高效液相色谱法检测中成药中4种雌激素的方法
雌激素类药物的高效液相色谱分析方法概况1
雌激素类药物的高效液相色谱分析方法概况李 燕1,韩 海21 重庆南川市人民医院药剂科,重庆4084002 暨南大学药学院,广东广州510632雌激素(estrogen)类药物是以18个碳原子雌烃为基本结构的类固醇激素,其作用除了性激素方面外,还能促进骨中钙的沉积。
目前已有很多以雌激素为主要成分的制剂用于治疗妇女绝经期后由于雌激素缺乏而发生的骨质疏松症及其引起的其它疾病。
如美国市场上销售的倍美力(Premarin),主要成分为多种雌激素的硫酸单酯钠盐。
目前常用的测定雌激素类药物的方法有比色法和分光光度法[1]、薄层色谱法[2]、气相色谱法(GC)[3]、高效液相色谱法(HPLC)、放射免疫分析法(RIA)[4]及酶联(ELISA)技术[5]等。
RI A及ELISA具有很高的灵敏度,可检测到空气及受污染的水源中微量的雌激素,但均存在交叉响应的问题,测定值常高于真实值,不宜作为含量测定方法。
随着分析技术的提高和分析仪器的发展,HPLC被广泛使用,它具有样品用量少、灵敏度较高、分离效能好、快速等优点,因此被USP、JP、BP及中国药典等采用。
文中主要介绍HPLC在雌激素类药物分析测定中的概况。
1 用于雌激素原料药的含量测定中国药典2000年版雌激素测定方法见表1。
表1 中国药典 中雌激素原料药物的HPLC法分析化合物分析柱流动相检测方法己烯雌酚ODS甲醇-水(75 25)UV241nm 苯甲酸雌二醇ODS甲醇-水(80 20)UV230nm 炔雌醇ODS甲醇-水(70 30)UV281nm2 用于制剂中雌激素的分离和含量测定HPLC具有很好的分离效能,所以除了应用于雌作者简介:李燕,女,重庆,大专,主管药师,从事临床药学工作。
激素原料药的分析外,还广泛地应用于雌激素制剂的分离与分析。
文献[6]以RP-HPLC分离测定雌三醇栓剂中雌三醇的含量,采用WatersNora-ParkC18柱,用氯霉素作内标,甲醇-水(50 50)为流动相, 280nm检测。
HPLC法同时测定雌激素类药物尼尔雌醇片和己烯雌酚片中主药含量
HPLC法同时测定雌激素类药物尼尔雌醇片和己烯雌酚片中主药含量作者：孙婷张菁刘云姜建国蒋凝来源：《中国药房》2019年第04期中图分类号 R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）04-0469-04DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.04.08摘要目的：建立同时测定尼尔雌醇片和己烯雌酚片中主药含量的方法。
方法：采用高效液相色谱法。
色谱柱为 Waters Symmetry C18，流动相为0.02 mol/L乙酸铵水溶液-乙腈（40 ∶60，V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为280 nm，柱温为35 ℃，进样量为20 μL。
结果：尼尔雌醇、己烯雌酚检测质量浓度线性范围均为0.01～0.5 mg/mL（ r均为 0.999 9）；定量限分别为187、192 ng/mL，检测限分别为56、58 ng/mL；精密度、稳定性、重复性试验的RSD 均小于1%（n=6）；加样回收率分别为99.13%～100.80%（RSD=0.52%，n=9）、99.20%～100.90%（RSD=0.58%，n=9）。
结论：该方法灵敏度高、重复性好，可用于同时测定雌激素类药物尼尔雌醇片中尼尔雌醇和己烯雌酚片中己烯雌酚的含量。
关键词高效液相色谱法；雌激素类药物；尼尔雌醇；己烯雌酚；含量测定ABSTRACT OBJECTIVE： To establish the method for simultaneous determination of main drug contents in Nilestriol tablet and Diethylstilbestrol tablet. METHODS： HPLC method was adopted. The determination was performed on Waters Symmetry C18 column with mobile phase consisted of 0.02 mol/L ammonium acetate water solution-acetonitrile （40 ∶ 60，V/V） at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 280 nm， and column temperature was 35 ℃. The sample size was 20 μL. RESULTS： The linear range of nilestriol and diethylstilbestrol were0.01-0.5 mg/mL （r=0.999 9）； the limits of quantitation were 187 and 192 