苦豆子内生细菌的分离及拮抗菌的筛选[1]
杂草中稻瘟病拮抗细菌的分离和筛选
摘要 ：从稗 草 （ ｃ ｉｏｈｏ ｒ ｓ ａｌ） 红 蓼 （ ｏｙ ｏ ｕ 、 草 （ ａ ｌ ｎ ｒａ ｎ ｔｎ ） ４ Ｅ ｈ ｎ ｃ ｌａｃｕ ｇ ｌ 、 ｉ Ｐ ｌｇ ｎ ｍ） 苦 Ｖ ｌ ｓｅｉ ａａ ｓ 等 ６种 杂草 ｉ 的根 、 、 片 中共 分 离细 菌菌株 １ ８ 株 ， 茎 叶 ９ ０ 经对峙 培 养法 筛选 ， 获得 对稻 瘟 病 菌有 强拮 抗 作 用 的 菌 株 ５株 。其 中， 菌株 的抑 茵带宽度 达 ２ ． ｍｍ， Ｕ ５５ 而其代 谢产 物抑 制 率达 ７ ． １ 。 ７ ７ 关 键 词 ：杂 草 ；稻 瘟 病 ；拮 抗 细 菌 ；抑 制 率
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２０ ０ ８年 第 ４期
杂 草 中
王 国 君 纪 明 山 ， ， 李 璐 ， 李 新 刘 少 武 韦 松。 ， ，
（ 阳农 业 大学 植 物保 护 学 院 农 药 科 学 实 验 室 ， 宁 沈 阳 ｉ０ ６ ） 沈 辽 １１ １
Ａ ｂ ｔａ ｔ Ａ ｔ ａ ｏｆ ９ ｓｒ ｃ ： ｏｔ ｌ １０８ ｂａ ｔ ｒａ ｓ ｒ ｉ ｗ ｅ ｅ ｂｔ ｉ ｄ ｒ ｍ ｒ ｏ ｓ，ｓ ｅ ｓ ｎｄ ｅ ｖ ｓ ｆ ６ ｃ ｅ ｉｌ ｔ ａ ｎｓ ｒ ｏ ａ ｎｅ ｆ ｏ ｏｔ ｔ ｍ ａ ｌａ ｅ ｏ ４ ｗｅ ｄ ｅ ｓ，ｉ ｃ ｕｄ ｎｇ ｎ ｌ ｉ Ｅ ｃ ｎｏ ｈｌ ａ ｒ ｇａｌ ｉ ｈｉ ｃ ｏ ｃ ｕｓ ｌ ，Ｐ ｏ ｙｇｏ ｍ ， ｌ ｉｎｅ ｉ ｎ ａｎ ｌ ｎｕ Ｖａ ｌｓ ｒ ａ ａｔ ｓ，ｅ ｃ ｔ ．Ｔｈｒ ｇｈ ａ ｅ ｔ ｏｕ ｆ ｃ —Ｏ— ｆ ｃ — ｕｌｕ ｉ ｎ ａ ｅ ｃ ｔ ｒｎｇ ｏ ＰＤＡ ｐｌ ｔ ｓ， ｓ ｒ ｉ ｓ ａ ｅ ５ ｔ ａ ｎ ｗｅ ｅ ｔｏｎ ｙ ａ ａ ｎ ｓ ｉ ｔ ｒ ｓ ｒ ｇｌ ｎｔ ｇｏ ｉ ｔｃ Ｏ Ｐｙｒｃ ｌ ｒａ ｇｒｓａ ， ｍ ｏ ｇ ｉｕ ａ ｉ ｉｅ ａ ｎ
辣椒内生细菌的分离及拮抗菌的筛选
辣椒内生细菌的分离及拮抗菌的筛选何红;蔡学清;洪永聪;关雄;胡方平【期刊名称】《中国生物防治学报》【年(卷),期】2002(018)004【摘要】对健康辣椒植株体内的内生细菌及拮抗菌进行了分离筛选.结果表明,不同品种、部位及种植地,内生细菌的数量有所不同,品种间内生细菌的数量变化为2.83×103～1.346×104cfu/g(FW);各品种以叶片中内生细菌的数量最多,其次为根,再次为茎,果最少;不同种植地中,前作为水稻田种植辣椒叶片中内生细菌的数量比旱地种植的多,而根、茎、果中内生细菌的数量正相反.拮抗、防病测定表明,108株辣椒内生细菌中,有28.7%的菌株对香蕉枯萎菌和黄瓜枯萎菌有拮抗作用;来自辣椒叶片和茎杆内的BS-2和BS-1两菌株,对13种植物病原真菌有较强和稳定的拮抗作用,其中对辣椒炭疽病有57.34%～94.08%的防病效果,并可以在辣椒体内定殖.经鉴定该两菌株为枯草芽孢杆菌.【总页数】5页(P171-175)【作者】何红;蔡学清;洪永聪;关雄;胡方平【作者单位】湛江海洋大学农学院;福建农林大学植保学院,福州,350002;福建农林大学植保学院,福州,350002;福建农林大学植保学院,福州,350002;福建农林大学植保学院,福州,350002【正文语种】中文【中图分类】S436.418.1;S476【相关文献】1.辣椒内生细菌的分离与拮抗菌株的筛选 [J], 位增辉;罗丽;王远路;崔瑛;王美娟;孙泽阔2.黄瓜内生细菌的分离及拮抗菌株的筛选初报 [J], 安瑞平3.红提葡萄内生细菌的分离鉴定及灰霉病拮抗菌的筛选 [J], 周泠璇;刘娅4.油松内生细菌的分离及拮抗菌的筛选 [J], 胡振亮;靳轩;庞久帅;王雪菲;陈孟;李会平5.柑橘皮内生细菌分离及柑橘青霉病菌拮抗菌筛选研究 [J], 刘起丽;张建新;徐瑞富;段长勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
