细菌运动观察(二)
实验十 细菌的运动
指老师：雒晓芳
一、实验目的
观察细菌鞭毛的形态特征。 学习用悬滴法观察细菌的运动性。
二、 实验原理
采用悬滴法在显微镜下观察活的细菌是否具有
运动能力，以初步判断细菌是否有鞭毛。观察
时，要适当减弱光强度以增加反差，若光线太 强，细菌和周围的液体难以区分。
三、材料仪器
1.仪器： 显微镜、凹玻片、载玻片、镊子、接种环、 滴管等 。
2.活材料： 培养24h的变形杆菌和未知球菌。 3.试剂： 凡士林、石蜡油。
四、实验方法
1.涂凡士林：取洁净的盖玻片，在其周围涂少 许的凡士林。 2.加菌液：在盖玻片中央滴一小滴菌液，并用 记号笔做记号。
3.盖凹玻片：将凹玻片的凹槽对准盖玻片中心的菌 液，并轻轻的盖在盖玻片上。轻轻按压使盖玻片于 凹玻片粘合在一起， 把液滴封闭在小室里。翻转凹 玻片，使菌液滴悬在盖玻片下并位于凹槽中央。
4.镜检：先用低倍镜找到标本，并将液滴移至视野中央， 然后用高倍镜观察。若用油镜观察，盖玻片厚度不 能超过0.17mm，并要十分细心，以免压碎盖玻片、 损坏镜头。
五、注意事项
1、载玻片与盖玻片要洁净无油； 2、滴加菌液不能过多，过多会影响细菌的正常运动； 3、若使用油镜观察，需加石蜡油！ 4、菌体是透明的，镜检时可缩小光圈或降低聚光器 以增大反差，区分细菌运动与布朗运动； 5、衰老的细菌鞭毛易脱落，宜选用幼龄菌体！
六、实验结果
1、绘出所看到的细菌的形态图，并用箭头表 示其运动方向。 2、悬滴法中，为什么要涂凡士林？为什么加 的菌液不能太多？如果发现显微镜视野内大量 细菌向一个方向流动，你认为是什么原因造成 的？
细菌2
1.鞭毛：某些细菌表面长出的一种呈波状弯曲的纤细丝状物。
鞭毛具有运动功能，通过鞭毛丝的旋转而动，它们是细菌的“运 动器官”，多在螺旋菌和杆菌中存在，球菌中只有芽孢八叠球菌 属长鞭毛，它着生在细胞膜的基粒上，穿过细胞壁伸向胞外。
鞭毛的长度：
一般为15—20 µ m，最长可达70 µ 。 m
培养方法：穿刺法，观察菌种的呼吸类型、运动状况、 酶学特性等。
3.液体培养基
观察菌膜、沉淀、色素、产气情况等。
五、细菌的染色
染色目的：增加与背景的反差。 染色原理：细菌等电点为PH2-5，一般情况下带负电荷，易与带 正电荷的碱性染液结合。 染色方法：简单染色：只用一种染液，主要用于形态观察。 复合染色:用两种以上染液，主要用于菌种鉴别。
粘膜肺炎球菌在血琼脂平板上菌落
肺炎克雷伯氏菌在DHL培养基上菌落形态
光滑型菌落
枯草芽孢杆菌菌落形态－粗糙型菌落
不同的微生物种类，其菌落特征不同。同一种菌 在不同培养条件下菌落特征也不尽相同。 菌落的特征：包括大小、形状、颜色、边缘、质地、 透明度、光泽、厚度、湿润度等。
不同种的细菌菌落特征
2.半固体培养
A 近中央
B 末端
C 中央
细菌芽孢的各种类型
芽孢的组成和结构
芽孢有多层结构，主要包括孢外壁、芽孢衣、皮层和核心.