ng/mL， and the limits of detection were 56 and 58 ng/mL. RSDs of precision， stability and reproducibility tests were all lower than 1% （n=6）. The recoveries of them were 99.13%-100.80%（RSD=0.52%，n=9） and 99.20%-100.90%（RSD=0.58%， n=9）. CONCLUSIONS： The method is more sensitive and reproducible， and suitable for simultaneous determination of nilestriol content in estrogenic hormone drug Nilestriol tablets and diethylstilbestrol content in Diethylstilbestrol tablets.KEYWORDS HPLC； Estrogenic drugs； Nilestriol； Diethylstilbestrol； Content determination尼爾雌醇（Nilethylenol）又名戊炔雌三醇，化学名为3-（环戊氧基）-19-去甲基-17α-孕甾-1，3，5（10）-三烯-20-炔-16α，17-二醇，属于雌三醇衍生物；己烯雌酚（Diethylstilbestrol）又名丙酸己烯雌酚，化学名为（E）-4，4′-（1，2-二乙基-1，2-亚乙烯基）双苯酚，是人工合成的非甾体雌激素类药物；两者均为雌激素类处方药，临床均用于雌激素缺乏引起的绝经期或更年期综合征，其主要不良反应均为突破性出血、子宫出血等。
液相微萃取-高效液相色谱联用分析化妆品中痕量的雌激素
Ｍａｃ ０ ７ ｒｈ２ ０
色
谱
Ｖ０ ． ５ Ｎ ｏ． １２ ２
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２ ４ ～２ ７ ３ ３
液相 微 萃取 － 效 液相 色谱联 用分 析化 妆 品 中痕 量 的 雌激 素 高
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｉｕ ｄ ｐ ａ ｅ ｍｉｒ ｅ ｔａ ｔｏ （ Ｐ ｓ ｒ ｃ ：Ｌｑ ｉ － ｈ ｓ ｃ ｏ ｘ ｒ ｃ ｉｎ Ｌ ＭＥ）Ｗａ ｎ ｒ ｄ ｃ ｄ ｔ ｓａ ｌ ｈ ａ ｔ － ｈ ｅ ｓ ｓ ｓ ｉｔｏ ｕ ｅ ｏ ｅ ｔ ｂｉ ｗｏ ｐ ａ ｙ — ｓ ｓ
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ｔ ｒ ｎａｔ ｏｎ ｆ Ｔｒ ｅ Ｅｓ ｒ ｉ ｏ ａｃ ｔ ｏｇｅ ｎ ｎｓ ｉ Ｃｏｓ ｅｔ ｃ Ｗ ａｔ ｒ ｂｙ ｍ ｉ ｅ Ｌｉ ｑｕｉ Ｐｈａｓ ｉ ｒ ｘｔ ａｃ ｉ ｄ－ ｅ Ｍ ｃ ｏｅ ｒ ｔ ｏｎ Ｃｏｕｐｌ ｅｄ ｉ ｈ ｉ ｈ ｗ ｔ Ｈ ｇ Ｐｅ ｆ ｍ ａ ｅ Ｌｉ ｕｉ Ｃｈｒ ｒ ｏｒ ｎｃ ｑ ｄ ｏｍ ａ ｏｇ ａ ｔ ｒ ｐｈｙ
高效液相色谱法同时测定动物饲料中的4种雌激素
高效液相色谱法同时测定动物饲料中的4种雌激素摘要：采用反相高效液相色谱法同时测定动物饲料中的4种雌激素（雌酮、雌三醇、炔雌醇、己烯雌酚）。
检测条件为色谱柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相甲醇-水（60∶40，V/V），流速1 mL/min，检测波长279 nm，柱温25 ℃。
结果表明，4种雌激素成分在0.02～200 μg/mL浓度范围内与其对应峰面积呈良好线性关系。
样品平均加标回收率为92.4%～109.3%，RSD为2.4%～3.4%，饲料中4种雌激素的检出限为0.010～0.030 mg/kg。
该法操作简便、灵敏度高，可同时检测动物饲料中4种雌激素含量。
关键词：高效液相色谱法；雌激素；动物饲料Determination of Four Estrogens in Animal Feeds by HPLCAbstract：The simultaneous determination method of four estrogen （estrone，estriol，ethiny，diethylstilbestrol）in animal feeds were established by RP-HPLC with Kromasil C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm）column at 25 ℃. The mobile phase consisted of methanol-water （60∶40，V/V）. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was set at 279 nm. The results revealed that there were good linear responses in the range of 0.02～200 μg/mL of 4 estrogens，and LODs were 0.010～0.030 mg/kg. The average recoveries were 92.4%～109.3% with RSD of 2.4%～3.4%. Consequently，the method was simple，sensitive for quality control of these estrogens in animal feeds.Key words：HPLC；estrogen；animal feeds饲料安全是动物性食品安全的重要环节，近年来，由饲料安全问题引发的食品安全事件时有发生。
反相高效液相色谱法同时测定中成药保健食品中4种生育酚含量
反相高效液相色谱法同时测定中成药保健食品中4种生育酚含量ZHANG Jing;WANG Xueqin;WANG Qian;XU Jinling;WANG Haibo【摘要】目的建立同时测定中成药保健品中4种生育酚含量的反相高效液相色谱法.方法色谱柱为YMC Carotenoid-C30柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为294 nm,柱温为20℃,进样量为10μL.结果α,β,γ,δ-生育酚质量浓度线性范围分别为5.28～63.36,5.42～65.09,5.23～62.77,5.10～61.15μg/mL(r>0.999),精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2％;平均加样回收率分别为95.77％,95.23％,97.43％,94.83％,RSD值分别为1.13％,1.86％,1.34％,1.73％(n=6).结论该方法操作简便,准确,精密度、稳定性、重复性、耐用性均较好,可用于同时测定中成药保健品中4种生育酚含量.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2019(028)014【总页数】3页(P29-31)【关键词】反相高效液相色谱法;中成药保健食品;天然维生素E;α-生育酚;β-生育酚;γ-生育酚;δ-生育酚;含量测定【作者】ZHANG Jing;WANG Xueqin;WANG Qian;XU Jinling;WANG Haibo 【作者单位】;;;;【正文语种】中文【中图分类】R932;R284.1;R286.0维生素E又称生育酚，为脂溶性维生素，具有抗氧化、抗衰老、促生育功能、提高免疫、保护肝脏、提高记忆、防治白内障、减轻肾损害等众多生理功能[1]。
按其来源可分为人工合成和天然维生素E，来自动植物的天然维生素E是苯并二氢呋喃的衍生物，共有8种类似物，包括α，β，γ，δ-生育酚和α，β，γ，δ-生育三烯酚，生理活性均不同，其中以α-生育酚生理活性最强，其次为β-生育酚[2]。
反相高效液相色谱法检查中药保健品中8种激素类成分
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激素类药物是临床上广泛使用的一种抗炎、 抗过敏、 抗风湿药 物。 笔者曾采用不同比例的乙腈 & 水进行梯度洗脱， 分离了氢化可的 在此基础上又重新设计流动相梯度洗脱方法， 松等 !# 种激素药物， 同时分离 !# 种成分之外的 ’ 种常用激素成分（ 泼尼松、 醋酸氢化泼 尼松、 醋酸氟氢可的松、 丁酸氢化可的松、 醋酸去炎松、 哈西奈德、 丙 4! 5 且均达到基线分离。 用该方法检测市 酸氯倍他索、 丙酸倍氯米松） ， 场抽样的中药制剂喘金宝， 操作简便， 结果准确可靠， 现报道如下。 & 仪器与试药 日本岛津） ， 岛 津 B>6J & B> & !#H9I- 型 高 效 液 相 色 谱 仪 （ J>B & !#H 型 系 统 控 制 器 ， B> & !#H9 型 泵 ， /0=1K:0< 型 工 作 站 ， 日本岛津 ） ， JL9 & 6!#H 型二极管阵列检测器 （ 9MN & 8H 型在线脱 气机， 泼尼松、 醋酸氢化泼尼松、 醋酸氟氢可的 >OP & !#H 型柱室。 松、 丁酸氢化可的松、 醋酸去炎松、 哈西奈德、 丙酸氯倍他索、 丙酸 倍氯米松对照品均购于中国药品生物制品检定所； 中药制剂喘金 宝为市场抽检样品； 乙腈为色谱纯； 试验用水为纯化水。 " !" # 方法和结果 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱： ； 流动相： 乙 9:;30</:= >!’ 柱 （ )## 33 @ 82 ( 33， * !3 ） ） （ ） （ ） 腈 ?HA & 水（ ； 梯 度 洗 脱 方 法 ： Q # * 8 %*R H * )8 $*R H * )" （ 。 二极管阵 %*R H） * 8# （ %*R H） 列检测器及 NS 检测波长： )8# <3； 柱温： 室温； 流 速： 进 !2 # 3B C 3:<； 样量： !