精选推荐硕士研究生课 现代分子生物学 核酸研究进展
分子生物学课程论文(精)
PCR技术发展与应用的研究进展王亚纯 09120103摘要：聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR 是最常用的分子生物学技术之一，通过变性、退火和延伸的循环来完成核酸分子的大量扩增．定量PCR 技术是克服了原有的PCR 技术存在的不足，能准确敏感地测定模板浓度及检测基因变异等，快速PCR 技术快速PCR 在保证PCR 反应特异性、灵敏性和保真度的前提下，在更短时间内完成对核酸分子的扩增．mRNA 差异显示PCR 技术是在基因转录水平上研究差异表达和性状差异的有效方法之一．近年来已经开展了许多这三方面的研究工作，本文就定量PCR 技术、快速PCR 技术、mRNA 差异显示PCR 技术作一综述，以便更好地理解及应用这项技术。
关键字：定量PCR ；荧光PCR ；快速PCR ；DNA 聚合酶；mRNA 差异显示PCR0 前言聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR 技术由于PCR 简便易行、灵敏度高等优点，该技术被广泛应用于基础研究。
但是，由于传统的PCR 技术不能准确定量，且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点，使其在临床上的应用受到限制[1]。
鉴于此，对PCR 产物进行准确定量便成为迫切的需要。
几经探索，先后出现了多种定量PCR (quantitative PCR ，Q-PCR 方法，其中结果较为可靠的是竞争性PCR 和荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR 。
随着生命科学和医学检测的不断发展，人们越来越希望在保证PCR 反应特异性、灵敏性、保真度的同时，能够尽量缩短反应的时间，即实现快速PCR(Rapid PCR or Fast PCR。
快速PCR 技术不仅可使样品在有限的时间内可以尽快得到扩增，而且可以显著增加可检测的样品数量，显然，在大批量样本检测和传染病快速诊断等方面将会有重要的应用前景。
分子生物学研究
分子生物学研究引言分子生物学是现代生物学的一个重要分支，主要关注生物体内的分子机制。
通过研究核酸、蛋白质等大分子的结构和功能，科学家们能够揭示生命的奥秘。
本文将简要介绍分子生物学的研究内容、方法以及一些重要的研究成果。
研究内容1. 核酸研究核酸包括DNA和RNA，是遗传信息的载体。
分子生物学的重要任务之一就是研究核酸的结构与功能。
例如，DNA双螺旋结构的发现为理解遗传信息的存储和传递奠定了基础。
此外，RNA在基因表达调控中的作用也是研究的重点之一。
2. 蛋白质研究蛋白质是生命活动的主要执行者。
分子生物学研究蛋白质的合成、折叠、功能及其与其他分子的相互作用。
通过了解蛋白质的功能，可以更好地理解细胞的生理过程。
3. 酶学研究酶是一类具有催化作用的蛋白质，能加速生物化学反应。
分子生物学研究酶的结构、催化机制及应用，如在医药和工业上的应用。
4. 信号传导研究细胞通过复杂的信号传导网络进行通信。
分子生物学研究这些信号通路的组成、调控及功能，以揭示细胞间的信息交流机制。
研究方法1. 分子克隆技术分子克隆技术是分子生物学的基本工具，用于获取、扩增和改造特定基因。
常用的方法包括PCR（聚合酶链式反应）和质粒构建。
2. 基因编辑技术CRISPR-Cas9等基因编辑技术的发展，使科学家能够精确地修改基因序列，从而研究基因的功能和治疗遗传疾病。
3. 高通量测序技术高通量测序技术（如NGS）能够快速测定大量DNA或RNA序列，极大地推动了基因组学和转录组学的发展。
4. 结构生物学方法X射线晶体学、核磁共振（NMR）和冷冻电镜（Cryo-EM）等技术用于解析蛋白质和其他生物大分子的三维结构，为理解其功能提供重要信息。
重要研究成果1. DNA双螺旋结构的发现沃森和克里克于1953年提出DNA双螺旋结构模型，这一发现奠定了现代分子生物学的基础。
2. RNA世界假说RNA世界假说认为早期生命形式主要以RNA为基础，RNA既是遗传物质又具有催化功能，为理解生命起源提供了新的视角。
分子生物学-第5章-分子生物研究法(上)精选全文完整版
