芦丁和槲皮素的化学检识(课堂PPT)
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芦丁和槲皮素的化学检识课件
芦丁在农业中的应用
芦丁具有杀虫、杀菌和除草等作用，可以作为生物农药用于农业生产 。
芦丁在化妆品工业中的应用
芦丁具有保湿、抗氧化和美白等作用，可以作为化妆品原料用于生产 护肤品和彩妆产品。
槲皮素的应用
槲皮素在医学领域的应用
槲皮素具有抗炎、抗氧化和抗 肿瘤等药理作用，常用于治疗 慢性阻塞性肺疾病、糖尿病和 癌症等。
芦丁的来源
芦丁主要存在于植物中，特别是 荞麦、槐花、艾蒿等植物的花和 叶中，是一种天然产物。
芦丁的生物活性
芦丁具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤 、抗血小板聚集等生物活性，对 人体有多种保健作用。
槲皮素的简介
槲皮素的化学结构
槲皮素是一种黄酮类化合物，具有多 个酚羟基，其化学结构包括两个苯环 和一个吡喃环，通常以糖苷的形式存 在。
荧光光谱法
槲皮素在荧光光谱下有特征发射峰， 通过测定其荧光光谱可进行鉴别。
05
芦丁和槲皮素的应用
芦丁的应用
芦丁在医学领域的应用
芦丁是一种黄酮类化合物，具有抗炎、抗氧化和抗过敏等药理作用， 常用于治疗高血压、糖尿病和心脑血管疾病等。
芦丁在食品工业中的应用
芦丁具有天然的抗氧化性能，可以作为食品添加剂用于延长食品的保 质期，同时还可以用于生产保健食品和功能性饮料。
槲皮素的来源
槲皮素的生物活性
槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、 抗病毒等生物活性，对人体有多种保 健作用。
槲皮素广泛存在于植物中，特别是苹 果、洋葱、茶叶等植物中，是一种天 然产物。
02
芦丁和槲皮素的化学性质
芦丁的化学性质
01
02
03
04
芦丁的分子结构
芦丁是由黄酮类化合物构 成的，具有多个酚羟基和 糖苷基团，分子式为 C27H30O16。
芦丁具有杀虫、杀菌和除草等作用，可以作为生物农药用于农业生产 。
芦丁在化妆品工业中的应用
芦丁具有保湿、抗氧化和美白等作用，可以作为化妆品原料用于生产 护肤品和彩妆产品。
槲皮素的应用
槲皮素在医学领域的应用
槲皮素具有抗炎、抗氧化和抗 肿瘤等药理作用，常用于治疗 慢性阻塞性肺疾病、糖尿病和 癌症等。
芦丁的来源
芦丁主要存在于植物中，特别是 荞麦、槐花、艾蒿等植物的花和 叶中，是一种天然产物。
芦丁的生物活性
芦丁具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤 、抗血小板聚集等生物活性，对 人体有多种保健作用。
槲皮素的简介
槲皮素的化学结构
槲皮素是一种黄酮类化合物，具有多 个酚羟基，其化学结构包括两个苯环 和一个吡喃环，通常以糖苷的形式存 在。
荧光光谱法
槲皮素在荧光光谱下有特征发射峰， 通过测定其荧光光谱可进行鉴别。
05
芦丁和槲皮素的应用
芦丁的应用
芦丁在医学领域的应用
芦丁是一种黄酮类化合物，具有抗炎、抗氧化和抗过敏等药理作用， 常用于治疗高血压、糖尿病和心脑血管疾病等。
芦丁在食品工业中的应用
芦丁具有天然的抗氧化性能，可以作为食品添加剂用于延长食品的保 质期，同时还可以用于生产保健食品和功能性饮料。
槲皮素的来源
槲皮素的生物活性
槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、 抗病毒等生物活性，对人体有多种保 健作用。
槲皮素广泛存在于植物中，特别是苹 果、洋葱、茶叶等植物中，是一种天 然产物。
02
芦丁和槲皮素的化学性质
芦丁的化学性质
01
02
03
04
芦丁的分子结构
芦丁是由黄酮类化合物构 成的，具有多个酚羟基和 糖苷基团，分子式为 C27H30O16。
最新槲皮素的提取ppt课件
1．物业管理早期介入
早期介入是指物业服务企业在房地产开发的立 项决策阶段，即项目可行性研究阶段的介入。 房地产开发企业在进行市场调研和项目可行性 研究评估时，聘请专业经验丰富的物业管理公 司做顾问，参与规划设计，使设计在符合国家 规范的前提下，尽可能地照顾到使用者的要求 以及日后管理的需要。此时，物业管理公司的 专业眼光及经验能有效弥补房屋设计方面的不 足，使设计趋于合理完善。
四、实验方案设计
【实验原理】：利用芦丁中含有较多的酚羟基，可溶于 碱中，加酸酸化后又可析出芦丁结晶的性质，采用碱溶 酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的 特性进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素。
