红薯叶黄酮类化合物的提取及其抗氧化活性的测定

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红薯叶黄酮类化合物的提取及其抗氧化活性的测定
作者:王小华, 邓斌, 张晓军, 龙石红, WANG Xiao-hua, DENG Bin, ZHANG Xiao-jun,LONG Shi-hong
作者单位:王小华,WANG Xiao-hua(湘南学院化学与生命科学系,湖南,郴州,423000), 邓斌,DENG
Bin(湘南学院化学与生命科学系,湖南,郴州,423000;中国科技大学,合肥微尺度物质科学国
家实验室,安徽,合肥,230026), 张晓军,ZHANG Xiao-jun(中国科技大学,合肥微尺度物质科
学国家实验室,安徽,合肥,230026), 龙石红,LONG Shi-hong(永州职业技术学院,湖南,永州
,425000)
刊名:
化学与生物工程
英文刊名:CHEMISTRY & BIOENGINEERING
年,卷(期):2009,26(2)
被引用次数:2次
1.邵红论红薯的营养价值与药用价值[期刊论文]-食品工业科技 2002(05)
2.胡立明.高荫榆.陈才水甘薯叶研究进展[期刊论文]-郑州工程学院学报 2002(01)
3.卢新建.吕美琴甘薯茎叶菜用及栽培技术 2000(04)
4.邹耀洪国产甘薯叶黄酮类成分研究[期刊论文]-分析测试学报 1996(01)
5.孙艳梅.徐雅琴.杨林天然物质类黄酮的抗氧化活性的研究[期刊论文]-中国油脂 2003(03)
6.夏维木.陈杞.张利民几种黄酮类化合物清除活性氧的实验研究[期刊论文]-第二军医大学学报 1997(04)
7.高愿军黄酮化合物结构鉴定技术 2002
8.石锦芹.黄绍华测定过氧化值 1999(05)
9.方素英.赵亚军.李琳食品抗氧化剂 1998
1.薛长晖.端允双波长法测定山丹叶中总黄酮含量[期刊论文]-粮油加工 2009(10)
2.冯雷.吴冬青.王永生.安红钢.王军霞.任雪峰黄芩总黄酮的提取及羟基自由基清除方法比较[期刊论文]-中兽医医药杂志 2010(5)
本文链接:/Periodical_hbhg200902009.aspx。

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比较法提取黄酮类化合物

比较法提取黄酮类化合物

碱液提取法热水提取法乙酸乙酯提取法甲醇提取法丙酮提取法乙醇提取法称取红薯叶20g用石油醚浸泡脱脂lh后,按固液比1:10(g:mL,下同)加碱液,调pH值为8~9,浸泡90min,滤出上清液,用稀盐酸调pH值为4~5,静置,过滤,滤液经聚酰胺柱吸附,然后用体积分数为70%的乙醇将黄酮类化合物解吸,过滤,干燥,粉碎,得产品,计算提取率,并用紫外可见分光法测定提取物中黄酮类化合物的含量。

称取红薯叶20g,用石油醚浸泡脱脂1 h后,过滤。

用蒸馏水洗净,按固液比l:10用蒸馏水在100℃下回流提取120min,提取完毕,提取液浓缩至20 mL左右,加入250mL体积分数为95%的乙醇,使蛋白质、多糖等沉淀,趁热过滤,滤液经聚酰胺柱吸附,然后用体积分数为70%的乙醇将黄酮类化合物解吸,过滤,将提取液置于硫酸纸上,在60℃烘箱中烘干,称重。

计算提取率,并用紫外可见分光法测定提取物中黄酮类化合物的含量。

用100%的乙酸乙酯代替蒸馏水,在80℃下回流提取90min,其余操作同热水提取法。

用无水甲醇代替蒸馏水,固液比为1:6,在80℃下回流提取120min,其余操作同热水提取法。

用体积分数为60%的丙酮代替蒸馏水,固液比为1:8,在60℃下回流提取180min,其余操作同热水提取法。

用体积分数为60%的乙醇代替蒸馏水,在70℃下回流提取90min,其余操作同热水提取法。

称取柚皮粉50g, 用石油醚浸泡脱脂1h,以固液质量比为1g:10mL加碱液调pH值为8~ 9, 浸泡90min, 过滤出上清液用稀盐酸调节pH值4~5, 静置再过滤, 然后上聚酰胺柱吸附后用体积分数70%乙醇将黄酮类化合物解吸、过滤、干燥、粉碎得产品, 计算提取率并测定提取物中黄酮的含量。

