细菌鞭毛染色及运动性观察
细菌运动性的观察
实验四细菌运动性的观察姓名：贾晓霖学号：201000140032班级：生科10.1同组成员：李江湲程子修洪钧烨一、实验目的1、学习压滴法观察细菌运动性。
2、学习鞭毛染色法，观察鞭毛的形态特征。
二、实验原理鞭毛是细菌的纤细丝状“运动”器官。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才能直接观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
鞭毛的着生方式多样，有一端单生，如铜绿假单胞菌；两端单生；一端丛生，如荧光假单胞菌；两端丛生，如蔓延螺菌以及周生，如大肠杆菌等。
三、实验器材1、所需菌种枯草芽孢杆菌（周生）铜绿假单胞菌（端生）2、溶液和试剂0.01%美蓝染液，95%乙醇溶液，鞭毛染色液A，鞭毛染色液B。
3、仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，烧杯，试管架，镊子等。
四、实验内容a)压滴法（说明一下我做的是铜绿假单胞菌）1、洗片将载玻片用水加去污粉洗净，自然晾干。
2、涂片在载玻片中央滴一小滴蒸馏水，点燃酒精灯，在火焰旁边从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀。
3、染色、镜检加0.01%美蓝染液染色，之后加盖玻片放于油镜下观察。
附：实验照片b)鞭毛染色（说明一下我做的是铜绿假单胞菌）1、洗片将载玻片用水加去污粉洗净，自然晾干。
2、浸泡将适量95%乙醇倒入烧杯，将洗净晾干的载玻片放入有乙醇的烧杯中，浸泡5min。
3、干燥将载玻片用镊子夹出，点燃酒精灯，将载玻片在酒精灯上小心过火干燥。
4、涂片将一小滴蒸馏水滴在载玻片一端，点燃酒精灯，在火焰旁边从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，将载玻片有水滴的一端微微竖起，使有菌种的水滴自然从载玻片一端流到另一端，在载玻片上形成一条菌带。
5、干燥自然干燥。
山大微生物报告 芽孢染色
实验四：鞭毛染色法及活菌运动性观察姓名:戈奕文学号：20100514022系别：2010生物基地组别：周一下午第一组试验日期：2012年10月15日同组成员：孟亚平宋宁褚鹏程一、实验目的及意义1、学习并掌握细菌鞭毛染色法（AgNO3）;2、学习压滴法观察细菌运动性。
二、实验原理1、压滴法观察活菌运动的基本原理：鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。
鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。
鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械—分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量ATP来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。
2、细菌鞭毛染色法的基本原理：简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的“运动器官”。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂（如单宁酸和明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。
鞭毛的实验报告
1. 学习并掌握鞭毛染色法。
2. 观察鞭毛的形态和分布。
3. 了解鞭毛在细菌运动中的作用。
二、实验原理鞭毛是细菌的一种特殊细胞器，由鞭毛蛋白组成，具有运动功能。
鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，通过染色剂将鞭毛染色，使其在显微镜下清晰可见。
本实验采用鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态和分布，并探讨其与细菌运动的关系。
三、实验材料1. 细菌培养物：大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌等。
2. 染色剂：鞭毛染色液（如革兰氏染液、卡红染液等）。
3. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯等。
四、实验步骤1. 取适量细菌培养物，用无菌生理盐水制成菌悬液。
2. 将菌悬液滴于载玻片上，用无菌镊子轻轻涂布均匀。
3. 待菌膜干燥后，用酒精灯轻微加热固定。
