细胞培养技术考题
细胞培养复习题(含答案)
. . 1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型? ⑴按生长方式分为二型： 粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面.而在悬浮状态下即可生长的细胞。（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。） ⑵可分四型：(1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞 2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程 ⑴通常.体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段： ①原代培养期：也称初代培养.是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。此期的细胞呈现出活跃移动的特点.可见细胞分裂.但不旺盛。处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。细胞群具有明显的异质性.细胞间的相互依存性强.在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。 ②．传代期 ：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期.原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。一般情况下.正常体细胞在传代10-50次左右后.细胞分裂的能力就会逐渐减弱.甚至完全丧失.细胞便进入衰退期。 ③衰退期：处于衰退期的培养细胞.增殖速率已经变得很慢或不再增殖.直至最后衰退死亡。 以上特点.主要是针对体外培养的机体正常细胞.对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言.永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力.这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。 ⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态.也称悬浮期。此时细胞质回缩.胞体呈圆球形。时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上.游离期结束。底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动.而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长.活力最佳.最适合进行实验研究。⑤停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后.细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度限制 . .
PCR及细胞培养技术题库1-0-8
PCR及细胞培养技术题库1-0-8问题：[单选]二氧化碳培养箱结构的核心部分，主要是（）A.湿度调节装置B.湿润的含水托盘C.湿度调节器D.CO2调节器、温度调节器和湿度调节装置E.气体保护器装置问题：[单选]TaqDNA聚合酶酶促反应最适温度为（）A.37℃B.50℃～55℃C.70℃～75℃D.80℃～85℃E.94℃～95℃问题：[单选]PCR反应正确过程应为（）A.退火→变性→延伸B.变性→退火→延伸C.退火→延伸→变性D.变性→延伸→退火E.延伸→变性→退火(11选5 )问题：[单选]温度均一性较好的PCR仪为（）A.A.水浴锅PCR基因扩增仪和压缩机PCR基因扩增仪B.B.半导体PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪C.C.压缩机PCR基因扩增仪和半导体PCR基因扩增仪D.D.压缩机PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪E.E.水浴锅PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪问题：[单选]PCR扩增仪升降温速度快有很多优点，以下哪一项应除外（）A.缩短反应时间B.提高工作效率C.消除位置的边缘效应D.缩短非特异性反应时间E.提高反应特异性问题：[单选]二氧化碳培养箱调节CO2浓度范围为（）A.0%～20%B.20%～40%C.10%～20%D.20%～30%E.30%～40%问题：[单选]以空气为加热介质的PCR仪是（）A.金属板式实时定量PCR仪B.96孔板式实时定量PCR仪C.离心式实时定量PCR仪D.各孔独立控温的定量PCR仪E.荧光实时定量PCR仪问题：[单选]SteadySlope技术是下列哪一家公司的专利技术（）A.eppendorf公司B.MJ公司C.Cepheid公司D.Roche公司E.ABI公司。
植物细胞培养测试题
植物细胞培养测试题(总8页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--实验室及设备单元复习题1．组培能够进行，其理论依据是＿＿＿＿和＿＿＿＿-。
2．接种室要求室内＿＿＿＿，墙面＿＿＿＿，门为＿＿＿＿，并设置＿＿＿＿，防止出入时带进杂菌。
3．紫外灯灭菌利用＿＿＿＿＿波长左右的紫外光，它的灭菌强度较弱，须离被灭菌物＿＿＿＿。
4．配制培养时，一般先配制母液，其目的在于＿＿＿＿-和＿＿＿＿-。
6．pH值一般调节为＿＿＿＿，常用＿＿＿＿和＿＿＿＿方法来进行。
7．压力单位中1kg/cm2＿＿＿＿Mpa,,在 mPa时锅内温度为＿＿＿＿。
9．蔗糖使用浓度为＿＿＿＿%，它主要起＿＿＿＿作用。
二、名词解释20分1.外植体2.愈伤组织3.灭菌4.细胞全能性5.脱分化三选择题10分1.接种工具灭菌常采用（）①灼烧②高压③过滤④熏蒸2.具有促进愈伤组织生成的物质是（）①VPP ②VB1 ③VB6 ④甘氨酸3.微量元素母液的配制浓度（）① 10倍②100倍③1mg/ml ④10mg/ml四、问答题40分1 配制培养基时，使用生长调节物质的原则是什么?2. 无菌接种室怎样做好接种前的灭菌工作3. 高压灭菌器的使用程序怎样4 MS培养基的名称来源及特点5 为什么要配制母液，配制时要注意什么6 表面灭菌如何操作?培养基章复习题一、填空（20分）1．配制培养时，一般先配制母液，其目的在于＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。