称取柚皮粉50g, 用石油醚浸泡脱脂1h, 过滤水洗净后, 以固液质量比为1g: 10mL、1g: 8mL分别用水加热到100℃, 60min提取2次, 合并提取液并浓缩至一定体积后,加入体积分数60%乙醇250mL使蛋白质、多糖等沉淀,趁热过滤, 上聚酰胺柱吸附, 然后用体积分数70%乙醇将黄酮类化合物解吸、过滤, 将提取液置于硫酸纸上, 在60℃烘箱中烘干, 把黄酮粉末称重, 计算产率并测定提取物中黄酮的含量。

甘薯叶片中多酚类物质的提取及抗氧化活性研究

甘薯叶片中多酚类物质的提取及抗氧化活性研究

犛狋狌犱狔狅狀狋犺犲犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀犪狀犱犪狀狋犻狅狓犻犱犪狀狋犪犮狋犻狏犻狋狔狅犳 狆狅犾狔狆犺犲狀狅犾狊犳狉狅犿狊狑犲犲狋狆狅狋犪狋狅犾犲犪狏犲狊
KongXiulin1,2,Zhang Wenting1,SunJian1,XuFei1,ZhuHong1,YueRuixue1,ZhangYi1,NiuFuxiang1
2.SchoolofLifeScience,JiangsuNormalUniversity,Xuzhou221116,Jiangsu,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:Theeffectsofdifferhanol,acetone,and狀butanol)ontheyieldof polyphenolsandflavonoidsinleavesofsweetpotatounderdifferentdryingconditionswerestudied,thedifferencesin DPPH(1,1diphenyl2trinitrophenylhydrazine)freeradicalscavengingcapacityandtotalantioxidantcapacityofdif ferentextractswereanalyzed,andthecorrelationanalysesbetweenthecontentofactivesubstancesandtheantioxi dantcapacitywerealsomade.Theresultsshowedthattheyieldsofpolyphenolsandflavonoidswereallthehighest in70% ethanolin both drying methods.Polyphenolcontentsinovendryingsamplesandsundryingsamples were (31.47±0.10)mg/gand (35.12±0.17)mg/grespectively,whiletheflavonoidcontentswere(15.59±0.40)mg/gand (14.36±0.40)mg/grespectively.TheDPPHfreeradicalscavengingabilityofmethanolextractswasthestrongest amongdifferentsolventextractsandthetotalantioxidantcapacitywasthestrongestwith70% ethanolextract.Cor relationanalysisshowedthatthecontentofpolyphenolsinleavesofsweetpotatowasextraordinary (犘 <0.01)and significant(犘<0.05)positivelycorrelatedwithDPPHclearanceandtotalantioxidantcapacity,respectively.There wasalsoasignificantpositivecorrelation (犘<0.05)betweenflavonoidsandtotalantioxidantcapacity,butthere wasnosignificantcorrelationwiththeDPPHclearancerate. 犓犲狔狑狅狉犱狊:sweetpotatoleave;differentsolvent;drying method;polyphenol;flavonoid;antioxidantactivity

