食品中细菌菌落总数的测定 PPT
合集下载
实验三--食品中微生物菌落总数的测定
5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中，并转动
平皿使其混合均匀
6、37℃倒置培养2天
7、按照计数Biblioteka 则计数五、菌落计数方法 选取菌落数在30~300cfu之间，无蔓延生长的平板 计数 低于30的记录具体菌落数，大于300的可记录为多 不可计，每个稀释度采用2个平行的均数 有较大片状菌落生长者不宜采用， 若片状小于平板一半时且余部均 匀分布，则以半个平板菌落数2 倍报告 无明显界限链状菌落每条单链视 为一个菌落
1、计数结果的表述
若只有一个稀释度平板在30~300CFU，则计算两平行平 板的均数，再乘以稀释倍数报告之 若有连续两个稀释度符合计数要求则按下公式：
所有符合计数要求 的平板菌落数之和
菌落总数
例：10-2=232，244 10-3=33，35 N= (232+244+33+35) (2+2×0.1)×10-2 = 24727
灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成
10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4
菌落总数操作流程图
3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌 移液管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个 平皿；同时，吸取1mL无菌生理盐水到1个平皿中作为
空白对照
4、熔化培养基
标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计
数法
将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分
散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿
培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落
都由原液中单个细胞发育而来。
反映食品被细菌污染的程度
由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验
实验四食品中细菌菌落总数的测定
4、若所有稀释度平板菌落数均<30， 则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍 数计算。
5、若所有稀释度平板均无菌落生长， 则应按<1乘以最低稀释倍数计算。
6、若所有稀释度均不在30～300之间， 有的>300，有的又<30，则应以最接近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
（四） 菌落计数报告方法
（二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察
，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在 记下各皿的菌落总数后，求出同稀释 度的各平板平均菌落数。
到达规定培养时间，应立即计数。如果 不能立即计数，应将平板放置于0～4℃ ，但不要超过24h。
1、 平皿菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作
例如：
稀释度 1:100（第一稀释度） 1:1000（第二稀释度）
菌落数 232，244
33，35
232+244+33+35 (2+0.1×2) ×10-2
=544/0.022=24727
四舍五入表示为: 2.5 × 104
3、 若所有稀释度的平板菌落数均 >300，则取最高稀释度的平均菌落数乘 以稀释倍数计算。
酱油（GB/T2717-2003）： 细菌菌落总数： ≤30000 CFU/mL 大肠菌群： ≤30MPN/100mL 肠道致病菌： 不得检出
全脂奶粉、脱脂奶粉（GB5410-1999）：
特级 一级 二级
细菌菌落总数：≤20000 ≤30000 ≤50000
（CFU/ml）
大肠菌群
≤40
≤90
≤90
一、 目的
1、 学习并掌握食品中菌落总数测定方 法和原理。 2 、了解菌落总数测定在对被样品进行 卫生学评价中的意义 。
食品中菌落总数检验PPT推荐版
• 培养时间 48±2h。
检测方法—计数
• 菌落读取 培养到时间后，应 立即计数。选定适宜菌落数的 平板来读取。可用肉眼观察， 或借助计数工具(如：放大镜 、菌落计数器等)。
菌落计数器
全自动菌落分析仪
注意：应在充足柔和的光线下 进行菌落计数。避免将平板上
来源于未溶解的培养基、样品
或沉淀物的颗粒计数成菌落。
• 样品稀释误差 为减少样品稀释误 差，在连续倍比稀释时，每一稀释 液应充分振摇使其均匀，同时每一 稀释度应更换一支吸管，将吸管内 液体沿管壁流入，吸管尖端不能伸 入稀释液内，以免吸管外部粘附的 检液溶于其内。
为减少稀释误差，SN标准采用取 10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。
检测步骤—接种
• 接种方式 倾注接种法 ，涂布接种法，螺旋接 种法等。
检测方法-计数 菌落计数和计算 GB/T 4789.2-2003方法
• 规则一：选择平均菌落数在30～300之间的稀释 度，乘以稀释倍数即为样品中菌落数。(例1)
规则二：若有两个稀释度， 其生长的菌落数均在30～ 300之间，则视两者之比如 何来决定。若其比值小于 或等于2，应报告其平均数； 若大于2则报告其中较小的 数字。(例2和例3)
检测方法-计数 菌落计数和计算 SN 0168-1992方法
规则五：若所有稀释度均无菌落生长
，则以小于1乘以最低稀释倍数即为 菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落计数器
样品中菌落数，加*号表示。(例5) 检样处理 参照GB/T 4789.