2．培养架一般长为＿＿＿＿＿米，宽为＿＿＿＿米。
3．培养基PH值一般调节为＿＿＿＿＿，常用＿＿＿＿和＿＿＿＿＿方法来进行。
4．培养基中缺铁会使幼苗＿＿＿＿，培养基中以＿＿＿＿＿形式加入铁。
5．磷是构成＿＿＿＿的主要成分，这种物质又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。
磷也是＿＿＿＿的成分、这是一种常见的直接能量物质。
6．琼脂加入浓度大约是___________，蔗糖加入浓度大约是______________ 。
细胞实验试题及答案
细胞实验试题及答案1. 细胞培养中常用的培养基有哪些？- 答案：常用的细胞培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM、F12等。
2. 细胞传代时应注意哪些事项？- 答案：细胞传代时应注意以下事项：1. 使用无菌操作技术。
2. 确保培养基新鲜且无污染。
3. 传代时细胞应处于健康生长状态。
4. 传代比例要适当，避免细胞过于拥挤或过于稀疏。
3. 细胞冻存液的主要成分是什么？- 答案：细胞冻存液的主要成分包括：1. 基础培养基。
2. 冷冻保护剂（如DMSO）。
3. 血清。
4. 细胞凋亡的形态学特征有哪些？- 答案：细胞凋亡的形态学特征主要包括：1. 细胞体积缩小。
2. 细胞核浓缩。
3. 细胞膜泡化。
4. DNA片段化。
5. 细胞周期各阶段的特点是什么？- 答案：细胞周期各阶段的特点如下：1. G1期：细胞生长，进行RNA和蛋白质的合成。
2. S期：DNA复制。
3. G2期：细胞继续生长，准备进行分裂。
4. M期：细胞分裂。
6. 细胞转染常用的方法有哪些？- 答案：细胞转染常用的方法包括：1. 脂质体介导的转染。
2. 电穿孔。
3. 病毒载体转染。
7. 细胞克隆形成实验的步骤是什么？- 答案：细胞克隆形成实验的步骤包括：1. 细胞消化。
2. 细胞计数。
3. 细胞稀释。
4. 细胞培养。
5. 克隆选择。
6. 克隆扩增。
8. 细胞培养中常见的污染类型有哪些？- 答案：细胞培养中常见的污染类型包括：1. 细菌污染。
2. 真菌污染。
3. 支原体污染。
4. 病毒污染。
9. 细胞培养箱的基本条件是什么？- 答案：细胞培养箱的基本条件包括：1. 恒温。
2. 恒湿。
3. 5% CO2环境。
4. 无菌。
10. 细胞毒性实验中常用的检测方法有哪些？- 答案：细胞毒性实验中常用的检测方法包括：1. MTT法。
2. LDH释放法。
3. 细胞克隆形成实验。
4. 细胞存活率检测。
以上是细胞实验试题及答案的排版和格式示例。
细胞培养技术在生物药品制造中的应用考核试卷
B.体外培养
C.基因敲除
D.基因敲入
17.在细胞培养过程中，下列哪种物质可以促进细胞贴壁生长？（}
A.胰蛋白酶
B.纤维连接蛋白
C.酚红
D.胶原蛋白
18.下列哪种细胞培养方法可以实现高密度培养？（}
A.摇瓶培养
B.微载体培养
C.固定化细胞培养
D.流动床培养
19.细胞培养中，下列哪种现象可能是细胞代谢异常的标志？（}
1.细胞培养技术主要用于以下哪种生物制品的生产？（）
A.化学药品
B.抗体药物
C.农药
D.矿物质药品
2.下列哪种细胞系最常用于生物药品的制造？（）
A.小鼠成纤维细胞
B.大肠杆菌
C.人胚胎干细胞
D.病毒
3.在细胞培养过程中，用于贴壁细胞生长的容器通常为？（）
A.滑面培养瓶
B.颗粒培养瓶
C.摇瓶
D.发酵罐
答案：
标准答案
一、单项选择题
1. B
2. C
3. A
4. B
5. A
6. A
7. A
8. A
9. B
10. B
11. C
12. D
13. C
14. D
15. B
16. B
17. B
18. D
19. D
20. B
二、多选题
1. ABD
2. ABCD
3. ABC
4. ABC
5. ABC
6. ABC
7. ABCD
3.优化培养条件包括使用富营养培养基、适宜的环境条件、添加生长因子和采用高密度培养技术。
4.不同生物反应器适用于不同规模和类型的细胞培养。摇瓶适用于小规模，发酵罐适用于大规模，微载体和流动床可实现高密度培养，各有优势和局限性。
细胞培养试题
细胞培养试题细胞培养是一项重要的实验技术，在生物医学研究和药物开发领域具有广泛的应用。
本文将介绍细胞培养的基本原理、步骤和相关技术，并附上一些常见的细胞培养试题，帮助读者巩固对细胞培养的理解和应用。
一、细胞培养的基本原理细胞培养是通过模拟体内环境，使细胞在体外生长和繁殖的过程。
其基本原理是将细胞从生物体中取出，营养培养液中提供适当的营养物质和生长因子，以及合适的温度、湿度和气体条件，创造出类似于体内的环境，从而使细胞在培养皿或培养器中持续增殖。
细胞培养可以分为原代细胞培养和细胞株培养两种类型。
原代细胞培养是指从生物体中提取的未经分离纯化的细胞，而细胞株培养则是通过无限次的细胞分裂后，形成一株生长相对稳定的细胞系。
二、细胞培养的步骤1. 细胞的收获和制备：从活体器官或组织中取得细胞，通过机械或酶解方法将细胞分离，并制备成单细胞悬液。
2. 细胞的传代和分离：将原代细胞悬液接种到培养皿中，在适当培养条件下使其增殖。
当细胞达到一定密度时，需要进行传代，即将细胞移植到新的培养皿中继续培养。
3. 细胞的培养和维持：根据细胞特性，选择合适的培养基和培养条件，如温度、湿度和CO2浓度等，维持细胞的正常生长和增殖。
4. 细胞的检测和鉴定：通过形态学观察、免疫细胞化学染色等方法，鉴定细胞的纯度、稳定性和功能。
5. 细胞的应用和使用：将培养好的细胞应用于各种实验和研究中，如体外毒理学、药物筛选和细胞凋亡研究等。
三、1. 请简要介绍细胞培养的基本原理和步骤。
2. 原代细胞培养和细胞株培养有什么区别？3. 细胞的传代是什么意思？为什么需要传代？4. 请列举一些常见的培养基和培养条件。
5. 如何判断细胞的纯度和稳定性？6. 细胞培养在哪些领域有广泛的应用？7. 解释细胞凋亡的概念和细胞培养中相关的实验方法。
8. 如何选择合适的细胞培养器具？9. 细胞培养中常见的问题和解决方法有哪些？10. 请简述细胞培养的意义和挑战。
以上是一些常见的细胞培养试题，通过回答这些问题，读者可以进一步巩固对细胞培养的理解和应用，同时增加对细胞生物学的整体认识。