半夏立枯病菌拮抗内生细菌的分离鉴定及功能分析
南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2023，54（11）：3277-3291ISSN 2095-1191； CODEN NNXAABDOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.11.015半夏立枯病菌拮抗内生细菌的分离鉴定及功能分析苏杭1，成胜1，孟祥佳1，韦远标1，吕国荣1，周燚1，2*，黄江荣3，4*（1长江大学农学院，湖北荆州434025；2湖北省农林病虫害预警与调控工程技术研究中心，湖北荆州434025；3长江大学附属荆州医院，湖北荆州434023；4长江大学医学部，湖北荆州434023）摘要：【目的】从药用植物半夏分离对半夏立枯病病原菌具有拮抗活性的内生细菌并初步探究其抑菌机制，为半夏立枯病的生物防治提供理论和实践依据。
【方法】对湖北省潜江市南章莆半夏大棚种植基地的半夏主要病害进行调查和分离，通过柯赫氏法则进行致病性验证，筛选出致病性最强的菌株并进行种类鉴定。
采用组织分离法对健康无病半夏进行内生细菌分离及鉴定，通过平板对峙试验筛选出对半夏立枯病病原菌拮抗活性最强的菌株并检测其抑菌谱，测定拮抗菌株无菌发酵液和挥发性物质的抑菌活性，检测拮抗菌株耐酸碱能力、胞外酶活性以及生物被膜的形成能力；通过平板试验检测温度和蛋白酶K对拮抗菌株无菌发酵液抑菌活性的影响；通过乙酸乙酯萃取法提取拮抗菌株的脂肽类活性物质并通过液相色谱—质谱联用仪（LC-MS）检测活性物质的主要成分。
【结果】南章莆大棚半夏的主要病害是茎腐病、根腐病、叶斑病和病毒病，发病率分别为20.87%、7.03%、3.57%和4.08%，发病率最高的茎腐病主要是立枯丝核菌引起的半夏立枯病。
从半夏种球组织中分离到5株细菌对半夏立枯病病原菌具有拮抗活性，其中菌株B2-7的抑菌效果最好，抑制率为79.60%，经鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。
抑菌谱测定结果显示，菌株B2-7对12种植物病原真菌均具有拮抗活性，其抑菌率为61.11%~89.47%。
宁夏道地药材苦豆子醇提取物体外抑菌作用研究
作者单位 宁夏医科大学检验学院(750004)宁夏道地药材苦豆子醇提取物体外抑菌作用研究哈丽娜 杨风琴 肖文婷摘 要 目的:观察宁夏苦豆子65%乙醇提取物对细菌和真菌的体外抑菌作用。
方法:将苦豆子药用65%乙醇浸泡24h 后,回流两次所得提取物,用试管二倍稀释法联合琼脂平板法,进行体外抑菌试验的研究。
结果:苦豆子65%乙醇提取物对三种常见致病菌及一种深部真菌抑菌作用显著,其最小抑菌浓度(M IC)均为3511m g/m L 。
结论:苦豆子中草药用65%乙醇提取物对四种受试菌的抑菌作用显著。
关键词 宁夏苦豆子65%乙醇提取物;体外抑菌试验;M IC中图分类号 R285 文献标识码 A 文献编号1006-(2011)05-324-03Study on the Antimicrobial Activity from Ethano-l extract of Ningxia Sophora Alopecuroides in VitroH a L ina,Y ang Fengqin,Xiao WentingI nstitute of Labor ator y M edicine of N ingX ia M ed ical Univer sityAbstract O bjective:T o obser ve the ant imicro bial activ ity of 65%ethano-l ex tract o f N ing x ia Sophor a alo pecuroides o n the bacter ia and fung