任务一水中菌落总数的测定习题(精)
中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验方法微生物指标题库
中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验方法微生物指标Standard examination methods for drinking water一Microbioloical parameters1、菌落总数1.1平皿计数法1.1.1范围本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定。
1.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
1.1.2.1菌落总数standard plate - count 加cteria水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落的总数1.1.3培养基与试剂1.1.3.1营养琼脂1.1.3.1.1成分：A 蛋白陈10gB 牛肉膏3gC 氯化钠5gD 琼脂10g——20gE 蒸馏水1000ml1.3.1.2制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4一7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43 kPa (121℃，15lb）灭菌20 min，储存于冷暗处备用。
1.1.4仪器1.1.4.1高压蒸汽灭菌器。
1.1.4.2干热灭菌箱。
1.1.4.3培养箱36℃士2℃。
1.1.4.4电炉。
1.1.4.5天平。
1.1.4.6冰箱。
1.1.4.7放大镜或菌落计数器。
1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。
1.1.4.9灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等1.1.5检验步骤1.1.5.1生活饮用水1.1.5.1.1门以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注人灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照1.1.5.1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃士1℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样1 ml 中的菌落总数1.1.5.2水源水1.1.5.2.1以无菌操作方法吸取lml充分混匀的水样，注入盛有9ml、灭菌生理盐水的试管中，混匀成1 : 10稀释液。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。
一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。
二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。
2．干热灭菌(烘箱)。
3．水浴隔热培养箱。
4．冰箱。
5.培养皿(直径9ml)。
6．吸管(10.0ml、1.0m1)。
三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。
四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。
[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。
二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。
实验十细菌菌落总数(CFU)的测定(精)
操作步骤图示
1ml
振荡 10min 1ml 1ml 1ml
水样
9ml 10-1 1ml 20ml
9ml 10-2 1ml 20ml
9ml 10-3 1ml 20ml
倒培养基
2×
五、菌落计数及报告方法
（一）平板菌落数的选择 1、进行平皿菌落计数时，记下同一浓度的3个平板（或 2个）的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即为 1ml水样中的细菌总数。 2、 计数时应选择菌落数在30~300/皿之间的稀释倍数 进行计数，若同—个稀释度中一个平皿有较大片状菌落 生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计 数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半 时，而另—半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2 倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同 一稀释度的平均菌数，供下—步计算时用。
实验十 细菌菌落总数 （CFU）的测定
一、实验目的和要求
1、学会细菌菌落总数的测定。 2、了解水质与细菌菌落数之间的相关 性。
二、实验原理