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)
一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基顺序的核酸 水解酶
Bam HⅠ
GGATCC CCTAGG
GCCTAG+
GATCC G
分类: Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ （基因工程技术中常用Ⅱ型）
命名
Hin dⅢ
Haemophilus influenzae 自主 复制能力的 DNA分子（ vector），如 病毒、噬菌体 和质粒等小分 子量复制子都 可以作为基因 导入的载体。
1970年Mandel和Higa发现，大肠杆菌细胞经适量氯化钙处 理后，能有效地吸收λ噬菌体DNA。
1972年，Cohen等人又报道，经氯化钙处理的大肠杆菌细 胞同样能够摄取质粒DNA。
把磷酸基团加到多聚核苷酸链的5'-OH末端（进行末端标记 实验或用来进行DNA的连接 在双链核酸的3'末端加上多聚单核苷酸
从DNA链的3'末端逐个切除单核苷酸
从DNA链的5'末端逐个切除单核苷酸 切除位于DNA链5'或3'末端的磷酸基团
1972 - Paul Berg,
Produced first recombinant DNA using
5.1 重组DNA技术回顾 5.2 DNA基本操作技术 5.3 RNA基本操作技术 5.4 SNP的理论与应用 5.5 基因克隆技术 5.6 蛋白质组与蛋白质组学技术
5.1 重组DNA技术回顾
三大成就 ：
1. 40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体 是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题；
• 基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒 或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，使之 进入原先没有这类分子的寄主细胞内并进行持续 稳定的繁殖和表达。
前沿分子生物学研究进展
前沿分子生物学研究进展近年来，随着科技的发展和人们对健康的关注，分子生物学的研究受到越来越多的关注。
分子生物学是研究分子和细胞的结构、功能和相互作用的学科。
在科学研究发展的过程中，前沿研究始终是人们关心的焦点。
本文将对当前分子生物学研究的一些前沿进展进行介绍和理解，以期能更好地了解生命的奥秘。
一、CRISPR-Cas9技术CRISPR-Cas9是一种基因编辑技术，它是一种有着广阔潜力的DNA切割和粘贴技术，基于细菌免疫系统提供的抗病毒保护机制。
“CRISPR”指的是“集群间重复意义短回文序列”(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)，而CAS-9则是能够识别和切割DNA的酶。
CRISPR-Cas9技术可以使科学家更准确、更快速地编辑人类或者其它物种的基因。
它可以修复或删除基因，对于研究基因的功能以及治疗人类遗传病具有重要意义。
该技术目前已在许多生物领域得到广泛的应用，比如增强了抗病作物的培育，改善人类遗传缺陷的治疗等。
虽然这种方法仍处于研究阶段，但它的发明已经引起了世界范围内科学家的广泛关注和研究。
二、免疫治疗免疫治疗是一种新型癌症治疗方法，它是通过激发人体免疫系统来打击癌症。
这种新型治疗方法通过改变T细胞的活性、激活其免疫系统，让免疫系统自主对抗肿瘤。
近年来的研究成果表明，免疫治疗可以生成持久性的免疫反应，增加细胞因子的产生，提高肿瘤细胞的毒性，使得免疫系统能够更有效地攻击癌症。
这种治疗方法已经在良性和恶性疾病的治疗上有了重要的影响，其中最有希望的是在癌症治疗领域，免疫治疗被认为是最有潜力的救命稻草之一。
三、DNA合成人类DNA合成的观测和研究已经超越了以往的常规技术，比如PCR(聚合酶链式反应)，随着更多技术的开发，大量的待测序列正在处理中，并且更易于解读。
现在人们可以比以往任何时候都更准确地合成DNA序列。
这种DNA合成技术为新型药物的发展和基因工程的更深入研究提供了可能。
综述现代分子生物学在医学检验中的应用进展
术，可在同一个 ＰＣＲ 体系中增添 ２ 对以上引物，提高检测结
