血小板功能检测的研究进展
常用血小板功能检测方法研究进展
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流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测血小板功能及其临床应用
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）检测血小板功能及其临床应用血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。
然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。
这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。
这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。
关键词：血小板临床应用流式细胞术血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。
然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。
这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。
这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。
由于血小板的活化程度可由血小板膜糖蛋白表达水平的高低来判断，近年来，文献报道利用流式细胞术，特别是全血法流式细胞术，检测血小板膜糖蛋白的表达［2］。
该技术能灵敏、特异地检测血液中活化血小板，并评价其功能。
现就全血法流式细胞术检测血小板功能的方法及临床应用现状和潜力进行综述。
一、全血法流式细胞术1.方法学：流式细胞仪能快速测定大量个体细胞的特性。
样品中欲分析的细胞预先进行荧光标记，然后由压缩氮经硅管送达标本室，再以5 000～10 000个细胞/秒的速率逐个射入光敏感区。
在适当波长的激发光作用下，被特殊染色的细胞发射出一定量的荧光脉冲讯号。
探测器收集每个细胞的荧光讯号和光散射，然后传入计算机进行分析。
传统的流式细胞术检测血小板膜糖蛋白的表达，常用的样本是经洗涤的血小板或富含血小板的血浆。
由于血小板极易活化激惹，样本经离心、洗涤等步骤，容易人为地导致体外血小板激活，影响临床诊断价值。
为此，Shatti等［2］引入了全血法流式细胞术。
血小板聚集功能检测及临床应用
阻抗法的不足之处
光学聚集仪耗时,对小聚集物的形成不敏 感,，操作相对烦琐。 阻抗法与比浊法的结果无法换算。 尚缺乏大量应用的经验。
目前血小板聚集功能的检测已经从传统的 手工法发展到全自动仪器的检测,从单一的 比浊法发展到阻抗法,剪切法,流式细胞术法、 模拟体内初期止血（PFA-100）等等, 从单 一的测定血小板聚集功能发展到能同时检 测血小板释放ATP和血小板内Ca2+的含 量，血小板释放颗粒及活化功能的测定， AA代谢产物测定，血小板内环腺苷酸 ( cAMP)和环鸟苷酸 ( cGMP)测定，血小板 活化的新标志物等等。
质量控制 室内质控：用已知正常人的混合PRP标本 建立典型的血小板聚集模式。这些模式的 正常值用来同结果显著异常的标本进行比 较就可以表明血小板机能障碍。最好每次 试验前做一混合PRP作为当日正常对照。
血小板聚集试验的应用
三大功能: 一、抗血小板药物的监测 二、血小板功能异常的诊断 三、血栓性疾病的监测
注意事项
时间 应在采血后3小时内完成。 温度 采血后标本应在15-30°C 的室温放置。切忌放 入冰箱。 血浆的pH 采血后血液中的CO2不断逸出，使pH上升。 6.5-8.5的标本可获得最佳效果。所以一般在实验前半 小时开盖为宜。 饮食 最好空腹，禁饮牛奶、豆浆和脂肪性食品。 诱导剂 ADP在保存中会分解，配制后最好分装，在20°C以下的冰箱中保存。肾上腺素更容易分解，应 以黑纸包裹避光。 生物参考区间 各实验室应对试剂说明书提供的生物 参考区间进行验证。
