病原性球菌的分离鉴定
五、透明质酸酶试验
试验目的
通过观察透明质酸酶对组织的破坏作用，了解细菌的侵 袭性。
试验原理
致病性链球菌可产生多种侵袭酶，其中透明质酸酶可水 解组织间质的透明质酸，使结缔组织疏松，通透性增高， 利于细菌和病毒的扩散及增强细菌的侵袭力，又称为扩散 因子。
0.25 0.25
0.25
0.00
0.25
0.00
保温
将各管内溶液混匀，置37℃水浴箱内5min
2％红细胞
0.25 0.25
0.25
0.25
0.25
0.25
保温
将各管内溶液混匀，置37℃水浴箱内10min后观察结果
血清稀释度及对照 1:500 1:833
1:1250
血清对照 抗原对照 血球对照
a1:50待检血清加入到1号试管后，被PBS稀释为1:500倍稀释的待检血清。 b每管总体积为1ml。
试验原理
乙链A族球菌可产生溶血素“O”(streptolysin O, SLO)具有溶血作用和较强的抗原性，可刺激机体产生抗 溶血素“O”抗体。该抗体在病愈后数月至数年才消失， 可做为诊断链球菌感染的辅助手段。
试验材料
1：50待检血清、2％红细胞悬液等
ASO溶血试验操作
单位：ml
试管号
操作步骤
12
淋病病灶分泌物、脑脊液、末梢血、痰斑
肉汤増菌
血平板培养
厌氧培养（5% CO2, Sp） 需氧培养（Sa）
菌落观察 （色素、溶血性）
涂片染色
分离单菌落 纯培养
巧克力平板培养 （N.m, N.g)
烛缸法培养
菌落观察
分离单菌落 纯培养
涂片染色
药敏试验
进一步鉴定
药敏试验
病原性球菌检验注意事项
➢ 严格无菌操作。 ➢ 奈瑟氏球菌标本应当保温保湿，尽快分离培养。 ➢ 有些标本可以离心取沉渣提高检出率。 ➢ 厌氧菌疑似标本应尽量避免空气暴露。 ➢ 实际工作中应根据条件和要求对上述检验程序进
行选择和取舍。
二、脓标本和咽拭子培养
咽拭子培养注意事项
➢ 用灭菌咽拭子在咽部粘膜表面上下滚动，保证棉 签头全部浸湿。不要污染其他口腔微生物。
➢ 用咽拭子前端在血平板边缘处涂布一个1X2 cm大 小区域，将咽拭子丢弃在石碳酸缸中。
➢ 小辨法或分区法接种。 ➢ 37℃培养24小时观察结果。
三、抗链球菌溶血素O试验
四、血浆凝固酶试验
实验目的
了解致病性球菌的初步鉴定方法。
实验原理
血浆凝固酶是致病性葡萄球菌产生的使人或兔抗凝血 浆产生凝固的酶，非致病葡萄球菌不产生此酶。因此该酶 是鉴定葡萄球菌有无致病性的指标之一。
实验材料
试剂：兔或人1：4稀释之抗凝血浆； 金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌接种琼脂平板。
实验步骤
将抗凝血浆用滴管分别加1滴于载玻片两端，用灭菌 接种环取少量金黄色葡萄球菌与一滴血浆混匀，同法取 表皮葡萄球菌与另一滴血浆混匀，然后边倾动玻片边观 察。
3
4
5
6
pH7.2 PBS
1.80 0.20
0.30
0.00
0.50
0.75
1:50待检血清
0.20a 0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
1:500待检血清
0.00 0.30
Байду номын сангаас
0.20
0.75
0.00
0.00
从1号试管中弃去0.25ml，以保证1号试管内反应液的总体积与其他试管相同b
还原溶血素O
试验材料
白色家兔；乙型溶血性链球菌血清肉汤培养基滤液；过 滤墨汁；生理盐水。
试验步骤
配置试验液（1ml 乙型链球菌滤液与2滴过滤墨汁混合液） 和对照液（1ml 生理盐水和2滴过滤墨汁混合液） 家兔腹部消毒后，用注射器取实验液在一侧皮内注射直 径为0.5 cm皮丘；同法取对照液在另一侧皮内注射直径 为0.5 cm皮丘，2h后观察结果。 预期结果：实验侧皮内黑色区域与对照侧黑色区域比较 ≧3倍为阳性。
病原性球菌的分离鉴定
Isolation and Identification of Pathogenic Cocci
1
➢病原性球菌分离鉴定程序简介 ➢脓标本和咽拭子接种 ➢抗链O试验 ➢血浆凝固酶试验 ➢透明质酸酶试验
一、病原性球菌分离鉴定程序简介
革兰氏阳性菌
血液
骨髓穿刺液、痰、咽拭子、脓液
革兰氏阴性菌
医学微生物实验实验四病原性球菌
相关研究和应用前景
研究方向
• 球菌的耐药性研究 • 球菌的毒力机制研究
应用前景
• 新型抗菌药物的开发 • 快速检测方法的改进
实验的意义和价值
促进健康
通过研究病原性球菌，能够更好地了解和应对 与之相关的疾病，促进人们的健康。
拓展科学知识
通过实验，可以进一步了解微生物领域的知识， 为科学研究的发展做出贡献。
3 柯氏试验
通过培养基的反应性来鉴别链球菌。
2 大肠杆菌鉴别试验
利用培养基鉴别肺炎球菌。
病原性球菌的检测方法
1
涂片法
将样品涂在玻璃片上，使用显微镜观察病原性球菌的形态特征。
2
H2 S产生试验
利用培养基观察球菌对H2S的产生情况。
3
SIM管法
通过尿素和铁盐培养基观察球菌的反应。