细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用 适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。 然而，在实际工作中不易做到，所以通常用 一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生 性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程 度。水中细菌总数与水体受有机污染的程度 成下相关，因此细菌总数常作为评价水体污 染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说 明水体被污染得越严重。
4、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应 按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 5、如果全部稀释度的平均菌落数均不在30～300 之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之。 6、菌落计数的报告，菌落在100以内时按实有数 报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位 有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为 了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示， 在所需报告的菌落数多至无法计算时，应注明水 样的稀释倍数。
菌落总数试题及答案
菌落总数试题及答案一、选择题（每题2分，共10分）1. 菌落总数是指在一定条件下，每克（毫升）样品中所含菌落的总数，通常以CFU/g（mL）表示。
以下哪个选项是正确的？A. CFU代表的是菌落数量B. CFU代表的是菌落体积C. CFU代表的是菌落密度D. CFU代表的是菌落类型答案：A2. 在进行菌落总数测定时，以下哪种方法不是常用的菌落计数方法？A. 直接计数法B. 稀释涂布法C. 比浊法D. 膜过滤法答案：C3. 菌落总数测定中，稀释倍数的选择对结果的影响是？A. 稀释倍数越大，计数越准确B. 稀释倍数越大，计数越不准确C. 稀释倍数的选择对结果没有影响D. 稀释倍数的选择对结果的影响取决于样品的种类答案：B4. 在菌落总数测定中，如果样品稀释后得到的菌落数超过了计数板的计数范围，应该如何处理？A. 重新稀释样品B. 增加稀释倍数C. 减少稀释倍数D. 重新取样答案：B5. 菌落总数测定中，如果样品中存在多种类型的菌落，应该如何进行计数？A. 只计数一种类型的菌落B. 将所有类型的菌落都计数C. 根据菌落的颜色和形状进行分类计数D. 根据菌落的生长速度进行分类计数答案：B二、填空题（每题2分，共10分）1. 菌落总数测定的目的是评估样品中的______。
答案：微生物污染程度2. 在进行菌落总数测定时，样品的稀释液通常使用______。
答案：无菌生理盐水或无菌磷酸盐缓冲液3. 菌落总数测定中，常用的培养基是______。
答案：营养琼脂4. 在菌落总数测定中，如果样品的菌落数过少，可能需要______。
答案：减少稀释倍数5. 菌落总数测定的实验结果通常在______后进行计数。
答案：培养24-48小时三、简答题（每题5分，共20分）1. 简述菌落总数测定的一般步骤。
答案：菌落总数测定的一般步骤包括样品的采集、稀释、涂布或接种、培养和计数。
2. 为什么在菌落总数测定中需要进行稀释？答案：进行稀释是为了确保菌落能在培养基上均匀分布，避免菌落重叠，从而便于计数。
食品微生物检验复习题(附参考答案)
食品微生物检验复习题（附参考答案）一、单选题（共60题，每题1分，共60分）1、生物安全防护水平为二级的实验室( )。
A、低个体危害,低群体危害B、中等个体危害,有限群体危害C、高个体危害,低群体危害D、高个体危害,高群体危害正确答案：B2、在进行菌落总数的测定时,稀释液移入培养皿后,应及时将凉至( )左右平板计数琼脂培养基注入培养皿约15-20mL,并转动培养皿使混合均匀。
A、56℃B、46 ℃C、26 ℃D、36 ℃正确答案：B3、关于肠道杆菌的描述不正确的是( )A、所有肠道杆菌都不形成芽胞B、肠道杆菌都为Gˉ杆菌C、肠道杆菌中致病菌一般可分解乳糖D、肠道杆菌中非致病菌一般可分解乳糖正确答案：C4、哪一项符合金黄色葡萄球菌在BP平板上的特征( )。
A、菌落直径为2-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色B、菌落颜色为金黄色，少数为白色C、长期保存的冷冻货干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，革兰氏染色一定为阳性。
D、菌落颜色呈红色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明圈正确答案：A5、关于菌落总数的计数中以下说法错误的是()。
A、平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用 ,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数B、当平板上出现菌落间无明显接线的链状生长时,则将忽略不计C、低于30CFU的平板记录具体菌落数D、大于300CFU的课记录为多不可计6、菌落计数时,菌落数在100以内,四舍五入后,报告整数,大于100 时,采用( )有效数字。
A、3 位B、2 位C、4 位D、1 位正确答案：B7、根据菌落总数的报告原则,某样品经菌落总数测定的菌落总数数据为3775个,应报告为( )CFU/mL。
A、3775B、3.8*103C、37800D、4.0*104正确答案：B8、大肠菌群系指一群在37℃条件下,能发酵乳糖,需氧或兼性厌氧的( )无芽孢杆菌。
A、革兰氏阴性B、革兰氏阳性C、不产酸产气D、产酸不产气正确答案：A9、某固体饮料检测霉菌及酵母菌时,取样 25g 放入盛有 225m1 无菌蒸馏水的均质袋中,用拍击式均质器拍打( ),制成 1:10 稀释液。
