细胞培养基本知识基本技术
细胞培养技术中的基础知识与操作技巧
细胞培养技术中的基础知识与操作技巧细胞培养技术是现代生物学和医学领域中不可或缺的技术之一。
利用细胞培养技术，我们可以研究细胞生长、发育、分化、疾病等方面的基本问题，也可以应用于药物筛选、细胞治疗、工程组织等领域。
本文将向您介绍一些细胞培养技术中的基础知识和操作技巧。
一、选择培养物在进行细胞培养之前，首先需要选择合适的细胞种类和培养物。
常见的培养物包括DMEM、RPMI1640、MEM等等，不同的培养物适用于不同类型的细胞，具体应该根据细胞种类和实验需求来选择。
此外，培养物中一般也会添加一些重要的成分，如胎牛血清、人血清、靶向蛋白、激素等等，这些成分的含量和种类也会影响细胞的生长与生理状态。
二、细胞培养的基本步骤细胞培养的基本步骤包括细胞的分离、细胞的培养和细胞的观察与分析。
1. 分离细胞分离细胞是细胞培养中的关键步骤之一，通常采用酶消化法和机械法两种方式。
通过酶消化法，可以使细胞与培养皿表面解离，从而得到单个或小团细胞；而机械法则是通过振荡或刮擦来达到分离细胞的目的。
2. 细胞的培养将分离好的细胞加入到预先涂覆有培养物的培养皿中，并将培养皿置于恒温箱（37℃，5% CO2）中培养。
在细胞生长的过程中需要定期更换或添加培养物。
3. 细胞的观察与分析细胞的观察可以通过显微镜来实现，观察细胞形态、大小、数量、移动等生长状态；而细胞的分析则可以利用细胞计数仪、细胞分选仪、PCR等技术，对细胞进行数量统计和功能评估。
三、细胞培养常见问题及应对方法在进行细胞培养的过程中，常会遇到一些问题。
例如，细胞不能够生长或生长缓慢；细胞死亡严重；细胞感染等等。
以下是一些常见问题以及针对问题的解决方法：1. 细胞不能够生长或生长缓慢这种情况可能是培养物失活或者浓度不足，这时候需要更换新鲜的培养物，或者调整培养物的含量。
2. 细胞死亡严重细胞死亡可能是由于细胞抗性引起的，这时候可以根据细胞类型来调整培养条件和细胞密度；另外，也有可能是由于感染、缺氧等过程中引起的，需要及时采取相应的处理措施。
实验室细胞培养基本知识
细胞培养箱的无菌
• 培养箱是主要的污染源，应每学期做彻底清洁（箱体、架子、 隔板、托盘），可用70%酒精充分擦拭，并完全挥发晾干。
• 培养箱使用时底部湿盘要加入1%硫酸铜。 • 培养细胞时，尽可能选购带渗透盖的培养瓶，不仅可以在CO2
环境中迅速达到平衡，而且不会有污染的危险。
细胞培养中的无菌操作
• 紫外灭菌：洁净台使用前、使用中的间隙、使用后都要用紫外灭菌，但 光束的有效性有限，因为它不能达到缝隙中。
• 70%酒精擦拭：洁净台使用前、使用中有溢出物、使用后都要擦拭，各 种试剂瓶、储液瓶、培养瓶、培养板和培养皿，放入洁净台之前，必须 用 70% 乙醇擦拭其外部，注意要选用抗乙醇的记号笔。
细胞培养中的无菌操作
• 加盖：所有试剂瓶子要用深螺旋的聚丙烯盖子，使用时要将盖 子口朝下放置在工作区域，不用时要及时盖好，但可以不用旋 紧。
• 灼烧：开放工作台才需要灼烧，细胞培养用的洁净台中不需要 也不建议灼烧、明火既破坏了层流又难以除去生物危害物质， 还带来了火灾隐患，明火带来的高温还会影响HEPA过滤的寿命。
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
准备与灭菌
灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌：160℃， 1h；
新鲜培养基，为其提供更多继续生长的空间。 • 细胞系：首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。 • 细胞株：如果将细胞系的一个细胞通过克隆或者其他方法从培养物中
细胞培养基本技术
医学实验中心 闾宏伟
主要内容
细胞培养的基本概念 细胞培养的基本条件 细胞培养用液的配制 细胞培养的基本方法 培养细胞活力测定 细胞冻存和复苏 细胞培养的污染和检测
一、基本概念