3M 纸 片 法
检 测 方 法
• 国内外菌落总数测定方法基本一致。基 本操作一般包括：检样→样品的稀释→ 倾注平皿→培养48小时→计数报告。
检测方法—计数
• 菌落读取 培养到时间后，应 立即计数。选定适宜菌落数的 平板来读取。可用肉眼观察， 或借助计数工具(如：放大镜 、菌落计数器等)。
菌落计数器
全自动菌落分析仪
注意：应在充足柔和的光线下 进行菌落计数。避免将平板上
来源于未溶解的培养基、样品
或沉淀物的颗粒计数成菌落。
• 样品稀释误差 为减少样品稀释误 差，在连续倍比稀释时，每一稀释 液应充分振摇使其均匀，同时每一 稀释度应更换一支吸管，将吸管内 液体沿管壁流入，吸管尖端不能伸 入稀释液内，以免吸管外部粘附的 检液溶于其内。
为减少稀释误差，SN标准采用取 10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。
检测步骤—接种
• 接种方式 倾注接种法 ，涂布接种法，螺旋接 种法等。
检测方法-计数 菌落计数和计算 GB/T 4789.2-2003方法
• 规则一：选择平均菌落数在30～300之间的稀释 度，乘以稀释倍数即为样品中菌落数。(例1)
规则二：若有两个稀释度， 其生长的菌落数均在30～ 300之间，则视两者之比如 何来决定。若其比值小于 或等于2，应报告其平均数； 若大于2则报告其中较小的 数字。(例2和例3)
检测方法-计数 菌落计数和计算 SN 0168-1992方法
规则五：若所有稀释度均无菌落生长
，则以小于1乘以最低稀释倍数即为 菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落计数器
样品中菌落数，加*号表示。(例5) 检样处理 参照GB/T 4789.
3M 纸 片 法
检 测 方 法
• 国内外菌落总数测定方法基本一致。基 本操作一般包括：检样→样品的稀释→ 倾注平皿→培养48小时→计数报告。
食品中细菌菌落总数的测定报告.ppt
最新.
9
三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基 平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸 盐缓冲液 3、 其它 无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培 养箱等。
最新.
10
四、 流程
1、检样
2、做几个适当倍数的稀释液
3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入 灭菌平皿内
4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀
一定条件包括培养基成分、培养温度 和时间、pH、是否需要氧气等。
最新.
4
按国家标准方法规定，即在需氧情况 下， 36 ±1℃培养48±2 h，能在平板 计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数。 所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求 的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件 不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
最新.
为菌落总数测定标准。每一个稀释度应 采用两个平皿，大于300的可记为多不 可计。
最新.
20
2、其中一个平板有较大片状菌落生 长时，则不宜采用，而应以无片状菌落 生长的平板作为该稀释度的菌落数；若 片状菌落不到平板的一半，而其余一半 中菌落分布又很均匀，则可以计算半个 平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。
最新.
