槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定精编版
槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定张景清（⼴西科技⼤学⽣物与化学⼯程学院⼴西柳州545006）1.摘要:本实验以槐⽶为原料，采⽤碱提酸沉法从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
该⽅法提取率⾼达26.3%，对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析，并与标准品做对⽐，结果表明提取的芦丁与标准品的纯度⼤致相等。
2.引⾔芦丁,亦称芸⾹苷,⼴泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐⽶和荞麦叶中含量最⾼,可作为⼤量提取芦丁的原料。
芦丁属于黄酮类化合物,在⼼脑⾎管疾病的治疗上起到了举⾜轻重的作⽤,具有VP样作⽤。
有助于保持⽑细⾎管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作⽤。
其临床效果肯定,副作⽤少,同时也是⼀种植物原料药[1]。
黄酮类化合物的提取⽅法较多主要是依据其溶解性及酸性。
黄酮类化合物的提取⽅法⼀般有：①热⽔提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
3.实验原理槐⽶中含芦丁、槲⽪素、皂苷、⽩桦、酯醇等多种成分。
芦丁是其主要成分，含量为16%-25%。
芦丁属于黄酮类化合物，结构中含有多个酚羟基，呈酸性，苷元为槲⽪素，糖基为芸⾹糖。
芦丁为浅黄⾊细⼩针状结晶，95-97℃脱⽔，熔点314℃，可溶于沸⼄醇、⽆⽔⼄醇、⼄酸⼄酯、丙酮，不溶于⽯油醚和⽔。
芦丁可溶于碱液中，呈黄⾊酸化后⼜析出，故可采⽤碱提酸沉法得到芦丁产品。
然后利⽤在冷⽔中不溶，在热⽔中微溶的溶解度差精制，可获得纯度⾼的微细针状结晶，最后利⽤芦丁、槲⽪素、及糖的性质予以鉴定。
4.实验部分4.1实验药品槐⽶（市售），氧化钙AR（西陇化⼯股份有限公司），盐酸AR（西陇科学有限公司），四硼酸钠AR（⼴东省台⼭市化⼯⼚），甲醇AR（天津市⼤茂化学试剂⼚），三氯甲烷AR（成都市科隆化学品有限公司）,氯仿（分析纯，成都市科龙化⼯试剂⼚），⼄醇（分析纯）4.2实验仪器JJ200电⼦天平（常熟市双杰测试仪器⼚），SHZ-D（III）循环⽔式多⽤真空泵（河南爱博特科技发展有限公司），ZNLC-GS 130*60智能磁⼒搅拌器（河南爱博特科技发展有限公司），薄层⾊谱展开缸，紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）4.3实验步骤4.3.1芦丁的提取⽅法⼀：称取槐⽶10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于500ml烧杯中，加⼊250ml⽔，加热搅拌下添加⽯灰乳，保持PH=8-8.5。
槐米中芦丁及槲皮素提取分离及鉴定
实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。
味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
槐米常炒炭应用。
槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。
临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。
[目的要求]1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2．掌握槲皮素的制备原理及操作。
3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
[实验原理]芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。
难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
[实验内容]一、芦丁的提取分离及精制方法⑴500ml 饱和石灰水，加热，并维持pH8～9滤液 药渣10分钟，维持pH8～9pH 至4 ～51：200的比例加水，方法⑵ 利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离。
槐花米中芦丁的提取分离和鉴定
五、思 考题
❖ 苷类结构的检识大体程序如何？ ❖ 苷类水解的方法？ ❖ 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素
3-OH上？ ❖ 苷元的结构怎样确定？ ❖ 怎样确定苷键的构型？
六、实验课后总 结与讨论
❖ 芦丁提取 ❖ 芦丁的分离纯化 ❖ 芦丁的理化鉴别 ❖ 芦丁的苷元-槲皮素的制备 ❖ 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
▪ 芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、 乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
▪ 芦丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇 中1:60，沸甲醇中1:7
▪ 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中， 酸化后又可析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
碱溶酸沉法原理
②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 ❖ 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外灯
(365nm)下观察。
5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
❖ 样品：自制芦丁。 ❖ 实验：KBr压片，红外分光光度仪测试。 ❖ IR谱图与芦丁标准谱图对照。 ❖ DMSO-d6作溶剂，测芦丁的1HNMR。
四、注意事 项
调节 PH8-9
1.5g CaO 加10ml水