芽孢的结构
芽孢的形成与芽孢的萌发过程
芽孢的形成：
芽孢的萌发：
芽孢萌发的必要条件：水、营养物、温度 和 O2，在条件具备的情况下，芽孢在几分钟 内便可萌发，芽孢吸收了水和营养物，体积膨 大，皮层破裂，长出芽管，发育成新的营养细 胞，与此同时芽孢的特征消失。
根据荚膜的形状和厚度的不同， 将荚膜分为四类：
实验六
(2)悬滴法 (a)在洁净凹载玻片周围涂少许凡士林。 (b)在盖玻片中央滴一小滴菌液，或用接种环取 1—2环菌液置于中央。 (c)将凹玻片反转，使凹窝中心对准盖玻片上的 菌液滴，液滴不得与凹玻片接触，以接种环柄轻压 使盖玻片与凹玻片粘在一起，液滴处于封闭的小室 中，防止液滴干燥和气流的影响。 (d)小心将凹玻片翻转过来，使菌滴仍悬浮在盖 玻片下和凹窝中心。 (e)先用低倍镜找到悬滴边缘，再用高倍镜观察。 观察时光线要调得暗一些。
五、实验报告
接物镜 接物镜倍 目镜测微尺 镜台测微尺 数 格数 格数 低倍镜 高倍镜 油 镜
接目镜放大倍数： 接目镜放大倍数：_______________
1．结果 (1)将目镜测微尺校正结果填人下表：
目镜测微尺每 格代表的长 度／pm
五、实验报告
宽 长 微生物 目镜测微 名称 尺每格 (2)将各菌测定结果填人 下表： 代表的 长度 /µm 目镜测 宽度／ 目镜测 长度 µm /µm 微尺 微尺 格数 格数 大肠杆 菌 酿酒酵 母 金葡球 菌 菌体大 小范 围 /µm
三、实验器材 菌种：大ห้องสมุดไป่ตู้杆菌。 仪器或其他用具 、凡士林、凹载玻片、 盖玻片、镊子、显微镜等。
四、操作步骤 (1)压滴法 (A)制片：在载玻片上加一滴生理盐水，挑取一环 菌液与水混合，加一环万分之一的美蓝水溶液混匀。 用镊子夹一洁净的盖玻片，使其一边先接触菌液， 然后将整个盖玻片慢慢放下，注意不要产生气泡。 (B)镜检：先以低倍镜找到标本，再用高倍镜观察， 观察时光线要调得暗些。 有鞭毛细菌可做直线、波浪式或翻滚运动，两个细 胞之间出现明显的位移，区别与布朗运动。
细菌的运动性观察
一、目的要求 学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性 二、实验原理
实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
问题与建议
对实验内容不明确 多进行基本技能的训练及实验指导 启发式教学（荚膜/芽孢染色为例） 鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
精品课件
暗视野显微镜或相差显微镜观察
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
➢了解细菌鞭毛染色的应用
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
单端鞭毛 端生丛毛
两端生鞭毛 精品课周件 生鞭毛
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
三、实验材料
1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加 热，用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
化3-4代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄
球菌（Staphyloccocus aureus）
2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡
染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH）
染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）
细菌运动力观察实验报告
实验七细菌运动力观察[实验目的]1、了解检查细菌运动力的方法。
2、掌握悬滴法检测细菌的运动力。
[实验原理]鞭毛是细菌的一种特殊结构，是细菌运动器官。
细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定中的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法较复杂烦琐。
采用悬滴法或水封片法（压滴法）直接在光学显微镜下检查活菌是否具有运动能力来判断细菌是否具有鞭毛则快速、简便。
具有运动能力的细菌，可以独立运动，在显微镜下观察时，细菌的真正运动(自动运动)表现为能离开原来位置，不断改变方向的自由地游动。
水的分子运动(布朗运动)也能见于细菌个体，但只能使其在原地摆动，不能远离原来的位置移动。
这种情况，都是外力作用的结果，不是细菌本身的真正运动。
检查细菌的运动力，应用幼年培养物，最好刚从温箱中取出，并在温暖的环境下从速进行。
此外，这种方法也可用来检查微生物对各种化学物质的趋化性。
[实验材料]1、菌种2003Y1，2003Y2(为本实验室分离的菌种)的肉汤培养物2、仪器及其他物品显微镜、接种环、酒精灯、凹玻片、盖玻片、蒸馏水等[实验内容]1、悬滴检查法采用不染色活菌标本来检查其运动能力。
a.不染色标本片的制备取洁净盖玻片一张，用接种环各勾取蒸馏水1-2环于盖玻片四个角，灭菌接种环，再勾取2003Y1或2003Y2幼龄肉汤培养物1-2环于盖玻片中央；另取一干净凹玻片，凹面朝下对角扣于盖玻片上，再将玻片翻转，使菌液液滴向下，即可进行镜检。
若为固体培养物，则需在盖玻片中央先滴上一小滴生理盐水或透明肉汤，再用接种环取待检固体培养物少量(不要过多)，混匀于液滴内即可。
盖玻片四角的蒸馏水起到粘附（使凹玻片和盖玻片紧密吸附）、防止液滴干燥的目的。
b. 镜检因细菌无色透明，与背景无明显的色差，故在观察时视野要稍暗。
10倍镜对光后调整光线使视野变暗。
放上悬滴标本片，先用低倍镜找到液滴边缘（因表面张力的作用，液滴边缘有大量的菌体，便于观察），然后再转换高倍镜对焦观察，一般不必使用油镜观察，必须用时，注意防止压坏盖玻片。
实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）
实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）一目的要求1．了解简单染色法和革兰氏染色法的基本原理，熟练掌握细菌的涂片与革兰氏染色技术。
2．初步学习细菌细胞特殊结构的染色方法，并观察细菌的特殊结构。
3．观察细菌的菌落平板，学会识别大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的菌落特征，学会初步鉴别微生物的种类的方法。