23
试样 例次
稀释度
10-210Leabharlann 3138052
平
2 均 526
205
菌
3 落 271
60
数
4
284
152
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
18
10-3
5.2x104
32 10-3，10-4 （1.56） 2.6x105
12
10-2
（2.2） 2.7x104
食品中细菌总数的测定
若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度 最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度 最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀 释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其 中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告
之。 检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释
若大于2则报告其中较小的数字。
度的各平板平均菌落总数。 平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
（2）菌落计数的报告 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链， （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时， 即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每 个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培 养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿 15ml~20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培 养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空 白对照。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度 最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀 释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其 中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告
之。 检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释
若大于2则报告其中较小的数字。
度的各平板平均菌落总数。 平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
（2）菌落计数的报告 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链， （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时， 即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每 个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培 养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿 15ml~20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培 养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空 白对照。
菌落总数测定
（（一一））、、样样品品的稀稀释释及及做做平平板板
6、及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃ 的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾 注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
1ml 1ml 1ml
生理盐 水
1:10
1:100 1:1000 1:10000
1ml
25g/m 1ml
食品中菌落总数的测定
一、菌落总数
• 食品检样经过处理，在一定条件下 （如培养基、培养温度和培养时间等） 培养后，所得每g（mL）检样中形成的 微生物菌落总数。
二、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、预测食品存用的期限长短。 3、了解细菌在食品中的繁殖动态。
三、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设 备和材料如下：
• 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 • 冰箱：2 ℃～5 ℃。 • 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 • 天平：感量为0.1 g。 • 均质器。 • 振荡器。 • 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1
4、上述 操作程序，制备10 倍系列稀释样品 匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无 菌吸管或吸头。
（（一一）、、样样品品的的稀稀释释及及做做平平板 板
5、根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样 品可包括原液），在进行10 倍递增稀释 时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内， 每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸 取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内 作空白对照。
性选择培养温度和时间？
资料源自网络
(四)、检验注意事项
1、对照平板出现几个菌落时，要追加对照 平板；
第三章食品中细菌菌落总数其检验资料
@ 平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅 有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链， 则应将每条链作为一个菌落计。
如预计样品中存在会在PCA上形成蔓延菌落，可在培养 基凝固后在加入约4mL培养基，凝固后再翻转平板。
13
2020/10/10 华南农业大学食品学院 林捷
培养
培养基凝固后倒置培养。 培养温度一般为36±1℃（水产品的培养温度，