4. 将载玻片浸入鞭毛染色液中，染色时间为10-15分钟。
5. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染色液。
6. 将载玻片浸入盐酸酒精溶液中，脱色时间为1-2分钟。
7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的脱色液。
8. 将载玻片浸入复染液（如复红染液）中，复染时间为1-2分钟。
9. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的复染液。
10. 将载玻片用吸水纸吸干，盖上盖玻片。
11. 在显微镜下观察鞭毛的形态和分布。
1. 大肠杆菌：观察到细菌具有明显的鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体一端。
2. 枯草杆菌：观察到细菌具有鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体两端。
3. 葡萄球菌：观察到细菌无鞭毛。
六、实验分析1. 通过实验观察，大肠杆菌和枯草杆菌均具有鞭毛，且鞭毛形态和分布不同。
这表明鞭毛在细菌运动中具有重要作用。
2. 葡萄球菌无鞭毛，这可能是其运动能力较弱的原因之一。
3. 鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，能够清晰观察到鞭毛的形态和分布，为研究细菌的运动和分类提供重要依据。
七、实验总结本实验通过鞭毛染色法观察了细菌鞭毛的形态和分布，了解了鞭毛在细菌运动中的作用。
实验过程中，我们掌握了鞭毛染色法的操作步骤，提高了实验技能。
3鞭毛染色和蓝细菌
（一）细菌的鞭毛染色 （枯草芽胞杆菌 ） 1、于一洁净载玻片上等分三个区域（用专用载玻片）。 2、在载玻片一端滴１滴菌悬液，倾斜载玻片，使菌悬液缓慢从一端流至另一端。 3、空气中自然干燥。 4、加染色液于第一区，3分钟后再加染色液于第二区，依次类推。 5、载玻片平置，加蒸馏水充盈，然后用洗瓶小心洗去染料，自然干燥。 镜检（100X） （二）细菌的运动性观察 （枯草芽胞杆菌 ） 直接制备枯草芽胞杆菌水浸片加盖玻片观察， 10X，40X（注意镜检时适当 缩小光圈或降低聚光器） （三）蓝细菌形态观察 制备水浸片：于一洁净载玻片上滴加蒸馏水1滴，取红萍少许，加盖玻片压 片。镜检10X，40X（光线适当减弱，注意异形胞的形态）。 四、作业 ： 1、绘制鞭毛形态图 （100X）； 2、绘制蓝细菌（ 40x）形态图
鞭毛
Bt三 细菌的鞭毛染色、运动性观察和蓝细菌的形态观察
一、实验内容与菌种 1、细菌的鞭毛染色：枯草芽胞杆菌 （Bacillus subtilis） 2、细菌的运动性观察：枯草芽胞杆菌 （Bacillus subtilis ） 3、蓝细菌形态观察： 满江红鱼腥蓝细菌（Anabaena azollae） 二、实验原理 三、实验步骤 ：
实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
问题与建议
对实验内容不明确 多进行基本技能的训练及实验指导 启发式教学（荚膜/芽孢染色为例） 鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
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暗视野显微镜或相差显微镜观察
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
➢了解细菌鞭毛染色的应用
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
单端鞭毛 端生丛毛
两端生鞭毛 精品课周件 生鞭毛
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
三、实验材料
1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加 热，用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
化3-4代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄
球菌（Staphyloccocus aureus）
2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡
染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH）