菌落计数试题
一、选择题
1.在进行菌落计数时，以下哪项操作是必要的？
A.将培养皿放在阳光下暴晒
B.使用无菌工具进行接种（正确答案）
C.用手直接触摸培养基表面
D.将培养皿放在潮湿环境中
2.菌落计数时，以下哪种情况可能导致计数结果偏高？
A.培养基被污染（正确答案）
B.培养时间过短
C.培养基营养成分不足
D.培养温度过低
3.以下哪项不是影响菌落计数准确性的因素？
A.培养基的pH值
B.接种量的多少
C.培养皿的颜色（正确答案）
D.培养时间的长短
4.在进行菌落计数时，如何区分不同种类的菌落？
A.根据菌落的颜色、形状和大小等特征（正确答案）
B.仅根据菌落的颜色
C.仅根据菌落的形状
D.仅根据菌落的大小
5.以下哪项操作可能导致菌落计数结果偏低？
A.培养基倾倒过厚
B.培养基表面过于干燥
C.接种前未充分摇匀菌液（正确答案）
D.培养温度适宜
6.在进行菌落计数时，以下哪项操作是不正确的？
A.使用无菌接种环挑取适量菌液
B.将接种环在培养基表面轻轻划线
C.用嘴吹凉培养基以加速其凝固（正确答案）
D.将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养
7.菌落计数时，以下哪种情况可能导致计数结果无效？
A.培养基上无菌落生长
B.培养基上菌落生长过多，无法准确计数（正确答案）
C.培养基上菌落形态各异
D.培养基上菌落大小不一
8.在进行菌落计数实验时，以下哪项措施有助于提高计数准确性？
A.使用过期培养基
B.接种前对菌液进行适当稀释（正确答案）
C.培养过程中频繁打开培养箱门
D.使用不洁净的接种工具。
细菌总数复习试题
细菌总数复习试题一、填空题1.细菌总数测定是测定水中、和密度的方法。
答：需氧菌；兼性厌氧菌；异养菌2.细菌学监测对玻璃皿的要求是所用的玻璃器皿应是玻璃制品，必须不附着任何，应剔除已、有的有的器皿。
答：硼硅；洁净；残渍；破损；划痕；气泡3.进行细菌学检验，一般从取样到检验不宜超过小时，不然应使用10℃以下冷藏设备保存样品，但不得超过小时。
答：2；64.作平板菌落计数时，可用观察；必要时用或，以防遗漏。
答：肉眼；放大镜；菌落计数器。
5.在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较大片状菌落生长时则，而应以作为该稀释度的平均菌落数。
答：不宜采用；无片状菌落生长的平皿。
二、选择题1.我国生活饮用水的细菌总数标准为：A、每升小样小于100个；B、每升水样小于或等于3个；C．每毫升水样≤100个菌落答：C2.细菌总数测定中，菌落数大于100时采用报出结果。
A.按实数报出；B.两位有效数字，用10的指数表示；C、三位有效数字答：B3.报告细菌总数测定结果时，首先应选择平均菌数在进行计算。
A．30～300之间；B．＜30；C．＞30答：A4.下列各项中不是营养琼脂培养基的成分。
A、蛋白胨；B、牛肉膏；C、氯化钠；D、乳糖答：D三、判断题1.在报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。
（）2.制备营养琼脂培养基时，调整pH值为9.4～9.6。
（）答：1.√ 2.×四、问答题1.叙述生活饮用水细菌总数测定的主要步骤？答：①将水样用力震摇20—50次便可能存在的细菌凝团分散。
②以无菌操作吸限1ml摇匀的水样，注入灭菌平皿，然后倾注约15ml已融化并放冷却到45℃左右的营养琼脂，并旋转平皿，使水样琼脂充分混匀，每个水样做二个平皿，并作空的对照；③待平皿琼脂全部凝固后，翻转平皿，使底面向上，置37④℃温箱24小时，取出、计数、报告每ml小样细菌总数。
2.怎样制备营养琼脂培养基？答：将10克蛋白胨、3克牛肉膏、5克氯化钠、10～20克琼脂、1000毫升蒸馏水混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，过滤后分装于玻璃容器中，经121℃高压蒸汽灭菌20分钟，储存于冷暗处备用。
水中菌落总数测定.ppt
动物性食品微生物检验
水中菌落总数的测定
主讲人：王福红
水中菌落总数测定
能力目标：
• 掌握生活饮用水菌落总数的测定方法 • 掌握水源水菌落总数的测定方法 • 判定水被细菌污染的程度和水的卫生质量
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
水中菌落总数测定
水中菌落总数的测定
• 检验依据：GB/T5750.12-2006 • 方法：平皿计数法
实验器材 • 设备、器材
– 无菌工作台、酒精灯、灭菌 吸管、灭菌试管、稀释液、 灭菌平皿、恒温培养箱、高 压蒸汽灭菌器、菌落计数器、 天平、电炉等
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
水中菌落总数测定
• 生活饮用水
实验操作
– 用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中
• 水源水
– 吸取1ml充分混匀的水样，注入盛有9ml灭菌生理盐水的 试管中，混匀制成1 : 10稀释液
实 不同稀释液的平均菌落数 菌落总数 报告方式
例
10-1
10-2 10-3 （CFU/mL） （CFU/mL）
6
27
11
5
270
270
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水中菌落总数测定
不同稀释度的选择及报告方法
• 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以 最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表 中实例7）