由于其生活环境水温较低，故多采用30±1℃）。 培养时间一般为48h(水产品72±3h)。培养箱应 保持一定的湿度，琼脂平板培养48h后，培养基 失重不应超过15％。 为了避免食品中的微小颗粒或培基中的杂质与细 菌菌落发生混淆，可同时作一稀释液与琼脂培基 混合的平板，于4℃环境中放置，以便计数时作 对照观察。或在营养琼脂中加入氯化三苯四氮唑 （TTC），培养后菌落呈红色，易于分别。
36±1℃ 48±2h
↓
菌落计数
↓
报告
5
2020/10/10 华南农业大学食品学院 林捷
实验材料
1、电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、天平、电炉、
吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管 架、微量移液器、酒精灯、均质器或乳钵、灭菌刀或 剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、油性笔、登记薄 2、培养基和试剂：75%乙醇、生理盐水（磷酸缓冲 液）、1mol/mL氢氧化钠溶液、 1mol/mL盐酸溶 液、平板计数琼脂培养基、petrifilm纸片和压板， 检验方法。
2020/10/10 华南农业大学食品学院 林捷
第三章 食品中细菌菌落总数检验
检验流程 操作技巧 计数与报告
1
2020/10/10 华南农业大学食品学院 林捷
菌落总数
食品中细菌数量越多，则食品腐败变质的速度就越快， 甚至可引起食用者的不良反应。
如预计样品中存在会在PCA上形成蔓延菌落，可在培养 基凝固后在加入约4mL培养基，凝固后再翻转平板。
13
2020/10/10 华南农业大学食品学院 林捷
培养
培养基凝固后倒置培养。 培养温度一般为36±1℃（水产品的培养温度，
由于其生活环境水温较低，故多采用30±1℃）。 培养时间一般为48h(水产品72±3h)。培养箱应 保持一定的湿度，琼脂平板培养48h后，培养基 失重不应超过15％。 为了避免食品中的微小颗粒或培基中的杂质与细 菌菌落发生混淆，可同时作一稀释液与琼脂培基 混合的平板，于4℃环境中放置，以便计数时作 对照观察。或在营养琼脂中加入氯化三苯四氮唑 （TTC），培养后菌落呈红色，易于分别。
36±1℃ 48±2h
↓
菌落计数
↓
报告
5
2020/10/10 华南农业大学食品学院 林捷
实验材料
1、电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、天平、电炉、
吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管 架、微量移液器、酒精灯、均质器或乳钵、灭菌刀或 剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、油性笔、登记薄 2、培养基和试剂：75%乙醇、生理盐水（磷酸缓冲 液）、1mol/mL氢氧化钠溶液、 1mol/mL盐酸溶 液、平板计数琼脂培养基、petrifilm纸片和压板， 检验方法。
2020/10/10 华南农业大学食品学院 林捷
第三章 食品中细菌菌落总数检验
检验流程 操作技巧 计数与报告
1
2020/10/10 华南农业大学食品学院 林捷
菌落总数
食品中细菌数量越多，则食品腐败变质的速度就越快， 甚至可引起食用者的不良反应。
菌落总数测定
上一页
下一页
◆用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液 1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中 （注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试 管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100的样品匀液。 ◆按上述操作制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀 释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
上一页
下一页
待培养基凝固后，
将培养皿放入恒温 培养箱。 提示：培养皿放入 培养箱时要倒置。 注意选择设置为 36℃±1℃的培养 箱。
上一页
下一页
菌落计数和报告
◆菌落计数方法。作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要 时用放大镜检查，以防遗漏，在记下各平板的菌落数后，求 出同稀释度的各平板平均菌落数。 ◆菌落计数报告。 a平板菌落数的选择 b稀释度的选择 C菌落数的报告
上一页
下一页
样品的稀释
◆固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸盐 缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～ 10000 r/min均质1min～2min，或放入盛有225 mL稀释液 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成 1:10的样品匀液。 ◆液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸 盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量 的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液
0
o
设备和材料
◆恒温箱（36 C±1 C)；冰箱（0~4 C）；恒温水 0 0 浴 （46 C±1 C）；天平；电炉（可调式）；吸 管（容量为1ml,标有0.1mL单位的刻度）；广口瓶 或锥心瓶（容量为500mL）；试管架：灭菌刀或 剪刀：灭绝镊子；酒精棉球；登记薄；玻璃蜡笔。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
5、称重取样以CFU/g 为单位报告，体积 取样以CFU/mL 为单位报告。
注意事项
1、无菌操作
3、 若所有稀释度的平板菌落数均 >300，则取最高稀释度的平均菌落数乘 以稀释倍数计算。
4、若所有稀释度平板菌落数均<30， 则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍 数计算。
5、若所有稀释度平板均无菌落生长， 则应按<1乘以最低稀释倍数计算。
6、若所有稀释度均不在30～300之间， 有的>300，有的又<30，则应以最接近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
2 菌落总数测定的卫生学意义
（1）菌落总数主要作为判别食品被 污染程度的标志，也可以应用这一方法 观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对 被检样品进行卫生学评价时提供依据。
（2） 食品中细菌菌落总数越多，则 食品含有致病菌的可能性越大，食品质 量越差；菌落总数越小，则食品含有致 病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和 致病菌的检验，才能对食品做出较全面 的评价。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问
3、细菌总数
指一定数量或面积的食品样品．经过 适当的处理后，在显微镜下对细菌进行 直接计数。其中包括各种活菌数和尚未 消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接 显微镜数。通常以1 g或1 mL样品中的细 菌总数来表示。