血小板的实验原理
血小板的实验原理
血小板是一种重要的血液组织细胞，参与了血液凝固和止血过程。
血小板的实验原理主要包括血小板计数和血小板功能评估两个方面。
血小板计数是指通过检测单位体积或单位血液中的血小板数目来评估血小板的数量。
常用的方法包括直接计数法和间接计数法。
直接计数法使用血细胞计数仪对稀释后的全血进行计数，得出血小板数目。
间接计数法则是先通过稀释血液，使血小板分散在血液中，然后使用显微镜进行计数，最后通过计算得出血小板计数。
血小板计数可用于评估血小板的数量，判断出血、出血倾向等疾病。
血小板功能评估是指通过相关实验方法来评估血小板的功能状态。
常用的方法有凝血时间、凝血酶原时间、凝血酶原活动度等。
凝血时间是指从血液凝固开始到形成凝块的时间，可以通过添加活化因子或添加促进凝血的物质来测试血小板功能。
凝血酶原时间是指凝血酶形成所需要的时间，也是评估血栓形成能力的指标。
凝血酶原活动度则是通过检测凝血酶原在血液中的水平来评估血小板的聚集和血栓形成能力。
血小板的实验原理主要包括血小板计数和血小板功能评估两个方面，通过这些方法可以对血小板的数量和功能进行评估，进而判断疾病的诊断和治疗。
血小板功能分析报告
血小板功能分析报告尊敬的患者先生/女士，感谢您对我们医院的信任与支持。
根据您提供的血液样本，我们仔细研究并进行了血小板功能的全面分析报告。
以下是我们的调查结果和相应的解释。
一、前言血小板是血液中的重要成分之一，对于正常的血凝过程至关重要。
血小板功能异常可能导致出血或血栓形成等疾病。
本报告将重点分析您血小板的功能表现，以了解您的个体情况。
二、方法我们采用了一系列的实验室检测方法，包括血小板计数、血小板聚集功能分析和血小板释放功能分析。
这些方法旨在评估血小板的数量和其聚集和释放功能。
三、血小板计数根据我们的检测，您的血小板计数为xxxx（正常范围：150-450x10^9/L）。
您的血小板计数处于正常范围内，这意味着您的血小板数量在正常水平上工作。
四、血小板聚集功能分析血小板聚集功能测试是评估血小板如何聚集形成凝块的关键指标。
我们通过以下实验来评估您的血小板聚集功能：1. ADP诱导的血小板聚集实验根据分析结果，我们发现您的ADP诱导的血小板聚集功能正常。
这表明当血小板受到刺激时，它们能够正常地聚集起来，以发挥其在血栓形成中的重要作用。
2. 碳酸氢盐诱导的血小板聚集实验类似地，对于碳酸氢盐诱导的血小板聚集实验，我们的结果显示您的血小板聚集功能在正常范围内。
这表明您的血小板对于血栓形成的反应正常。
五、血小板释放功能分析血小板释放功能测试有助于评估血小板释放细胞因子的能力。
以下是我们进行的相关测试：1. ATP释放实验根据我们的结果，您的血小板ATP释放功能正常。
这意味着您的血小板能够正常释放细胞因子，以维持血液凝固平衡。
2. 5-HT释放实验类似地，我们的实验结果表明您的血小板5-HT释放功能正常。
这表明您的血小板能够正常释放血小板血栓素，以进一步维持血栓形成的正常功能。
六、结论根据我们的血小板功能分析报告，您的血小板数量正常，同时其聚集和释放功能也处于正常水平。
这说明您的血小板功能正常，与正常的血液凝固过程没有明显异常。
血小板体外质量评价研究进展
伪足 从 细胞表 面 突 出 ， 血小 板不再 有 涡旋 。因此 ， 活 化 的血 小 板 的反 射 光 只射 向一 个方 向 ， 成 一个 暗 形 淡 的表 面 。圆 盘状 血 小板 有 涡 旋 现象 ， 球 状血 小 而 板 则没 有 。观 察 涡 旋现 象 是一 个 简单 而 又 相对 粗 糙 和 主观 的方法 。 根据 涡旋 现 象 而设 计 的 自动 血 小板 检测 仪器没 有 特别成 功 的发展 。 １ ． 形 态学计 分 形 态 学计分 曾经 被认 为是 血小 ．２ １ 板体 外质 量评 价 的最好 方法 之一 ， 与体 内的输 注效 果有 很 好 的相 关性 。 由于血 小 板体 积 很 小 ， 以 所 通过 油镜 观测 、 辨和计 数 圆盘 状的 、 分 带伪 足 的和其 他 形态 的血 小板 很 困难 。形 态 学计 分 很 费 时 ， 且 而 主观 ， 因此在 医 院血库 使用 不多 。但是 ， 如果 形态 学 评分 和输 注 效果 能 够 结合 ， 形 态 学计 分 自动化 用 将