细胞培养(cell culture)：在体外条件下，模 拟体内的生理环境，用培养液维持细胞生 长与增殖的技术。 组织培养 (Tissue culture)：把活体的一小 片组织（O.5～1立方毫米）置于底物上孵 育，细胞自其周围移出并生长。 器官培养 (Organ culture)：将活体中整个 器官或一部分器官取出，置于体外生存、 生长并同时保持其一定的结构和功能特征。
血清解冻步骤
逐步解冻法
–20℃ 或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室 温下全溶后再分装，一般用50 ml无菌离心管可 分装40～45 ml。
勿直接由–20℃至37℃解冻，因温度改变 太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
无机盐
CaCl2 、KCl 、MgSO4、 NaCl 、 NaHCO3 、NaH2PO4 对调节细胞渗透压、某些酶的活性 及溶液的酸碱度都是必须的。
酶液等均采用滤过法除菌。
安装滤膜时注意：滤膜光滑一面是正面，要朝
上，否则起不到过滤的作用。
CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2 使用CO2培养箱应注意的问题：
。
①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，
以保证通气。 ②保持培养箱内空气干净，定期消毒擦拭。 ③箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水3000 毫升，以保持箱内湿度。
抗生素溶液
通常是青霉素和链霉素联合使用，俗称“双抗 溶液”。
细胞培养基本知识
（2） 传代期培养：初代培养的细胞生长到一定 程度，即可连接传代，使其连续生长。一般正常 二倍体细胞，不加附加条件，可传代30-50代， 此时可发生染色体丢失、突变、细胞增殖变慢、
停止分裂，进入衰退期，我们称之有限细胞系。
这一转折点有人称之危象临界点（crisis），有 些细胞的少数后代，或通过人工条件转化的细胞 可通过这一期，获得持久的增殖传代能力，我们 称细胞系，或无限细胞系，即一般通称的细胞系。
（3） 细胞作为生命活动的基本单位的共同特点： 首先所有细胞 表面均有一层脂蛋白成分的生物 膜，即细胞膜，使细胞能与周围环境保持相对独 立性； 其次，所有细胞都有两种核酸，即DNA和RNA 作为遗传信息的复制和转录的物质基础； 第三作为蛋白质合成的“机器”-核蛋白，是一 切细胞不可缺少的基本结构； 第四所有细胞都是以一分为二的分裂方式增殖。 第五，细胞具有多样性，形状、大小悬殊很大， 结构复杂程度也很不一样。
株（Cell strain)
4. 组织（细胞）培养的医学生
物学意义
（1） 培养的组织器官或细胞，能在一定范围和 程度上反映生命活动规律和机体功能特点。培养 的细胞为生命科学和生物医学各种研究奠定了物
质基础
（2） 细胞培养与生物工程：细胞培养技术已经 成为商品化生物技术的核心。如目前可提供的产 品，病毒疫苗：口蹄疫、狂犬疫苗、乙肝疫苗； 非抗体型免疫调节剂：干扰素、白介素、集落刺
（3） 衰退期：传代细胞到达一定代数，即发生 增殖缓慢，逐 渐停止，进而发生衰退、死亡， 多数传代细胞（或叫有限细胞系），不能通过所
谓的“crisis（危象临界点），导致最终死亡，
这一现象可能说明生物学衰老的细胞学基础。人 胚胎成纤维细胞可以进行60代增殖，而80岁老人 的肺成纤维细胞仅传代了16代后便死亡。
细胞培养相关知识点
细胞培养相关知识点
细胞培养是指将细胞从体内或体外来源中采集到培养基中，通过提供合适的营养物质和环境条件使其在体外无限制地生长和繁殖的一种生物学实验技术。
常见的细胞培养技术包括原代细胞培养和细胞系培养。
1. 培养基：细胞培养中使用的培养基是包含多种营养物质的液体或固体培养基。
常见的培养基种类包括DMEM、RPMI-1640、MEM等，并根据细胞的类型和特殊需要进行相应的改制。
2. 细胞分离：通过一系列的操作将组织中的细胞分离出来，常用的方法有机械剪切、酶消化和离心等。