us in v itr o.M etho ds:Soak the Sophor a alopecur oides in the 65%ethanol after 24h,and gain the ant-i micr obial test of the ext ract by r eflux ing twice,w hich w as perfo rmed by the tube double dilution metho d combined with ag ar plate metho d in vitro.Results:60%ethano-l extr act of N ingx ia So phor a alo pecuro ides show ed the distinct bacter iostasis effect o n the three commo n pathog enic bacteria and one species of deep fungus;the minimum inhibitor y concentr atio n(M IC)wer e 3511mg/mL.Conclusion:65%ethano-l ex tract of herb medicine So phor a alopecur oides has t he dist inct effect o f bacter-i o st asis o n t he fo ur bacter ia.Key words 65%ethano-l ex tract o f N ingx ia Sophor a alopecur oides;A ntimicr obial act ivit y in v itro ;M IC苦豆子(Sophora alopecur oides L)为豆科槐属植物,是宁夏的重要药用植物资源和自然植被组成部分,野生资源分布面积广,蕴藏量大,种群优势突出。
茄类内生菌的分离及拮抗细菌的筛选
茄类内生菌的分离及拮抗细菌的筛选
刘杰凤;韩寒冰;张进凤;罗添喜;詹加钦
【期刊名称】《农业科学与技术（英文版）》
【年(卷),期】2009(010)001
【摘要】[目的]本研究的目的是将三种茄科水果和蔬菜等番茄，胡椒和茄子等蔬菜的内心分离，以筛选和鉴定细菌枯萎的拮抗细菌。
[方法]根据研磨液体培养方法，选择性培养基分离三种植物的内心细胞并通过板条条纹方法纯化，因此通过悬垂纸币筛选纯化的内心细胞。
此外，通过栓塞，革兰氏染色的分离物和形态特征以及生理和生化反应的培养特征来确定和分类筛选的拮抗和内皮细菌。
[结果] 5次内心细菌，五十三个内生真菌和四十四个内生外形菌与三种植物的内心分离。
筛选的十四个内生细菌对细菌枯萎性强的拮抗效应分别被分类为芽孢杆菌，大肠杆菌，Klebsiella，Agromonas，Erwinia和Curto细菌。
特别是，芽孢杆菌是占优势的物种，对细菌枯萎有最强的拮抗作用。
[结论]本研究为茄科细菌枯萎生物控制提供了一种有效的方法。
【总页数】4页(P35-38)
【作者】刘杰凤;韩寒冰;张进凤;罗添喜;詹加钦
【作者单位】茂名学院化学与生命科学学院,广东茂名,525000;茂名学院化学与生命科学学院,广东茂名,525000;茂名学院化学与生命科学学院,广东茂名,525000;茂名学院化学与生命科学学院,广东茂名,525000;茂名学院化学与生命科学学院,广东茂名,525000
【正文语种】中文
【中图分类】S4
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大兴安岭野生药用植物内生真菌的分离及拮抗菌株初筛
ｈｔｔｐ：／／ｈｌｊｎｙｋｘ．ｈａａｓｅｐ．ｃｎ ＤＯＩ：１０．１１９４２／ｊ．ｉｓｓｎ１００２２７６７．２０２１．０７．００８７
杨 帆 ，刘 春 来 ，刘 亮 ，等 ．大 兴 安 岭 野 生 药 用 植 物 内 生 真 菌 的 分 离 及 拮 抗 菌 株 初 筛 ［Ｊ］．黑 龙 江 农 业 科 学 ，２０２１（７）：８７９１．
