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细胞周期分析偏高注意事项
细胞周期分析偏高注意事项细胞周期分析是用来研究细胞生长和分裂过程的一种实验技术，通过测量细胞在不同细胞周期阶段的比例和持续时间，可以了解细胞周期的调控机制以及细胞增殖的异常情况。
在进行细胞周期分析时，需要注意以下几个方面：1. 细胞处理：在实验开始之前，需要将细胞制备至适宜的生长状态。
通常需要使用细胞培养基培养细胞，不同类型的细胞培养需要根据具体实验要求采取不同的操作方法。
同时，需要注意细胞的数量和密度，以确保细胞可以正常生长和分裂。
2. 细胞收集：细胞周期分析通常使用流式细胞术进行，因此需要先将细胞从培养皿或培养板中收集出来。
收集细胞时，要注意不要使细胞遭受太大的损伤，避免对细胞周期的影响。
可以使用胰酶等酶来进行细胞解聚，也可以使用细胞刮刀轻轻刮取细胞。
收集的细胞应尽可能集中和纯净，以获得准确的结果。
3. 样本处理：在细胞收集完成后，需要对样本进行处理。
通常需要将细胞用PBS 缓冲液洗涤一遍，去除残余的培养基和细胞碎片。
然后，可以使用乙醇等溶剂将细胞固定，以保持其形态结构。
固定时间和温度需要根据不同类型的细胞进行调整。
4. 细胞染色：为了鉴定细胞的不同细胞周期阶段，通常需要对细胞进行染色。
常用的染色剂有荧光素-氨基酸，乙蓝溴化物等。
染色剂浓度和染色时间需要进行优化，以充分显示细胞的染色状态。
5. 流式细胞仪分析：细胞染色完成后，可以通过流式细胞仪对细胞进行分析。
在进行分析之前，需要对流式细胞仪进行校准，以确保测量的准确性。
在设置参数时，需要根据细胞样本的染色状态进行调整，以使流式细胞仪可以准确识别和区分不同细胞周期阶段的细胞。
6. 数据分析：流式细胞仪会生成一系列的图表和数据，需要将这些数据进行统计和分析。
通常，可以使用软件进行细胞周期数据的分析，比如ModFit LT和FlowJo等。
数据分析的目的是了解细胞的增殖速率、细胞周期分布以及细胞周期的调控机制。
在进行细胞周期分析时，还需要注意以下几个技术细节：1. 细胞样本的保存：实验完成后，需要妥善保存细胞样本，以备后续的实验分析。
Modfit分析细胞周期指南
M o d f i t分析细胞周期指南本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.MarchModfit分析细胞周期指南本指南只提供在guava流式细胞分析仪上使用细胞周期模块分析后产生的数据，其它请参阅产品使用说明书，本指南仅供参考。
一．概述细胞周期的概念：细胞由一次分裂结束到下一次分裂结束，都要经历相同的变化阶段(即G1→S→G2→M )周而复始地进行活动，细胞的这种生长、分裂循环即称为细胞周期(cell cyc1e)。
一个细胞周期包括有丝分裂期(M)和分裂间期(G1、S、G2)。
尽管在各种细胞中各期所占时间都不尽相同，但相对而言M期最短，S期却较长。
分裂间期：1 、G1期，前一次有丝分裂完成到S期开始。
各种与DNA复制有关的酶明显增多，线粒体、叶绿体、核糖体增多，内质网在更新扩大，高尔基体、溶酶体都增加，中心粒彼此分离、复制。
2、S期：DNA、组蛋白合成3、G2期， S期结束后到有丝分裂开始。
由上可以看出G2期、S期、M期反映了细胞的增殖活性，特别是G2期、S期（因M期较短）。
因而，G2/M％+S％反映了细胞增殖能力。
二者有无差别要进行统计检验。
细胞周期阻滞：对于生殖细胞及保持增殖能力的细胞(如干细胞)，由于细胞不断的增殖，细胞总是处于从G1 、S、G2 和M 期的连续的细胞周期中。
在细胞周期的各阶段，细胞分别进行着DNA 复制、蛋白质合成及细胞分裂等重要的生理活动。
每一阶段都是下一阶段的准备期, 真核细胞可以在启动下一个周期前监测与一个细胞周期顺利完成相关的生化事件，这包括各种体内外因素威胁下游事件进行时可逆地将细胞周期阻滞在特定的生理阶段的能力，而这种特定的生理阶段称为检定点(checkpoint) 。
只有前一阶段的生理活动完成后，才能通过称为检定点的阶段，进入周期的下一步，一些突发事件引发的细胞反应能影响驱动细胞周期前进的因子，从而使细胞周期停滞在检定点，这被称为细胞周期阻滞(cell cycle arrest)。
2014-5-6 PI法细胞周期检测
细胞周期检测（PI法）一、实验方法原理细胞周期（cell cycle)：是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。
G1期：细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。
S期：DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。
当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期。
G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期。
因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。
一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。
因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。
通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
