第一节 微生物微生物的的的的纯培养纯培养

第一节 微生物的纯培养
纯培养（pure culture）：单个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。 克隆：对于微生物，由于其主要进行无性繁殖，故纯培养即为克隆。 显微镜技术：栖居于自然界中的微生物是以肉眼难以分辩地杂居丛生着。在 显微镜问世之前，人们是无法目睹这个丰富多彩的微生物世界。光学显微镜的诞 生，它将肉眼的分辨率提高到微米级水平，而电子显微镜的出现使人眼分辨达到 纳米水平。从此过去视而不见、触而不觉的微生物世界就展现在人们的眼前。第 一台显微镜是由荷兰的杨森父子发明的。列文虎克是第一个用显微镜来观察和描 述微生物的。以后光学显微镜中相继出现了相差、暗视野和荧光等新附件，加上 良好的制片和染色技术等又大大推动着微生物学形态、解剖和分类等研究。30 年代初电子显微镜技术，以及与之配套的各种新技术和新方面的应用，使微生物 学的研究从细胞水平逐渐向亚细菌和分子水平迈进。所以显微镜技术的问世和完 善，不仅为揭开微生物世界作出贡献，同是也为揭示微观领域的奥秘提供了强有 力的工具。 无菌技术：要真正揭开微生物世界的奥秘，就得深入研究，也就是必须创造 一个无其他微生物干扰的无菌环境，即我们熟称的无菌技术，无菌技术是在分离、 转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术。现代无菌技术是由法国 人阿贝特（Appert）在食品保藏中偶然发现的。而对灭菌技术的原理等作出科学 解释的是巴斯德，他所进行的举世闻名的曲颈瓶实验，不仅彻底否定了当时十分 流行的“生命自然发生学说”，而且为微生物学中的无菌技术的创立和发展奠定 了理论和实践基础。 纯种分离技术：纯种分离技术是人类揭开微生物世界奥秘的重要手段。要揭 开在自然条件下处于杂居混生状态的某一微生物的特点，以及它们对人类是有益 还是有害，就必须采用在无菌技术基础上的纯种分离方法。早期对微生物群体进 行单个纯化分离者是李斯特。但真正取得突破的是柯赫发明的培养皿琼脂平板技 术。从此它为微生物的纯种分离技术奠定了扎实的基础。直到现在它仍广泛地应 用于微生物菌种的筛选、鉴定、育种、计数及各种生物测定等工作中。 纯种培养技术：微生物纯种培养技术在科学实验和生产实践中有着极其重大 的理论与实践意义。若为微生物提供一个初级培养的实验方法并不复杂，但要使
干热灭菌：空气加热灭菌
高温灼烧：用火直接接触烧灭 四、菌种保藏
传代培养保藏 冷冻保藏 干燥保藏 五、二元培养物 如果培养物中只含有二种微生物，而且是有意识地保持二者之间的特定关系 的培养物称为二元培养物。
2、富集培养
主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，指定特定的环境条件，使 仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能 够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。
固体培养各种微生物形成的菌落特征：
二、纯培养的接种方法 根据菌的生长速度的快慢来选择 斜面接种、液体接种 。
综上所叙，微生物学中四项独特的基本研究技术无疑为微生物学的创始、奠 基和发展提供了基础。随着微生物在工、农、医及环保等领域中日益广泛地应用， 微生物学的研究方法和技术必将日趋完善和发挥更大的作用。 一、获得纯培养的方法： （一样品） 连续划线（适用于浓度较小的样品） 扇形划线 方格划线
穿刺接种 （三）液体接种法
用接种针在液面边缘-----产生混浊------搅匀、振荡
注意事项： 1、小接种量、2、用无菌滴管或移液管、3、直接倒入、4、利用无菌空气 通过特殊装置压入、5、利用负压吸入液体基中。 三、无菌技术 无菌操作：防止微生物进入物体的技术。 无菌：指没有活的微生物（包括芽孢）。 死亡：指不可逆地丧失了生长繁殖的能力。 除菌：应用机械的方法（过滤、离心分离、静电吸附）除去液体或气体中的 微生物。 灭菌操作：杀灭所有微生物 常用 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌
（一）斜面接种： 为保存菌种和获得大量菌种 （1）密涂布法(适用于各种 M，可获得大量菌体） （2）蛇形划线法(适用于易扩散的 M） （3）中央划线法（适用于生长快的 M） （4）点种法（适用于真菌短时间保存菌种）
斜面接种示意图 （二）穿刺接种法：
用于接种试管深层琼脂培养基，以观察细菌运动及鉴定细菌用。
中只存在一个细胞，由此繁殖得到的后代必是纯培养。
（三）单细胞（单孢子）分离法 较大的微生物可用毛细管挑取单个个体；个体较小的微生物，需用显微操
作仪，在显微镜下进行。
（四）.选择培养分离（通常做成固体的培养基） ：通过选择培养进行微生物纯 培养分离的技术称为选择培养分离。
1、利用选择平板进行直接分离
分段划线法 2、稀释倾注分离法：
可定性、定量。 方法：先取稀释液注入平皿，再注入 45℃左右的培养基，将稀释液冲开培 养基表面、中间均会出现菌落。 3、涂布平板法（培养基表面出现菌落） 简单易行，但易造成机械损伤
（二）．液体分离法 适用于细胞较大的微生物。用液体培养基对菌液做 10 倍系列稀释，使试管
微生物在大规模生产中良好地生长或累积代谢产物，就得考虑一些最为合理的培 养装置和有效的工艺条件，并且还要在整个微生物的发酵过程中严防其他微生物 的干扰，即防止杂菌污染。在整个微生物纯种培养技术的发展过程中，大规模液 体深层通气搅拌发酵装置，即发酵罐的发明及大规模地普及使用，它为生物工程 学开辟了崭新的前景。同时微生物发酵工业也已成为国民经济的重要支柱之一。