流式细胞仪检测细胞周期原理和方法
利用流式细胞术分析细胞周期时相
细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。 仪器：流式细胞仪，细胞培养设备，离心机，水浴，冰箱 了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用
掌 握 用 流 式 细 胞 仪 测 量 细 胞 群 体 DNA 仪器：流式细胞仪，细胞培养设备，离心机，水浴，冰箱
膜封口。4℃固定过夜（可长至2周）
• 800rpm 15min收集固定细胞，PBS洗2次 • 用0.4mL PBS重悬细胞并转至Tube中轻轻吹打（防止细胞破碎） • 加RNase-A约3µL至终浓度约为50µg/mL ，37℃水浴消化30 min； • 加PI约50µL至终浓度约为65µg/mL ，在冰浴中避光染色30 min。 • 用300目（孔径40~50微米）尼龙网过滤，上机检测 • 样品分析测定及打印
了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用 实验目 的 通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白 质、抗原等物理及化学特征。 实 验 原理
取对数生长期细流胞，式倒细去培胞养液仪，的胰酶工适度作消原化细理胞，是用将培养待液吹测打细，8胞00rp放m ,入离心样15品mi管n去上中清，。 在气体的压力下 实用验300利目进用（流孔入式径充细40胞~满5术0微分鞘米析液）细尼胞的龙周网期流过时动滤相，室上机。检在测 鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷 加RNas出e-A，约3形µL至成终细浓度胞约为柱50。µg/m通L ，过37对℃水流浴消动化液30 m体in；中排列成单列的细胞进行逐个检测，得
流式细胞术分析细胞周期时相 流式细胞术在科学研究中的应用 了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用 仪器：流式细胞仪，细胞培养设备，离心机，水浴，冰箱
利用流式细胞仪分析细胞存活率细胞周期ROS
利用流式细胞仪分析细胞存活率细胞周期ROS 流式细胞仪（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究领域的技术，可用于分析细胞数量、形态、存活率、细胞周期等多个参数。
下面将详细介绍如何利用流式细胞仪来分析细胞存活率、细胞周期和ROS （Reactive Oxygen Species）。
一、分析细胞存活率细胞存活率是研究细胞毒性或细胞凋亡过程中的重要参数。
在流式细胞仪中，常用细胞染色剂PI（Propidium Iodide）来评估细胞的存活率。
PI是一种能够穿透破损细胞膜并结合DNA的染色剂，可以通过荧光检测器来测量。
具体操作步骤如下：1.培养待测试的细胞，并将细胞备样。
可以使用PBS洗涤一遍，以获得单细胞悬浮液。
2. 使用细胞培养基或PBS将细胞悬浮液稀释至合适的细胞浓度，通常在1×10^6 - 1×10^7 cells/mL之间。
3.加入适量的PI染色剂到细胞悬浮液中，一般终浓度为1-10μg/mL。
4.在黑暗条件下，在4°C冷藏室中孵育15-30分钟，避免光照和温度升高。
5.使用流式细胞仪进行测量。
设置PI染色剂的激发波长和检测通道，根据实验需要选择适当的过滤器。
6. 将细胞悬浮液转移到流式细胞仪的样本管中，进行数据采集和分析。
可以设置门控（gating）策略以排除细胞碎片和颗粒物。
通过分析样本中PI染色的细胞数量，可以计算出细胞的存活率。
二、分析细胞周期细胞周期分析是研究细胞增殖和凋亡机制的一项重要实验。
在流式细胞仪中，通过DNA染色剂染色和分析可以了解细胞的周期分布情况。
具体操作步骤如下：1.培养待测试的细胞，并将细胞备样。
可以使用PBS洗涤一遍，以获得单细胞悬浮液。
2. 使用细胞培养基或PBS将细胞悬浮液稀释至合适的细胞浓度，通常在1×10^6 - 1×10^7 cells/mL之间。
3.用酒精或细胞固定液固定细胞，一般在-20°C的环境中固定20-30分钟。
流式细胞术测定细胞周期
流式细胞术测定细胞周期一、实验原理碘化丙锭（PI）可以与细胞内DNA和RNA结合,采用RNA抑制剂将RNA 消化后,通过流式细胞术检测到的与DNA 结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA 含量的多少。
由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。