植物内生 菌 是 普 遍 存 在 于 植 物 体 内，与寄 主 植 物 协 同 进 化 ，或 存 在 拮 抗 作 用 或 存 在 轻 微 致 病 的 互 惠 共 生 关 系 的 一 类 微 生 物［１２］。 研 究 表 明 大 多 数 的 植 物 物 种 至 少 具 有 一 种 内 生 菌［３］，而 生 长 在 独 特 环境中的植物通 常 具 有 新 的 内 生 菌［４］。这 使 植 物 内 生 菌 的 挖 掘 研 究 发 展 成 为 寻 找 具 有 潜 在 农 业 、医 药和工业应用价值的天然产物的新领域［５］。
收 稿 日 期 ：２０２１０４２８ 基 金 项 目：黑 龙 江 省 农 业 科 学 院 科 研 项 目 计 划（２０１９ ＹＹＹＦ０３７）；黑龙江省农业科学院农业科技 创 新 跨 越 工 程经 济 作 物 科 技 创 新 专 项 （ＨＮＫ２０１９ＣＸ０６０１０３）。 第一作者：杨帆（１９８２－），女，博 士，副 研 究 员，从 事 作 物 病 虫 害 生 物 防 治 。Ｅｍａｉｌ：ｙｆ＿ｅｃｈｏ２０１１＠１６３．ｃｏｍ。 通信作者：李新民（１９６３－），男，硕 士，研 究 员，从 事 微 生 物 源 农 药 研 究 。Ｅｍａｉｌ：ｘｉｎｍｉｎ６３＠１６３．ｃｏｍ。
药用植物的内生真菌可以产生与寄主相同或 相似的次生代谢 产 物，是 具 有 生 物 活 性 的 天 然 化 合物的丰富来源［６７］，由植物及其内生真菌 共 同 产 生的生物 活 性 化 合 物 包 括 抗 癌 药 物 Ｃａｍｐｔｏｔｈｅ ｃｉｎ，抗癌 先 导 化 合 物 Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ 和 天 然 杀 虫剂印楝素［８１０］，尽管如 此，药 用 植 物 仍 在 很 大 程 度上未被 开 发［１１］。 因 此 从 药 用 植 物 中 分 离 得 到 内生真菌在寻找新的生物活性天然化合物方面具 有重要的应用价值。研究报道传统药用植物是新 型内生真菌 的 重 要 来 源 ，在 ［１２１４］ 杀 菌 剂 的 研 制 中 内生真菌代谢产物具有很大潜力。这极大地推动 了药用植物内生真菌及其筛选功能性生物活性产 物的研究进展。
121140041 钱昆 植物内生菌的分离
植物内生菌的分离钱昆121140041一、实验目的1、掌握对植物内生菌的分离处理方法。
2、熟练掌握对细菌、真菌的染色观察技术。
3、了解微生物分子实验的基本操作流程。
二、实验原理在植物的生态环境中，存在着各种各样的微生物,它们有的附着于植物的表面，有的则生活于植物体内。
对于附着于植物表面和根际的微生物已有很多研究，而对于植物体内微生物的研究却刚刚起步。
但有资料显示, 一些植物内生微生物与宿主发生关系时，可明显增强宿主的抗病性，提高植物的生产力。
因此，合理利用植物的内生微生物具有重要的理论意义和实用价值。
植物内生菌作为微生物研究领域之一，近年来一直备受关注。
内生菌概念在1866年首先由Bary提出的，指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织或器官内部的微生物（主要为真菌和细菌）。
其后的很长时间内，内生菌研究进展缓慢。
直到1993 年，美国蒙大拿州立大学Strobel等从短叶红豆杉的韧皮部位分离到一株产新型抗癌物质紫杉醇的内生真菌，从而启发人们可从植物内生菌寻找与植物产生的相同或相似的化合物，由此促进了植物内生菌的研究。
植物内生菌为植物组织内的正常菌群，包括植物内生真菌、内生细菌和内生放线菌，广泛分布于各种陆生及水生的低等植物和高等植物中。
内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。
这类真菌中，有许多种类很少形成孢子，或者在宿生植物上形成孢子（或者孢子果），不容易识别。
真菌感染植物组织，菌丝存在于细胞内和细胞间。