病原性球菌实验结果分析
形态观察
观察菌落的形态特征，如颜色、 形状和质地。
病原性球菌的特征和疾病
球菌种类 金黄色葡萄球菌 肺炎球菌 链球菌
特征 黄色菌落，产生金黄色素 多形态，革兰阴性 成链状排列
相关疾病 皮肤感染、食物中毒等 肺炎、脑膜炎等 咽炎、扁桃体炎等
病原性球菌的实验判断
1 甘露醇耐性试验
用甘露醇培养基判断金黄色葡萄球菌。
医学微生物实验实验四病 原性球菌
这个介绍病原性球菌的医学微生物实验将带您了解球菌的分类和特征，病原 性球菌对人类健康的影响，以及与常见球菌相关的疾病。
病原性球菌的分离与鉴定
样本采集
收集可能含有病原性球菌的样 本，如血液、尿液或分泌物。
培养与分离
将样本在含有适宜培养基的培 养皿中培养，分离出病原性球 菌。
病原性球菌的检验
病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。
⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。
分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。
（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。
（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。
（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。
（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。
金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。
⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。
⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。
⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。
金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。
因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。
无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。
致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。
培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。
），在麦康凯琼脂平板不生长。
2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。
5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。
6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。
4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。
实验四病原性球菌的检验
1、标本采集：脓液
2、检验程序：
脓液
↓
↓
直接涂片
分离培养
革兰染色镜检 （操作）（血琼脂平板）
↓
↓ 37℃ 18～24h
初报 挑取可疑菌落（性状、色素、溶血）
↓
鉴定试验及药敏试验
↓
↓
↓
↓
革兰染色镜检 生化反应鉴定 其他鉴定 药敏试验
↓
↓
↓
↓
↓37℃ 18～24h
报告
三、葡萄球菌属生物化学反应：
（一）触酶试验（操作）
规定时间内出现清晰凝集者为阳性，不出现凝集 者为阴性。
主要用于风湿热的辅助诊断：
风湿热患者ASO大多在250单位；
活动性风湿热患者ASO一般≥400单位。
『实验报告』
绘出化脓性球菌镜下形态图。 记录脓液标本的分离培养与鉴定程序。
实验四 病原性球菌的检验
病原性球菌，又称化脓性球菌，根据革 兰染色性的不同，分为两类： G＋球菌： 葡萄球菌、链球菌、肺炎链 球菌等。 G- 球菌： 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌 等。
『目的要求』
掌握：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜 炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的形态及染色特点；葡 萄球菌、链球菌的菌落特点及链球菌在血琼脂 平板上的溶血性；血浆凝固酶试验、触酶试验 的试验方法、结果及意义。