【实验材料】：槐米、石灰乳、硼砂、4％的硫酸溶液、 95％乙醇、浓盐酸、氯仿，甲醇，甲酸，1％的三氯化铝 乙醇溶液、1%芦丁乙醇溶液、1％槲皮素乙醇溶液、广 泛pH试纸
五、实验药材与产物的鉴定
【槲皮素的理化鉴定】
槲皮素为黄绿色结晶，熔点为315~317℃，紫外灯下显蓝色荧光， 加三氧化铝乙醇溶液萤光变黄绿色，盐酸镁粉反应显红色。
【薄层鉴定】
用薄层色谱将槲皮素标准品和制得的槲皮素分别点样比较，吸附剂 为硅胶G，105℃下活化2h，展开剂为氯仿：甲醇：甲酸（15：5：1） 溶液，显色剂为三氯化铝试剂（显黄色斑点）。
(1)分析原设计图纸，提出有关物业结 构布局和功能方面的改进建议。
(2)提供设备设施的设置和服务方面的 改进意见。
3．物业管理晚期介入 晚期介入是指物业服务企业在项目施工阶段的
介入。 此时，物业服务企业主要是派员到施工现场，
三、提取方法初步探究
芦丁的提取方法比较与选择
三、提取方法初步探究
芦丁的水解方法
在析出的芦丁中加入4倍量4%的硫酸溶液加热微沸回流90min之后加 入适量的水稀释，静置，过滤。用水洗滤渣至无酸性，至80℃干燥， 得槲皮素粗品。
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L ．）的未开放花蕾。
味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
槐米常炒炭应用。
槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
芦丁具有Vitp 样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。
临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。
[目的要求]1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2．掌握槲皮素的制备原理及操作。
3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
[实验原理]芦丁（rutin ）：C 27H 30O 16·3H 2O ，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。
难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin ）：C 15H 10O 7·2H 2O ，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
[实验内容]一、芦丁的提取分离及精制方法⑴槐米粗粉（50g）置1000ml烧杯中，加入500ml饱和石灰水，加热，并维持pH8～9煮沸20分钟，趁热用脱脂棉滤过滤液药渣用300ml饱和石灰水煮沸10分钟，维持pH8～9趁热滤过滤液药渣（×）合并70℃下用浓HCl调pH至4 ～5沉淀低温（80℃）干燥，称重。
天然药物化学实验PPT课件
即可在0-45度之间任意倾斜。
4） 接通冷凝水，接通电源220V/50Hz，与主机连接上蒸 发瓶（不要放手），打开真空泵使之达一定真空度松开 手。
5） 调正主机高度：按压下位于加热槽底部的压杆，左 右调节弧度使之达到合适位置后手离压杆即可达到所需 高度。
6） 打开调速开关，绿灯亮，调节其左侧旁的转速旋钮，蒸 发瓶开始转动。打开调温开关，绿灯亮，调节其左侧旁的 调温旋钮，加热槽开始自动温控加热，仪器进入试运行。 温度与真空度一到所要求的范围，即能蒸发溶剂到接受瓶。
药材作成对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005年 版一部附录ⅥB)试验，供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。
三、实验仪器与实验材料
1、实验仪器
索氏提取器 旋转蒸发器 烧杯 漏斗 展开缸 显色 瓶超声波提取器 玻璃棒 试剂瓶 电子天平 锥形瓶 研钵
玻璃板 布氏漏斗 真空泵 抽滤瓶
槐花米粗粉（20g）
置500ml烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石 灰乳（1~1.5g），调至PH8~9，加热至微沸， 保持30min，趁热抽滤。
残渣
滤液
在60~70℃下用浓盐酸调至 PH4~5，精置1hr,抽滤。