二实验内容与原理1．简单染色法原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，一般用于观察个体形态与细菌排列。
由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫对细菌进行染色。
美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使菌体着色。
染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim2．革兰氏染色法原理革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。
它是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（G －）两大类。
革兰氏染色过程：涂片→固定→结晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脱色（95% 酒精,30s）→番红复染（30 秒）→干燥→镜检阳性菌：紫色阴性菌：红色革兰氏染色要点：（1）初染：用结晶紫，染色 1 分钟，水洗。
（2）媒染：加碘液覆盖 1 分钟后水洗。
（3）脱色：连续滴加 95％乙醇，约 30 秒，直到滴下的乙醇无色为止，水洗。
（4）复染：加番红染色 1 分钟，水洗。
（5）干燥。
（6）镜检：先低倍镜，后油镜观察。
注意：涂片要薄而均匀，脱色程度要控制得当。
学生做大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草杆菌的革兰氏染色。
观察细菌个体形态与排列，绘图。
3．芽孢染色原理细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。
细菌的运动性观察
细菌的运动性观察（一）实验原理细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或水封片法（即压滴法）直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。
此法较快速、简便。
悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。
水封片法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。
大多数球菌不生鞭毛，杆菌中有的有鞭毛有的无鞭毛，弧菌和螺菌几乎都有鞭毛。
有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动力，衰老的细胞鞭毛易脱落，故观察时宜选用幼龄菌体。
1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。
2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。
3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。
4.盖凹玻片将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。
若制水封片，在载玻片上滴加一滴菌液，盖上盖玻片后即可置显微镜下观察。
5.镜检先用低倍镜找到标记，再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。
由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。
镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。
细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。
结果：有鞭毛的枯草杆菌和假单胞菌可看到活跃的运动，而无鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动。
文案编辑词条B 添加义项?文案，原指放书的桌子，后来指在桌子上写字的人。
细菌鞭毛染色及活菌运动观察
微生物实验报告——细菌鞭毛染色及活菌运动观察摘要关键词前言实验目的实验原理A.细菌鞭毛染色法的基本原理B.压滴法观察活菌运动的基本原理实验器材实验内容(一)压滴法观察活菌运动(二)细菌鞭毛染色实验结果参考文献报告编写人：张行润生命科学学院生科四班200900140177 细菌鞭毛染色及活菌运动观察摘要鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细茵的一项重要形态特征．细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0 . 01 ~0.02um ，所以，除了很少数能形成毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察．要用普通光学显微镜观查细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
细菌形态学观察包括细菌染色标本检查法和不染色标本检查法。
压滴法属于最常用的不染色标本检查法，主要用于检查细菌的运动性。
关键词鞭毛（flagellum）细菌（bacteria）鞭毛染色法（flagellum staining）光学显微镜（Optical microscope）压滴法（Pressure drop method）前言细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察。
但是由于设备限制，我们希望能够在普通的光学显微镜下就能够看见细菌鞭毛。
于是，便产生了鞭毛染色法。
1958年Rhodes根据Fontana的螺旋体改良镀银染色法，建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。
试剂分为媒染剂和银染剂。
但是试剂的稳定性低，容易变质。
2002年谷海瀛发明了一种新的细菌鞭毛镀银染色法。
该法将媒染剂分为A、B两种。
A液为酸化FeCl3溶液，B液为15%单宁酸，含甲醛1 ml，用时A、B液等量混合，轻微加热，染片40s，再用银染液涂片加热至微冒蒸汽，染色10 s。
这种方法不仅染色效果好，而且解决了试剂稳定性差的问题，此种试剂常温下至少可保存1年。
实验三 鞭毛染色法及活细菌运动性的观察
一、实验目的：
1.学习细菌的鞭毛染色法,观察细菌鞭毛的 形态特征; 2.学习用悬滴法观察细菌的运动性.