因此,通过流式细胞术PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M 期,并可通过Multicycle软件计算各时相的百分率。
值得注意的是, PI不能通过细胞膜完整的细胞(如活细胞和早期凋亡细胞) ,在标本制备时,必须先用乙醇或其他破膜剂增强细胞膜的通透性,才能使PI进入细胞内与细胞内的核酸结合。
乙醇通常为终浓度为70%的冷乙醇。
二、实验准备1、试剂胰酶、PBS、纯乙醇（4℃）、RNase A、Triton X-1002、主要器材300目尼龙过滤网三、实验步骤1、每个样品细胞数不得少于100万。
2、胰酶消化，收集细胞（贴壁细胞）或1000rpm离心5分钟直接收集细胞（悬浮细胞）。
3、4℃ PBS洗一次，将细胞重悬于0.3ml 4℃ PBS，加入0.7ml 4℃的纯乙醇，将枪头伸入液面下，轻轻打入乙醇，轻柔混匀两次，4℃固定过夜。
4、1000rpm离心5分钟，去上清，加入染色缓冲液PI染色缓冲液：50 μg/ml PI0.1 mg/ml RNase A0.05% Triton X-100总体积1ml/样品，37℃孵育40分钟。
5、1000rpm 离心5分钟，小心去除上清，加入1ml PBS，轻柔混匀，300目过滤，上机检测。
FCM(流式细胞术检测)原理及临床应用
流式细胞术(flow cytometry FCM)是利用流式细 胞仪对单个生物颗粒(红细胞、白细胞、各类组织细 胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和 生物学特性进行多参数定量分析，并能对特定细胞 群体加以分选的分析技术。
FCM的工作原理
流式细胞仪组成：
1.液流系统 2.光学系统 3.数据处理系统
双标记或多标记分析：目前使用的流式细胞仪 能用一个激光束激发检测三色甚至四色荧光信 号。检测时需注意荧光补偿。
常用免疫荧光染料组合
荧光染料 FITC+PE
激发波长 （nm）
488
发射波长（nm） 525、575
颜色 绿色、橙色
FITC+PeCy5
488
525、675
绿色、红色
FITC+ECD
488
实体瘤以多倍体居多；
G0 期：DNA 合成静止期 G1 期：DNA 合成前期 S 期： DNA 合成期 G2 期：DNA 合成后期 M 期： 细胞分裂期
DNA 倍体 2N 2N
2N-4N 4N 4N
DNA非2倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指 标:
良性肿瘤和正常组织良性增生不出现DNA非2倍体细 胞而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞；
过去认为 FCM测定残存白血病细胞不可靠， 因为现用的 McAb不能鉴别正常血细胞与白血 病细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗 原，但近来有人提出根据白血病细胞的以下特 征， FCM检测的敏感度可明显提高
白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应 的正常血细胞
如小儿ALL，其CDl0+细胞的荧光强度可 高达3-4个对数值，而其 CD45则为弱阳性或 阴性。
525、625
流式细胞仪检测细胞周期原理和方法
流式细胞仪检测细胞周期原理和方法I流式细胞仪（FCM ）检测细胞周期的原理和方法高考和模拟试题中经常会出现流式细胞仪检测细胞周期图像，那么, 什么是流式细胞仪？如何检测细胞周期?流式细胞仪是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检査相比，具有速度快、精度高.准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。
流式细胞仪，乂称荧光激活的细胞分选器，作为进行流式细胞分析的仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体力学、图像技术、细胞生物学、免疫学理论于一体，是一种非常先进的检测仪器,被誉为生物医学实验室的“CT"。
流式细胞术已经成为一种用途最广泛和最先进的细胞分析技术，在细胞生物学、血液学、肿瘤学、免疫学等基础和临床医学领域发挥着重要作用。
流式细胞讣的基本结构流犬细胞计主要山流动室与液流系统、激光源与光学系统、光电管与检测系统、计•算机与分析系统四部分组成（如典例分析 槽品»・正电荷偏 •分光的向第散射尤检测話 植満充Mi 信号•夕 ••負电（2015年北京高考试题）流式细胞仪可根据细胞中DNA 含量的不同对细胞分别计数。