3. 细胞传代：细胞的传代是指将细胞从旧的培养皿中转移到新的培养皿中，以保持细胞的生长状态和增殖能力。
细胞传代的方法有裂解法、胶原酶法和选择性黏附法等。
4. 培养条件：细胞的生长需要适宜的温度、湿度、pH值和气体环境。
常见的培养条件为37℃、5% CO2和95%湿度。
5. 防止细胞污染：细胞培养中常见的污染源有细菌、真菌和支原体等。
常用的防止污染的方法包括消毒培养器具和介质、使用无菌操作等。
6. 细胞检测：常用的检测方法包括细胞形态观察、细胞数量计
数、细胞活力测定、染色体核型分析和细胞分化等。
7. 细胞培养的应用：细胞培养技术在生物医学研究中有广泛的应用，如药物筛选、疾病模型建立、组织工程和基因工程等。
注：以上所列举的知识点为细胞培养的基本内容，具体的细胞培养操作方法和技巧可根据具体实验需求和细胞类型进行进一步学习。
细胞组织培养技术3篇
细胞组织培养技术第一篇：细胞培养技术的基础知识细胞培养技术是生物学及其相关领域中的一个重要分支，其通过在体外培养已经分离出来的组织和细胞，以及从原料中获得的其他细胞或细胞系，来进行生物学及医学相关的实验研究，具有广泛的应用价值。
细胞培养技术的起源可以追溯到19世纪末期，当时生物学家Robert Koch首先建立了来自斑点病人的细菌培养技术，从而开创了细菌研究的全新领域。
20世纪上半叶，细胞生物学家和肿瘤学家开始将植物和动物细胞培养的方法应用于研究，逐渐发展出了细胞培养技术的基础知识。
在现代细胞培养技术中，主要包括以下几个方面：1.细胞培养基的制备细胞培养基是进行细胞培养的最基本要素，其基本成分包括营养物质、激素、生长因子等。
常见的细胞培养基有DMEM、RPMI1640、MEM等，此外还有更为复杂的定制培养基，其成分和配比需要根据不同的实验要求而定。
2.细胞培养条件的控制细胞培养需要一些特殊的环境条件，如适宜的温度、湿度、物质浓度、气体含量等。
实验时需要定期检查细胞培养条件是否合适，从而保证细胞的正常生长和増殖。
3.细胞培养器的选择细胞培养器主要有平底培养皿、培养瓶、滚筒式培养器等，不同的培养器在不同的实验中会有不同的选择，从而满足不同的实验要求。
4.细胞的分离和传代细胞在培养中会出现一些问题，如纷繁多样的细胞类型、生长速度过快或过慢、细胞死亡等。
此时需要进行细胞分离和传代，将健康的细胞分离出来，进行下一轮的培养或实验。
以上是细胞培养技术的基础知识，掌握了这些基础知识之后，才能够更好地进行实验和开展研究工作。
第二篇：细胞培养技术在医学研究中的应用细胞培养技术的广泛应用在许多领域都产生了积极的影响，其中医学研究成为了细胞培养技术应用最为广泛的领域之一。
细胞培养技术在医学研究中的应用有以下几个方面。
1.药物筛选细胞培养技术在医药研究中有着广泛的应用，其中药物筛选是其最为重要的应用之一。
通过对不同细胞系的培养实验，可以筛选出对某种疾病有治疗作用的药物，并对其进行实验验证。
细胞培养技术
二、培养细胞的特性
培养细胞的生长特点
贴附
贴附
贴附是贴附类细胞生长增殖条件之一 以成纤维细胞为例，一般在细胞接种后，很快
（5-10min）便可见细胞以伪足初期附着，与底物
形成一些接触点；接着细胞逐渐呈放射状地伸展
开，细胞体的中心部分亦随之扁平；最后细胞成
为成纤维细胞的形态。
1. 培养细胞的生长方式及类型
五 细胞冷冻保存
1. 冷冻保护剂浓度为5 或10 ％ DMSO，
冷冻方法： 传统方法8小 时(或隔夜)--> 液氮槽蒸汽相中长期储存。
2. 材料用品
1） 2） 3） 4） 生长良好的培养细胞 新鲜培养基 DMSO (Sigma D-2650) 无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)
四、细胞传代培养
1. 细胞生长至高密度时，即须分殖至新的培养瓶中，一 般稀释比例为1:3 至1:6，依细胞种类而异。 2. 材料用品： PBS,0.25%胰酶, 新鲜培养基
3. 步骤：
3.1. 贴壁型细胞 1） 吸掉旧培养液。
2） 用PBS 洗涤细胞一至二次。