染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）
细菌运动力观察实验报告
实验七细菌运动力观察[实验目的]1、了解检查细菌运动力的方法。
2、掌握悬滴法检测细菌的运动力。
[实验原理]鞭毛是细菌的一种特殊结构，是细菌运动器官。
细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定中的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法较复杂烦琐。
采用悬滴法或水封片法（压滴法）直接在光学显微镜下检查活菌是否具有运动能力来判断细菌是否具有鞭毛则快速、简便。
具有运动能力的细菌，可以独立运动，在显微镜下观察时，细菌的真正运动(自动运动)表现为能离开原来位置，不断改变方向的自由地游动。
水的分子运动(布朗运动)也能见于细菌个体，但只能使其在原地摆动，不能远离原来的位置移动。
这种情况，都是外力作用的结果，不是细菌本身的真正运动。
检查细菌的运动力，应用幼年培养物，最好刚从温箱中取出，并在温暖的环境下从速进行。
此外，这种方法也可用来检查微生物对各种化学物质的趋化性。
[实验材料]1、菌种2003Y1，2003Y2(为本实验室分离的菌种)的肉汤培养物2、仪器及其他物品显微镜、接种环、酒精灯、凹玻片、盖玻片、蒸馏水等[实验内容]1、悬滴检查法采用不染色活菌标本来检查其运动能力。
a.不染色标本片的制备取洁净盖玻片一张，用接种环各勾取蒸馏水1-2环于盖玻片四个角，灭菌接种环，再勾取2003Y1或2003Y2幼龄肉汤培养物1-2环于盖玻片中央；另取一干净凹玻片，凹面朝下对角扣于盖玻片上，再将玻片翻转，使菌液液滴向下，即可进行镜检。
若为固体培养物，则需在盖玻片中央先滴上一小滴生理盐水或透明肉汤，再用接种环取待检固体培养物少量(不要过多)，混匀于液滴内即可。
盖玻片四角的蒸馏水起到粘附（使凹玻片和盖玻片紧密吸附）、防止液滴干燥的目的。
b. 镜检因细菌无色透明，与背景无明显的色差，故在观察时视野要稍暗。
10倍镜对光后调整光线使视野变暗。
放上悬滴标本片，先用低倍镜找到液滴边缘（因表面张力的作用，液滴边缘有大量的菌体，便于观察），然后再转换高倍镜对焦观察，一般不必使用油镜观察，必须用时，注意防止压坏盖玻片。
细菌鞭毛染色及运动性鉴定
细菌鞭毛染色及运动性鉴定摘要：用稀释美蓝对菌体进行染色后在油镜下对菌体的运动性进行观察、鉴定和描述。
鞭毛是细菌的运动器官，用硝酸银染液A液B液对菌体的鞭毛进行染色，并在光学显微镜下对菌体鞭毛的形态特征和着生部位进行观察。
关键词硝酸银染色法压滴法微生物制片镜检前言鞭毛是细菌的运动器官，具有鞭毛的不同的细菌其鞭毛的粗细、长短、着生部位不同，是微生物的一项重要形态特征。
除了少数细菌的鞭毛能够较轻易的观察出来外，一般其他的细菌由于鞭毛微小且透明，一般不能在光学显微镜直接观察到。
故要用光学显微镜对细菌的鞭毛进行观察时，要对细菌的鞭毛进行染色处理使鞭毛直径加粗并与背景色形成对比。
通过硝酸银法对细菌鞭毛进行染色观察，能区分细菌的类型，对细菌的结构进行初步了解，在细菌的分类及鉴定上具有一定的重要意义。
材料与方法1.1 材料1.1.1标准菌株枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌1.1．2溶液和试剂蒸馏水 95%乙醇香柏油 0.01%美蓝硝酸银染液A液B液1.1.3仪器及其他用品载玻片盖玻片镊子光学显微镜胶头滴管酒精灯接种环1.2方法1.2.1压滴法观察细菌的运动性1）涂片1．将载玻片用自然水洗干净后，用纸吸除多余水分。
2．在载玻片滴取半滴蒸馏水到载玻片上。
3．在酒精灯形成的无菌区域内用接种环在铜绿假单胞菌的琼脂斜面上小心地（防止因动作过大而使鞭毛从菌体上脱落）挑取适量的菌苔。
4．将沾有菌苔的接种环置于载玻片中的滴有蒸馏水的区域进行涂抹，使菌悬浮在蒸馏水中。
2）染色在涂有菌体的部分滴加一滴稀释美蓝使其覆盖整个悬浮液。
3）盖盖玻片1．用镊子取出一片盖玻片并将盖玻片放在菌体悬浮液的左侧使盖玻片恰好与悬浮液相接触。
2．将盖玻片用镊子轻轻向左侧移动同时慢慢地盖上盖玻片（注意不要让空气进入片中）。
4）快速镜检在观察时应先用高倍镜观察，看不清楚时再用低倍镜观察。
在观察时应采用暗视野，并要以较快的速度对菌体进行观察以免菌体过早死亡。
主要介绍油镜的使用方法：1．将染色好的载玻片置于显微镜下的载物台上，将对准载物台油镜，调节粗调将载物台合适的高度。
细菌的运动性观察
细菌的运动性观察（一）实验原理细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或水封片法（即压滴法）直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。