滤液
沉淀（粗制芦丁）
重结晶 将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热 煮沸15min，趁热过滤
3. 崔福德主编《药剂学》（第六版），人民卫生出版社， 2007年
实验三 芦丁粗提物的显色反应和PC鉴别
一、实验目的
① 学习黄酮类化合物理化性质和常用的显色方法。 ② 学习用纸色谱法分离和鉴定黄酮类化合物的混合液。
二、实验原理
8 7
1
O27
6 5
3'
2'
4） 接通冷凝水，接通电源220V/50Hz，与主机连接上蒸 发瓶（不要放手），打开真空泵使之达一定真空度松开 手。
5） 调正主机高度：按压下位于加热槽底部的压杆，左 右调节弧度使之达到合适位置后手离压杆即可达到所需 高度。
6） 打开调速开关，绿灯亮，调节其左侧旁的转速旋钮，蒸 发瓶开始转动。打开调温开关，绿灯亮，调节其左侧旁的 调温旋钮，加热槽开始自动温控加热，仪器进入试运行。 温度与真空度一到所要求的范围，即能蒸发溶剂到接受瓶。
药材作成对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005年 版一部附录ⅥB)试验，供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。
三、实验仪器与实验材料
1、实验仪器
索氏提取器 旋转蒸发器 烧杯 漏斗 展开缸 显色 瓶超声波提取器 玻璃棒 试剂瓶 电子天平 锥形瓶 研钵
玻璃板 布氏漏斗 真空泵 抽滤瓶
槐花米粗粉（20g）
置500ml烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石 灰乳（1~1.5g），调至PH8~9，加热至微沸， 保持30min，趁热抽滤。
残渣
滤液
在60~70℃下用浓盐酸调至 PH4~5，精置1hr,抽滤。
滤液
沉淀（粗制芦丁）
重结晶 将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热 煮沸15min，趁热过滤
3. 崔福德主编《药剂学》（第六版），人民卫生出版社， 2007年
实验三 芦丁粗提物的显色反应和PC鉴别
一、实验目的
① 学习黄酮类化合物理化性质和常用的显色方法。 ② 学习用纸色谱法分离和鉴定黄酮类化合物的混合液。
二、实验原理
8 7
1
O27
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3'
2'
实验教学课件-芦丁
④α -萘酚、浓H2SO4反应 取样品的乙醇溶液1ml加α -萘酚试液1~ 2滴后振 摇，然后沿管壁加适量浓H2SO4，观察两界面处的颜色。 （2）AlCl3纸斑反应 取样品的乙醇溶液，在滤纸上各滴一个点，干 燥后置紫外灯下观察荧光。然后在原斑点上喷AlCl3，干 燥后重新置紫外光灯下观察荧光。
5、糖的检识（径向纸色谱） 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5）上层 显色剂：邻苯二甲酸-苯胺试剂（95℃烘干） 样 品：水解浓缩液 对照品：葡萄糖、鼠李糖的水溶液 展开方式：径向 结 果：对照样品斑点及对照品斑点位置并计 算Rf值。
水煎煮提取槐米中芦丁的优点？
自行设计另外一种从槐米中提取分离黄酮 的工艺流程。
Байду номын сангаас 米
槐米为豆科植物槐Sophora japonica 的花蕾，主要含有 芦丁、槲皮素； 槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至13.0%
芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，并用作高血 压辅助治疗剂。
OH
溶解度：冷水1:10000， 沸 水 1:200 ， 沸 乙 醇 1:60 ， 沸 甲 醇 1:7 ； 具酚羟基，显弱酸性， 易溶于碱液中，酸化 后又可析出。
1、提取
槐米（20g）
加水煎煮两次（400ml，30min；200 ml， 20min），趁热过滤合并煎煮液
工 艺 流 程
药渣
煎煮液 放置4~5h，抽滤
沉淀
自然干燥 粗品芦丁
2、精制
工 艺 流 程
粗品芦丁
加甲醇15~20ml，水浴加热（空气冷凝） 溶解， 至无黄色物，趁热过滤。
沉淀
滤液
放置，待结晶析出，抽滤至干。
HO
O OH
中药化学实验——芦丁的提取与鉴定PPT课件
3、槲皮素的水解：芦丁为黄酮苷类，在酸中可 发生水解，生成槲皮素和糖。
HO
O
