细菌运动性的观察
实验十 细菌的运动
指老师：雒晓芳
一、实验目的
观察细菌鞭毛的形态特征。 学习用悬滴法观察细菌的运动性。
二、 实验原理
采用悬滴法在显微镜下观察活的细菌是否具有
运动能力，以初步判断细菌是否有鞭毛。观察
时，要适当减弱光强度以增加反差，若光线太 强，细菌和周围的液体难以区分。
三、材料仪器
1.仪器： 显微镜、凹玻片、载玻片、镊子、接种环、 滴管等 。
2.活材料： 培养24h的变形杆菌和未知球菌。 3.试剂： 凡士林、石蜡油。
四、实验方法
1.涂凡士林：取洁净的盖玻片，在其周围涂少 许的凡士林。 2.加菌液：在盖玻片中央滴一小滴菌液，并用 记号笔做记号。
3.盖凹玻片：将凹玻片的凹槽对准盖玻片中心的菌 液，并轻轻的盖在盖玻片上。轻轻按压使盖玻片于 凹玻片粘合在一起， 把液滴封闭在小室里。翻转凹 玻片，使菌液滴悬在盖玻片下并位于凹槽中央。
4.镜检：先用低倍镜找到标本，并将液滴移至视野中央， 然后用高倍镜观察。若用油镜观察，盖玻片厚度不 能超过0.17mm，并要十分细心，以免压碎盖玻片、 损坏镜头。
五、注意事项
1、载玻片与盖玻片要洁净无油； 2、滴加菌液不能过多，过多会影响细菌的正常运动； 3、若使用油镜观察，需加石蜡油！ 4、菌体是透明的，镜检时可缩小光圈或降低聚光器 以增大反差，区分细菌运动与布朗运动； 5、衰老的细菌鞭毛易脱落，宜选用幼龄菌体！
六、实验结果
1、绘出所看到的细菌的形态图，并用箭头表 示其运动方向。 2、悬滴法中，为什么要涂凡士林？为什么加 的菌液不能太多？如果发现显微镜视野内大量 细菌向一个方向流动，你认为是什么原因造成 的？
细菌的运动性判定
细菌的运动性判定
说一个大家可能有兴趣的话题，在微生物怎么去判断细菌是否有运动性，判断细菌的运动性又有什么作用
首先我们可以直接观察细菌的运动，拿一个载玻片，上面滴一滴菌悬液，盖上盖玻片，光学显微镜直接观察，区分开分子运动和细菌运动，细菌可以从一个地方游到其它地方，分子运动只是左右摆动，分子运动并不是可以“看见分子在运动”，而是分子在推动着微小的可见颗粒在左右摆动；在检测标准中，采用半固体动力试验，就是在半固体培养基中用接种针刺一下，没有鞭毛的细菌，不会走太远，只在穿刺的地方生长，有鞭毛的细菌，向四周扩散生长，培养基会显得混浊。
当我们去检测一株菌的时候，已经知道这株菌的很多特性，比如这株菌是否有鞭毛，如果有鞭毛存在，细菌就可以运动，还有很多，比如产酸，产气，革兰氏阳性还是阴性，对胆盐是否敏感，可以利用什么糖类等等，其实生化试验就是来判断这些方面，通过细菌特性来卡，判断这株菌是否存在。
实验六
(2)悬滴法 (a)在洁净凹载玻片周围涂少许凡士林。 (b)在盖玻片中央滴一小滴菌液，或用接种环取 1—2环菌液置于中央。 (c)将凹玻片反转，使凹窝中心对准盖玻片上的 菌液滴，液滴不得与凹玻片接触，以接种环柄轻压 使盖玻片与凹玻片粘在一起，液滴处于封闭的小室 中，防止液滴干燥和气流的影响。 (d)小心将凹玻片翻转过来，使菌滴仍悬浮在盖 玻片下和凹窝中心。 (e)先用低倍镜找到悬滴边缘，再用高倍镜观察。 观察时光线要调得暗一些。
五、实验报告
接物镜 接物镜倍 目镜测微尺 镜台测微尺 数 格数 格数 低倍镜 高倍镜 油 镜
接目镜放大倍数： 接目镜放大倍数：_______________
1．结果 (1)将目镜测微尺校正结果填人下表：
目镜测微尺每 格代表的长 度／pm
五、实验报告
宽 长 微生物 目镜测微 名称 尺每格 (2)将各菌测定结果填人 下表： 代表的 长度 /µm 目镜测 宽度／ 目镜测 长度 µm /µm 微尺 微尺 格数 格数 大肠杆 菌 酿酒酵 母 金葡球 菌 菌体大 小范 围 /µm
三、实验器材 菌种：大ห้องสมุดไป่ตู้杆菌。 仪器或其他用具 、凡士林、凹载玻片、 盖玻片、镊子、显微镜等。
四、操作步骤 (1)压滴法 (A)制片：在载玻片上加一滴生理盐水，挑取一环 菌液与水混合，加一环万分之一的美蓝水溶液混匀。 用镊子夹一洁净的盖玻片，使其一边先接触菌液， 然后将整个盖玻片慢慢放下，注意不要产生气泡。 (B)镜检：先以低倍镜找到标本，再用高倍镜观察， 观察时光线要调得暗些。 有鞭毛细菌可做直线、波浪式或翻滚运动，两个细 胞之间出现明显的位移，区别与布朗运动。
细菌的运动性观察
一、目的要求 学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性 二、实验原理
实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
问题与建议
对实验内容不明确 多进行基本技能的训练及实验指导 启发式教学（荚膜/芽孢染色为例） 鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
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暗视野显微镜或相差显微镜观察
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
➢了解细菌鞭毛染色的应用
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
单端鞭毛 端生丛毛
两端生鞭毛 精品课周件 生鞭毛
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
三、实验材料
1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加 热，用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