直火加热
保持微 沸
注3意0m及时in补充水
和石灰乳，维持 PH 8~9
双层滤纸趁 热抽滤
• 趁热抽滤时，注意防 止滤液因减压而沸腾。
滤液 残渣
在60-70度下，用 浓盐酸调PH3-4
静置
2、芦丁的精制与水解
第一次实验所得滤液
• 酸水解过程ຫໍສະໝຸດ 抽滤中，注意补充由槐花米中提取芦丁的方法很多，本实 验是根据芦丁在冷水和热水中的溶解度差异 的特性进行提取和精制，或根据芦丁分子中 具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大 溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液 加酸酸化后则芦丁游离析出。
实验 槐米中芦丁的提取、分离与鉴别
实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别一、实验目的（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。
（2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。
二、实验原理芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。
溶解度情况如下：水：1:10000(冷)，1:200(热)甲醇：1:100(冷)，1:9(热)乙醇：1:300(冷)，1:30(热)吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。
再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。
利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。
三、实验内容（一）芦丁(芸香苷)的提取1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。
称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤饼用水洗3-4次），干燥后得粗品。
实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素
实验二 槐米中芦丁的提取和芦丁水解制备槲皮素一、概述植物来源：槐米系豆科植物槐树（sophora japonica L.）的花蕾（槐米），芦丁含量高达12%~20%。
荞麦中含量也较高。
含芦丁成分的植物高达70种以上。
功效：芦丁经药理实验证明具有调节毛细血管渗透作用，具有维生素P 样作用。
在临床上用作毛细血管止血药，常作为高血压病的辅助用药。
芦丁为槐米中主要有效成分。
主要化学成分的结构及理化性质：芦丁（Rutin ）也称芸香苷，是槲皮素3位上的羟基与芸香糖脱水缩合形成的苷(芸香糖为葡萄糖与鼠李糖组成的双糖)。
分子式：C 27H 30O 16·3H 2O ，淡黄色针状结晶，含三分子结晶水，熔点174～178℃,无水物为188~190℃。
易溶于碱液，显橙黄色，酸化后又析出。
在冷水中的溶解度为1：10000，热水中为1：200，在冷乙醇中为1：650，在热乙醇中为1：60，在吡啶中为1：12。
微溶于乙酸乙酯和丙酮，难溶于苯、三氯甲烷、石油醚等极性小有机溶剂，可溶于硫酸和盐酸，加水稀释又可析出。
UV EtOHm ax λ：259，299，359nm 。
芦丁用20%H 2SO 4水溶液水解可得槲皮素（芦丁的苷元），呈黄色结晶，313～314℃，C 15H 10O 7·2H 2O ，在热乙醇中溶解度为1：23，冷乙醇中1：290，难溶于水和苯等极性小的有机溶剂，可溶于极性较大的有机溶剂如甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。
UV EtOH m ax λ：255，269sh,301sh,370nm 。
其他成分理化性质：皂苷（saponin ）粗品为白色粉末，m.p.210～220℃。
易溶于吡啶。
能溶于200倍的甲醇，酸水解后获得两种苷元（白桦酯醇、槐花二醇）及糖（糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸内酯）。
白桦酯醇（betulin ）无色针晶，m.p215～217℃,能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、三氯甲烷、苯等；难溶于石油醚。
槐米中芦丁的提取,分离与鉴定实验报告
槐米中芦丁的提取,分离与鉴定实验报告一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
二、实验原理芦丁:浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。
溶解度:1:8000;热水1:200;冷乙醇1:300;热乙醇1:30;冷甲醇1:100:热甲醇1:10.槲皮素:黄色结晶，mp313℃-314℃，能溶解于冷乙醇，易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙酸乙酯等;难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。
本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取:取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟，并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。
浓缩至1/2体积，滤液在60℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。
五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。
在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。
槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。
PH应严格控制8-9，不得超过10,。
因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。
酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。
2、提取过程中加入硼砂作用:保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐米中芦丁的提取与分离摘要：利用芦丁在沸水中溶解度大的性质将其在沸水中进行提取，而芦丁与其他水溶性化合物可借助聚酰胺柱色谱予以分离。
关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定1 引言芦丁（Rutin ）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由槲皮素（Quercetin ）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose ）〔葡萄糖（Glucose ）与鼠李糖（Rhamnose ）组成的双糖〕脱水形成的苷。
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子结晶水，熔点为174~178℃，不含水的芦丁熔点为188℃。
含2分子结晶，熔点为313~314℃。
水溶解度：冷水中为1:10000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
不含结晶水的槲皮素熔点为316℃，它们的结构式如下：OHOHO O OHO OOH OHOH OHOH CH 2CH 3OH O O OH芦丁（Rutin ）O OHO OH OHOH槲皮素（Quercetin ）芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。
2 实验内容与步骤2.1仪器与试剂仪器：紫外灯 蒸馏装置一套 250mL 烧杯（一只） 500mL 烧杯（两只） 100mL 三角瓶（两只） 纱布 色谱柱（Ф1.5×30cm ） 玻璃板 硅胶G 板试剂：甲醇 70%工业乙醇 槐米 层析用聚酰胺（60-100目） 芦丁标准样2.2 芦丁的提取将粉碎好的槐米10g 倒入500mL 烧杯中，加沸水150mL ，煮沸1h(在煮沸的过程中可补加水），趁热用纱布过滤，残渣加入100mL 水，再煮沸30分钟，共进行两次，将两次滤液混合，放置，冷却，即有大量黄色沉淀生成，抽滤。
槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
滤液
沉淀
(保留作糖的纸色谱鉴定)
水洗至中性，
用乙醇－水（1：1）30ml混合溶剂
重结晶； 加热溶解，趁热抽滤，
放置 析晶，抽干，干燥 ，
苷元(槲皮素)(测定熔点、1HNMR) 13
实验注意事项
芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢； 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还
可以除去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但 pH值不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉 淀析出； pH值过低会使芦丁形成烊盐重新溶解，降低收率 （最佳pH值为4-5）
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思考题
苷类结构的检识大体程序如何？ 苷类水解的方法？ 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮
素3-OH上？ 苷元的结构怎样确定？ 怎样确定苷键的构型？
15
实验课后总结与讨论
芦丁提取 芦丁的分离纯化 芦丁的理化鉴别 芦丁的苷元-槲皮素的制备 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
16
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性， 易溶于碱液中，酸化后又可析出，因此可 以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
6
三、实验过程
1、提取分离 槐米粉末
加约6倍量水①，煮沸， 在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8～9②。 在保持该pH条件下③，微沸20～30分钟， 随时补充失去的水份④， 趁热抽滤⑤， 药渣加 4倍量水⑥，同法再提2次
样品：①自制芦丁乙醇液; ②自制槲皮素乙醇液。
对照品：①芦丁对照品乙醇液; ②槲皮素对照品乙醇液。
吸附剂：聚酰胺薄膜。 展开剂：①氯仿—甲醇—甲酸(15：5：1);
②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干
后，置紫外灯(365nm)下观察。
11
5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
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槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定
槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。
味苦性凉、具清热凉血、
止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
槐米常炒炭应用。
槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐
花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调
节通透性。
临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。
[目的要求]
1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2．掌握槲皮素的制备原理及操作。
3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用
4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