果准确性。 但将现代分子生物学技术应用在病原微生物检
测过程中难度较大，究其原因是病原微生物体积较小，且死
菌量较大，为确保检验结果准确性，需首先将死菌筛选出，使
用活菌进行检测。
采用其他技术检测病原微生物会受液体及其他因素影
用。 人们通过将特异性抗体固定在磁性纳米球表面，而后使
用酶、荧光染剂等进行检验。 将其与传统检验方案对比发
现，新型分子纳米技术检验敏感度、特异度较高，且具有操作
简单有优势。
应用分子纳米技术可对人体各种生化指标状态进行分
析，继而判断机体内是否存在足够的微量元素，其次分子纳
米技术可应用在病变基因修整中，促进损伤组织、细胞修复，
质检测中应用广泛。 例如，通过采集患者血液等标本，对机
体微量蛋白进行研究，通过分子生物遗传器可明确血液标本
特异性，继而为临床治疗、病情评估提供参考。
有报告指出，利用分子生物遗传器检验食物中大肠埃希
菌，灵敏度在 １０２－ １０３ＣＦＵ ／ ｍＬ 之间，５ ～ ７ｍｉｎ 便可完成一个
样品的检测，不仅稳定性较高，还可节约检测所需时间，亦可
体病变进行评估，为后期治疗提供更准确的引导，提高各疾
病控制效果。 因此分子蛋白组必然会成为医学检验的主流
方向，且在医学发展中占据重要地位。
五、 现代分子生物技术对病原菌微生物的检测
传统的病原菌检测技术耗时长、步骤繁杂，在检验过程
中需对病原微生物进行分离、培养，在检验过程中应用现代
分子生物学技术可提高检测效率及敏感度。 例如，在检测核
响，但应用现代分子生物技术可有效改善这一问题，既可提
硕士博士研究生毕业生论文-在医学分子生物学教学中开展研究生创新能力培养探究
[摘要] 以理论教学为切入点，教师承担的科研课题项目为引导，以开放实验室为平台，组织分子生物学兴趣小组，指导研究生从课题设计到研究计划实施进行了一系列探索。
通过课堂的理论学习—课后查阅相关资料—课堂讨论—实验设计—综合实践的过程，培养了学生的创新思维和独立分析问题、解决问题的能力。
[关键词] 分子生物学；创新能力；研究生教育；高等教育；培养质量研究生教育的宗旨是培养具有科学精神和原始创新能力的专业人才。
对研究生创新能力高低的判断，有人主张根据研究生的行为表现（主要是研究成果，特别是毕业论文）来做出[1]。
研究论文的质量，在一定程度上体现研究水平和能力，也是评价研究生教育质量的一个重要标准。
分子生物学是一门新兴的前沿学科,已成为现代生命科学中最具活力的带头学科之一。
医学领域分子生物学研究日新月异的发展，使人类对疾病的认识、预防、诊断和治疗发生了深刻的变革，医学科学已从整体、细胞水平逐步深入到了分子水平。
所以分子生物学理论与技术的应用是衡量研究生论文质量的一个重要指标。
那么在医学分子生物学教学过程中如何培养研究生的科研能力与创新能力。
我们在多年的教学实践中，以理论教学为切入点，教师承担的科研课题项目为引导，以组织分子生物学兴趣小组开放实验室为平台，指导研究生从课题设计到研究计划实施进行了一系列探索，促进了研究生科研能力与创新能力的培养与提高。
1 在《医学分子生物学》教学中开展研究生创新能力培养的必要性分子生物学是生命科学的带头学科，其理论与技术几乎渗透到医学、药学的所有领域。
无论是医学或药学专业的研究生在设计毕业论文时都用得上，如果学生都用上先进的理论和技术来设计课题，我院研究生的毕业论文质量将会更上一层楼。
另外，中医药要“保持和发扬传统特色，走现代化道路”，必须有坚实的分子生物学基础和创新能力，如怎样揭示辨证论治的分子机制，中医整体观怎样用基因组、基因谱、基因群、基因族等加以论证和研究，辨证论治怎样与基因的多态性、多效性、异质性、变异性结合等。
生物化学与分子生物学的研究进展
生物化学与分子生物学的研究进展生物化学和分子生物学是现代生命科学中两个重要且密切相关的分支学科。
它们的研究内容主要集中在生物分子的结构、功能以及其在生命活动中的作用和调控机制。
随着科技的进步和研究方法的发展，生物化学与分子生物学在过去几十年中取得了巨大的进展，为我们解开生命奥秘提供了有力的工具和理论基础。
一、生物化学研究进展生物化学主要研究生物体内各种生物大分子（如蛋白质、核酸、多糖等）的结构、性质和功能，以及它们在细胞代谢和生物体内的调控等方面的问题。
生物化学的研究手段主要包括分离纯化、酶学、光谱学、分子生物学等。
近年来，生物化学领域取得了许多重要的突破。