流式细胞仪的工作原理：是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。
在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。
通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其DNA特征。
细胞周期检测的原理：PI法是较常见的一种周期检测方法。
PI 为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。
PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。
细胞周期示意图如（图一）所示（图一）二、材料及准备工作1.材料准备试剂、耗材名称品牌货号细胞培养瓶corning6孔板corning10ml离心管国产1.5ml EP管国产胰酶（无EDTA）贝博试剂盒中包括RNase-A 贝博试剂盒中包括PI 贝博试剂盒中包括无水乙醇国产PBS 自配2. 试剂配制10XPBS液体配方（0.1MPBS pH 7.4）以1L量为例：NaCl 80gNa2HPO4·12H2O 32.3gNaH2PO4·2H2O 4.5g（十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠）加双蒸水900mL 左右，用HCl/NaOH 调pH至7.4，最后定容为1000mL。
高中生物细胞周期课程教案
高中生物细胞周期课程教案课时：2课时教学目标：1. 了解细胞周期的定义和基本特征；2. 掌握细胞周期不同阶段的特点和变化；3. 了解细胞周期与细胞分裂的关系；4. 能够描述细胞周期的四个阶段及其重要事件。
教学内容：1. 细胞周期的定义和基本特征；2. 细胞周期的四个阶段：有丝分裂期(间期)、有丝分裂期(前期)、有丝分裂期(中期)、有丝分裂期(后期)；3. 各个阶段的特点和重要事件。
教学准备：1. 教学PPT和教学视频；2. 细胞周期的示意图和图解材料；3. 实验器材：显微镜、显微镜玻片和盖玻片、生理盐水、可视化芯片等。
教学过程：第一课时：1. 导入：通过展示细胞周期的示意图引起学生对细胞周期的兴趣；2. 讲解细胞周期的定义和基本特征；3. 分组讨论：让学生分组讨论细胞周期的四个阶段的特点和变化；4. 汇报讨论结果。
第二课时：1. 讲解细胞周期的四个阶段及其重要事件；2. 示范观察：通过显微镜观察细胞在不同阶段的变化；3. 实验操作：让学生使用显微镜观察实验材料，理解细胞周期的不同阶段；4. 总结：总结细胞周期的关键内容，帮助学生巩固知识。
教学评价：1. 教师对学生的回答和讨论进行评价，鼓励学生积极参与；2. 通过实验操作，检验学生对细胞周期的理解和掌握程度；3. 帮助学生总结细胞周期的重点知识，进行口头或书面总结。
教学反思：通过本节课的教学，帮助学生了解细胞周期的概念和特点，掌握细胞周期不同阶段的变化和重要事件，培养学生科学思维和实验能力。
可以通过更多的实验操作和案例分析来丰富教学内容，激发学生的学习兴趣，提高学生对细胞周期的理解和掌握程度。
新教材高考生物一轮复习第四单元细胞的生命历程课堂互动探究案1细胞周期和细胞的有丝分裂
课堂互动探究案1 细胞周期和细胞的有丝分裂考点一细胞的生长和增殖的周期性任务驱动·探究突破任务1 细胞增殖的周期性(1)细胞增殖①细胞增殖包括________和________整个连续的过程。
②方式③意义：是生物体__________________的基础。
(2)细胞周期①概念：连续分裂的细胞,从一次分裂完成时开始,到下一次分裂______时为止,为一个细胞周期。
②适用范围：a.进行______分裂的细胞才有细胞周期；b.______分裂的细胞才有细胞周期。
(3)判断下列哪些细胞具有细胞周期A．根尖分生区细胞B．植物形成层细胞C．神经细胞 D．人表皮细胞E．哺乳动物成熟红细胞 F．干细胞G．生发层细胞 H．洋葱表皮细胞I．浆细胞①具有细胞周期的是：________。
②判断的理由：这些细胞都是________的细胞。
任务2 细胞周期的表示方法总结：判断一个完整的细胞周期的方法(1)细胞周期以________为起点,而不能以分裂期为起点。
(2)分裂间期的时间________分裂期。
[技法提炼](1)判断一个完整的细胞周期的方法①“先长后短”：一个细胞周期一定要先经过一个长的间期,再经过一个短的分裂期。
②“终点到终点”：从完成时开始,到完成时结束,为一个细胞周期。
③“先复制后分裂”：一个细胞周期一定要先完成DNA的复制,才能完成细胞的分裂。
(2)解答有关细胞周期的三个技巧①只有连续分裂的细胞才具有细胞周期,高度分化的体细胞(如神经、肌肉细胞)和减数分裂产生的生殖细胞不具有细胞周期。
②细胞周期的长短由遗传物质决定,同时受环境因素影响。
③在观察有丝分裂时,应选择分裂期相对较长的材料,有利于观察到处于不同分裂时期的图像。
(3)细胞周期中的三种变化分析策略①基因突变：在细胞分裂间期,DNA复制时容易受到内外因素的干扰而发生差错,即发生基因突变。
②染色体变异：在细胞分裂前期,秋水仙素或低温都可抑制纺锤体的形成,出现多倍体细胞。
PI染色法测细胞周期
PI染料与DNA结合
PI染料能够选择性地结合DNA，通过 荧光显微镜可以观察到染色后的细胞 核。
数据分析
通过特定的软件对数据进行处理和分 析，可以获得细胞周期的分布情况。
细胞周期分析
通过对染色后的细胞核进行荧光强度 和面积的测量，可以分析细胞的细胞 周期状态。
PI染色法的应用
肿瘤研究
通过PI染色法可以研究肿 瘤细胞的细胞周期变化， 为肿瘤的诊断和治疗提供 依据。