二、实验原理：
细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子 显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在 普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色方法很多，但 其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉 积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用 的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
三、实验器材
1. 菌种：培养12-16h小时的普通变形杆菌。 2. 标本片：周鞭毛（伤寒杆菌） 3. 试剂：硝酸银鞭毛染色液、生理盐水、蒸馏水、 香柏油、二甲苯。 4. 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、吸 水纸、接种环，显微镜等。
四、实验方法
（一）鞭毛染色 硝酸银染色法：
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，最好选用 新的。然后将玻片置洗衣粉过滤液中 （洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒）， 煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾 干，再放入浓洗液中浸泡5—6天，使用前取出 玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将 水沥干后，放入95%乙醇中脱水。
下周实验
四大类微生物菌落及个体形态观察
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！ 请第三组同学留下值日
注意事项
①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 ②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；否则鞭毛 易脱落，造成染色失败。 ③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干，不 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 影响观察。 ④A、 B染液染完后用蒸馏水（自来水效果差）冲洗时 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到，影响实验 效果。 ⑤加B染液后，将玻片稍加热（但不能太热，更不能沸 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
实验三、细菌鞭毛染色及其运动的观察
2016/1/7
12
2细菌运动性的观察201611051压滴法载玻片取菌液加盖玻片观察2悬滴法盖玻片取菌液加凹载玻片并翻转观察1压滴法载玻片取菌液加盖玻片观察2悬滴法盖玻片取菌液加凹载玻片并翻转观察2016110620161107特殊聚光器实现斜射照明给样品照明的光线不直接穿过物镜而经样品反射或折射后进入物镜使样品与背景差别大可以清楚看到透明微小颗粒
实 验
三
细菌鞭毛染色及其运动的观察
生科院微生物教研室
2016/1/7
一、目的
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察细菌 鞭毛的形态特征； 2、学习用压滴法和悬滴法观察活细菌的运
动性。
2016/1/7
2
二、基本原理
鞭毛具运动功能，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的
位置和数目是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤
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2016/1/7
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图 2 运动型细菌
特殊聚光器实现斜射照明，给样品照明的光线不直接穿过物镜， 而经样品反射或折射后进入物镜，使样品与背景差别大，可以清 楚看到透明微小颗粒。 用于：生活细菌运动性观察。 2016/1/7 7
细菌鞭毛的着生位置
2016/1/7
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2016/1/7
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三、实验材料
1、菌种 大肠杆菌、变形杆菌6～8h斜面 培养物；
2、染色剂 鞭毛染色液
3、仪器或其他用具 光学显微镜、酒精 灯 载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水等。
2016/1/7
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四、操作步骤