OH OH
【实验原理】
OR OH O
2021/3/9 授课：XXX
3
共分四次完成 1、芦丁的提取 2、芦丁的精制 3、芦丁的水解、槲皮素精制 4、芦丁、槲皮素、糖检液的鉴定
1
2
【实验安排】
3
4
2021/3/9 授课：XXX
实验二、 芦丁的提取与鉴定
2021/3/9 授课：XXX
1
HO
O
OH OH
OR OH O
槲皮素 R=H 芦丁 R=芸香糖
2021/3/9 授课：XXX
2
1、芦丁的提取：芦丁分子中含多个酚羟基，显 酸性，易溶于碱液中，可用碱溶酸沉法提取。
2、芦丁的精制：芦丁在冷水中的溶解度为1:10， 000，在热水中的溶解度为1:200，因此，可用水 进行重结晶。
4
提取
过滤
调PH
芦丁的提取
HO
O
OH OH
OR OH O
2021/3/9 授课：XXX
5
抽滤
重结晶
干燥
HO
O
OH OH
OR OH O
芦丁的精制
2021/3/9 授课：XXX
6
水解
精制
芦丁的水解、槲皮素精制
2021应
聚酰胺层析
芦丁、槲皮素、糖检液的鉴定
2021/3/9 授课：XXX
8
1、碱提取时，保持PH8～9；酸沉时，PH＝3～ 4。
2、水提液含杂质较多，抽滤前需先小心倾出上 清液，否则很难抽滤。
3、芦丁重结晶时，要趁热抽滤，分次操作。
4、层析时，点样量不可过大，否则易拖尾。画 下层析结果图，并计算Rf值。
HO
O
OH OH
【实验原理】
OR OH O
2021/3/9 授课：XXX
3
共分四次完成 1、芦丁的提取 2、芦丁的精制 3、芦丁的水解、槲皮素精制 4、芦丁、槲皮素、糖检液的鉴定
1
2
【实验安排】
3
4
2021/3/9 授课：XXX
实验二、 芦丁的提取与鉴定
2021/3/9 授课：XXX
1
HO
O
OH OH
OR OH O
槲皮素 R=H 芦丁 R=芸香糖
2021/3/9 授课：XXX
2
1、芦丁的提取：芦丁分子中含多个酚羟基，显 酸性，易溶于碱液中，可用碱溶酸沉法提取。
2、芦丁的精制：芦丁在冷水中的溶解度为1:10， 000，在热水中的溶解度为1:200，因此，可用水 进行重结晶。
4
提取
过滤
调PH
芦丁的提取
HO
O
OH OH
OR OH O
2021/3/9 授课：XXX
5
抽滤
重结晶
干燥
HO
O
OH OH
OR OH O
芦丁的精制
2021/3/9 授课：XXX
6
水解
精制
芦丁的水解、槲皮素精制
2021应
聚酰胺层析
芦丁、槲皮素、糖检液的鉴定
2021/3/9 授课：XXX
8
1、碱提取时，保持PH8～9；酸沉时，PH＝3～ 4。
2、水提液含杂质较多，抽滤前需先小心倾出上 清液，否则很难抽滤。
3、芦丁重结晶时，要趁热抽滤，分次操作。
4、层析时，点样量不可过大，否则易拖尾。画 下层析结果图，并计算Rf值。
《芦丁提取实验》PPT课件
《芦丁提取实验》PPT课 件
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一、实验目的要求
1.通过芦丁的提取与精制掌握碱提-酸沉法提取 黄酮类化合物的原理及操作。
〔2〕pH值过低可使芦丁形成佯盐而降低收率。
〔3〕利用芦丁在冷热水中溶解度的差异来到达结晶 目的。得到的沉淀要粗称一下，按照芦丁在热水中1： 200的溶解度加蒸馏水进展重结晶。
2.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷〔芦 丁〕、苷元〔槲皮素〕和糖局部〔芸香糖〕的 鉴定方法。
二、芦丁的构造与性质及其 提取原理
OH OH
O HO
O rutinose OH O
芦丁存在于多种植物中，以槐米中为最高。由于其 具有维生素P样作用，有助于保持及恢复毛细血管 正常弹性，主要用作防治高血压的辅助治疗剂。
芦丁的物理性质：
浅黄色细小结晶，熔点177-178℃。芦丁易溶 于热水，难溶于冷水，溶于甲醇、乙醇，难溶 于乙酸乙酯，丙酮；不溶于苯、乙醚、氯仿、 石油醚等，易溶于碱液呈黄色，酸化后又析出。
碱提酸沉法提取芦丁
芦丁构造中由于具有酚羟基，能 与碱反响生成盐而溶于水中，向 此盐溶液中参加酸，那么可游离 析出，因此可采用碱提取酸沉淀 法。
石灰乳：可除去鞣质，果胶，粘液质，有利于纯化。但浸出效 果不及NaOH ，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。
稀NaOH：浸出效率高，但杂质多。
酸碱浓度不宜过高：碱性过强，破坏黄酮母核；酸性过强，生 成佯盐，影响产率。
本卷须知：