# !B。 ’ 种成分分离效果良 好， 拖尾因子 均在 !2 # 左右 ， 理论 塔板数均在 ’ ### E !# ### 。 色谱图 见图 ! 。 !" ! 线性关系考察 分别称取上述 ’ 种激素对照品适量， 置同一 *# 3B 量瓶中， 用 乙醇溶解并稀释至刻度， 按上述色谱条件记录色谱图。 以质量浓度 （ 为横坐标、 峰面积 （ 为纵坐标进行线性回归， 在线性范围内 #） "） ’ 种成分的质量浓度与峰面积均呈良好的线性关系 ? 表 ! A 。 !" $ 精密度试验 取混合对照品溶液， 连续进样 ( 次， 记录色谱图。 结果 ’ 种激 素成分的 $%& 均小于 !2 #R ， 表明仪器精密度良好。 !" % 耐用性试验 取混合对照品溶液， 分别采用不同品牌的色谱柱和不同型号 的液相色谱仪照拟订的方法操作， 结果 ’ 种成分仍能够很好地分 张广求， 男， 本文通讯作者， 主要从事质量管理、 药物分析和制剂研究 （ ） （ ） 工作，电话 #$!% & ’()*%!) 电子信箱 +,-)##*. /0,12 +03。 参考文献：
高效液相色谱法测定化妆品中5种性激素
高效液相色谱法测定化妆品中5种性激素王珊;李琼;武晓剑;崔俭杰;郑芸芸【摘要】HPLC was applied to the determination of 5 sexual hormones in cosmetic.The cosmetic sample was extracted with methanol.Kromasil 100-5C18 chromatographic column was used as stationary phase,and a mixture of acetonitile and water (65 +35)was used as mobile phase.UV-detection at 242 nm and 290 nm was adopted in the determination.Linear relationships between values of peak area and mass concentration of 5 sexual hormones were kept in the same range of 0.100 -10.0 mg·L-1 ,with detection limits (3S/N)in the range of 0.552-1.01 mg·kg-1 and lower limits of determination (10S/N)in the range of 1.10-5.04 mg·kg-1 .Values of recovery found by standard addition method were in the range of 96.2%-110%,and values of RSD′s (n=9) less than 10%.%应用高效液相色谱法测定化妆品中5种性激素的含量。
高效液相色谱法测定化妆品中四种雌激素
Determination of Four Female Sex Hormone in
Cosmetics by HPLC
作者： 余晓 袁凯松 翟海云 卢绮雯 潘育方
作者机构： 广东药学院药物分析系,广东广州510006
出版物刊名： 宜春学院学报
页码： 91-93页
年卷期： 2012年 第12期
主题词： 高效液相色谱法 雌激素 化妆品
摘要：目的：建立反相高效液相色谱法同时测定化妆品中的4种雌激素（雌酮、雌三醇、炔雌醇、已烯雌酚）的方法。
方法：色谱柱Inertsil ODS—C18（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-水（体积比为60：40），流速1mL／min，检测波长279nm，柱温：25℃。
结果：4种雌激素成分在0．05-500μg／mL浓度范围内与其对应分峰面积线性关系良好。
样品的平均加标回收率为97．3％-110．6％，RSD为2．9％-4．0％，化妆品中四种雌激素的检出限为0．02—0．03mg／kg。
该方法操作简便、灵敏度高，能够同时检测化妆品中4种雌性激素的含量。
中成药中四种雌激素的薄层鉴别方法研究
中成药中四种雌激素的薄层鉴别方法研究王全一;矫筱蔓;董宇【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2011(14)2【摘要】目的建立中成药中雌酮、已烯雌酚、炔雌醇和雌二醇4种激素的快速鉴别方法.方法采用薄层色谱法(TLC),吸附剂为硅胶G,展开剂为氯仿-正己烷-丙酮(10:9:2),显色剂为磷钼酸试剂.结果 4种雌激素的Rf值分别为0.67、0.53、0.48和0.39.结论新建方法选择性强、灵敏度高、可靠且准确,可以作为中成药中雌激素非法添加检测的有效方法.