三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基 平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸 盐缓冲液 3、 其它 无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培 养箱等。
为菌落总数测定标准。每一个稀释度应 采用两个平皿，大于300的可记为多不 可计。
2、其中一个平板有较大片状菌落生 长时，则不宜采用，而应以无片状菌落 生长的平板作为该稀释度的菌落数；若 片状菌落不到平板的一半，而其余一半 中菌落分布又很均匀，则可以计算半个 平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。
3、当平板上有链状菌落生长时， 如呈链状生长的菌落之间无任何明显 界限，则应作为一个菌落计，如存在 有几条不同来源的链，则每条链均应 按一个菌落计算，不要把链上生长的 每一个菌落分开计数。
食品中细菌菌落总数的测定
一、 目的
1、 学习并掌握食品中菌落总数测定方 法和原理。 2 、了解菌落总数测定在对被样品进行 卫生学评价中的法由于所采用的 计数方法不同而有两种：菌落总数和细 菌总数。
1、菌落总数
是指食品检样经过处理，在一定条 件下培养后，所得1g或1mL检样中形成 的细菌菌落总数。以 CFU/g（mL）来 表示。
2、用1 mL灭菌吸管吸取1:10稀释 液1 mL，沿管壁徐徐注入含有9 mL灭 菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内， 振摇试管或反复吹打混合均匀，制成 1:100的稀释液。
3 、另取1 mL灭菌吸管，按上项操 作顺序，制10倍递增稀释液，如此每 递增稀释一次即换用1支1 mL吸管。
4、根据标准要求或对污染情况的估 计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制 作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释 度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中， 每个稀释度做两个平皿。
（二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，
必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记 下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度 的各平板平均菌落数。
到达规定培养时间，应立即计数。如果 不能立即计数，应将平板放置于0～4℃， 但不要超过24h。
1、 平皿菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作
一定条件包括培养基成分、培养温度 和时间、pH、是否需要氧气等。
按国家标准方法规定，即在需氧情况 下， 36 ±1℃培养48±2 h，能在平板 计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数。 所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求 的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件 不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
菌落总数并不表示实际中的所有细菌总 数，也不能区分其中细菌的种类，只包括 一群在计数平板琼脂中生长发育、嗜中温 的需氧和兼性厌氧的细菌菌落总数，所以 有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
四、 流程
1、检样 2、做几个适当倍数的稀释液 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小
时 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 7、 计算菌落总数 → 报告
五、 步骤
(一) 取样、稀释和培养
（四） 菌落计数报告方法
1、菌落数在1～100时，按四舍五入报 告两位有效数字。
2、菌落数≥ 100时，第三位数字按四舍 五入计算，取前面两位有效数字，为了缩 短数字后面的零数，也可以10的指数表示。
3、若所有平板上为蔓延菌落而无法计 数，则报告菌落蔓延。 4、 若空白对照上有菌落生长，则此次检 测结果无效。
1、 以无菌操作取检样25g（mL），放于 225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 的灭菌玻 璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内， 经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。
固体和半固体检样在加入稀释液后，最好置 灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理 1～2min，制成1:10的均匀稀释液。
同时分别取1ml稀释液（不含样品） 加入两个灭菌平皿内作空白对照。
5 、稀释液移入平皿后，将冷却至 46℃琼脂培养基注入平皿约15～20ml， 并转动平皿，混合均匀。
6、 待琼脂凝固后，翻转平板，置 36±1℃温箱内培养48±2h，水产品 30±1℃温箱内培养72±3h。
如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥 漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面 覆盖一薄层琼脂培养基（约4毫升），凝固 后培养。
（三）菌落总数的计算
1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在 适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的 平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数， 作为每g（mL）中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在
适宜计数范围内时，应以两者比值决定。 若其比值小于2，应报告两者的平均数； 若大于等于2，则报告稀释度较小的菌落 数。
注意事项
1、无菌操作
3、 若所有稀释度的平板菌落数均 >300，则取最高稀释度的平均菌落数乘 以稀释倍数计算。
4、若所有稀释度平板菌落数均<30， 则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍 数计算。
5、若所有稀释度平板均无菌落生长， 则应按<1乘以最低稀释倍数计算。
6、若所有稀释度均不在30～300之间， 有的>300，有的又<30，则应以最接近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
2 菌落总数测定的卫生学意义
（1）菌落总数主要作为判别食品被 污染程度的标志，也可以应用这一方法 观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对 被检样品进行卫生学评价时提供依据。