细胞培养考试题目
细胞培养考试题目(总3页) -本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-细胞培养特性：分为贴壁性（上皮细胞型、成纤维细胞型）和悬浮型（白细胞、癌肿细胞）体外培养细胞生长特点：贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。
原代培养（原代细胞）：取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前称为原代培养或原代细胞。
传代培养：细胞持续生长繁殖一段时间，到达一定浓度之后，就应当将细胞分离成两部分（或更多）至新的培养器皿，并补充更新培养液。
细胞系：原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。
有限细胞系：一般正常细胞系的寿命只能维持一段时间期限。
无限细胞系：传代中极少的后代发生转化，通过“危机期”，获得不死性而具有持久或无限增值能力，这种永生化细胞即为无限细胞系。
细胞株：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株。
克隆：在动物细胞培养中从细胞群体中分离出一个细胞开始，其在体外无性繁殖成新的基因型相同的细胞群体，这种纯化的细胞群称为细胞株，他们中的每个细胞的遗传特征及生物特性极为相似，常用的细胞克隆技术有有限稀释法和平皿克隆分离法。
杂交瘤技术：主要由免疫动物、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养、单克隆抗体的制备与鉴定等一系列实验组成的实验系统，核心是细胞融合。
杂交瘤：由产生抗体的肿瘤细胞与抗原-刺激的正常浆细胞融合而形成的细胞，这种细胞产生的抗体称为单克隆抗体。
基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。
筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤细胞的特性，可长期传代培养，又可在液氮中保存的细胞。
把这些细胞单克隆化，用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。
细胞杂交：通过人工培养和诱导将不同种生物或同种生物不同类型的两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。
杂交技术过程:①免疫动物及细胞培养:用特定抗原免疫纯系动物获得预定抗体B 淋巴细胞,利用细胞融合技术可使短寿命抗体形成细胞与能永久生长的同种骨髓瘤细胞系融合,获得既有分泌抗体能力,又有无限繁殖能力的细胞②筛选杂交瘤细胞(在具有筛选作用的培养基上培养)③克隆化培养④单克隆抗体的大量制备与鉴定(动物体内诱生法和体外培养法)⑤进一步分离和纯化单克隆抗体,鉴定单克隆抗体类型及亚类,测定抗体亲和力以及相应抗原的分子量等.显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，其计算公式是σ=λ/NA 式中σ为最小分辨距离；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径。
细胞培养复习题(含答案)
1 1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型? ⑴按生长方式分为二型： 粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。） ⑵可分四型：(1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞 2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程 ⑴通常，体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段： ①原代培养期：也称初代培养，是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。此期的细胞呈现出活跃移动的特点，可见细胞分裂，但不旺盛。处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。细胞群具有明显的异质性，细胞间的相互依存性强，在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。 ②．传代期 ：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期，原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。一般情况下，正常体细胞在传代10-50次左右后，细胞分裂的能力就会逐渐减弱，甚至完全丧失，细胞便进入衰退期。 ③衰退期：处于衰退期的培养细胞，增殖速率已经变得很慢或不再增殖，直至最后衰退死亡。 以上特点，主要是针对体外培养的机体正常细胞，对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言，永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力，这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。 ⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态，也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束。底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。⑤停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度限制 2
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1.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。
激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞核血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。