此法较快速、简便。
悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。
水封片法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。
大多数球菌不生鞭毛，杆菌中有的有鞭毛有的无鞭毛，弧菌和螺菌几乎都有鞭毛。
有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动力，衰老的细胞鞭毛易脱落，故观察时宜选用幼龄菌体。
1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。
2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。
3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。
4.盖凹玻片将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。
若制水封片，在载玻片上滴加一滴菌液，盖上盖玻片后即可置显微镜下观察。
5.镜检先用低倍镜找到标记，再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。
由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。
镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。
细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。
结果：有鞭毛的枯草杆菌和假单胞菌可看到活跃的运动，而无鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动。
文案编辑词条B 添加义项?文案，原指放书的桌子，后来指在桌子上写字的人。
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细菌鞭毛染色及活菌运动性观察
【摘要】本实验以铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌为实验菌种，先使用压滴法制片，之后用光学显微镜的油镜观察细菌的活体运动。
然后，使用鞭毛染色法（用硝酸银染液A液和B液进行染色）对其染色，之后用光学显微镜的油镜观察细菌鞭毛的形态；虽然最后并没有在显微镜下观察到染色后的鞭毛，但在实验中已大致掌握相关实验操作。
【关键词】铜绿假单胞菌；枯草芽孢杆菌；鞭毛染色法；压滴法
【前言】鞭毛是生长在某些细菌体表的长丝状，波曲型的蛋白质附属物，具有运动功能。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~20nm，只有用电子显微镜才能观察到。
但可以使用鞭毛染色法，使之能用普通光学显微镜观察到。
因此在本实验中，要观察细菌鞭毛形态，就要使用鞭毛染色法。
本实验使用染液的是硝酸银染液A液和B液。
而观察细菌的运动性时要使用压滴法。
本实验选用的的菌种是具周生鞭毛的枯草芽孢杆菌和具端生鞭毛的的铜绿假单胞菌，均可使用两种方法进行观察。
本实验报告先介绍了本次实验的实验材料与方法，然后是对实验的结果与分析进行描述，最后是总结性的小结部分。
1.实验目的
1.1学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征
1.2巩固显微镜操作技术及无菌操作技术
1.3学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）
2实验原理
2．1细菌鞭毛染色法的基本原理
简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson 氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。
2.2菌种压滴法观察活菌运动的基本原理
鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。
鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。
鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械—分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量ATP来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。