与病原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。
对于现已分离得到的植物内生细菌，一般可分为专性内生细菌与兼性内生细菌，前者指至今只能在植物体内分离得到的细菌；后者指能在植物根际与土壤中分离得到，也能在植物体内分离得到的细菌，而且种类居多。
根据内生细菌对宿主植物生长发育的影响可以将其分成三类：第一类对植物的作用是中性的，即尚未发现它们的内生定殖对宿主植物生长与繁殖有影响；第二类对植物生长发育有促进作用，如能提高宿主植物抗病、抗逆能力，或能通过固氮与分泌激素促进植物生长发育等；第三类对植物生长具有负面影响，在特别条件下接种到原宿主植物或另外的宿主植物会诱发植物病害。
菠菜内生拮抗细菌的分离、筛选与鉴定-09.08
菠菜内生拮抗细菌的分离、筛选与鉴定摘要：从菠菜叶片上和菜园土壤中分离细菌，筛选出对菠菜霜霉病菌或菠菜炭疽病菌拮抗作用强的菌株，并挑选出生活力强、适应性好、防病效果好的作为目标菌株，并其鉴定到种。
技术路线：1 实验材料1.1 样品来源菠菜菜园内土壤和菠菜植株。
1.2 供试病原菌菠菜霜霉病菌（Peronospora effusa）和菠菜炭疽病菌（Colletotrichum spinaciae），由本实验室分离和鉴定。
1.3 培养基细菌的分离用NA、KB和TSA。
细菌的培养用NA或LB。
细菌的菌种保存用NA 或YPA。
真菌的培养与拮抗测定用PDA。
细菌的生理生化测定用基础培养基。
1.4 标准菌株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）标准菌株。
西瓜细菌性果斑病病菌（Acidovorax avenae subsp.citrulli Willems et al.1992）标准菌株Aac7500。
1.5 溶液与试剂草酸铵结晶紫染剂，鲁戈尔碘液，番红复染剂，西萨—基尔染媒剂，苯酚品红染剂，7.6%孔雀绿水溶液，1%溴百里酚蓝水溶液，甲基红试剂，0.3%肌酸水溶液，格里斯试剂，吲哚试剂，10%（W/V）FeCl3溶液，1%二甲基对苯撑二胺水溶液，3%（v/v）过氧化氢。
2 实验方法2.1 菠菜内生细菌的分离从菠菜的健叶和病叶上取样，各取1.0g，先用70%酒精浸泡5min，再用0.2%升汞表面消毒2-3min，无菌水冲洗3次。
取0.5ml最后1次无菌水冲洗液涂布接种于各种培养基上。
每个处理重复3次，培养48h，观察有无菌落产生。
据此验证此消毒方法是否能全部杀死供试材料表面微生物。
样品晾干后转入无菌研钵中研磨匀浆，加5ml 无菌水碾碎，静止15min后，各取50 l涂平板，每处理重复3次，30℃黑暗培养48-72h，计算菌落数。
根据菌落形态、颜色等挑取单菌落，按常规方法纯化后保存，供测试鉴定。
2.2 菠菜病原菌拮抗菌株的筛选采用对峙生长法，测定以上分离菌株对菠菜霜霉病菌或菠菜炭疽病菌的拮抗性。
一株菜豆普通细菌性疫病拮抗细菌的分离鉴定及其生防效果
一株菜豆普通细菌性疫病拮抗细菌的分离鉴定及其生防效果刘明;王昕;高涵;郭永霞【期刊名称】《中国生物防治学报》【年(卷),期】2024(40)1【摘要】菜豆普通细菌性疫病是黑龙江省近年来发生面积较广的菜豆病害之一,严重时可导致菜豆大面积减产,并影响籽粒品质。
为发掘菜豆普通细菌性疫病的生防菌资源,本研究从健康菜豆根际土壤中分离筛选到一株对菜豆普通细菌性疫病菌具有显著抑制效果的拮抗菌株B2。
经菌落形态观察、生理生化测试、16SrDNA和gyr B基因序列分析,将其鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillusvelezensis,该菌株在平板试验中对菜豆普通细菌性疫病病原菌Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli(Xap)和Xanthomonas fuscans subsp.fuscans(Xff)的抑菌圈直径分别为19.3和21.8mm。