硏究者用某抗癌药物处理体外培养的癌细胞，24小时后用流武细胞仪检测，结果如图。
对检测结果的分析错误的是【答案】C【解析】从题目图中我们不难看出有两个峰值细胞的数U 最多，分别 对应的DNA 含量为40和80。
可知40的应该是处于分裂间期的G1期细胞，G1期时间比较长。
而80的细胞应该是属于G2期和分裂期的细胞，DNA 含量已经加倍。
因此A 选项中b 峰中细胞的DNA 含量是a 峰中的2倍是正确的。
B 选项中a 峰和b 峰之间应该是细胞周 期中的S 期，正在进行DNA 分子复制。
C 选项中，处于分裂期的细胞DNA 含量处于加倍状态，应该i|•数在b 峰中。
D 选项通过看右侧图可知b 峰明显下降，可知应该是抑制了 DNA 分子的复制，DNA加倍的细胞明显减少，所以D 选项正确。
流式细胞术检测细胞周期的原理及技术流程
流式细胞术检测细胞周期的原理及技术流程哎呀，这可是个不简单的活儿啊！今天我们就要聊聊流式细胞术检测细胞周期的原理及技术流程。
话说这个方法可是科学家们研究细胞生长和分裂的重要工具呢，那咱们就好好聊聊吧！咱们得明白什么是细胞周期。
简单来说，就是细胞从一个生命周期阶段到另一个阶段的过程。
就像人一样，从出生到长大再到老去，每个阶段都有不同的特点和任务。
而细胞也是这样，它们也有自己的生命周期，从分裂开始，到分化成不同的细胞类型，再到死亡或修复损伤。
如何知道这些细胞在什么时候开始分裂、什么时候结束呢？这就需要用到流式细胞术了。
流式细胞术的原理其实很简单，就是通过激光或其他光源对细胞进行照射，然后利用特殊的摄像头捕捉不同颜色的荧光染料标记的细胞。
这些荧光染料会因为细胞内部的某些分子而发光，所以我们可以通过观察荧光的颜色和强度来判断细胞的状态和位置。
咱们就来看看流式细胞术的技术流程吧。
第一步，准备工作。
先要把待检测的细胞样本准备好，然后把它们稀释到一定浓度，这样可以让更多的地方都能看到荧光信号。
接着，要把样品放到流式细胞仪上，这里有一个小技巧：要尽量让样品均匀分布，这样才能保证检测结果的准确性哦！第二步，激光照射。
这时候要用到激光器或者其他光源对样品进行照射。
记住啊，这个过程一定要快，否则荧光信号可能会减弱或者消失。
不过不用担心，现在的流式细胞仪都设计得很聪明，能够自动调整激光功率和时间长度，以获得最佳的检测效果。
第三步，数据采集。
照射完成后，流式细胞仪就会自动记录下每个荧光信号的位置、强度和持续时间等信息。
这些数据会被传输到电脑上进行分析和处理。
别看这步骤听起来简单，实际上需要非常高的精度和速度才能做到哦！第四步，数据分析。
这一步主要是通过软件对收集到的数据进行分析和比对，找出其中的规律和异常情况。
比如说，我们可以通过观察不同细胞的荧光信号强度来判断它们的生命周期阶段；也可以通过比较不同样品之间的荧光信号差异来寻找潜在的疾病标志物等等。
细胞实验技术之细胞周期检测
细胞实验技术之细胞周期检测导读细胞周期是指细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的时间，它代表着生命从一代向下一代传递的连续过程，与前几期我们介绍过的细胞学实验（细胞增殖、克隆形成等）一样，细胞周期也是评价细胞增殖功能的重要实验。
流式细胞仪是检测细胞周期最常用的方法，然而我们会碰到细胞量不够、细胞碎片太多等原因，导致实验一次次重复，本文就一起看看如何把细胞周期的数据变的更加漂亮，准确！一、细胞周期简介主要分为以下2大过程：1.分裂间期：间期又分为三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）；2.分裂期M期：细胞分裂期，指细胞分裂开始到结束。
细胞周期图（来自网络）•注：G0期是指某些细胞在分裂结束后会暂时离开细胞周期，停止细胞分裂；但在一定适宜刺激下，又可进入周期；•因为分裂间期持续的时间远远比分裂期持续时间长，在一个正常细胞周期中，分裂间期时间会占整个细胞周期的90%～95%；•不同类型细胞的G1期时间长短不同，所以其细胞周期时间存在差异。
如：人类胃上皮细胞为24小时，骨髓细胞为18小时，HeLa细胞为21小时。
二、常用的实验方法细胞周期常用检测方法有流式检测法、BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)掺入法及同位素标记法等，其中流式检测法因适用于大量样品检测，可快速分析单个细胞的多种特性，是目前最为常用的测定细胞周期的一种方法，下面就详细介绍如何利用流式细胞仪进行周期分析。
1. 流式检测的实验原理由于细胞周期各时相的DNA含量不同，因此，可通过特异性与DNA结合染料来检测细胞内的DNA含量来测定细胞周期。
流式中常用碘化丙啶(Propidium，简称PI)与DNA结合，其荧光强度与DNA 含量成正比。