%Objective To develop a thin-layer chromatography (TLC)method for the qualitative detection of estrogenic hormone illegally added into Traditional Chinese Medicine (TCM).Methods The TLC method was used for qualitative determination of four common added estrogenic hormones.The organic extract of the TCM preparations was analyzed on the thin layer plate of silica gel G.The developing agent was chloroform-n-hexane-acetone( 10: 9:2 ).The developer was the test solution of sonnenschein’s reagent.Results Rf values of the four estrogens were 0.67,0.53,0.48 and 0.39.Conclusion The method is selective, sensitive, reliable and accurate, and it can be used to detect estrogenic hormone illegally added into TCM.【总页数】2页(P134-135)【作者】王全一;矫筱蔓;董宇【作者单位】辽宁省食品药品检验所,沈阳,110023;辽宁省食品药品检验所,沈阳,110023;辽宁省食品药品检验所,沈阳,110023【正文语种】中文【相关文献】1.乳香及含乳香中成药中乳香酸类薄层层析鉴别 [J], 夏磊;宋志前;张琳琳;魏征;曹玉娜;刘振丽2.中成药中熟地黄的薄层色谱鉴别 [J], 赵春香;章贵杰3.地黄丸类中成药泽泻薄层鉴别方法研究 [J], 王秀芹;林彤;江英桥4.天益头痛片,复方半夏片等中成药中半夏的薄层层析鉴别 [J], 林海;肖艳萍5.中药及中成药薄层色谱鉴别检验中的问题分析 [J], 刘爱香因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱切换波长法同时测定辛夷鼻炎丸中4种成分的含量
高效液相色谱切换波长法同时测定辛夷鼻炎丸中4种成分的含量目的：建立同时测定辛夷鼻炎丸中升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵含量的方法。
方法：采用高效液相色谱切换波长法对A、B、C 3家企业共52批次辛夷鼻炎丸样品进行含量测定。
色谱柱为Kromasil C18，流动相为乙腈-0.1%磷酸，流速为1.0 mL/min，检测波长为220 nm（升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷）和250 nm（甘草酸铵），柱温为30 ℃，进样量为10 μL。
结果：升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵检测质量浓度线性范围分别为 6.138～122.77 ?g/mL（r=0.999 9）、2.502～50.03 ?g/mL （r=0.999 9）、5.988～119.75 ?g/mL（r=0.999 9）、12.788～255.76 ?g/mL（r=0.999 9）；精密度、稳定性和重复性试验的RSD均1.5 ；理论板数以5-O-甲基维斯阿米醇苷峰计为12 000。
结果表明，其他成分对主成分测定无干扰。
2.4 线性关系考察精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液0.125、0.2、0.5、1.0、2.0、2.5 mL，分别置于5 mL量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀。
分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，以待测成分质量浓度为横坐标（x，μg/mL）、峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，线性关系考察结果见表1。
2.5 检测限与定量限考察精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液0.25、0.5、1 mL，分别置于10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，进样分析。
当信噪比为3 ∶1时，得检测限；当信噪比为10 ∶1时，得定量限。
结果，升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草苷、甘草酸铵的检测限分别为0.200、0.200、0.150、0.125 μg/mL，定量限分别为0.500、0.505、0.350、0.271 μg/mL。