在室内盆栽试验中,菌株B2对Xap和Xff的防效分别为55.42%和67.77%。
通过菜豆叶片防御酶活性及丙二醛含量测定显示,菌株B2能显著提高菜豆叶片中SOD、POD、CAT、PPO酶活性,降低丙二醛含量,表明菌株B2能诱导植物防御反应起到抵抗病原菌的作用。
综上,菌株B2在由Xap和Xff两种病原菌引起的菜豆普通细菌性疫病生物防治中具有良好的开发应用潜力。
【总页数】10页(P157-166)【作者】刘明;王昕;高涵;郭永霞【作者单位】黑龙江八一农垦大学农学院/农业农村部东北平原农业绿色低碳重点实验室/黑龙江省作物有害生物互作生物学及生态防控重点实验室/国家杂粮工程技术研究中心【正文语种】中文【中图分类】S476【相关文献】1.菜豆普通细菌性疫病病原菌鉴定2.进境菜豆种子中普通细菌性疫病菌的分离和鉴定3.一种桑树细菌性病原内生拮抗细菌的筛选、鉴定及其生防活性4.黄瓜白粉病拮抗细菌的筛选鉴定及其生防效果5.山西省普通菜豆核心种质普通细菌性疫病抗性的鉴定和评价因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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第18卷 第4期2006年12月 塔 里 木 大 学 学 报JournalofTarimUniversity Vol.18No.4Dec.2006
文章编号:1009-0568(2006)04-0068-02
苦豆子内生细菌的分离及拮抗菌的筛选
龚明福1,23 林世利1 贺江舟1 孙晓棠1 韦革宏2(1 新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室,新疆阿拉尔 843300)(2 西北农林科技大学生命科学学院;西北农林科技大学微生物研究中心,陕西杨陵 712100)
摘要 从塔里木盆地不同地点采集苦豆子,从不同组织中分离内生细菌,并用分离得到的内生细菌对病原真菌做皿内拮抗试验,筛选有生物拮抗活性的内生菌菌株。结果表明,不同来源的苦豆子内生细菌数量上有较大差异,苦豆子不同组织内生细菌的种类和数量也有差异。从苦豆子各种组织中分离得到129株内生细菌,其中5株对多种植物病原真菌具有拮抗作用,这些菌株在苦豆子植株内均可定殖,属于芽孢杆菌。关键词 苦豆子;内生细菌;分离;拮抗菌中图分类号:S436.412.15 文献标识码:A
IsolationofentophyticbacteriainSophoraalopecuroides
andscreeningofAntagonisticbacteriaGongMingfu1,23 LinShili1 JiangZhouhe1 SunXiaotang1 WeiGehong2(1KeyLaboratoryofProtection&UtilizationofBiologicalResourcesinTarimBasinofXinjiang
Production&ConstructionGroup,Alar,Xinjiang843300)(2CollegeofLifeSciences,InstituteofMicrobiology,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100)
Abstract 129strainsofentophyticbacteriawereisolatedfromdifferentplanttissuesofSophoraalopecuroidesdistributinginTarimBa2sin.Amongthesebacteria,5strainsshowedgoodantagonisticeffectivenesstosomeplantpathogenicfungi,couldbecolonizedintheplants,andwereidentifiedasBacillus.TheresultsalsoshowedthatthenumberofentophyticbacteriadifferedindifferenttissuesofSo