〔1〕参加石灰乳即可到达碱溶解提取芦丁的目的， 还可以除去槐米中残存的大量多糖类粘液质，但用 量不宜过大；pH值不能过高，否那么钙能和芦丁形 成鳌和物而析出沉淀，此步为关键步，一定注意。
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一、实验目的要求
1.通过芦丁的提取与精制掌握碱提-酸沉法提取 黄酮类化合物的原理及操作。
〔2〕pH值过低可使芦丁形成佯盐而降低收率。
〔3〕利用芦丁在冷热水中溶解度的差异来到达结晶 目的。得到的沉淀要粗称一下，按照芦丁在热水中1： 200的溶解度加蒸馏水进展重结晶。
2.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷〔芦 丁〕、苷元〔槲皮素〕和糖局部〔芸香糖〕的 鉴定方法。
二、芦丁的构造与性质及其 提取原理
OH OH
O HO
O rutinose OH O
芦丁存在于多种植物中，以槐米中为最高。由于其 具有维生素P样作用，有助于保持及恢复毛细血管 正常弹性，主要用作防治高血压的辅助治疗剂。
芦丁的物理性质：
浅黄色细小结晶，熔点177-178℃。芦丁易溶 于热水，难溶于冷水，溶于甲醇、乙醇，难溶 于乙酸乙酯，丙酮；不溶于苯、乙醚、氯仿、 石油醚等，易溶于碱液呈黄色，酸化后又析出。
碱提酸沉法提取芦丁
芦丁构造中由于具有酚羟基，能 与碱反响生成盐而溶于水中，向 此盐溶液中参加酸，那么可游离 析出，因此可采用碱提取酸沉淀 法。
石灰乳：可除去鞣质，果胶，粘液质，有利于纯化。但浸出效 果不及NaOH ，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。
稀NaOH：浸出效率高，但杂质多。
酸碱浓度不宜过高：碱性过强，破坏黄酮母核；酸性过强，生 成佯盐，影响产率。
本卷须知：
〔1〕参加石灰乳即可到达碱溶解提取芦丁的目的， 还可以除去槐米中残存的大量多糖类粘液质，但用 量不宜过大；pH值不能过高，否那么钙能和芦丁形 成鳌和物而析出沉淀，此步为关键步，一定注意。
实验芦丁的鉴定PPT课件
长和吸收值，用方格纸作图，精确的测出吸收峰的波长和吸收值，记 录测定结果。
(2) 25%醋酸水溶液 (3) 85%醋酸水溶液 显 色: (1) 可见光下观察，再在紫外光下观察 (2) 经氨气后再观察 (3) 喷三氧化铝试剂后再观察
2 .芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定：
新化一号层析滤纸 样 品: 自制芦丁、槲皮素 对照品: 芦丁、槲皮素 展开剂: 乙醇-水（7:3） 显 色: （1）可见光下观察，再在紫外光下观察
六、紫外吸收光谱测定槲皮素
（一）原理
利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解 质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断该 化合物羟基的位置
（二）试剂
无水甲醇 甲醇钠溶液 氢氧化钠溶液 三氯化铝溶液 醋酸钠 硼酸饱和液
（三）测定方法
1．黄酮羟基位置的测定：
精密称取黄酮样品（槲皮素）约1.2mg，用无水甲醇溶解，再稀释至 100ml
385 I峰△14
3，5及3’,4’-OH 3’，4’-OH 7-OH
3’，4-OH
克分子吸收系数的测定：根据已测定的黄酮光谱，测量吸收峰的波 长和吸收峰前后20nm的波长范围。然后取样品溶液约3ml，置于1cm长的 石英杯中，测UV，仔细测量在上述波长范围内各波长的吸收值，反复测 定三次。
思考题及记录
涤数次，合并洗、滤液、蒸馏回收部分丙酮，留存10 ~ 15ml，放置，
渐渐析出无色结晶，母液浓缩，复得一批结晶，如母液浓缩后呈糖浆 状不能析出结晶，应加5%NaOH数滴，振摇使硫酸二甲酯水解，此时又 可析出一小部份结晶，合并，以乙醇重结晶, 得皮槲素五甲醚(mp152 ~ 153℃)
四、槲皮素的降解 取槲皮素50mg，置于圆底烧瓶中，加水5ml，乙醇6ml，
(2) 25%醋酸水溶液 (3) 85%醋酸水溶液 显 色: (1) 可见光下观察，再在紫外光下观察 (2) 经氨气后再观察 (3) 喷三氧化铝试剂后再观察
2 .芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定：
新化一号层析滤纸 样 品: 自制芦丁、槲皮素 对照品: 芦丁、槲皮素 展开剂: 乙醇-水（7:3） 显 色: （1）可见光下观察，再在紫外光下观察
六、紫外吸收光谱测定槲皮素
（一）原理