［ ｙ ｗ ｒ ｓ ｐａ ｌｔ ｕ ｌｙ ｅ ａ ａ ｏ ；ｄ ｔｃｉ ｎ ｔ ｍｅ ｔ Ｋｅ ｏ ｄ ］ ｌ ｅｅｓ ａ ｔ ｖｌ ｔ ｎ ｅｅ ｔ ｇ ｉｓ ｔ ；ｑ ｉ ｕ ｉ ｎ ｕ ｒ ｎ
血小 板 是血 液 中的有 形成 分 之一 ， 一般 呈 圆形 ， 有质 膜 ， 没有 细胞 核 ， 体积 小 于红 细胞 和 白细胞 。血 小 板 功 能 检 测 是 围 绕 其 正 常 生 理 活 性 及 功 能 展 开 的 。 目前 关 于血 小板 体外 质量 检测 缺 乏公 认 的金标 准 。我们 在 此简要 介 绍 目前评 价 血小板 体 外质 量 的
ｍｅ ｔｏｃ ｄ ｍ ｆ Ｍｉｔ ｙ Ｍｅ ｉ ｌＳ ｉ ｃ ｓ ｅ ｉｇ １ ０ ７ ；Ｃ ｉ ｎ ｆ Ｂ ｏ ｒ ｎｆ ｉ ，Ａ ｆ ｉ ｅ ｏ ｐｔ ｆＡ ａ ｅ ｙ ｏ ｌ ａ ｄｃ ｃｅ ｅ ，Ｂ ｉｎ ０ ０ １ ｈｎ ｏ ｕｏ ｉａ ａ ｉｒ ａ ｎ ｊ ａ
血小板功能检测技术应用进展
息 。该方法 缺点 为 血小 板 分离 过 程 中剪 切力 刺 激 血小 板， 不能准确模拟血 小板 在损伤 的血 管壁黏 附 、 激活 和聚集 过程 ； 检测操作 时间长 ， 标本要迅速送交实 验室 ， 能床旁进 不 行， 并且需要高水平 的操作技师 ； Ｐ Ｐ ｍ小板计 数 ＜１０× 当 Ｒ ０ １ Ｌ时结果不可信 ； ０／ 血脂能够改变 Ｐ Ｐ和 Ｐ Ｐ中光波波长 Ｒ Ｐ 的吸收 ， 如有显著 的高脂血症 ， 则无法准确检测 。
冠 心 病 抗 血 小板 疗效 ’ 。 Ｊ ２ 血 小板 聚 集 反 应 检 测
准， 可用于床旁检测 阿司匹林或噻氯 吡啶诱 导 的血小 板功能
缺 陷 。 目前 有 ３种 机 型 ： ｅ ＰＩ ／Ｉ ｓａ 对 Ｇ ｂ ｔ ｂ ＩａＡ ｓｙ（ ｈＧ Ｉ Ｉ ＰＩ ／ Ｉ Ｉａ拮 抗 药 敏 感 ）ｔｅＡｐｒ ｓａ （ 阿 司 匹 林 敏 感 ） ｔｅ Ｉ Ｉ ， ｓｉｎＡ ｓｙ 对 ｈ ｉ 和 ｈ Ｐ Ｙ ２Ａ ｓｙ （ 噻 吩 并 吡 啶 敏 感 ） 。 其 中 Ｖ ｒｙ Ｎ ｗ ２ １ ｓ ａ 对 ｅｉ ｏ ｆ
测 技 巧 、 肤 厚 度 及 温 度 的 影 响 ， 他 影 响 因 素 包 括 特 异 性 皮 其
面带有 负电荷 的血 小板立 即在电极 阳极端形成 血小板膜 ， 导 致该 电极 电阻增 高 。如 果血小 板处 于激活状 态并 在 电极 表
面形成膜 ， 将会使整 个 回路 测 量 血 小板 增加 的整 体 回 路 电 阻 。
差（ 如可受到维勒布兰德 因子影 响 ） 敏感性 差 ， ， 高度 的 内感 受器变异性 ， 的患 者还 可能形 成不 雅观 的瘢痕 Ｊ 目前 ， 有 。
血小板聚集功能试验
血小板聚集功能试验1. 介绍血小板聚集功能试验是一种常见的实验室检测方法，用于评估血小板的聚集能力。
血小板是血液中的一种细胞成分，主要功能是在血管受损时形成血栓，以止血。
而血小板聚集功能则是指在一定刺激条件下，血小板能够迅速聚集在一起形成血栓。
这一功能对于维持正常的止血过程非常重要。
2. 原理血小板聚集功能试验主要基于以下原理：•血小板激活：在受到刺激时，血小板会释放出一些激活因子，如ADP、TXA2等。
•表面受体结合：这些激活因子会与血小板表面的受体结合，从而引发下游信号传导。
•表面糖蛋白表达：在信号传导过程中，血小板表面的糖蛋白也会发生变化，从而使得相邻的血小板能够相互黏附。
•聚集过程：通过这些黏附作用，大量的血小板能够聚集在一起，形成血栓。
