的酸性。
乳酸知识
乳酸的检验乳酸的定性鉴定往乳酸水溶液中加入高锰酸钾溶液，加热，即发出乙醛的特殊气味： KmnO4CH3CHOHCOOH——→CH3CHO+CO2+H2△乳酸的定量测定取样品约1g，精密称定，加蒸馏水50ml，精密加1mol/1NaOH标准溶液25m l,煮沸5分钟，加酚酞指示剂2滴，趁热用0.5mol/1标准硫酸溶液滴定至淡红色，并同时做一空白对照。
计算如下：ω=90.08（υο－υ）c*2式中ω——乳酸的实际含量（mg）υο——空白试样滴定消耗硫酸量（ml）υ——样品滴定消耗硫酸量（ml）c——硫酸的浓度（mol/1）乳酸溶液的重量百分重量（mg）乳酸钙的定量测定取样品0.3g,精密称定，加水50ml,微热溶解后，放冷，加KOH试液4ml，钙黄绿素指示剂约20mg，用0.05mol/1EDTA·Na2溶液滴定，背光观察，溶液由黄绿色荧光转变为橙色为终点。
以Y4-代表EDTA·Na2在溶液中的状态，则：Ca2++Y4-＞=＜CaY2-加入KOH的目的是提高钙络合物（CaY2-）的条件稳定常数，防止它的水解效应，使滴定曲线等当点附近的突跃部分加长，指示剂变色明显。
结果计算如下：乳酸钙含量：ωCaL2=218.2VC （mg）五水乳酸钙含量：ωCaL2·5H2O=308.3VC (mg)产品纯度（%）=（ωCaL2·5H20/W1）*100式中υ——滴定消耗EDTA·Na2的量（ml）C——EDTA浓度（mol/1）ω1——称取样品重量（mg）乳酸的用途乳酸是一种重要的有机酸，成品分为工业级、食品级和药典级。
乳酸及其盐类和衍生物在医疗、农业和许多工业部门都有广泛的用途。
乳酸不仅对人畜无害，而且有杀菌作用，可以用作手术室、病房、实验室、车间等场所的喷雾杀菌。
由于他酸性稳定，有助于食品风味，所以在食品工业中广泛用作酸味剂、防腐剂、还原剂等，可用于清凉饮料、糖果、糕点的生产和鱼肉、蔬菜的加工和保藏。
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乳酸的测定：
对羟基联苯比色法（参照高庆，2005）
1.材料、试剂与仪器
无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
1.1主要溶液：
①钨酸溶液：0.303mol/L硫酸及10%(W/V)钨酸钠(Na2WO4·2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制；
②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O) 20g，加蒸馏水70ml，加热使之溶解，再加入蒸馏水定容至100ml；
③对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯1.5g溶于100ml 的0.125mol/L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体) ，贮存于棕色瓶中，保存于4℃冰箱，可使用一个月；
④乳酸标准储存液(1mg/ml)：精确称取无水乳酸锂106.5mg，溶于50ml 蒸馏水中，加0.5mol/L 硫酸20ml，后加蒸馏水定容至100ml，混匀后保存于4℃冰箱。
⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL加蒸馏水稀释至50mL。
⑥乳酸标准应用液(200µg/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。
在冰箱中可保存数天。
1.2主要仪器：
UNIC UV-2100 紫外可见分光光度计、TGL-16B 离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。
2. 方法
2.1 青贮浸提液样品预处理
取适量青贮浸提液样品5000r/min离心10min，取上清液适当稀释，吸取稀释液2.00ml于洁净离心管中，加入2.00ml钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物（约30～45min），10000r/m 离心10min，取上清液置于5ml 洁净具塞试管中，60℃水浴保温30min 左右，冷却待用。
2.2 标准曲线的制作
①用200Lg/mL乳酸应用标准液
同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。
②各管中分别加入氢氧化钙粉末100mg,混匀,8000r/min离心5min,取上清液 1.5mL,加入预先加有20mg氢氧化钙粉末的小试管中,混匀,加0.1mL 20%硫酸铜溶液,称重,迅速混匀,沸水浴3min,水浴冷却,补足重量,3000r/min离心5min,各吸上清液0.5mL加入比色管中。
③在各管加入25µL的4%硫酸铜溶液,混匀后置冰水浴内冷却。
④将预冷的浓硫酸缓缓加入各管中,每管各加6.0mL,边加边摇,混匀后置沸水浴中准确加热5min,取出后迅速置冰水浴中冷却3min左右。
⑤在各管中加0.5%对羟基联苯溶液0.05mL,充分振摇后,放置0.5h,其间每10min混摇一次。
⑥各管置于沸水浴中准确加热90s,立即放入冰水浴中冷却。
在波长565nm处用lcm比色皿,1管作为参比,分别测定吸光度(A)。
所得数据以乳酸含量为横坐标,以565nm处的光吸收为纵坐标,作标准曲线。
2.3青贮样品浸提液中乳酸含量的测定
取青贮样品浸提液滤液按标准曲线的测定方法,以蒸馏水为空白测定其在560nm处的光吸收,所得数据在标准曲线上查得相应的乳酸含量,即为青贮样品浸提液中的乳酸含量。
样品中乳酸含量=计算值×稀释倍数
需要试剂：
无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
需要器材：
分光光度计、离心机、离心管、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。