四、抗链球菌溶血素“O”的测定（乳胶法，示教）
1、原理：ASO高滴度的血清被适量溶血素“O”中 和后，失去了正常水平量的抗体，多余的抗“O” 抗体与ASO乳胶试剂反应，出现肉眼可见的，清 晰均匀的凝集颗粒（ASO乳胶试剂系羧化聚苯乙 烯乳胶与溶血素“O”共价交联的产物）。
2、方法：（略）3、结Fra bibliotek及意义：1、原理：
微生物实验设计-病原性球菌的鉴定
医学微生物学实验设计姓名：***学号：**********班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河子大学医学院石河子832000）摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。
本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。
对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。
一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。
然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。
（具体见图1-1）分离纯化葡萄球菌属奈瑟菌属血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验二、鉴定方法（一）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。
葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。
链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。
肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。
奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。
通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。
在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。
（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。
观察菌落的形态。
葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。
形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。
链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。
球菌检验报告解释
球菌检验报告解释引言球菌是一类常见的细菌，以其球状细胞形态而得名。
球菌广泛存在于自然界中，包括土壤、水体、皮肤以及呼吸道等部位。
虽然大部分的球菌对人体没有害处，但某些特定的球菌却可能引起严重的感染和疾病。
为了准确诊断和治疗球菌感染，医疗机构常常进行球菌检验。
本篇文档将解释球菌检验报告的相关内容。
检验项目球菌检验报告通常包括以下几个主要项目：1.病原菌培养鉴定：通过将样本在适当的培养基上进行培养，可以分离出其中的球菌。
培养后，医学实验室将对分离出的菌株进行鉴定，确定其是否为球菌以及具体属种。
2.药敏试验：这一项目主要用于测试球菌对不同抗生素的敏感性。
医学实验室将在培养基上施加不同类型的抗生素，观察菌落的生长情况，以确定当前球菌对哪些药物敏感，哪些药物耐药。
3.血清学检测：通过检测患者体内的球菌相关抗体来判断球菌感染的存在与程度。
通常，这项检测用于检测球菌感染是否为初次感染，或者用于跟踪治疗效果。
报告解释球菌检验报告通常会提供以下信息：1.菌株鉴定：报告会详细说明培养出的球菌菌株的属种和亚种信息。
这对医生来说非常重要，因为不同的球菌可能导致不同类型和严重程度的感染。
2.抗生素敏感性：报告会列出球菌对不同抗生素的敏感性结果。
通常使用一个字符表示，例如“S”表示敏感，“R”表示耐药，或者使用数字来表示具体的抗生素最低抑菌浓度。
这些信息有助于医生选择合适的抗生素治疗感染。
3.血清学检测：如果进行了血清学检测，报告中会包含血清学结果。
这通常是一些数字或特定单位表示的抗体水平。
医生可以根据这些结果判断球菌感染的程度和临床治疗的效果。
结论球菌检验报告是诊断和治疗球菌感染的重要工具。
通过对球菌菌株的鉴定、抗生素敏感性和血清学结果的分析，医生可以制定相应的治疗方案，以最大程度地控制感染并促进患者康复。
在解读球菌检验报告时，医生需要全面了解每个项目的结果，并综合考虑患者的临床病情。
这样，才能做出准确的诊断和治疗决策。