3. 实验步骤血小板聚集功能试验的具体步骤如下：3.1 血样采集需要从被测者的静脉或指尖采集一定量的血样。
采集血样时需要注意消毒和无菌操作，以避免污染。
3.2 血小板分离将采集到的血样放入带有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒数次，使得抗凝剂充分混合。
用离心机将试管置于高速离心状态下，离心一段时间后，血液会分层。
上层是血浆，中间是白细胞和红细胞，底部则是富含血小板的沉淀。
3.3 血小板悬液制备将血小板沉淀取出，并加入适量的缓冲液进行洗涤。
然后再次进行离心操作，去除上清液。
重复以上步骤2-3次，直至得到纯净的血小板悬液。
3.4 血小板聚集试验将血小板悬液与特定的刺激物混合，如ADP、TXA2等。
将混合液置于光学聚集仪中进行监测。
光学聚集仪能够实时记录血小板的聚集过程，并生成相应的曲线。
3.5 结果分析根据血小板聚集试验所得到的曲线，可以通过以下指标进行结果分析：•最大聚集率（MA）：表示血小板在刺激下的最大聚集程度。
•聚集速度（AS）：表示血小板在刺激下的聚集速度。
•聚集时间（AT）：表示血小板开始聚集到达最大聚集率所需的时间。
4. 应用血小板聚集功能试验在临床上具有广泛的应用价值，主要包括以下方面：4.1 诊断疾病血小板聚集功能试验可以用于诊断一些与血小板功能异常相关的疾病，如遗传性或获得性出血性疾病、高凝状态等。
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文章编号(A rti c l e I D):1009-2137(2007)05-1130-05 ・综述・血小板功能检测的研究进展杨超,王捷熙,韩颖军事医学科学院野战输血研究所,北京100850摘要 血小板在执行生理性止血的同时,也在病理性血栓形成过程中起重要作用。
血小板功能检测对于临床相关疾病的诊断和抗血小板药物的筛选及相关研究有着重要的意义。
目前,血小板功能检测的实验与方法日益增多,但所有这些检测方法均有不足之处,因而有必要研究和发展一种操作简便、检测灵敏度高的方法。
本文对近年来血小板功能检测方法诸如血小板的一般功能检测、血小板黏附功能测定、血小板聚集功能测定、血小板释放功能测定、血小板凝血活性检测和流式细胞术在血小板功能检测中的应用等研究进展进行了综述,并对研究前景作了简单的展望。
关键词 血小板;血小板功能;血小板功能检测中图分类号 R331.143文献标识码 AR e se a rch A d va n ce in P la te le t F u n c t ion A ssa ys———Revie wY ANG C hao,WANG J ie2Xi,HAN YingInstitute of Transfusion M edicine,Academ y of M ilita ry M edica l Sciences,B eijing100850,ChinaA b s t ra c t P latelets p lay a key role in the pathogenesis of atherothrom bosis,and also perfor m the physiological he2m ostasis.The p latelet function assays have values in the investigating patients w ith suspected p latelet disorders and in studying the effects of anti2p latelet drugs.There are increasing assays for investigating p latelet function,including assess2 m ent of p latelet adhesion,activation and aggregation,etc.H ow