红薯叶中黄酮类化合物的超临界提取研究_陈瑛

红薯叶中黄酮类化合物的超临界提取研究_陈瑛
超临界流体萃取的过程就是黄酮类化合物在 CO2 流体中达 到溶解平衡的过 程,当 超 临 界 流 体 与 黄 酮 类 化 合 物 达 到 溶 解 平 衡时,萃取率一般达到较大值。
称取甘薯叶粉 100 g,用 80% 乙醇为夹带剂,夹带剂用量为 60 mL,控制 CO2 流 量 15 L / h,设 定 萃 取 温 度 50 ℃ ,萃 取 压 力 30 MPa,改变循环萃取时间,实验果见图 6。
甘薯是我国四大 主 要 粮 食 作 物 之 一,我 国 甘 薯 的 总 产 量 和 种植面积均居 世 界 首 位[9]。长 期 以 来,人 们 利 用 的 只 是 甘 薯 的 块根,有关甘薯的 研 究 较 多,但 对 甘 薯 茎 叶 研 究 很 少。 因 此,甘 薯叶除部分地区作为饲料外,绝大部分被丢弃,造成了资源的极 大浪费。为了充分 利 用 甘 薯 叶 这 一 资 源,本 实 验 采 用 超 临 界 技 术从甘薯叶中提取黄酮类物质,对甘薯叶进行有效的开发利用, 提高甘薯叶的附 加 值,为 进 一 步 开 发 利 用 这 一 资 源 提 供 科 学 的 理论依据。
作者简介: 陈瑛( 1968 - ) ,男,讲师,研究方向: 天然活性成分提取研究与教学。 通讯作者: 王文渊,副教授。E - mail: wwy07@ 163. com
2011 年 39 卷第 6 期
广州化工
·83·
对芦丁浓度 Y 进行线性回归,得回,r = 0. 9998
3讨论
在对 CO2 流量的考察实验时发现,对于不同的压力,达到最 佳萃取效果的流速是有所不同的,压力越高,达到最佳萃取效果 的流速越低; 萃取压力越低,达到最佳萃取效果的流速越大。在 选定的实验条件下,15 L / min 的流速对黄酮的萃取效果较好,故 作为实验流量。

红薯叶中黄酮类化合物的超临界提取研究

红薯叶中黄酮类化合物的超临界提取研究
CO2fo r t 5 L w ae 1 /h,8 l 0% ac h la h nr ie n h a s a in o h n r i e of e 0% .Th a o od c n l o o st e e tan ra d t e na sr t ft e e ta n rt e d 5 o e f v n i o — l tn s6. 5% un rt e o t a o e s c n iin. e twa 2 de h p i lprc s o d t m o
CHEN y ,S UN n — l, WANG We — y an Xig i n u
( u a o g huV ct n l eh i l ol e H n nY n zo 2 0 6 C ia H n nY n —Z o oa oa T c nc l g , u a o gh u4 50 , hn ) i aC e
黄 酮 不仅 有 显 著 的降 血脂 、 糖 和 治 疗 脂 肪 肝 的效 用 , 能 有 效 血 还 地 提 高 机 体 内 组 织 抗 氧 化 能 力 , 止 组 织 脂 质 的 过 氧 化 损 防 伤 』 。在 医学 上 对 治 疗 冠 心 病 、 症 、 m栓 、 除 自 由基 以 癌 脑 消 及 抗衰 老 等 方 面 有显 著 效 果 ; 食 品 业 上 可 用 作 抗 氧 化 剂 、 在 I 色 素 和甜 味 剂 等 J 。 甘 薯 是 我 国 四 大 主 要 粮 食 作 物 之 一 , 国 甘 薯 的 总 产 量 和 我 种植 面积 均 居 世 界 首 位 J 。长 期 以 来 , 们 利 用 的 只 是 甘 薯 的 人
p o e sc n i o swee a o lw :e t cig p e s r 0 MP ,e t c ig tmp r t r 0 ℃ ,e t ci g t 0 mi r c s o d t n r sf l s x r t r s u e 3 a x r t e e au e 5 i o a n a n xr t i 1 n, a n me 5

红薯叶总黄酮的提取工艺优化及其抑菌、抗氧化活性研究

红薯叶总黄酮的提取工艺优化及其抑菌、抗氧化活性研究

红薯叶总黄酮的提取工艺优化及其抑菌、抗氧化活性研究文章编号:1006-1126-2018(3)-0311-05摘要:以红薯叶提取物中总黄酮含量(以芦丁标准品为对照)为评价标准,利用单因素试验,着重考察提取时间(A )、提取料液比(B )、乙醇浓度(C )对红薯叶黄酮提取效果的影响,选用L 9(34)正交试验设计,优化红薯叶总黄酮的提取工艺,得到最佳工艺条件:60%乙醇溶液,料液比为1∶40(m/V ),回流1.5h ,总黄酮提取率平均可达8.81%。

该工艺在实验室规模(200.0g )具有很好的稳定性,具有一定的工业开发潜力。

对红薯叶总黄酮提取物进行体外抗氧化作用(1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH ·)的清除)和体外抑菌(金黄葡糖球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、伤寒杆菌和黑曲霉菌)效果研究。