实验 六球菌的分离鉴定(一)
而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含
量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后， 以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚 糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此 通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染
料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
实验内容
方法：
①初染：在已固定的细菌涂片上滴加结晶紫染 液数滴室温作用一分钟后，用细流水轻轻冲洗。
实验报告
1 记录革兰氏染色结果
2 记录三区划线结果
实验 六球菌的分离鉴定（一）
实验目的
1．了解病原性球菌的检查程序。
2．掌握革兰氏染色方法。
3．掌握病原性球菌的形态和分离培养法。
实验材料
病原性球菌的形态、革兰氏染色液
普通平板、血平板、玻片、接种环
酒精灯、光学显微镜、香柏油、吸水纸、
擦镜纸
实验内容
一、病原性球菌的检查程序
实验内容
②媒染：滴加媒染剂碘液数滴，室温作用一分 钟，用细流水冲洗。
③脱色：滴加95%酒精数滴，轻轻摇动玻片几 秒钟，使均匀脱色，然后斜持玻片，使脱掉的 染料随酒精流去，
实验内容
再滴加酒精，直到流下的酒精无色或稍淡紫色 为止（约需30s），立即用细流水将酒精冲掉。
④复染：滴加稀释石炭酸复红液复染约30秒钟 后用细流水冲洗。 ⑤镜检：标本染色后，凉干，滴香柏油，用油 镜观察，革兰氏阳性菌染成紫色，革兰氏阴性 菌染成红色。
二 革兰氏染色法 原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形 成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌 由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密， 故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小， 再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因 此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫 色；
病原性球菌的检验
触酶试验 血浆凝固酶试验
(1)触酶试验
方法：用接种环挑取细菌，置于洁净载玻 片上，滴加3％H2O2溶液1～2滴，观察结 果。
结果判断、解释和报告：于半分钟内产生 大量气泡，为触酶试验阳性，而不产生气 泡者为阴性。
(2)血浆凝固酶试验
方法：取未稀释的新鲜人血浆和生理盐水各1滴 分别滴于载玻片上，挑取待检葡萄球菌菌落少许， 分别与生理盐水和血浆混合，立即观察结果。此 法用于测定结合型凝固酶。
球菌检验
成都医学院 临床微生物学教研室
【目 的】
1．掌握常见病原性球菌的分离培养与鉴定 方法。
2．熟悉葡萄球菌、链球菌的菌落特点、 菌体形态及染色性。
【器 材】
接种环、培养箱、酒精灯、载玻片、显微镜 等
【试 剂】
1．培养基 普通琼脂平板（1个/人） 2．试剂 革兰染液、3％H2O2、人血浆、生
理盐水
【标 本】
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄 球菌
草绿色链球菌
【方 法】
第一次
1．标本涂片染色镜检 观察三种葡萄球菌 的镜下形态、染色性。
2．接种与培养 接种三种葡萄球菌于普通 琼脂平板上；37℃ 18~24h
第二次
3.菌落形态观察 4.菌落涂片染色
病虫害防治中的病原菌分离与鉴定技术
病虫害防治中的病原菌分离与鉴定技术随着农业的发展和气候变化的影响，病虫害对作物的危害日益突出，给农民朋友们带来了巨大的损失。
为了高效地防治病虫害，病原菌的分离与鉴定技术在农业生产中变得至关重要。
本文将介绍病虫害防治中的病原菌分离与鉴定技术及其应用。
1. 病原菌分离技术病原菌分离技术是研究病原菌特性和分类的重要手段，其过程包括取样、分离纯种和培养等步骤。
首先，我们需要在病害的田间表现明显的部位进行采样。
采样时我们要选择健康的、有一定病害程度的植株，避免受到其他病原菌的干扰。
在采样完成后，我们需要将样品送至实验室进行分离纯种。
分离纯种的过程主要包括从样品中挑选病原菌进行单菌落培养、培养基的制备和菌落转接等步骤。
这些步骤旨在确保分离到的病原菌是单一的纯种，以便进行后续的鉴定工作。
2. 病原菌鉴定技术病原菌鉴定技术是通过对分离纯种进行一系列的实验和分析，确定病原菌的分类、形态特征、生理特性和分子标记等信息。