化3-4代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄
球菌（Staphyloccocus aureus）
2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡
染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH）
染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）
细菌的运动性观察
细菌的运动性观察（一）实验原理细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或水封片法（即压滴法）直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。
此法较快速、简便。
悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。
水封片法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。
大多数球菌不生鞭毛，杆菌中有的有鞭毛有的无鞭毛，弧菌和螺菌几乎都有鞭毛。
有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动力，衰老的细胞鞭毛易脱落，故观察时宜选用幼龄菌体。
1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。
2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。
3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。
4.盖凹玻片将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。
若制水封片，在载玻片上滴加一滴菌液，盖上盖玻片后即可置显微镜下观察。
5.镜检先用低倍镜找到标记，再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。
由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。
镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。
细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。
结果：有鞭毛的枯草杆菌和假单胞菌可看到活跃的运动，而无鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动。
文案编辑词条B 添加义项?文案，原指放书的桌子，后来指在桌子上写字的人。
2013实验四细菌鞭毛观察法及细菌运动性观察(2)
一、目的要求：
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察 细菌鞭毛的形态特征。 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的 运动性。
二、基本原理
鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭 毛 着生的位置和数目是细菌的一项重要的形态特征。细菌的鞭毛 直径通常为0.01-0.02微米，为超显微结构，不能用光学显微 镜直接观察，必须对鞭毛染色。
2、思考题：用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是 否具有鞭毛， 要注意那些环节？
3、其他：载玻片、盖玻片、无菌水、 显微镜、双层瓶、镜头纸、接种环等。
四、操作步骤
1、鞭毛染色：
1）制片：在新制载玻片上抹一薄薄的水层，在菌 苔边缘取菌，轻轻在水层中轻轻点几下；待其自然 干燥；
2）A液染色：3--5分钟； 3）缓流水洗：让水流平缓流下，浸洗多次，将残 留的A液洗尽； 4）B液染色：30--60秒、微热 5）缓流水洗，自然干燥； 6）镜检（油镜）：菌体深褐色，鞭毛淡褐色。
染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上， 使鞭毛直径加粗，然后再用硝酸银染色，因而可以在显微镜下 观察。
在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否 有鞭毛。常用压滴法和悬滴法。
三、实验材料及用品
1、菌种：苏云金芽孢杆菌（半固体培养基平 板）、白色葡萄球菌（斜面）
2、染色剂：A液（媒染剂）、 B液（硝酸银鞭毛染色液）。
2、运动性的观察 （1）、压滴法
a 、制片：滴无菌水，取菌，盖上盖玻片； b 、镜检（高倍）
（2）、悬滴法 a 、加菌液于盖玻片，盖于凹玻片上； b 、镜检（高倍）
五、实验报告
1、结果：你所观察的2种细菌是否都具有鞭毛？ 是否都能 运动？鞭毛----运动有无相关性？绘图 表示有鞭毛细菌的形态特征
水产微生物实验—细菌特殊构造的染色法及活细菌运动性的观察
实验六细菌特殊构造的染色法及活细菌运动性的观察一、基础知识荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。
由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。