结果显示:红薯叶黄酮提取物对DPPH ·的清除效果显著,有明显的抗氧化效果。

红薯叶总黄酮提取物对金黄葡糖球菌和大肠杆菌具有较好的抑制作用,在高剂量条件下抑菌率最高,分别达到108.66%、115.89%,MIC 分别为5.02、10.05mg/mL ,具有较好的抑制活性,有很高的开发价值。

关键词:红薯叶;总黄酮;提取工艺;抗氧化活性;抑菌活性中图分类号:R284.2文献标识码:A收稿日期:2018-03-19基金项目:商洛学院科学与技术研究基金项目(17SKY005);2017年陕西省大学生创新创业训练计划项目(20172715)第一作者:延永(1988—),男,硕士研究生,研究方向:药物合成。

延永1,李玉萌2,张亦琳1,王溪2,简丽萍1(1.商洛学院生物医药与食品工程学院,陕西商洛726000;2.商洛学院健康管理学院,陕西商洛726000)Optimization of Extraction Technology of Flavonoids from Sweet Potato Leavesand Antimicrobial and Antioxidant ActivityYAN Yong 1,LI Yu-meng 2,ZHANG Yi-lin 1,WANG Xi 2,JIAN Li-ping 1(1.College of Biology Pharmacy and Food Engineering ,Shangluo University ,Shangluo ,Shaanxi 726000,China ;2.College of Health Management Address ,Shangluo University ,Shangluo ,Shaanxi 726000,China )Abstract:Using the content of flavonoids extracted from sweet potato leaves as the evaluation criterion (rutin standard was control group ),the effects of time (A ),extraction liquid ratio (B ),and ethanol concentration (C ))on flavonoid extracts were analyzed by single factor test.The extraction process was optimized by L 9(34)orthogonal design.The optimum condition was that the extraction liquid ratio was 1∶40(m/V )with 60%eth ⁃anol solution and refluxed for 1.5hours.The average extraction rate of total flavonoids reached to 8.81%.The process had good stability in laboratory scale (200.0g )and certain industrial development potential.In vitro antioxidant activity test (removal of 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl free radical (DPPH ·))and in vitro antibacterial activity test (Staphylococcus aureus ,Escherichia coli ,Klebsiella pneumoniae ,Salmonella typhi ,and Aspergillus niger )were carried out and results showed that the flavonoid extracts of sweet potato leaves had significant effect on removal of DPPH ·and antioxidation.Flavonoid extracts of sweet potato leaves had a good inhibitory effect on S.aureus and E.coli ,and the inhibitory rates was 108.66%and 115.89%un ⁃der the high dosages ,respectively ,and the minimum inhibitory concentration (MIC )was 5.02mg/mL and 10.05mg/mL ,respectively.Extracts of sweet potato leaves had a good inhibitory activity and a high develop ⁃ment value.Key words:sweet potato leaf ;total flavonoids ;extraction process ;antioxidant activity ;antibacterial activity第47卷第3期2018年9月广西林业科学Guangxi Forestry ScienceVol.47No.3Sep.2018广西林业科学第47卷因素水平123A提取时间/h1.52.02.5B料液比/(m/V)1:201:301:40C乙醇浓度(%)40%50%60%D空白123红薯叶即指秋天红薯成熟后地上秧茎顶端的嫩叶,又称地瓜叶,是常被忽视的红薯种植过程中的副产品。