常用的鉴定方法包括形态学观察、生理生化试验和分子生物学技术。
在形态学观察中，我们可以通过放大镜或显微镜观察病原菌的菌落形态、菌丝特征和孢子形态等，从而对其进行初步的分类。
生理生化试验可以通过菌落特征、生长速度、营养需求和代谢产物等进行分析，以进一步确定病原菌的种属归属。
分子生物学技术在病原菌鉴定中得到了广泛应用。
其中，PCR (聚合酶链式反应) 和DNA测序是常用的方法。
通过PCR技术，我们可以扩增特定的基因片段，从而得到病原菌的特异性DNA序列。
而DNA 测序则可以对PCR扩增产物进行测序分析，从而确定病原菌的属种和亲缘关系。
3. 病原菌分离与鉴定技术的应用病原菌分离与鉴定技术广泛应用于病虫害防治领域。
通过对病害样品进行病原菌分离与鉴定，可以及时准确地判断病害的病原菌，并针对性地制定防治策略。
除了在农作物病虫害的防治中应用，病原菌分离与鉴定技术还可以用于果树、蔬菜和花卉等园艺作物的病害防治。
此外，病原菌分离与鉴定技术还在新品种选育、抗病育种和病原菌演化等方面发挥着重要作用。
微生物—病原性球菌的分类鉴定(革兰氏阳性球菌的分类鉴定)
上述各种球菌中，有的是寄生于自然界 或人体的正常菌群，正常情况下不引起 疾病；有的对人有致病性。这些对人有 致病性的球菌统称为病原性球菌。因其 能引起机体的化脓性感染，所以又称为 化脓性球菌。
这些病原性球菌均属于微球菌科、链球 菌科和奈瑟氏球菌科。从结构上讲，它 们均无芽孢，多数无鞭毛，少数可形成 荚膜；从染色性上讲，前两个科属革兰 氏阳性球菌，后者属革兰氏阴性球菌。
2 、 培 养 基 ： 称 取 相 当 于 1 0 0 0 ml 容 量 Todd Hewitt培养基干粉（用于B群链球菌β-溶血素 制备中金黄色葡萄球菌的培养），加琼脂15g， 高压灭菌备用。
称取PYR400mg，溶于4ml甲醇，无菌过滤后， 加入前项培养基中，倾注成平板。
3、PYR产色试剂：1g N,N-二甲氨基肉 桂 醛 溶 于 含 2 5 mmol/L TritonX-10 的 50ml 10%的浓盐酸中。来自（2）、根据抗原结构分类：
链球菌的抗原结构比较复杂。目前对乙 型链球菌抗原研究较多，其抗原可分为 特异性抗原和非特异性抗原两大类；特 异性抗原又可分为群特异性抗原和型特 异性抗原。
抗原结构是链球菌属分类的重要依据。
如Lancefield等根据群特异性抗原的不同， 将乙型溶血型链球菌分为A、B、C、D、 E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、 Q、R、S、T 等 1 8 个 血 清 群 ； 对 人 类 有 致病性者，90%属于A群，偶可见到B、 C、D、G群链球菌感染。
当把能产生碱性磷酸酶的细菌的菌悬液与无色 的对—硝基苯磷酸盐溶液混合，后者受碱性磷 酸酶的作用裂解生成无机磷酸盐和黄色的对— 硝基苯酚。从而使溶液变黄。
细菌分离鉴定
细菌分离鉴定目的要求：熟悉临床标本中常见的病原性细菌的分离鉴定方法。
实验内容：一、脓汁、咽拭子等标本中病原性细菌的.分离与鉴定(一)标本采集1.脓拭子：用无菌棉签蘸取患处深部脓液或分泌物少许，置入无菌空试管内，送检。
2.痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用无菌棉签挑取脓稠痰块，置入无菌空试管内，送检。
3.咽拭子：嘱病人把口张大，用压舌板压住舌根，用无菌棉签迅速蘸取咽部分泌物，置入无菌空试管内，送检。
4.血标本：疑为败血症患者，在严格无菌操作下，静脉采血，床旁直接加入含50ml的肉汤瓶内，立即摇匀后送培养。
5.脑脊液：对疑似流脑患者，作腰椎穿刺取脑脊液，立即行直接床旁接种(送检过程中应注意保温)。
6.尿道、阴-道分泌物：对可疑淋病患者，男性可从尿道取材，取材时导尿管应进入尿道1cm～2cm，如为刚排尿，应等待1h左右;女性则可以从宫颈口取分泌物，当内窥器插入宫颈口后应稍等片刻，再旋转取出，取材应立即送检，不可放置冰箱。
(二)分离鉴定程序待检标本可直接做涂片染色检查鉴定，必要时可做分离培养、生化反应及致病性鉴定。
常见的致病性球菌检查程序如下。
直接涂片、革兰染色、镜检(形态、排列、染色性)脓、痰、咽拭子分泌物、脑脊液观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板→ 涂片、染色、镜检↑ 挑取可疑菌落生化反应血液、穿刺液→肉汤培养基纯分离致病性测定药敏试验如培养液混浊时可涂片、染色、镜检(三)常见临床标本的检查方法1．脓拭子在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。
材料(1) 标本：脓拭子(2) 培养基：血琼脂平板(3) 兔血浆、白色滤纸片、无菌生理盐水、载玻片方法脓汁→ 革兰染色→ 镜检↑血琼脂平板→观察菌落形态及溶血情况致病力试验(1)将脓拭子作革兰染色，镜检(先作培养再涂片以免污染)。