利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解 质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断该 化合物羟基的位置
（二）试剂
无水甲醇 甲醇钠溶液 氢氧化钠溶液 三氯化铝溶液 醋酸钠 硼酸饱和液
（三）测定方法
1．黄酮羟基位置的测定：
精密称取黄酮样品（槲皮素）约1.2mg，用无水甲醇溶解，再稀释至 100ml
385 I峰△14
3，5及3’,4’-OH 3’，4’-OH 7-OH
3’，4-OH
克分子吸收系数的测定：根据已测定的黄酮光谱，测量吸收峰的波 长和吸收峰前后20nm的波长范围。然后取样品溶液约3ml，置于1cm长的 石英杯中，测UV，仔细测量在上述波长范围内各波长的吸收值，反复测 定三次。
思考题及记录
涤数次，合并洗、滤液、蒸馏回收部分丙酮，留存10 ~ 15ml，放置，
渐渐析出无色结晶，母液浓缩，复得一批结晶，如母液浓缩后呈糖浆 状不能析出结晶，应加5%NaOH数滴，振摇使硫酸二甲酯水解，此时又 可析出一小部份结晶，合并，以乙醇重结晶, 得皮槲素五甲醚(mp152 ~ 153℃)
四、槲皮素的降解 取槲皮素50mg，置于圆底烧瓶中，加水5ml，乙醇6ml，
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30-40 50-65 0
B环有邻二酚羟基 A,B环皆有邻二酚羟基 A,B环皆无邻二酚羟基
实验原理
• 芦丁提取物含量的测定： • 在黄酮类化合物的紫外光谱图上主要有两个吸收带:
环肉桂酰系统引起的吸收带1 ( 300 ) 550nm)和环苯 酰系统引起的吸收带2 ( 240 ) 280nm) 。若加入铝 盐, 则铝离子与黄酮化合物形成稳定的配合物,带2 会明显向长波方向移动( 红移) ; 在NaNO2 的强碱 性溶液中, 其在500nm左右吸光度值最大, 从而为分 光光度法测定提供了可靠的依据
（3）
H O
O
O H O
O H
H O
O
O H
A lC l3
OO A l3+
O A l3+
O H O
O
H Cl/H 2O
OO A l3+
O H O H
形成络合物的能力：
黄酮醇3-OH >黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）> 邻二酚羟基 > 二氢黄酮醇5-OH 邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合 ； 但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合； 形成络合物越稳定，红移越多。
带 I ， II 随 加 NaOMe 时
间延长，逐渐衰减
5-20
320-330nm 有吸收，成 苷后消失
在长波一侧 有明显的肩 峰
两峰强度基本相同，具体位置 与母核上电负性取代基(-OH, O多C，H越3)长有移关 ， -OH, -OCH3 越
有4’-OH，无3-OH 有3-OH，无4’- OH 有3,4’-OH或3,3’,4’-OH（衰减 更快） 7-OH
芦丁的鉴别及含量测定
小组成员：陈丽、陈惠渝、 黄雄、李钰川
实验目的
• 熟悉黄酮类化合物的化学检识的常用方法 • 掌握芦丁紫外吸收光谱测定的方法与原理 • 学习用紫外分光光度法测定芦丁提取物的含量
实验原理
芦丁和槲皮素的化学检识
1.对不同强度碱液的溶解度试验 2.浓硫酸和浓盐酸反应 3.Molish反应 4.盐酸-镁粉试验 5.FeCl3反应
7
O
R O
苯甲酰基
4'
7
O
R O
4'
O
O
桂皮酰基
黄酮类化合物结构中的交叉共轭
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定
多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成： 带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃 迁引起。
O B
O B
O
O
实验原理
• 带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃 迁所引起。
实验原理
• 浓硫酸和浓盐酸反应：
γ-吡喃环上的1-氧原子，因有未共用的电子对，故 表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸 等生成盐，但生成的盐极不稳定，加水后即可分解。 另外，黄酮类化合物溶于浓硫酸中常常表现出特殊 的颜色，可用于鉴别。