05
注意事项
实验安全注意事项
01
实验操作应在通风橱中进行，以减少有毒气体的吸入。
02
实验过程中应佩戴实验服和化学防护眼镜，以防止试剂溅到皮
肤或眼睛。
实验后应将废液倒入指定的废液收集容器中，不要随意倾倒。
03
实验操作注意事项
确保细胞浓度适中， 以保证计数准确性。
在洗涤过程中要彻底 去除多余的染料，以 免影响计数结果。
02
PI染色法原理
PI染料的特性
01
02
03
高荧光强度
PI染料具有高荧光强度， 能够有效地与DNA结合， 发出强烈的荧光信号。
专一性
PI染料只与DNA结合，不 与其他细胞成分结合，具 有专一性。
细胞膜通透性
PI染料能够透过细胞膜， 与细胞核中的DNA结合， 实现对细胞核的染色。
PI染色法的原理
干燥细胞
让涂片自然干燥，以便更好地观察染色效果。
荧光显微镜观察
使用荧光显微镜观察涂片，记录不同时期细胞的 染色情况。
04
结果分析
细胞周期各期的划分
G1期
细胞开始生长，DNA合成前期 ，细胞体积逐渐增大。
S期
DNA复制期，细胞核内DNA含 量加倍。
细胞凋亡周期
3细胞凋亡之 caspase检测
• 背景知识
– 细胞凋亡过程中，胞内主要蛋白通常被降解，调节这一过程 的蛋白叫做Caspase（半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶） – Caspase 3是参与DNA维护和调控细胞的重要组分，即Caspase 3激活==细胞凋亡
细胞凋亡之 凋亡相关酶检测
名称
Caspase-1
品牌
CST CST
细胞凋亡之 caspase-3
Jurkat T-Cells
6 µM camptothecin for 4 h
untreated
细胞凋亡之 caspase-3
Jurkat T-Cells
Mouse Thymocytes
固定、破膜过程
细胞凋亡之 caspase-3
产品编号
9602S
原理：JC-1有有单体和多聚体两种存在形式，高浓度时多聚体，发红色荧光（FL2检测）， 低浓度时单体形式，发绿色荧光（FL-1检测）。 正常细胞：膜电位正常，JC-1靠线粒体膜极性进入线粒体内，随浓度升高多聚体，红光 凋亡细胞：线粒体膜电位去极化，JC-1从线粒体释放，浓度降低，转为单体，绿光 通过检测绿色和红色荧光：
细胞
检测方法
免疫荧光
TUNEL法 Annexin V/PI Caspase 通路 线粒体膜电位
核酸
细胞膜 胞内通路
线粒体
细胞生命活动之：细胞周期
2.1细胞周期
细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为 间期与分裂期两个阶段。
2.1.1细胞周期检测原理
利用特殊的荧光染料(PI等)与 细胞内DNA碱基结合，被这些 荧光染料染色的细胞在激光 照射下发射出荧光，荧光强 度与DNA含量成正比。流式细 胞仪通过测定细胞的荧光强 度推算出细胞的DNA含量。
细胞周期测定实验
细胞周期测定实验细胞计数法：实验方法原理体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。
它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。
分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。
实验材料细胞试剂、试剂盒胰酶甲醇培养液冰醋酸Giemsa染液仪器、耗材CO2培养箱普通显微镜培养皿盖玻片吸管实验步骤一、消化细胞，将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。
二、CO2培养箱中培养48小时，使细胞长在盖片上。
三、取出盖片，按下列顺序操作：PBS漂洗3分钟→甲醇：冰醋酸=3：1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。
四、盖片晾干后反扣在载玻片上，镜检。
五、计算分裂指数=分裂细胞数/总细胞数×100%展开注意事项1. 操作时动作要轻，以免使盖片上的细胞脱落。
其他一、Giemsa染液配制称Giemsa粉末0.5 g，加几滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油总量为33 ml）。
56℃中保温90-120分钟。
加入33 ml甲醇，置棕色瓶中保存，此为Giemsa原液。
使用时按要求用PBS稀释。
一般稀释10倍。
BrdU参入法实验方法原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。
从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。
细胞周期反应了细胞增殖速度。
单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。
如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。
细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。
计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。
实验材料细胞试剂、试剂盒BrdU 甲醇冰醋酸Giemsa染液秋水仙素SSC 柠檬酸三钠NaCl仪器、耗材冰箱玻片水浴锅锅盖紫外灯光学显微镜实验步骤一、试剂配制1. BrdU配制BrdU 10 mg加双蒸水10 ml ，4℃下避光保存。