（在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
）2.谷氨酰胺在细胞培养中起什么作用及使用方法？作用：几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
使用方法：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃保存，临用前加入培养液。
配制方法：谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。
3.如何用台盼兰计数活细胞？正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
（用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。
轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。
）4.如何消除组织培养的污染？确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。
（一）认真做好外植体的选择和消毒工作，防止外植体带菌。
（二）改善接种室和培养室的环境条件，保证接种与培养环境清洁无菌。
（三）操作人员严格遵守无菌操作规程。
（四）培养基及接种工器具要严格灭菌，确保灭菌质量。
（五）在培养基中加入适量的抗生素。
（六）利用病毒在植株体内分布不均匀的原理，生产脱毒苗。
（七）利用培养基中高盐或高糖的浓度，抑制微生物的生长。
（八）减少培养基中的某些有机成分，可抑制微生物的生长繁殖。
5.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
6.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？胎牛血清没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。
由–20℃至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。
7.二价离子会抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的？二价离子能够抑制胰蛋白酶活性。
EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。
在胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
8. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？液体培养基冷冻后再经融化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往会变碱，某些成分溶解也会受到影响，对细胞生长不利，故培养液一定要存放在冷藏条件下。
9.培养用液pH对细胞生长的影响？由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围可能对细胞生长产生有害的影响。
但各种细胞对pH的要求不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受能力强。
但总的来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些。
10.MTT法的原理？又称细胞增殖检测活细胞线粒体中琥珀脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物甲臢（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。
二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。
用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定甲臢染料的吸光值，可间接的反应活细胞数量。
细胞培养实验室的基本设备有哪些常用的基本设备：1、仪器：显微镜、培养箱、干燥箱、水纯化装置、冰箱或冷藏箱、细胞冷冻储存器、离心机、天平、消毒器、滤器；2、基培养用器皿：培养瓶、培养皿、多孔培养板；3、培养操作有关器皿：贮液瓶、吸管、加样器等；4、用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。
特殊设备：酶联免疫检测仪，超低温冰箱，旋转培养器，荧光显微镜，流式细胞仪及其他用于检测细胞培养条件的各种仪器。
（【实验设备】：无菌操作室(包括更衣间，缓冲间和操作间）准备室的设备：三蒸水器，酸缸，烘箱，高压锅，储品柜（放置未消毒物品），储品规（放置消毒过的物品），包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品），PH计（测量培养用液PH值），磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液），滤器及泵。
培养室的设备：液氮罐，储品柜（存放杂物），日光灯和紫外灯，空气净化器系统，低温冰箱（-80℃），空调，二氧化碳缸瓶，边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞），超净工作台，倒置显微镜，CO2孵箱（孵育培养物），水浴锅，4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
）1.培养器皿的清洗与消毒玻璃器皿的清洗一般经过浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（24小时）、和清洗（流水冲洗和蒸溜水冲洗）四个步骤，然后50℃烘干。
新的橡胶制品洗涤方法0.5M NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，0.5M HCl煮沸15分钟，流水冲洗，自来水煮沸2次，蒸馏水煮沸20分钟，50℃烤干备用。
压力蒸汽消毒器：湿热消毒，15磅，维持20-30分钟。
消毒前常用的包装材料：牛皮纸、棉布、铝饭盒*电热干燥箱：干热消毒，160℃～180℃，维持2小时。
主要用于玻璃器皿消毒。