ever,all of these assays have certain li m ited sensitivity.It is necessary to develop a si m p le,sensitive assay that m easures the activated p latelet.This article review ed advances of re2 searches on p latelet function assays,including assay for general function of p latelet,assay of p latelet adhesion function, p lantelet activation assay,p latelet aggregation assay,p latelet coagulation assay and app lication of flow cytom etry in as2 sessm ent of p latelet functions,etc.and looked for w ard to research p rospect in this field.K e y w o rd s p latelet;p latelet function;p latelet function assayJ Exp He m atol2007;15(5):1130-1134 血小板在生理性止血、维持血管壁完整性以及某些病理过程,如血栓形成、动脉粥样硬化、不稳定性心绞痛、肿瘤转移和炎症反应等过程中起着重要作用[1,2]。
因此,血小板功能检测对早期发现是否有血栓形成的危险以及血小板相关疾病的诊断和治疗有着重要的意义。
本文就血小板功能检测方法的研究进展作如下综述。
血小板功能检测可分为血小板一般功能测定,血小板黏附、聚集及释放功能的测定和流式细胞术(FC M)分析等。
血小板一般功能测定这种测定包括出血时间的测定[3]、血块收缩试验、活化凝血时间测定、快速血小板功能分析法(RPF A)[4]等,是目前临床评价血小板功能的辅助手段。
血小板粘附功能测定1941年W right[5]建立了转动玻瓶法测定抗凝全血中的血小板在玻璃瓶表面的黏附特性。
1960年, Helle m[6]建立了玻璃珠柱法测定枸橼酸抗凝全血或富血小板血浆的血小板粘附性。
血液通过玻璃珠柱后,由于血小板粘附在玻珠或塑料管,以及形成的血小板聚集体被滞留在玻璃珠柱内。
因此,过柱后血液中的血小板数降低,故又称滞留试验。
1963年Salz man[7]对Helle m法加以改进,血液抽出后为经抗凝直接通过玻璃珠柱进行测定,本法有助于粘附性减低的出血患者的诊断,但对粘附性增高的血栓性疾病敏感性降低。
通讯作者:韩颖,研究员.电话:(010)66932200.E2mail:hany2 ing1001@2006-09-29收稿;2007-06-05接受・311・中国实验血液学杂志 J ourna l of Experi m enta l H em a tology2007;15(5):1130-1134血小板聚集功能的测定血小板聚集是血小板的一个重要生理特性,是其参与止血和血栓形成过程的重要因素之一。
血小板聚集功能的测定对于临床上诊断血栓前状态和血栓性疾病具有重要意义。
长期以来血小板聚集活性的检测一直是血小板体外功能评价的金标准[8]。
目前已有多种方法对血小板聚集活性进行定量或定性的测定。
肉眼或镜下检查法主要观察聚集颗粒出现的时间及其大小,以判断血小板的聚集活性,但是只能粗略地评价血小板的聚集活性。
过滤压力法将全血以恒定的速度通过微孔金属网,若血小板聚集成团,则阻止血流通过,测定过滤前后的压力差来表示血小板聚集活性。
PRP比浊法最初由B r on[9]提出,在特定的搅拌条件下,在富含血小板血浆(PRP)中加入诱导剂,血小板激活后GP Ⅱb2Ⅲa复合物暴露出纤维蛋白原的受体并与其结合而导致血小板聚集,血浆浊度降低,透光率增加,光电池迅速将光浊度的信号转换为电讯号,在记录仪上记录下电讯号的变化。