例如，结构生物学的发展使得我们可以通过解析蛋白质和核酸的立体结构来揭示其功能和调控机制。
随着高通量测序技术的出现，蛋白质组学和基因组学也得到了飞速发展。
通过研究蛋白质组与基因组的变化，我们可以更好地理解生物体内的调控网络和信号传递。
此外，还有许多新兴技术的出现，如质谱、生物传感器等，为生物化学的研究提供了新的思路和方法。
二、分子生物学研究进展分子生物学研究的是生物体内基因表达、DNA复制、蛋白质合成等分子过程。
分子生物学的研究手段主要包括PCR、基因克隆、DNA测序、基因组学、转基因技术等。
近年来，分子生物学领域也取得了巨大的进展。
特别是在基因组学方面，随着高通量测序技术的成熟应用，人类、动植物等生物的基因组序列得到了广泛的研究和解读。
这些基因组数据的大规模积累为我们研究生物体内基因功能和调控提供了宝贵的资源。
此外，分子生物学在疾病诊断和治疗方面也发挥着重要的作用。
例如，分子诊断技术可以通过检测体液中的特定蛋白质、核酸等分子标志物来帮助医生判断患者是否患有某种疾病，促进早期诊断和个体化治疗。
三、生物化学与分子生物学的结合生物化学和分子生物学两个学科在研究内容和研究方法上有很多交叉和重叠之处，二者的结合可以更好地揭示生命活动的本质。
例如，分子生物学的研究成果为生物化学的研究提供了结构和功能的基础，而生物化学的研究成果又为分子生物学的研究提供了必要的实验手段和理论指导。
硕士研究课现代分子生物学Molecularapproachesinbioremediation
易错PCR是一种简便快速地在DNA序列中随机制造突 变的方法，它通过改变传统PCR反应体系中某些组分的浓 度，使碱基在一定程度上随机错配而引入多点突变。本 法的关键在于选择适当的突变频率，当突变频率太高时， 几乎无法筛选到有益突变；若突变频率太低，野生型将 占据突变群体的优势，也很难筛选到理想的突变体。
(Cefotaxime)的最低抑制浓度比原始菌株提高了32,000
倍,也远高于易错PCR的突变筛选结果。
硕士研究课现代分子生物学 Molecularapproachesinbioremediation
DNA改组是DNA分子的体外重组,是基因在分子水平上 有性重组。通过改变单个基因(或基因家族)原有核苷酸 序列,创造新基因,并赋予表达产物以新功能。实际上,该 技术是一种分子水平上的定向进化。因此也称为分子育 种。在创造新基因的过程中,要设法产生各种变异。这主 要通过有性PCR、交错延伸PCR完成。
根际修复是利用植物一微生物和根际环境降解有机污 染物的复合生物修复技术，是目前最具潜力的土壤生物修 复技术之一。
硕士研究课现代分子生物学 Molecularapproachesinbioremediation
Protein engineering
定向进化（Directed evolution）是近20年发展起来的 一项新技术，是达尔文的进化论思想在核酸、肽或蛋白 等分子水平上的延伸和应用。它不需要深入了解蛋白质 的结构功能关系，在实验室条件下人工模拟生物大分子 自然进化过程，在体外对基因进行随机诱变，使基因发 生大量变异，并定向选择出所需性质的突变体，从而可 以在短时间内实现自然界几百万年才能完成的进化过程。
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核酸实验研究技术进展－ 1
杂交法的优点与缺点：
? 优点：? Dot blotting：简单实用，适于进行大样本数同时检测。
? Northern blotting：如果检测结果阳性，其可信度要远远高于
RT-PCR，因此被誉为评价基因转录的Golden Marker。
?
Southern blotting：对DNA病毒类病原体等的检测实用性很强。
B 食管癌细胞
SHEEC
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核酸实验研究技术进展－ 1
? 通过 RT-PCR，结合条带光密度扫描分析，测定实验 标本中目标mRNA分子或目标cDNA分子的含量
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核酸实验研究技术进展－ 1
例子：RT-PCR 检测SHEEC食管癌细胞与永生化食管上皮 细胞SHEE中 NGAL基因转录mRNA相对含量实验结果
化学发光法
NGAL ?