红薯叶茎中黄酮的提取工艺研究

红薯叶茎中黄酮的提取工艺研究
传统的水提法指的是煎煮法,将红薯叶茎加水煮出汁。 另外还有通过浸泡的方法将汁提取出来,该方法至今仍然在 使用,且具有操作安全、成本低、耗时较短、提取率高。但 该种方法提取出来的物质中杂质较多、保质期短、不易保存、 不易过滤和进一步浓缩 [3]。通过实验研究能够发现水提法的 浸泡时间、料液比例、提取时间以及提取温度对黄酮类化合 物的提取率有直接的影响,无法被广泛应用在红薯叶茎的黄 酮类化合物提取生产当中。 2.2 有机溶液提取法
[1] 赵丽杰 , 高星 , 吴丽 Nhomakorabea . 粮食及其制品中真菌毒素限量 标准及检测方法概述 [J]. 现代面粉工业 ,2019,33(3):26-28.
[2] 蓝熊静 . 粮食中真菌毒素快速检测技术的发展及应用 验证评价 [J]. 粮油与饲料科技 ,2020(5):18-21.
[3] 许嘉 , 林楠 , 王志 , 等 . 北京市市售谷物及制品中真菌 毒素污染状况的调查 [J]. 中国食物与营养 ,2019,25(3):29-31.
[5] 徐文秀 , 杨云 . 柿叶中黄酮类物质的提取工艺研究 [J]. 运城学院学报 ,2021,30(2):54-57.
(上接第 152 页) 在线实时检测。然而,这项技术在现阶段粮油食品领域中发 展并不理想,检测技术也非常的单一,虽然在检测一种真菌 毒素时较为快速,但不能完成多种真菌毒素的快速检测,有 待进一步的完善和发展。 2.4 实时荧光定量分析技术
食品科技
红薯叶茎中黄酮的提取工艺研究
徐洪宇
( 吉林化工学院生物与食品工程学院,吉林吉林 132022)
摘 要:黄酮类化合物是植物中的一种活性物质,具有一定的保健功能。研究学者从红薯中提取到的活性物质能够有 效抑制乳腺癌和结肠癌的发生,国产红薯的梗、叶、茎中对医疗功能成分的活性物质提取检测研究则相对较少。本文对红 薯叶茎中黄酮化合物的提取工艺进行了研究,总结了提取方法包含水提法、有机溶剂提取法、碱提法、酶解法、超临界萃 取法等,并对辅助提取法进行了深入研究,希望能够为红薯叶茎黄酮化合物的提取、研究、开发及应用提供有效参考。

红薯梗、茎、叶提取物抗氧化活性研究

基金项 目:浙江教育厅科研基金资助项 目(20050317) 作 者简介 :田迪英 (1970一),女 ,本科 ,高级实验 师 ,主要从事食 品工 程和食品分析工作 。
中鲜见报道 。为此本 实验将从 红薯梗 、茎 、叶中提取抗氧化 活 性物质 对其进行 测定 ,并进行 相关性 研究 ,一 方面 ,极有 可能从 这些 原 料 的食用 或 非食 用部 分 分离 得 到新 的天然 抗 氧化性 物质 ,从而 促进农 副产 品 的开发利 用 ;另一 方面 , 了解其抗 氧化 的程度 ,将有 助 于人们合 理利用 食 品营养 、 并 有 利于 研制 能够 预 防癌 症及 心 血管 等方 面疾 病 的功 能 性 食品 。 1 材料与方法 1.1材 料
随着 我 国人 口向老龄 化发展 ,心 血管疾病 等成人病 的 防治 和抗 衰老 的研 究 已不 仅是 医学 家 和生 物学 家 所涉 及 的课题 ,也成 为食 品学 家乃至 全社会 所关 心 的问题 。近年 的研究 表 明 :抗 氧化 活性 物质 对 于预 防心 血 管疾 病 、癌 症 以及抗衰 老等有很重要 的生理功 能…。为此 ,研究天然 植物 中的抗氧化 活性 已成 为食品科学 工作者 的热 门课 题 。
STUDIES 0N THE ANT10XIDANT ACTIVAT10N 0F EXTRACT10N FR0M SW EET P0TAT0 sTALK STEM AND LEA F TIAN D i—ying
(CoHege of Food Science,Biotechnology&Environmental Engineering,Zhejiang Gongshang University, Hangzhou 3 10035,Zhejiang,China)