[实验原理]
芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃
（无水物）。
难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），
冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、
乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃
（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰
醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
+鼠李糖+葡萄糖
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可
利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择
重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
[实验内容]
一、芦丁的提取分离及精制
方法⑴
槐米粗粉（50g）
置1000ml烧杯中，加入500ml饱和石灰水，加热，并维持pH8～9
煮沸20分钟，趁热用脱脂棉滤过
滤液药渣
用300ml饱和石灰水煮沸10分钟，维持pH8～9
趁热滤过
滤液药渣（×）
合并
70℃下用浓HCl调pH至4 ～5
沉淀
低温（80℃）干燥，称重。
按1：200的比例加水，
加热使溶解，趁热滤过
滤液
静置，抽滤，减压干燥，计算收率
芦丁精制品
方法⑵利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离。
槐米粗粉
沸水煮沸5～10分钟，反复2次
趁热滤过
水提取液药渣
放冷
沉淀析出（粗芦丁）
热水重结晶
或乙醇重结晶
芦丁结晶
二、槲皮素的制备
称取精品芦丁1g
置250ml烧瓶中
加2%H2SO4200ml
加热回流1小时
放冷，静置，抽滤
酸性滤液沉淀
中和水洗两次，干燥
乙醇重结晶
中性滤液称重，计算收率
浓缩
黄色细针状结晶
浓缩液（槲皮素）
（供糖的PC鉴定）
三、检识反应
1．芦丁的定性反应
取芦丁适量，加乙醇使溶解，分成三份供下述试验用：
(1)盐酸镁粉试验：取样品液适量，加2滴浓HCl、再酌加少许镁粉，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色至深红色。
(2)锆-枸试验：取样品液适量，然后加 2％ZrOCl2的甲醇溶液，注意观察颜色变化，再加入2％枸椽酸的甲醇溶液，并详细记录颜色变化。
(3)α-萘酚-浓硫酸反应：取样品液适量，加等体积的l0％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色。
2．芦丁的UV
(1)鉴定试剂的配制
①甲醇钠溶液：取0.25g金属钠，切碎，小心加入色谱甲醇10ml中，此液置于玻璃瓶中，用橡皮塞密封。
②三氯化铝溶液：取1g无水三氯化铝，小心加入色谱甲醇20ml中，放置24小时后全部溶解即得。
③醋酸钠：用无水粉末醋酸钠。
④⑤硼酸饱和溶液：取无水硼酸，加入适量色谱甲醇、制成饱和溶液。
（上述贮备液可放置六个月）
（2）芦丁溶液的配制
精密称取芦丁纯品0.5g，用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
（3）光谱的测定
①甲醇光谱：取样品液置石英杯中，至200～500nm内进行扫描，重复一次，观察紫外光谱。
②甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，加入甲醇钠溶液3滴后，立即测定，放置5分钟后再测一次。
③三氯化铝光谱，在盛有样品液的石英杯中，加入三氯化铝6滴，放置1分钟后进行测定。
测定后加入3滴盐酸溶液（盐酸：水＝1：1）再进行测定。
④醋酸钠光谱：取样品液约3ml，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀（杯底剩有约2mg 的醋酸钠），加入醋酸钠后两分钟内测定，5分钟到10分钟后再测定一次。
3．芦丁及槲皮素的色谱
支持剂：中速层析滤液（5×20cm）
展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层
样品：自制槲皮素的乙醇溶液
自制芦丁的乙醇溶液
对照品：槲皮素标准品的乙醇溶液
芦丁标准品的乙醇溶液
显色剂：三氯化铝乙醇溶液喷雾
4．糖的纸色谱检识
支持剂：中速层析滤纸（5×20cm）
样品：取水解后的滤液10ml，水浴加热，且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性，过滤，取滤液并浓缩至2mI左右，放冷后，供纸色谱点样用。
对照品：1％葡萄糖标准品醇溶液及1％鼠李糖标准品醇溶液
展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层
显色剂：喷以邻苯二甲酸苯胺溶液，105℃烘烤5分钟至斑点显色清晰。
[实验说明及注意事项]
1．用石灰水调节芦丁提取溶液的PH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。
但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。
2．用HCl调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低（PH2以下）会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。
3．注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。
[思考题]
1．苷类结构检识的一般程序？
2．苷类水解有几种催化方法？
3．怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O位上？
4．怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？
5．UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。