3） 0.25%胰酶37℃ 作用数分钟，于倒置显微镜下观察，当细 胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉胰酶溶液。
1. 细胞培养(cell culture)概念
从生物体内取出细胞或组织，在体外模拟体内生理环境，在 无菌、适当温度和一定营养条件下进行孵育培养，使之生存
和生长并维持其结构和功能的技术。
体内、外细胞的差异
体内细胞：
机体神经体液调节 和其他类型细胞影响 基因表达受到外来信号调节 增殖过程中不断发生着分化 （由一般到特殊） 高度特化的结构和功能
3. 操作步骤：
细胞培养基本知识基本技术
医学院 中心实验室 谷景义 85225841
主要内容： •1、细胞培养基本知识 •2、培养细胞生长环境 •3、细胞培养基本技术
•4、培养细胞质量控制
一、 细胞培养
• 把取得的组织用机械或消化的方法分 散成单个细胞，用培养基制成细胞悬 液，在体外适宜条件下，使细胞生长 繁殖，并保留其一定的结构和功能特 性。
二、培养细胞生长环境
Cell Culture Environment
Substrate Gas Medium Serum Supplements
Glass ﹠ Plastic Culture Vessels ……
O2 CO2
……
pH Osmolality Temperature ……
Hormones FBS Growth factors NCS Antibiotic ……
培养细胞的特性1 -生长方式及类型
• 贴附型、悬浮型
培养细胞的特性2 - 增殖特点
• 体外培养的细胞既保持了一定的体内细 胞的基本特性，但也具有本身的一些特 点。 • 贴附-伸展 • 接触抑制-增殖的密度抑制
贴附-伸展
接触抑制
• 当一个细胞被其他细胞围绕导致无处 可去而保持接触时，细胞不再移动， 在接触区域的细胞膜活动将停止。 • 因此，一般正常细胞并不相互重叠于 其上生长。
• 应用： • 软骨和骨组织（软骨细胞和干细胞，再生损伤的软骨、骨） • 循环系统和心脏（有目的地改变血管形成）
细胞培养技术的特点及应用
优点：
1）研究的条件可以人为控制 2）研究的样本均一 3）研究内容方便观察、检测、记录 4）研究的费用相对于经济
缺点：体外培养的细胞不能完全Байду номын сангаас同于体 内的细胞。
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• 细胞系亚系：由某一细胞系分离出来，在性状
上与原细胞系不同的细胞系，称该细胞系的亚系
• 有限细胞系：如果不能
继续传代或传代有限， 可称为有限细胞系。
• 连续细胞系：能够连续
传代的细胞叫做“连续 细胞系或无限细胞系。 可培养50代以上并无限 培养下去。
• 大多数的二倍体细胞为 有限细胞系。无限细胞 系大多已发生变异。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
EDTA· 4Na 溶液
• 一种化学螯合剂，对细胞有一定的离散作用， 而且毒性小，价格低廉，使用方便 • 常用工作液浓度为0.02%。 注意：使用EDTA 处理细胞后，要用平衡盐液 冲洗干净，因残留的EDTA 会影响细胞生长
D-Hanks’ 平衡盐溶液(D-Hanks Balanced Salt Solutions, D-HBSS)
• 原代细胞：从机体取得组织材料，在体外
培养生长，到第一次传代前。
• 传代细胞：当原代细胞持续生长繁殖一段
时间，达到一定的细胞密度后传代的细胞。
培养瓶培养法
方法： 将培养对象直接接种于培养瓶内，再放 入培养箱进行培养。
优点： 1、可以避免培养瓶表面粗糙等原因对培养物 的影响。 2、可以方便地进行显微镜观察、染色等操作， 以及永久保存。 3、增加了培养瓶的培养面积。
气相和PH
• 5% CO2 + 95%空气混合气体（O2）。 • CO2既是细胞生长所需，同时又是细 胞代谢的产物，并与维持培养基的PH 有关。 • 最适PH 7.2 – 7.4 • 低于PH 6.8或高于PH7.6可能对细胞有 害，甚至死亡。
细胞增殖密度抑制