2
phoraalopecuroidesandinSophoraalopecuroidesfromdifferentsampleplaces.Keywords Sophoraalopecuroides;ntophyticbacteria;isolation;antagonisticbacteria
苦豆子别名草本槐、苦豆根,为豆科多年生耐盐旱生草本植物。苦豆子含有多种单体生物碱,并具有抗癌、提高免疫力等活性[1]。它由于能与根瘤菌共生固氮而含有丰富的蛋白质,具有较高的饲用价值。苦豆子的内生细菌由于长期存在于苦豆子内,与苦豆子建立了和谐的关系,有可能产生与苦豆子产生的相同或相似的生物碱,或者与苦豆子植物较高的抗逆能力有关,因此系统研究苦豆子内生细菌对于合理开发苦豆子资源具有重要的意义。我们对塔里木盆地苦豆子内生细菌进行了分离,并测定了苦豆子内生细菌对多种病原真菌的拮抗性,现将结果报道如下。
1 材料与方法
收稿日期:2006-04-28
资助项目:塔里木大学校长基金重点资金项目(编号:TDZKZD06001);新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室开放课题(编号:BR0607BR0605);教育部新世纪优秀人才支持计划(编号:NCET-04-0953);新疆生产建设兵团科技攻关计划项目(编号:
2006GG26)。
作者简介:龚明福(1970-),男,副教授,硕士,主要从事微生物资源研究。 3为通讯作者第4期龚明福等:苦豆子内生细菌的分离及拮抗菌的筛选1.1 分离材料从塔里木盆地不同地点采集苦豆子植株,包括根瘤、根、茎、叶、花、果、种子。1.2 培养基细菌分离培养用牛肉膏蛋白胨培养基(NA培养基),根瘤菌分离培养用YMA培养基、真菌培养及拮抗性测定用PDA培养基[2]。1.3 内生细菌分离与纯化从塔里木盆地不同地点采集长势良好、无病虫害的苦豆子植株,其根、茎、叶、花、果、种子分别用自来水冲洗晾干后,各称取5g(果10g),用无菌水反复冲洗4次～5次,用70%乙醇浸泡消毒用5min
～10min,用2%次氯酸钠表面消毒5min～30min,
无菌水冲洗3次～4次,取最后一次冲洗液0.1ml
涂布无菌NA平板进行无菌检验。每样品加50ml
无菌水在无菌研钵中研磨,静止15min后,各取0.1
ml涂NA平板。每处理重复3次,28℃黑暗培养72h,计算菌落数,根据菌落形态、颜色等挑选单菌落转接NA斜面保存备用。根瘤菌的分离培养方法参照龚明福的方法[3]进行。1.4 皿内拮抗细菌的筛选在直径为9cm的PDA平板中加入0.1ml菌液,涂布均匀后,在平板上接入直径为0.7φ的病原真菌菌丝块,28℃黑暗培养4d,测量抑菌圈。取0.
1ml无菌水涂布平板后接种真菌菌丝块为对照。每处理重复3次。靶标病原真菌包括:棉花黄萎病菌、甘兰黑斑病菌、西瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、白菜黑斑病菌、辣椒枯萎病菌、苹果轮
纹病菌。1.5 细菌检测常规革兰氏染色、芽孢染色[4]。1.6 菌株在苦豆子内定殖测定用含有苦豆子10-4μg.ml-1浓度的NB培养液培养内生细菌24h,用涂抹叶片、注射茎秆等方法接种,分别于不同时间取根、茎、叶、花,经2%次氯酸钠表面消毒后,分离菌株,测定其定殖情况,以清水处理组织为对照。
2 结果与分析2.1 不同采样点苦豆子内生细菌数量对塔里木盆地不同地点采集的苦豆子进行内生细菌分离,结果表明来源不同的苦豆子植株,内生细菌的种类和数量存在一定的差异(见表1)。表1 不同采样点苦豆子各种组织部位分离到的内生细菌菌株数采样点根瘤根茎叶花果种子合计乌恰1564332235
温宿2086432144
阿拉尔2587422250
合计60221711865129