6
例三：
Northern blotting 检测缺 氧复氧条件下心 肌细胞EGR1 基 因转录mRNA 实 验结果
同位素法 EGR1 ?
核酸实验研究技术进展－ 1
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核酸实验研究技术进展－ 1
确保杂交法实验成功的八个关键点： ? 关键点1：确保实验方案设计合理。 ? 关键点2：确保探针的特异性充分。 ? 关键点3：确保检测的灵敏度足够高。 ? 关键点4：确保样本质量合格。 ? 关键点5：确保实验试剂质量合格。 ? 关键点6：确保实验过程规范。 ? 关键点7：对于编码序列的cDNA，要确保没有RNA的干扰。 ? 关键点8：几种杂交法，或杂交法与其它方法联合使用，相互印证，
? 缺点：? Dot blotting：由于在同一斑点位置，除了目标核酸分子
外，同时还存在其它的成千上万种不同的核酸分子，而这些核酸
分子有可能会与探针分子部分结合，这会促进探针分子与目标核
酸分子的结合，因此将可能导致阳性结果放大，甚至是假阳性结
果。 ? Northern blotting：对低拷贝mRNA有时检测不出来，容
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核酸实验研究技术进展－ 1
? 通过 Southern blotting ，结合条带光密度扫描分 析，测定实验标本中目标DNA分子的含量
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核酸实验研究技术进展－ 1
? 通过 Southern blotting ，结合条带光密度扫描分 析，测定实验标本中目标DNA分子的含量
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核酸实验研究技术进展－ 1
9
核酸实验研究技术进展－ 1
例子：
RT-PCR检测 SHEEC食管癌 细胞NGAL 基因 转录mRNA实验 结果
SM
NGAL ? 600bp
S: 食管癌细胞SHEEC
M: DNA marker
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核酸实验研究技术进展－ 1
确保PCR法实验成功的八个关键点： ? 关键点1：确保实验方案设计合理。 ? 关键点2：确保引物的特异性充分。 ? 关键点3：确保样本质量合格。 ? 关键点4：确保实验试剂质量。 ? 关键点5：确保实验过程规范。 ? 关键点6：确保PCR变性、退火和延伸温度适度。 ? 关键点7：对于编码序列cDNA，要确保没有RNA的干扰。 ? 关键点8：几种PCR法，或PCR法与其它方法联合使用，相互印证，
确保实验结果可靠。
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核酸实验研究技术进展－ 1
2) PCR法：序列已知，同时还要合成一对特异性引物。 ? 优点：? 实验的灵敏度很高，理论上可检测实验生物系统
中所存在的1个拷贝目标核酸分子。? 阴性结果的可信度很 高。 ? 缺点：由于容易存在样本污染情况，与此同时，毕竟在实验 过程中存在着目标核酸分子拷贝数人为放大这样一个事实， 因此，其阳性结果的可信度不如Northern boltting 或 Southern boltting。
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核酸实验研究技术进展－ 1
TaqMan Probes的优点： ? 定量关系准确。随着扩增循环数增加，TaqMan探针释
放出来的荧光基团成倍增加，荧光强度与扩增产物的 数量呈正比关系。 ? TaqMan探针特别适合于病毒定量、基因转录水平定量、 癌细胞基因微突变检测等。 ? 敏感性高。 ? 特异性高。 TaqMan Probes的缺点： ? 只适合于一个特定目标的检测。
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核酸实验研究技术进展－ 1
原理： ? 以目标基因DNA为模板，利用32P-（放射法）或生物素（非放
射法）作为标记信号，体外转录合成反义RNA探针。 ? 将过量的反义RNA探针与样品总RNA杂交，然后进行核糖核酸
酶处理。未与探针杂交的单链RNA和过量的游离探针被降解， 而目标RNA则因与探针结合形成双链而被‘保护'。 ? 杂交双链进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，用放射自显影或化学发 光等方法确定目标RNA的量。
核酸实验研究技术进展－ 1
生物系统中mRNA或DNA等目标核酸分子的分析鉴定
必须回答如下三个基本问题： ? 目标核酸分子是否存在于实验标本中。 ? 实验标本中目标核酸分子的含量是多少。 ? 实验标本中目标核酸分子的序列如何；以及与其他实验标本
中的情况比较，目标核酸分子的序列是否有变化。
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核酸实验研究技术进展－ 1
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核酸实验研究技术进展－ 1
例子：cDNA microarray （反向 Dot blotting） 检测 SHEEC食管癌细胞与永生化食管上皮细胞SHEE中 NGAL基因转录mRNA相对含量实验结果