因此，通过流式细胞仪对细胞内DNA含量进行检测，同时获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。
2. 流式细胞仪的实验步骤A. 收集细胞取适量的对数生长期细胞接种于6cm中，在相应的条件下（如药物）处理相应时间后，倒去培养基，用胰酶适度消化细胞，离心收集细胞，弃去上清；Tips:•细胞数量：一般情况下，由于在细胞周期中分析的细胞数应达到1.0*104~3.0*104才具有统计学意义。
流式细胞仪检测细胞周期
流式细胞仪检测细胞周期
周期分析
操作篇
写在前面
流式细胞术的原理篇我先卖个关子，先来个简单的周期分析操作篇~
通过流式细胞术进行DNA周期分析，可以测定细胞的DNA含量哦~
准备工作☞☞☞制备单细胞悬液于200 μl的PBS缓冲液中；加入2 ml预冷的70%乙醇，4 ℃保存；
步骤
1.肿瘤细胞按300,000-500,000细胞/孔接种于6孔板中；24小时后，加入药物；24-72小时后，EDTA消化并收集细胞，取单细胞悬液1-2×106个细胞于PBS（PH=7.2）缓冲液中；
2.1500 rpm离心5分钟，弃上清，反复两次；
3.重悬细胞于0.5 ml PBS缓冲液中（第二次在eppendenf管中）；
4.加入1 ml冷75%乙醇，混匀，保存于4 ℃（或-20 ℃），至少30分钟。
在-20 ℃条件下可保存2-3周；
5.1500 rpm离心5分钟，去上清，用500 μl PBS重悬细胞，加入5 μl RNaseA消化，去除RNA影响；
6.加PI染液5μl重悬细胞，室温避光20-30分钟；
7.若有明显的黏附，需再用筛网过滤；
8.上机检测。
488 nm激发波长测定。
注意：
1.根据实验的要求，固定剂也可选用1-3%多聚甲醛；
2.将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至0-4 ℃；
3.细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓
度缓慢增加，并不断震摇，以免细胞成团（特别是用乙醇固定时）；
4.单细胞浓度应为106/ml，以免影响CV值和检测结果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
流式细胞仪检测细胞周期原理和方法
流式细胞仪（Flow Cytometry）是一种现代生物学实验技术，主要用
于检测和分析细胞的形态、结构、功能及其分子水平的变化。
它通过利用
激光传感器探测透过细胞的激光散射或荧光信号，同时可以通过细胞的大小、荧光强度和荧光波长的变化将细胞分为不同的亚群。
流式细胞仪的使
用已经广泛应用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学、生殖医学等领域。
流式细胞仪检测细胞周期的原理主要基于细胞的DNA含量不同于不同
细胞周期阶段。
细胞周期通常分为G1期（细胞生长期）、S期（DNA复制期）、G2期（前期）、M期（有丝分裂期）和G0期（休止期）。
在细胞
周期中，细胞会通过分子调控机制从一个阶段进入到下一个阶段。
细胞在G1期，其DNA含量为单倍体（2N）。
G1/S转变时，细胞准备
开始进入DNA复制期（S期），在S期中，细胞的DNA含量翻倍，达到二
倍体（4N）。
接下来，细胞进入G2期，准备进入有丝分裂期（M期），
在M期，细胞的DNA含量达到四倍体（8N），细胞核开始分裂。
而G0期，则代表细胞处于休眠或未分裂状态，DNA含量不变（通常是2N）。
1.细胞样本制备：首先需要制备良好的单细胞悬浮液，通常通过细胞
消化酶处理细胞集落或组织样本，将细胞分散为单细胞。
同时，还要对细
胞进行化学固定或冷冻处理，以保持其形态和结构的完整性。
2.细胞染色：将细胞进行荧光染色或抗体标记。
如果使用荧光染料，
可以直接将染料加入到细胞悬浮液中，使其与DNA结合。
如果使用抗体标记，先将抗体与细胞混合，然后再加入荧光二抗进行染色。
3.流式细胞仪检测：将样品注入流式细胞仪仪器中。
细胞悬浮液在仪器中通过微细管道流动，激光通过细胞悬液时，细胞会散射激光，形成散射信号。
同时，荧光标记的细胞也会发出荧光信号。
4.数据分析：通过流式细胞仪仪器，可以获取每个单个细胞的散射与荧光信号。
利用仪器中的分析软件，可以对细胞的散射与荧光信号进行分析和计数。
根据荧光信号强度，可以对细胞进行不同周期阶段的区分和计数。
总结起来，流式细胞仪检测细胞周期的原理是通过荧光染料或抗体标记来标记细胞的DNA含量或特定蛋白，然后使用流式细胞仪仪器对细胞进行检测和分析。
这种方法可以判断细胞的周期阶段，以及细胞周期与其他生物学活动的关系，对于生物学研究和临床诊断有重要的应用意义。