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
水中菌落总数测定
• 每递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管 • 每个稀释度制作2个平皿 • 同时做空白试验
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
水中菌落总数测定
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任务一水中菌落总数的测定习题
一、名词解释：
1.cfu:
2.无菌操作:
3.细菌总数:
二、填空题：
1.生活饮用水标准检验方法微生物指标是（写出GB代号）。
2.生活饮用水菌落总数不得超过个/ml，总大肠菌群MPN不得检出。
3.菌落总数测定时对水样进行倍递增稀释，一般选择个连续稀释度。
4.应选取菌落数在之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数作为菌落计数标准。
低于 30cfu的平板记录具体菌落数，大于300 cfu的可记录为多不可计。
5.灭菌的平板计数琼脂培养基应却至℃时倾注平皿。
6.菌落总数测定时培养温度℃，培养时间 h。
7.稀释倍数越高，平板上的菌落数应越。
三、判断题：
1.琼脂在46℃以下会发生凝固，故常用于固体培养基的凝固剂和营养剂。
（）
2.菌落计数时，菌落数小于 100 cfu 时，按"四舍五入"原则修约，以整数报告。
（）
3.菌落计数时，当平板内的菌落数过多（所有稀释度均大于300），但分布很均匀，可取平板的1/4计数，再乘以4作为该平板的菌落数。
（）
4.空白对照试验的平板上允许有菌落生长。
（）
5.菌落总数测定时，样品如果有包装，应用无水乙醇在包装开口处擦拭后取样。
（）
四、简答题
1.平皿计数法(GB5750.12-2006)测定的细菌数量是样品中的实际菌数吗？为什么？
2.某样品菌落总数测定时，所有稀释度平板上都无菌落生长，试分析出现此结果的原因有哪些。
五、实验题：
某种鸡厂对生产用水井的水样进行菌落总数测定时，按国家标准将水样处理及培养后，培养皿上生长的菌落数量记录如下：
请回答下列问题：
1.对水样进行处理及培养条件是指什么？
2.本次实验选择的稀释度是多少？选择依据是什么？
3.列式计算并正确地对测定结果进行报告。
4.该指标（菌落总数）的常规检验依据是什么？简要写出其检验程序。
任务一水中菌落总数的测定习题答案
一、名词解释：
1.cfu:指水样经过处理，在一定条件下培养所得的1mL检样中细菌菌落的数量。
2.无菌操作:采取一切方法防止微生物进入实验操作范围的操作方法。
3.细菌总数:指一定数量或面积的食品检样经过处理，在显微镜下对细菌进行直接计数。
二、填空题：
1.生活饮用水标准检验方法微生物指标是GB/T5750.12-2006 （写出GB代号）。
2.生活饮用水菌落总数不得超过 100 个/ml，总大肠菌群MPN不得检出。
3.菌落总数测定时对水样进行十倍递增稀释，一般选择 3 个连续稀释度。
4.应选取菌落数在 30—300 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数作为菌落计数标准。
低于 30cfu的平板记录具体菌落数，大于300 cfu的可记录为多不可计。
5.灭菌的平板计数琼脂培养基应却至 46 ℃时倾注平皿。
6.菌落总数测定时培养温度 36±1 ℃，培养时间 48±2 h。
7.稀释倍数越高，平板上的菌落数应越少。
三、判断题：
1.琼脂在46℃以下会发生凝固，故常用于固体培养基的凝固剂和营养剂。
（×）
2.菌落计数时，菌落数小于 100 cfu 时，按"四舍五入"原则修约，以整数报告。
（√）
3.菌落计数时，当平板内的菌落数过多（所有稀释度均大于300），但分布很均匀，可取平板的1/4计数，再乘以4作为该平板的菌落数。
（√）
4.空白对照试验的平板上允许有菌落生长。
（×）
5.菌落总数测定时，样品如果有包装，应用无水乙醇在包装开口处擦拭后取样。
（×）
四、简答题
1.平皿计数法(GB5750.12-2006)测定的细菌数量是样品中的实际菌数吗？为什么？
答：不是。
平板菌落计数法测定的细菌总数只是检样中部分活菌数，测定结果比检
样中实际存在的活菌数值小，这主要是由于培养基的营养状况和培养条件不能满足某些细菌的要求，致使这些细菌不能正常的生长繁殖。
首先，不同的细菌对营养物质的要求不同，而平板菌落计数法常选用的是一种培养基，其不可能满足检样中所有细菌的营养需求；其次，不同的细菌对环境条件的要求不同，在平板菌落计数中常选择中温（一般36℃±1℃）培养，于是嗜热细菌和嗜冷细菌的生长繁殖就要受到影响。
2.某样品菌落总数测定时，所有稀释度平板上都无菌落生长，试分析出现此结果的原因有哪些。
答：（1）稀释倍数选择不正确。
（2）营养琼脂培养基温度太高，烫死检样中的细菌。
（3）检样中没有细菌。
五、实验题：
1．水样进行处理是指无菌操作条件下进行十倍递增稀释，培养条件是36±1℃，48±2h。
2.本次检验选择的稀释度是10、100、1000倍，选择依据是对样品污染情况估计。
3.(291+279)÷2=285
(31+35)÷2=33
330÷291=1.13 (3100÷2910=1.13)
∵ 1.13〈2
∴该水样菌落总数应为2850cfu/ mL。
结果报告:2900 cfu/ mL
4.该指标的常规检验依据是GB5750.12-2006，其检验程序：检样做成几个适当倍数的稀释液选择3个适宜稀释度各取1 mL分别加入灭菌培养皿内每皿加入适量平板计数琼脂培养基培养（36℃、48h）菌落计数
结果报告。