3.培养用液有哪些水、平衡盐溶液（PBS、D-Hank,s液）、碳酸氢钠液、HEPES缓冲液、胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液、抗生素溶液、天然培养基（血清、血浆、组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液））和合成培养基（包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物；目前常用培养基：RPMI-1640、DMEM、M199、MEM）4.如何进行细胞计数，注意什么，细胞计数法：就是从需要计数的细胞悬液中取出一定量细胞进行计数，并通过计数得知原始细胞悬液中的细胞密度以及细胞总和数。
在细胞计数时，若细胞浓度太高，可进行必要的稀释。
血球计数板每一大方格长为1mm ，宽为1mm ，高为0.1mm ，体积为0.1mm3，可容纳的溶液是0.1μl ，那么每ml 溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的1000 0 倍。
实验步骤（一）准备计数板：用酒精清洁计数板和盖玻片，然后用吸水纸轻轻擦干。
（二）制备细胞悬液：用胰蛋白酶消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞，制成单个细胞悬液。
要求细胞密度不低于104 /ml ，若细胞数很少，应将悬液离心（1000rpm ，2min ），重悬浮于少量培养液中。
（三）加样：将盖玻片盖在计数板两槽中间。
用吸管轻轻吹打细胞悬液，吸取少量细胞悬液，在计数板上盖玻片一侧加细胞悬液，加样量不要溢出盖玻片，也不要过少或带气泡。
否则要将计数板和盖玻片擦干净重新加样。
（四）计数：在显微镜下，用10 ×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，细胞压中线时，只计左侧和上方者，不计右侧和下方者。
（五）计算：将计算结果代入下式，得出细胞密度。
细胞数/ 毫升原液= （4 大格细胞数之和/4 ）×104×稀释倍数）注意事项（一）消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单个细胞悬液，否则会影响细胞计数结果。
（二）取样计数前，应充分混匀细胞悬液。
在连续取样计数时，特别应该注意这一点，否则前后计数结果会有很大误差。
（三）镜下计数时，遇到2 个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。
如细胞团占10% 以上，说明消化不充分；或细胞数少于200 个/10mm2或多于500 个/10mm2时，说明稀释不当，需重制备细胞悬液、计数。
5.台盼蓝细胞染色步骤1、4%台盼蓝母液：称取4克台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水100ml，用滤纸过滤，4度保存，使用时用PBS稀释至0.4%（也可以买Gibco的成品）；2、胰酶消化贴壁细胞，制作单细胞悬液，并作适当稀释；3、染色：细胞悬液与0.4%的台盼蓝溶液以9:1混合均匀（终浓度0.04%）；4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞；5、镜下观察：死细胞被染成蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状；6、统计细胞活力：活细胞率（%）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）*100%。
6.MTT比色法实验步骤普通MTT法实验步骤：1.接种细胞：用含10%胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个接种于96孔板，每孔体积200ul。
2.培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可以根据实验目的和要求决定培养条件）。
3.呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml 用PBS配成，pH=7.4）20ul继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO,脱色摇床振荡10min，使结晶物充分溶解。
4.比色：选择570nm（490nm）波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
7.细胞冷冻与复苏方法细胞冷冻方法：1.消化细胞，将细胞悬液收集至离心管中。
2.1000rpm离心10min，弃上清液。
3.沉淀，加含保护液的培养液，计数。
4.将细胞悬液分装至冻存管中，每管1m l。
5.将冻存管封严。
6.贴上标签，写上细胞种类，冻存日期。
7.先将冻存管放入4℃冰箱，约40min。
8.接着置于-20℃冰箱，约30-60min。
9.置于-80超低温冰箱中放置过夜。
10.置于液氮罐中长期保存。
11.同时做好冻存记录，在自己的笔记本和冻存记录本上均要记录。
细胞复苏方法：1）从液氮中取出冷冻管，迅速投入37℃-38℃水浴中，使其融化（1分钟左右）；（2）5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上；（3）低速离心10分钟；（4）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。
（细胞复苏方法实验前准备： 1.将水浴锅预热至37℃。
2.用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。
取出冻存管：1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
2.从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
迅速解冻：1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。
2.约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。
平衡离心：用架盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min 离心3min 。
制备细胞悬液： 1.吸弃上清液。