2.2 苦豆子不同组织部位内生细菌数量对分离自苦豆子不同组织部位的内生细菌数量进行分析,结果表明,苦豆子不同组织部位的内生细菌种类和数量也存在一定的差异,总体上来看,内生细菌数量在苦豆子植株中的分布规律为沿根、茎、叶、花、果、种子递减(见表1)。
表2 五株内生细菌对常见植物病原真菌的拮抗作用(单位:mm
)
病原真菌CKKDNB2KDNB4KDNB5KDNB6RKZ11261菌落直径菌落直径抑菌率菌落直径抑菌率菌落直径抑菌率菌落直径抑菌率菌落直径抑菌率棉花黄萎病菌402635%2538%2538%1075%2245%
甘兰黑斑病菌241442%1154%1058%1058%1058%
西瓜枯萎病菌382632%2145%1074%1074%1171%
小麦赤霉病菌473526%3623%2547%1764%2057%
棉花枯萎病菌413320%1856%1759%1076%1563%
白菜黑斑病菌483527%2352%2744%1079%1569%
辣椒枯萎病菌372727%1365%1365%1073%1073%
苹果轮纹病菌433421%1077%1077%1077%1077%
2.3 拮抗病原真菌的内生细菌筛选从不同采样点苦豆子的各种组织中分离得到内生细菌129个菌株。通过对峙生长法,测定了内生细菌各菌株对8种病原真菌的皿内拮抗作用,其中5株内生细菌(RKZ11261分离自根瘤)对8种病原真菌都有拮抗作用(见表2)。(下转第80页)
96塔 里 木 大 学 学 报第18卷围内没有发现波的散射及反射波的同相轴发生错断现象。基础以下0—15m的深度范围内不存在空洞及塌方现象。4.2.3 在基础纵向III—III方向,可以判定该剖面10m深度的范围内不存在空洞,但在剖面线9～14m之间深度在(已开挖的基坑底面线为0点)4～7.5m之间有夹层,其剪切波速为200m/s,该剖面也不存在空洞及塌方现象。4.2.4 在纵向的VI—VI方向,在200ms的波幅范围内,也就是深度在20m的范围内,不存在软弱夹层及不良地质体存在。根据以上四点可以确定在库车县国贸购物中心大楼的地基范围内,基础下没有发现防空洞及塌方现象,也不存在软弱夹层及其它不良的地质体。5 结语现代社会快速发展,城市建设的规模日益增大,为了保证建筑的使用安全,对地基处理的要求也提出了更高的要求,我们需要了解空洞、采空区以及不良的地质条件,并采取相应的处理方法。本文详细介绍了瞬态瑞雷面波在基础勘探中的数据采集、处理及解译方法。利用地震映象资料,叙述在该区域的地质展布的情况,从而为整个建筑物的安全评价供了科学依据。
参考文献[1] 杨成林.瑞雷波勘探.北京:地质出版社,1993.[2] 宋先海,肖柏勋,黄荣荣,.用等厚薄层权重自适应迭代阻尼最小二乘法反演瑞雷波频散曲线.物探与化探,
2003,27(3):212～216.[3] 刘云祯,王振东.瞬态面波法的数据采集处理系统及应用实例.物探与化探,1996,20(1):28～33.
[4] 肖柏勋.工程地球物理学进展.武汉:武汉水利电力大学出版社,2000.
(上接第69页)2.4 拮抗内生细菌的初步鉴定对拮抗作用较强的5个菌株进行了形态观察和常规染色,参照东秀珠等[4]的方法,将5个菌株均鉴定为芽孢杆菌(Bacillussp.)。3 讨论3.1 从苦豆子上分离到5株内生细菌对8种植物病原真菌有拮抗作用,其中RKZ11261分离自苦豆子根瘤。5株内生细菌均为Bacillus属,它们的种名还待进一步研究确定。RKZ11261为革兰氏阳性的芽胞杆菌,不是根瘤菌,这表明在苦豆子根瘤中,存在根瘤菌以外的内生细菌。3.2 苦豆子根瘤中内生细菌数量较多,但多数为根瘤菌。苦豆子根瘤菌都具有较强的抗逆能力[3],苦豆子非根瘤内生细菌或根瘤内非根瘤菌的内生细菌是否也具有较强的抗逆能力,还需进一步进行研究。3.3 五株苦豆子拮抗性内生细菌对病原真菌的田间防效还需进一步研究确定。
参考文献[1] 秦学功,元英进.苦豆子生物碱的研究与苦豆子的综合利用[J].中国野生植物资源,2000,19(4):30～32.