实验原理
• Molish反应：
糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍 生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓 硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。 Molish反应可以鉴定单糖的存在。
影响不大 查耳酮2’-OH 使带I红移的
影响最大
加入诊断试剂后引起的位移及结构测定
加入试剂
带II
带I
说明
样品+甲醇 （黄酮类及 黄酮醇类）
+NaOMe
+NaOAc (未熔融)
250-285 304-385
A环有OH ， 红 移小， 无意义
40-60nm （不变或 增强） 50-60nm （下降）
（4） 根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外 光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟
基的取代情况。
带II(240285nm)（苯 甲酰系统）
250-285
245-270 270-295
220-270
带I(300400nm) 桂皮酰系统 304-350
328-357
352-385
300-400
6.AlC碱液的溶解度试验：
黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性， 可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺 中。由于酚羟基的数目及位置不同，酸性强弱也不 同。以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱顺序依次为： 7,4‘-二OH>7-或4’-OH>一般酚OH>5-OH>3-OH 因此，酚羟基的数目及位置不同的黄酮类化合物酸 性不同，在不同强度碱液中的溶解度也不同。
340-390 或340-390(Ia)
300-320(Ib)
370-430(3-4 个小峰)
类型 黄酮类
黄酮醇类 (3-OR)
黄酮醇类 (3-OH) 异黄酮类 二氢黄酮 （醇） 查耳酮类
橙酮类
说明
-OH越多，带 I带II越红移
B环3’,4’有OH基，带II 为双峰（主 峰伴肩峰）
B环上有-OH, OCH3对带I
实验原理
• 盐酸-镁粉试验：
盐酸-镁粉反应的机制过去解释为由于生 成了花色苷元所致，现在认为是因为生成 了阳碳离子的缘故。
• FeCl3及AlCl3反应：
黄酮类化合物分子中常含有下列结构单元， 故常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂 反应，生成有色络合物。
OH
O
O
OH
OH
OH
O
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定：
7-OH
+NaOAc (熔融)
40~65 有4’-OH
+NaOAc/ 5- 12-30 有6,7-OH或7,8-OH (5,6-OH无)
H3BO3
10
B环有邻二酚羟基
AlCl3/ HCl
AlCl3 光 谱 AlCl3/ HCl光谱
60 50-60 35-55 17-20 0
有3-OH 有3,5-二OH 有5-OH，无3-OH 有6-OR 无3-OH, 5-OH
• 注意：用NaNO2 - Al(NO3 ) 3 - NaOH 体系分光光 度法测定总黄酮含量时, 必须严格保证稀释定容用乙 醇的浓度、试剂加入时间、显色时间等测试环节前 后完全一致, 否则会出现很大误差。
实验试剂及仪器
O
A
O
O
A
O
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定：
7
O
R O
苯甲酰基
4'
7
O
R O
4'
O
O
桂皮酰基
黄酮类化合物结构中的交叉共轭
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱测定
说明： （1）+NaOMe或NaOAc, OHONa，变为离子化合物，
共轭系统中的电子云密度增加，红移 另 有 3,4’-OH 或 3,3’,4’-OH 时 ， 在 NaOMe 作 用 下 易氧化破坏，故峰有衰减。 （2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4’-OH解 离。