• 当细胞生长汇合形成单层时，细胞变得比 较拥挤，这时其分裂停止，这种细胞可在 静止状态下维持存活一段时间，但不会继 续分裂生殖。
• 转化细胞或恶性肿瘤细胞与正常细胞不同，他们 的接触抑制和增殖密度抑制常常降低，因而可以 增殖至较高的终末细胞密度。
培养细胞的特性3 -生长过程
• 单个细胞增殖：细胞周期
用含血清培养液终止其对细胞的消化作用
•
•
胰蛋白酶溶液配制 • 胰蛋白酶粉末置烧杯中，用少许D-Hanks 平衡盐溶液调成糊状，再补足D-Hanks 平 衡盐溶液（常用浓度为0.25% ）搅拌混匀， 置室温 4 小时或冰箱过夜，不断搅拌振荡 • 次日，先用滤纸粗滤，再进行过滤除菌， 分装入瓶中， -20℃保存备用（以免分解 失效）， • 胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可用碳酸氢钠 溶液调 pH 至7.2 左右
化后移植；组织工程软骨损伤修复；试管婴儿……
二、培养细胞生长的条件
营 养 需 要 环 境 要 求 无毒及无污染
1 、细胞的营养需求
• （1）氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子 • （2）促生长因子等 • • • • • 完全培养基的组成： 基础培养基 血清 碳酸氢钠 青、链霉素
80％一95％ 5％一20％ 2.0 g/L 各100单位／毫升
• 饱和密度：在特定条件下，培养器皿内能
达到的最高细胞数，当细胞达到饱和密度后细胞 群体停止繁殖。
• • • •
潜伏期/滞留期 指数增长期 平台期/停滞期 退化或死亡
• 细胞系的生长过程
• 细胞系：原代培养细胞经首次传代成功后即成为
细胞系，可泛指一般可以传代的细胞。
• 细胞株：通过筛选或克隆化，从原代细胞或细胞
• 血清质量好坏是实验成败的关键。 • 常用血清： 胎牛血清、小牛血清、兔血清、马血清等， 以胎牛血清质量最好。
• 优质血清的标准： 透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、 病毒污染。
pH 调整液
• NaHCO3 溶液（碱）
▫ 常用浓度为7.5%。配制时用三蒸水溶解后，过滤除菌或高 压灭菌，分装，4℃保存
缺点：体外培养的细胞不能完全等同于体 内的细胞。
应用
• 病毒学：病毒鉴定，病毒抗原作用，疫苗生产…… • 免疫学：杂交瘤-单克隆抗体…… • 遗传学：染色体分析…… • 肿瘤学：筛选重要的抗肿瘤药物…… • 分化及发育：刺激使细胞群体发生改变…… • 细胞毒实验：药效测试…… • 临床医学及生物技术：干细胞培养定向诱导分
• 抗菌素的使用：
• 在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制可 能存在的细菌的生长。 • 通常是青霉素和链霉素联合使用。 • 最终使用浓度为每毫升100单位。 •
制备1000ml RPMI 1640培养基
RPMI 1640 干粉培养基10.4g（1包） 超纯水 400ml ↓ 磁力搅拌至完全溶解 ↓ 加超纯水定容至1000ml 在超净台内无菌条件下，用灭菌后的并置有 0.22μm 孔径滤膜的过滤器除菌，分装200ml/瓶， -20℃保存备用。 用前取一瓶溶解，每200ml培养液加灭活的 小牛血清至终浓度为10%，即加22ml。加青霉素 和链霉素至终浓度各为100U/ml。
• 应用： • 软骨和骨组织（软骨细胞和干细胞，再生损伤的软骨、骨） • 循环系统和心脏（有目的地改变血管形成）
• 目前常用的三维培养模型： 基质覆盖培养 旋转烧瓶培养 微载体培养 预置支架培养 旋转细胞培养系统 自发性细胞聚集
细胞培养技术的特点及应用
优点：
1）研究的条件可以人为控制 2）研究的样本均一 3）研究内容方便观察、检测、记录 4）研究的费用相对于经济
温度
• 体外培养的细胞需要在保持一定恒温的环境中才 能生长。在达到最适温度（37°）前，一般细胞 繁殖率因温度的升高而增加，但是，温度逐步升 高并超过最适温度时，繁殖会被抑制。 • 当温度在25°- 35°，细胞的生长速度很慢，但 能够生存；细胞在4°也能存活数天；只要温度 不低于0°，细胞都能生存；加了保护剂还能放 到液氮中保存。 • 当高温时，在41°- 42°中培养1h，细胞损伤严 重，43°以上，则多数细胞死亡。 • 高温比低温对细胞的影响更为明显。