甘薯叶中黄酮类化合物的提取工艺研究

甘薯叶中黄酮类化合物的提取工艺研究
1 甘薯叶的性质
甘薯叶,是一种植物特有的叶片,含有丰富的黄酮类化合物。

它们主要含有类胡萝卜素、黄酮、多糖等成分,还有丰富的维生素,微量元素及脂肪、木质素等物质。

它具有抗氧化、抗菌、抗病毒、降血糖及抗疲劳等活性,是一种支撑人类健康的物质。

2 黄酮类化合物的提取工艺
黄酮是一种非常重要的天然活性成分,在医药、食品等行业中都有广泛应用。

由于其生物活性和抗氧化作用,在医学和保健领域具有很高的价值。

因此,提取甘薯叶中黄酮类化合物非常重要。

目前,提取甘薯叶中黄酮类化合物的研究工艺主要有超临界流体提取法、水萃取法、熬制萃取法、抽提法等,其中采用超临界流体提取法比较适用于提取活性较强的黄酮类化合物。

在此基础上,为了获得更高的黄酮类化合物提取率,可以对超临界流体提取的条件加以优化,例如温度、压力、添加剂等。

此外,也可以采用其他提取工艺来优化黄酮类化合物的提取。

3 结论
提取甘薯叶中黄酮类化合物的工艺研究具有重要意义。

现代科学技术及技术工艺应用可以提高提取甘薯叶中黄酮类化合物的效率,使得对黄酮类化合物的研究及应用有更好的发展以支持健康。

红薯茎叶中黄酮类化合物的提取工艺

Ab s t r a c t I n t h e e x p e r i me n t , e x t r a c i t o n o f t o t a l l f a v o n o i d s i n t h e s t e m a n d l e a f o f s w e e t p o t a t o wa s s t u d i e d . O n t h e b a s i s
中 图分类 号 : 2 1 5
文献标 识码 : A
文 章 编 号: 1 6 7 3 — 6 0 0 4 ( 2 0 1 3 ) 0 3 — 0 0 2 1 — 0 3
D O I I 1 0 . 3 9 6 9 6 . i s s n . 1 6 7 3 — 6 0 4 4 . 2 0 1 3 . 0 3 . 0 0 8
1 材料与方法
红薯茎 叶 ,品种豫薯 1 0号 。新鲜 红薯 茎叶 :
在红薯块根收获前一天 ,采下新鲜 的红薯茎叶 , 放 人烘箱 ,先在 1 0 0℃杀青 3 0 m i n ,然后在 6 0℃条
作用广泛 ,对多种炎症 、冠心病 、心绞痛等均有 良 好疗效 。黄酮类化合物还是一种 良好 的活性 自由基 1 . 1 试 验材料
红薯又名甘薯 、番薯 ,在中国南北方均大量种 植 ,资源广泛 。一直以来对红薯 的利用 以块根 为
阔的医药开发应用前景 。黄酮类化合物能清除氧 自 由基 ,且无毒 副作用 ,是一种天然 的食品添加剂 。
主 ,藤 叶一般做饲料或者废弃 ,造成很大 的浪费 。 为了充分利用红薯资源 ,通过试验筛选从红薯茎 叶 据报道 , 甘薯茎叶中含有多种营养成分和生物活性 中提取黄酮类化合物的优化条件 ,从而为开发红薯 物质 ,如胡萝 卜 素 、维生素 、矿质元素 、蛋 白质 、 茎叶中黄酮的提取工艺提供依据 。 粗纤维 、氨基酸 、氯原酸 、多糖 、黄酮类 成分等。 甘薯茎叶中的生物活性物质黄酮类 化合物 ,其生理

红薯叶黄酮类化合物提取及其抗氧化作用研究


同时采用烘箱贮存法测定红薯叶黄酮类化合物在猪油中抗氧化活性 , 实验结果表明, 红薯叶黄酮类 化合物具有明显抗氧化效果 , 且抗氧化活性随加入量增加而增强 , 其抗氧化效果强于抗坏血酸和柠
檬酸。
关键 词 : 红薯 叶 ; 酮类化 合物 ; 黄 抗氧化 性
S u V 0 x r c i n 0 a 0 0 d l m we tD t t t d n e t a t0 fn v n i s r f0 s e 0 a 0
la e nd isa i x da te f c e v sa t nt0 i n fl t e
W ANG a 一 u DE Xi0 h a 。 NG n. Z Bi , HANG a _u L 一 Xio j n , oNG h— o g S ih n
( . a g a ie s y, e z 0 2 0 0, ia; . ie s yo ce c n e h o0 y0 ia, 1 Xin n nUnv ri Ch n h u4 3 O Chn 2 Unv ri f in ea dT c n 1g f t t S Chn
a d cti a i . n i c c d r
Ke 0 ds we t O a O la e ; V nO d; n i x d n c i t yW r :s e t t e V s na O i a tO i a t t y p a vi
中图分类号 : S2 2 T O . 3
H fi3 0 6 C ia3 Y n z0 oai a T c n lg Ii t, n z0 2 o 0 C ia ee2 O 2 , hn ;. o g h uV ct n l eh o0 y Itue Yo gh u4 5 o , hn ) o Is t
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