3材料与方法
3.1 材料
3.1.1 菌种
枯草芽孢杆菌，铜绿假单胞菌。
3.1.2 溶液和试剂
硝酸银鞭毛染液（A、B液），蒸馏水，95%的乙醇。
3.1.3 仪器和其他用品
普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），接种环，试管架，镊子，吸水纸，滴管等。
3.2 步骤和方法
3.2.1 压滴法
3.2.1.1 制片
先在载玻片上滴一滴蒸馏水，无菌操作用接种环由枯草芽孢杆菌（或铜绿假单胞菌）14~18h牛肉膏蛋白胨固体培养基斜面上挑去适量菌落边缘菌体在水中轻轻蘸几下，注意保持其不受猛烈震荡。
再另取一洁净盖玻片让其一端紧靠液滴，再缓慢放下，避免产生气泡。
3.2.1.2镜检
使用光学显微镜中的油镜进行镜检，观察到两个或以上的细菌分别朝着相反或不同的方向运动时则说明细菌自身在运动。
3.2.2 鞭毛染色
洗片→95%乙醇浸泡5分钟→涂片→自然干燥→A液染色3~5min →水洗→B液冲覆盖30s~1min（稍加热）→水洗→自然干燥→镜检3.2.2.1洗片
先用去污粉洗净载玻片约8片（每人两片），再在培养皿中倒入适量的95%的乙醇溶液，将洗净的载玻片放入浸泡5分钟。
然后取出在酒精灯外焰灼烧，使其上的酒精挥发掉。
3.2.2.2 涂片
在载玻片上滴一滴蒸馏水，无菌操作用接种环由枯草芽孢杆菌（或铜绿假单胞菌）14~18h牛肉膏蛋白胨固体培养基斜面上挑去适量菌落边缘菌体在水中轻轻蘸一蘸，注意保持其不受猛烈震荡。
倾斜玻片，使菌悬液缓慢流向另一端，用吸水纸吸去多余菌悬液，自然干燥。
3.2.2.3染色
滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3~5min后用蒸馏水沿载玻片背面冲洗，充分洗去A液。
用硝酸银染液B液洗去残留水分后，再滴加B液覆盖菌面数秒至1min，其间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。
3.2.2.4镜检
使用光学显微镜中的油镜镜检：将做好的涂片放到显微镜下，由多到少观察两种菌，以方便找到鞭毛（注：枯草杆菌的菌体较大，为周生鞭毛，也可能会出现侧生鞭毛的现象，这是因为鞭毛断掉；铜绿假单胞菌菌体较小，为端生鞭毛）
4.结果与分析
4.1 实验结果
在使用压滴法进行观察时，我们观察到假单胞菌的运动。
在对本组四名同学制作的八个鞭毛染色的玻片进行观察时，均没有发现鞭毛结构。
实验绘图另附。
4．2 结果分析
4.2.1压滴法观察活菌运动
根据本组实验结果可知：某些细菌虽然微小，但是具有运动性。
4.2.2细菌鞭毛染色
根据本组实验结果知，枯草芽孢杆菌结构呈细长状，多为链型，铜绿假单胞菌为椭圆状，多单个分布。
通过观察其他组成功制得的鞭毛的玻片可知，枯草芽孢杆菌具周生鞭毛；铜绿假单胞菌具端生鞭毛。
鞭毛染色失败的可能原因主要有以下几点：
1.接种的菌种位于菌落中间，菌龄可能比较老，老龄的菌种的鞭毛极易
脱落，因此染色后很难看见有鞭毛。
2.在盖玻片上接种的时候，用力过猛，动作太重太大，菌种的鞭毛就被
刮落了。
5.小结
本次实验要求我们使用鞭毛染色法和压滴法对细菌的鞭毛形态和其运动性进行观察。
因此在实验中我们首次接触到了鞭毛染色法和压滴法，经过实验后对其大致操作已经基本了解。
但是在实验中还有很多需要注意的地方，
本实验中的注意事项：
（1）选用活跃生长期菌种进行鞭毛染色，老龄菌鞭毛易脱落。
（2）载玻片必须清洁、光滑、无油迹，否则菌液不能散开，造成菌体堆积，鞭毛相互纠缠而难以看清，而且染色后背景脏乱。
（3）制片过程中条件要温和，不能剧烈震荡、涂抹菌液，也不能采用加热法进行固定，否则鞭毛易脱落。
（4）硝酸银染液B液的使用方式和染色时间的掌握是本实验能否成功的关键环节。
若时间过短或方式不当，就很难在媒染剂上着色，那么，
我们也就没有办法在显微镜下观察到鞭毛了。
（5）本次实验的染色结果差强人意：菌体中鞭毛大都已脱落，而且染色后观察的菌体并不很清楚，有些太过密集，全都连成一片了。
实验中，
还有很多事需要注意，首先是载玻片上油迹比较多，多次进行清洁后
效果可能仍然不佳，这可能是观察不清楚的原因；其次，接种的菌种
位于菌落中间，菌龄可能比较老，老龄的菌种的鞭毛极易脱落，因此
染色后很难看见有鞭毛；最后，在盖玻片上接种的时候，用力过猛，
动作太重太大，菌种的鞭毛就被刮落了。
因此，在本实验中以上方面都需要改进。
6.参考文献
[1] 沈萍，陈向东《微生物学实验》（第4版）.北京. 高等教育出版社
2007
[1] 沈萍，陈向东《微生物学》（第2版）.北京.高等教育出版社，2006。