1、鞭毛染色 制片 染色液A 3～5min 充分水洗 染色液B 2min 水洗、自然干燥、镜检。 2、细菌运动性的观察 （1）压滴法 载玻片 取菌液 加盖玻片 观察 （2）悬滴法 盖玻片 取菌液 加凹载玻片并翻转 观察
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细菌运动观察（二）
关键词：硝酸银菌种乙醇凡士林试剂标准物质北京标准物质网
一、操作步骤
1．鞭毛染色
1)硝酸银染色法
(1)菌种的准备：要求用活跃生长期菌种进行鞭毛染色和运动性的观察。
对于冰箱保存的菌种，通常要连续移种1～2次后使用。
为节约时间，从可行性角度出发，可选用下列方法(之一)接种培养作染色用菌种：①取新配制的营养琼脂斜面(表面较湿润、基部有冷凝水)接种，28～32℃培养10～14h，取斜面和冷凝水交接处培养物作为染色观察材料；②取新制备的营养琼脂(含0．8％～1．0％的琼脂)平板，用接种环将新鲜菌种点种于平板中央。
28～32℃培养18～30h，让菌种扩散牛长，取菌落边缘的菌苔(不要取菌落中央的菌苔)作为染色观察的菌种材料。
注意：良好的培养物，是鞭毛染色成功的基本条件。
不宜用已形成孢芽或衰亡期培养物作为鞭毛染色的菌种材料，因为老龄细菌鞭毛容易脱落。
(2)载玻片的准备：将载玻片在含适量洗衣粉的水中煮沸约20min，取出用清水充分洗净，沥干水后置95％乙醇中，用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。
注意：玻片要求光滑、洁净，尤其忌用带油迹的玻片(将水滴在玻片上，无油迹玻片上的水能均匀散开)。
(3)菌液的制备：取斜而或平板菌种培养物数环于盛有1～2mL无菌水的试管中，制成轻度混浊的菌悬液用于制片。
也可用培养物直接制片，但效果往往不如先制备菌液。
挑菌时，尽可能不带出培养基。
(4)制片：取一滴菌液于载玻片的一端，然后将玻片倾斜，使菌液缓缓流向另一端，用吸水纸吸去玻片下端多余菌液，室温(或37℃温室)自然干燥。
载菌玻片千后，最好在0．5h内尽快染色，不宜长时间放置，以菌种免失活变性。
(5)染色：涂片干燥后，滴加硝酸银染色液甲液覆盖3～5min，用蒸馏水轻轻地充分洗去甲液。
用乙液冲去残水后，再加乙液覆盖涂片染色约数秒至1min，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。
若加乙液后显色较慢．可用微火加热(加热时不能出现干燥面)．直至显褐色时立即水洗，自然干燥。
注意：配制合格的染色剂(尤其是乙液)、充分洗去甲液后再加乙液、掌握好乙液的染色时间均是鞭毛染色成败的重要环节。
(6)镜检：染色载菌玻片干后用油镜观察。
观察时，可从玻片的一端逐渐移至另一端．有时只在涂片的指定部位观察到鞭毛。
菌体呈深褐色，鞭毛显褐色，通常呈波浪形：
2)改良的莱弗氏染色法
(1)载玻片和菌种材料的准备：与硝酸银染色法相同。
(2)制片：用记号笔在载玻片反面将玻片分成3～4个等分区，在每一小区的一端放一小滴菌液。
将玻片倾斜，让菌液流到小区的另一端，用滤纸吸去多余的菌液。
室温或37℃温室自然干燥。
(3)染色：加莱弗氏染色液覆盖第一区的涂面，隔数分钟后，加染液于第二区涂面，如此继续染第三、四区。
间隔时间自行议定，其目的是确定最佳染色时间。
在染色过程中，要仔细观察，当整个玻片都出现铁锈色沉淀、染料表面现出金色膜时，即直接用水轻轻冲洗(不要先倾去染料再冲洗，否则背景不清)。
染色时间大约10min，自然干燥。
(4)镜检：载菌玻片染色干后用油镜观察，方法与硝酸银染色法相同。
菌体和鞭毛均呈红色。
2．运动性的观察
玻片的准备、菌种材料的准备与鞭毛染色法相同。
1)压滴法
(1)制片：在洁净载玻片上加一滴无菌水，挑取一环菌液与水混合，再加一环0．01％的亚甲蓝水溶液与其混合均匀。
用镊子取一洁净盖玻片，使其一边与菌液边缘接触，然后将盖玻片慢慢放下盖在菌液上。
观察专性好氧菌时，可在放盖玻片时压人小气泡，以防止细菌因缺氧而停止运动。
(2)镜检：先用低倍镜找到标本，再用高倍镜观察。
也可用油镜观察，用油镜时，盖玻片厚度不能超过0．17mm。
观察时，要用略暗光线。
有鞭毛细菌可作直线、波浪式或翻滚运动，两个细菌之间出现明显的位移而与布朗运动或随水流动相区别。
2)悬滴法
(1)涂凡士林：取洁净凹载玻片(凹玻片)，在其凹槽四周涂少许凡士林[图2一13(a)]。
(2)加菌液：在盖玻片中央滴一小滴菌液。
为便于观察时寻找菌液位置，可用记号笔在菌液周围画上记号。
菌液不能加得太多，为了便于观察，也可用接种环挑取一环菌液于盖玻片中央[图2—13(b)]。
(3)盖凹玻片：将凹玻片的凹槽对准盖玻片中心的菌液，并轻轻盖在盖玻片上。
轻轻按压使盖玻片与凹玻片黏合在一起，把液滴封闭在凹槽小室中，翻转凹玻片，使菌液滴悬在盖玻片下并位于凹槽中央[图2—13(c)、(d)]。
若菌液加得过多，菌液就会流到凹玻片上而影响观察。
(4)镜检：先用低倍镜找到标本，并将液滴移至视野中央，然后用高倍镜观察。
若用油镜观察，盖玻片厚度不能超过0．17mn，，并要十分细心，以免压碎盖玻片、损坏镜头。
观察过程要在略暗光线下进行。
二、实验报告
1．实验结果
所观察的3种细菌是否都有鞭毛?是否都能运动?鞭毛与运动有无相关性?绘图表示有鞭毛细菌的形态特征和运动特征。
2．思考题
(1)用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛，要注意哪些环节?
(2)悬滴法为什么要涂凡士林?为什么加的菌液不能太多?如果发现显微镜视野内大量细菌向一个方向流动，可能是什么原因造成的?
出处：北京标准物质网。