A 永生化食管 上皮细胞
SHEE
判断标准： B/A ? 2或 ? 0.5为显著性 差异表达
实际情况： B/A＝3.53
证明目标核酸分子是否存在于实验标本中的基本实验方法： 1）杂交法，2）PCR法，3）测序法。
2
核酸实验研究技术进展－ 1
1) 杂交法：序列已知，同时还要合成一个标记了的特异性探针。 ? Dot blotting：不经过电泳，直接把检测样本点在一个适宜载体
上，针对目标DNA分子或RNA分子进行杂交检测。 ? Southern blotting：在电泳后，针对目标DNA分子的杂交检测。 ? Northern blotting：在电泳后，针对目标RNA分子的杂交检测。 ? 目标DNA分子原位杂交检测。 ? 目标RNA分子原位杂交检测。
? 起始模板浓度的对数与Ct呈 线性关系，根据样品的Ct值 就可计算出样品中所含的初 始模板数。
核酸实验研究技术进展－ 1
3.00
ห้องสมุดไป่ตู้
2.50
2.00
n
R ¤ |
1.50
1.00
104 103 102 Threshold
0.50
0.00 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 Cycle
易导致假阴性结果。
4
例一： cDNA microarray 检测SHEEC食管 癌细胞NGAL 基因 mRNA转录实验 结果
反向 Dot blotting
核酸实验研究技术进展－ 1
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例二：
Northern blotting检测 SHEEC食管癌 细胞NGAL 基因 转录mRNA实验 结果
核酸实验研究技术进展－ 1
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核酸实验研究技术进展－ 1
目标片段边缘序列的测定结果有时不准确例子
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核酸实验研究技术进展－ 1
Poly A tail
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核酸实验研究技术进展－ 1
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测定实验标本中目标核酸分子的含量
核酸实验研究技术进展－ 1
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核酸实验研究技术进展－ 1
? 通过 Dot blotting，结合斑点光密度扫描分析， 测定实验标本中目标mRNA分子、目标cDNA分子或 目标DNA分子的含量
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分子信标 (发夹型杂交探针)
环（15-30bp）
核酸实验研究技术进展－ 1
环与目标序列互补
FAM
荧光基团
Texas Red
茎(5-7bp)
茎由互补配对的序 列组成
淬灭剂
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分子信标工作原理
光 荧光基团
环
茎 淬灭剂
＋
光
发出荧光
核酸实验研究技术进展－ 1
单链DNA 模板
探针与DNA模板杂交
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核酸实验研究技术进展－ 1
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核酸实验研究技术进展－ 1
例一：Northern blotting 检测SHEEC食管癌细胞与永生化食管上皮 细胞SHEE中 NGAL 基因转录mRNA相对含量实验结果（化学发光）
NGAL ?
AB
AB
500 400 300 200 100 -
AB
GAPDH ?
AB
100 80 60 40 20 -
确保实验结果可靠。
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核酸实验研究技术进展－ 1
3) 测序法：通过电泳等手段已知实验生物系统中目标核酸的大 致大小，而且是对照生物系统中不存在，或者两者相比在含 量上可能有显著差别，然而序列未知。
? 优点：? 可信度最高。? 对于解析鉴定未知核酸分子序列片 段是必需的手段。
? 缺点：目标片段边缘序列的测定结果有时不准确，在读原初 测序图时要格外小心。
A: 食管癌细胞SHEEC B: 永生化食管上皮细胞SHEE
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核酸实验研究技术进展－ 1
例二：Northern blotting 检测缺氧复氧条件下心肌细胞EGR1 基 因转录mRNA 相对含量实验结果(同位素标记法)
1 2 34 5 1 2345
EGR1 ?
? -Actin ?
1 正常 2 缺氧复氧 3 缺氧复氧＋溶剂对照 4 缺氧复氧＋F2 5 缺氧复氧＋钙离子拮抗剂
淬灭剂
TAMRA DABCYL
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TaqMan Probes工作原理
荧光基团
淬灭剂 游离的探针