所以通常用衬托染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。
由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。
实验中介绍3种荚膜染色法，其中湿墨水法较简便、并适用于各种有荚膜的细菌。
芽孢又叫内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。
由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，当用石炭酸复红、结晶紫等进行单染色时，菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽孢呈淡红或淡蓝紫色的圆或椭圆形的圈。
为了使芽孢着色便于观察，可用芽孢染色法。
芽孢染色法的基本原理是：用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进人菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。
鞭毛是细菌的运动“器官”细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。
细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0.01—0.021xm，所以，除了很少数能形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察。
要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
鞭毛染色方法很多，本实验介绍硝酸银染色法和改良的Leifson氏染色法，前一种方法更容易掌握，但染色剂配制后保存期较短。
细菌运动性的观察2
三、实验器材 1、菌种 培养24~36h的枯草芽孢杆菌菌悬液。 2、仪器或其他用具 载玻片、盖玻片、滴管、显微镜、 擦镜纸。
四、实验步骤 1、制片 用滴管取菌悬液一小滴，置于干净的载玻片中央， 以倾斜法加上盖玻片（勿使产生气泡） 2、镜检 将载玻片置显微镜下，用低倍镜、高倍镜观察细菌 运动的情况。
实验三 细菌运动性的观察
一、目的要求 1、学习水浸片的制作方法。 2、观察细菌的运动性。
二、基本原理 具鞭毛的细菌在液体中借助鞭毛的旋转，使菌体能定向 的泳动。幼龄菌运动活泼，老龄菌运动性差或失去鞭毛不能 运动。观察细菌的运动性可采用水浸片法。在显微镜下观察 时，应减弱光照强度，并注意区分是细菌的真运动，还是因 液体流动引起细菌随水流而动，或呈现无规则、原位颤动的动位移轨迹示意图
（1） 显微镜下观察细菌运动时，为何应减弱光线 （2） 细菌的运动与布朗运动有何区别
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实验四细菌运动性的观察
姓名：贾晓霖
学号：201000140032
班级：生科10.1
同组成员：李江湲程子修洪钧烨
一、实验目的
1、学习压滴法观察细菌运动性。
2、学习鞭毛染色法，观察鞭毛的形态特征。
二、实验原理
鞭毛是细菌的纤细丝状“运动”器官。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才能直接观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
鞭毛的着生方式多样，有一端单生，如铜绿假单胞菌；两端单生；一端丛生，如荧光假单胞菌；两端丛生，如蔓延螺菌以及周生，如大肠杆菌等。
三、实验器材
1、所需菌种
枯草芽孢杆菌（周生）
铜绿假单胞菌（端生）
2、溶液和试剂
0.01%美蓝染液，95%乙醇溶液，鞭毛染色液A，鞭毛染色液B。
3、仪器和其他用品
酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，烧杯，试管架，镊子等。
四、实验内容
a)压滴法（说明一下我做的是铜绿假单胞菌）
1、洗片将载玻片用水加去污粉洗净，自然晾干。
2、涂片在载玻片中央滴一小滴蒸馏水，点燃酒精灯，在火焰旁边从菌种斜面挑取少
量菌体与水滴充分混匀。
3、染色、镜检加0.01%美蓝染液染色，之后加盖玻片放于油镜下观察。
附：实验照片
b)鞭毛染色（说明一下我做的是铜绿假单胞菌）
1、洗片将载玻片用水加去污粉洗净，自然晾干。
2、浸泡将适量95%乙醇倒入烧杯，将洗净晾干的载玻片放入有乙醇的烧杯中，浸泡
5min。
3、干燥将载玻片用镊子夹出，点燃酒精灯，将载玻片在酒精灯上小心过火干燥。
4、涂片将一小滴蒸馏水滴在载玻片一端，点燃酒精灯，在火焰旁边从菌种斜面挑取
少量菌体与水滴充分混匀，将载玻片有水滴的一端微微竖起，使有菌种的水滴自然从载玻片一端流到另一端，在载玻片上形成一条菌带。
5、干燥自然干燥。
6、染色、镜检先滴加A液，覆盖5min，用水流在载玻片反面冲洗掉，之后加B液冲
洗覆盖1min，然后在缓水流下按同样方法冲洗掉。
加热干燥后，镜检。
附：实验图片
视野中央偏上方可见一带有鞭毛的细菌，可是手机像素太低，所以可能看不清^o^
五、思考题
1、除鞭毛染色法外，还有什么方法能观察到鞭毛？
答：可直接在电子显微镜下观察，电子显微镜放大倍数高，可以观察到鞭毛。
2、如果你发现鞭毛已与菌体脱离，请解释原因。
答：（1）可能是菌龄过大，自然脱落；
（2）操作时玻片受到较强烈的震荡；
（3）接种时接种环在玻片上反复涂抹时使之脱落；
（4）染色过久使之脱落。