PRP比浊法是目前应用最广泛的一种测定法,临床上对于血小板无力症、原发性血小板增多症及血栓前状态和血栓性疾病的诊断具有重要意义。
这种方法也存在不足之处:需要去除红细胞,可导致CO2的挥发和pH增高,不能完全反映体内血细胞之间的相互作用;测定时间过长可导致血小板活性降低;对血小板聚集物的形成不敏感,只能检测大的血小板聚集物;离心过程也会导致血小板的激活和红细胞碎片中血小板的丢失;血小板数目的调整难以标准化;重现性差[10];而且高脂血症的PRP会影响吸光度,减少PRP与PPP之间的差异。
因此,体外血小板聚集实验不能准确反应体内血小板的聚集功能和血小板活化水平的变化[11]。
全血电阻抗法1980年Cardina和Fl ower[12]以电阻抗原理设计了一种测定全血中血小板聚集的方法,即在测定管中加入2个电极,加入诱导剂胶原或ADP,血小板发生聚集而堆积在电极上,阻抗就相应增加,在记录仪上记录这种阻抗,以观察体外血小板的聚集活性。
这种方法的优点是直接使用全血,无需富血小板血浆的制备,操作更简便快捷;无需经过离心,是新型血小板功能试验和血小板拮抗剂评价的良好供选方案[13];对于脂血标本的测定,可以克服比浊法因浑浊而影响结果。
这种方法的不足之处,与比浊法相比较对小聚集物的形成不敏感,且每次测定后需要清洗电极,连接电极的电线需要小心放置,不能弯曲,使其很难满足临床工作的需要。
全血血小板计数法用来测定血小板聚集时减少血小板数目。
将枸橼酸钠抗凝的全血放到含有旋转离心磁棒的聚苯乙烯试管中,并在37℃下孵育,用甲醛固定单个血小板,以测定起始血小板数。
加入诱聚剂诱导血小板聚集,并测定聚集后血小板数量,聚集前后进行比较,得出血小板减少的百分率。
该法对很小的血小板聚集物敏感,并不需要对抗凝全血的稀释,耗血量少,所需时间短,可用于评价血小板功能异常的病人。
血小板功能分析仪(PFA2100)PF A2100系统最早在1995年由Kundu等[14]提出,对抗凝全血的血小板功能进行定量检测。
PF A2100模仿体内血管损伤时的止血环境,此系统由微处理器控制,使用一次性反应杯,内有一层生物膜,表面附有胶原,并含有ADP或肾上腺素。
当用枸橼酸钠抗凝的全血从膜的小孔中抽吸出来时,血小板粘附于胶原并被ADP或肾上腺素进一步活化,形成血小板栓子,将小孔阻塞,仪器自动记录小孔完全阻塞的时间,所需的时间称为"封闭时间"。
胶原和ADP用来区分先天和后天性血小板功能障碍,胶原和肾上腺素都适合检测阿斯匹林诱导的正常人血小板异常[15]。
PF A2100操作简单,结果准确,临床上用于VWD和血小板异常的筛选,以及抗血小板药物治疗的监测和外科手术过程中初级止血的评价。
然而PF A2100对于纤维蛋白原缺陷疾病的诊断的灵敏度低[16]。
体外血小板聚集计测定法在高剪切力条件下测定血小板的黏附和聚集。
该方法简单快捷,仅需要0.2m l血液[17]。
临床用来抗血小板药物的治疗、血栓前状态及血小板功能亢进等疾病[18]和心胸外科出血的监测[19]。
剪切诱导血小板聚集测定法该方法采用旋转式铁板流体测定仪,将PRP注入平・1311・血小板功能检测的研究进展板的内筒内,氦氖激光透过其中,通过圆锥的旋转产生剪切力,从而引起血小板聚集,血小板聚集引起PRP透光度的变化,由电脑进行分析处理,最后绘制成聚集曲线[20]。
剪切诱导的血小板聚集对于血栓性血小板疾病,如脑血栓、动脉粥样硬化的防治具有重要意义。
但是温度和血小板数目对该法的测定结果都有较大的影响。
散射性粒子检测法该方法最先由Ozaki[21]提出,仪器采用He2Ne半导激光器(波长为675nm)通过聚光镜折射成直径约为40μm的激光束,照射到装有富血小板血浆(PRP)比色杯。
该方法能通过血小板聚集颗粒的大小及其生成数量两个指标来评价血小板的聚集功能,血小板聚集颗粒的大小及数量与散射强度相一致,与比浊法相比,灵敏度有了很大提高。