（2） 食品中细菌菌落总数越多，则 食品含有致病菌的可能性越大，食品质 量越差；菌落总数越小，则食品含有致 病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和 致病菌的检验，才能对食品做出较全面 的评价。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问
3、细菌总数
指一定数量或面积的食品样品．经过 适当的处理后，在显微镜下对细菌进行 直接计数。其中包括各种活菌数和尚未 消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接 显微镜数。通常以1 g或1 mL样品中的细 菌总数来表示。
三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基 平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸 盐缓冲液 3、 其它 无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培 养箱等。
为菌落总数测定标准。每一个稀释度应 采用两个平皿，大于300的可记为多不 可计。
2、其中一个平板有较大片状菌落生 长时，则不宜采用，而应以无片状菌落 生长的平板作为该稀释度的菌落数；若 片状菌落不到平板的一半，而其余一半 中菌落分布又很均匀，则可以计算半个 平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。
3、当平板上有链状菌落生长时， 如呈链状生长的菌落之间无任何明显 界限，则应作为一个菌落计，如存在 有几条不同来源的链，则每条链均应 按一个菌落计算，不要把链上生长的 每一个菌落分开计数。
食品中细菌菌落总数的测定
一、 目的
1、 学习并掌握食品中菌落总数测定方 法和原理。 2 、了解菌落总数测定在对被样品进行 卫生学评价中的法由于所采用的 计数方法不同而有两种：菌落总数和细 菌总数。
1、菌落总数
是指食品检样经过处理，在一定条 件下培养后，所得1g或1mL检样中形成 的细菌菌落总数。以 CFU/g（mL）来 表示。
2、用1 mL灭菌吸管吸取1:10稀释 液1 mL，沿管壁徐徐注入含有9 mL灭 菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内， 振摇试管或反复吹打混合均匀，制成 1:100的稀释液。
3 、另取1 mL灭菌吸管，按上项操 作顺序，制10倍递增稀释液，如此每 递增稀释一次即换用1支1 mL吸管。
4、根据标准要求或对污染情况的估 计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制 作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释 度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中， 每个稀释度做两个平皿。
（二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，
必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记 下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度 的各平板平均菌落数。
到达规定培养时间，应立即计数。如果 不能立即计数，应将平板放置于0～4℃， 但不要超过24h。
1、 平皿菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作
一定条件包括培养基成分、培养温度 和时间、pH、是否需要氧气等。
按国家标准方法规定，即在需氧情况 下， 36 ±1℃培养48±2 h，能在平板 计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数。 所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求 的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件 不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
菌落总数并不表示实际中的所有细菌总 数，也不能区分其中细菌的种类，只包括 一群在计数平板琼脂中生长发育、嗜中温 的需氧和兼性厌氧的细菌菌落总数，所以 有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
四、 流程
1、检样 2、做几个适当倍数的稀释液 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小
时 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 7、 计算菌落总数 → 报告
五、 步骤
(一) 取样、稀释和培养
（四） 菌落计数报告方法
1、菌落数在1～100时，按四舍五入报 告两位有效数字。
2、菌落数≥ 100时，第三位数字按四舍 五入计算，取前面两位有效数字，为了缩 短数字后面的零数，也可以10的指数表示。
3、若所有平板上为蔓延菌落而无法计 数，则报告菌落蔓延。 4、 若空白对照上有菌落生长，则此次检 测结果无效。
1、 以无菌操作取检样25g（mL），放于 225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 的灭菌玻 璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内， 经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。
固体和半固体检样在加入稀释液后，最好置 灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理 1～2min，制成1:10的均匀稀释液。
同时分别取1ml稀释液（不含样品） 加入两个灭菌平皿内作空白对照。
5 、稀释液移入平皿后，将冷却至 46℃琼脂培养基注入平皿约15～20ml， 并转动平皿，混合均匀。
6、 待琼脂凝固后，翻转平板，置 36±1℃温箱内培养48±2h，水产品 30±1℃温箱内培养72±3h。
如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥 漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面 覆盖一薄层琼脂培养基（约4毫升），凝固 后培养。
（三）菌落总数的计算
1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在 适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的 平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数， 作为每g（mL）中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在
适宜计数范围内时，应以两者比值决定。 若其比值小于2，应报告两者的平均数； 若大于等于2，则报告稀释度较小的菌落 数。