• 1907 年 -Harrison用细胞培养解决一个难题
• 盖玻片覆盖凹型载玻片悬滴培养法
悬滴培养法基本步骤
1、在盖玻片上滴加胚胎提取液、血浆和 植块，混匀。培养基凝固后将植块包埋。 2、在凹载片周围涂凡士林。将凹载片向 下压向盖玻片 3、将凹载片反转，盖玻片周围涂溶蜡。 放入培养箱培养
• 1910 至 1923年 – Carrel 和早期的组织培养
血清
• 热灭活：56℃, 30 分钟加热已完全解冻的血清 (目前少用） • 热灭活目的：灭活血清中的补体成分。如果不做 细胞因子和免疫相关的实验，建议血清不要灭活。 热处理造成血清沉淀物增多，影响血清质量。 甚至严重影响细胞生长速度，且细胞贴壁率降低。 • 血清中的沉淀物
– 絮状物：血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成， 这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5 分钟去除，也可不用处理 – 显微镜下“小黑点”：经过热处理过的血清，沉淀物的形成 会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”，常 误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不会影响细胞生 长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批 号的血清
消化液
• 分离组织和分散细胞 • 常用：胰蛋白酶、二乙胺四乙酸二钠(EDTA) • 单独或混合使用
• 胰蛋白酶溶液：
•
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的 肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞 骨架，从而使细胞分离。
• •
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过 一定限度会损伤细胞。 胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。
三维细胞培养技术
• 将具有三维结构不同材料的载体与各种不 同种类的细胞在体外共同培养, 使细胞能 够在载体的三维立体空间结构中迁移、生 长, 构成三维的细胞-载体复合物。
• 普通的细胞培养由于细胞在体外改变的环境下增生逐渐丧失 了原有的性状，往往和体内情况不相符，而动物实验完全在 体内进行, 但由于体内的多种因素制约以及体内和外界环境 相互影响而变得复杂化, 难以研究单一过程，且难以研究中 间过程。三维细胞培养技术是介于单层细胞培养与动物实验 之间的一种技术，既能最大程度的模拟体内环境，又能展现 细胞培养的直观性及条件可控性的优势。
KCl KH2PO4 NaCl NaCO3 Na2HPO4 D-Glucose 0.40g 0.06g 8.00g 0.35g 0.048g 1.00g
Phenol Red
0.01g
2、 环境要求
• 细胞培养必须具备细胞生存并繁殖的 生理学能接受限度内的物理化学特性
• （1）温度 • （2）气相 • （3） PH
• 卡氏瓶培养法
• 1943年Earle、Dulbecco等创建单层细胞培 养法，首建长期传代的L-细胞系。
• 1951年Gey首建人肿瘤细胞——Hela细胞系。
• 从50年代末开始，组织培养技术应用进入 了一个繁盛的阶段，广泛应用于生物学和 医学研究各个领域。
无血清培养
无血清培养基:是不需要添加血清就可以维持细胞在
体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含 个别蛋白或大量蛋白组分。基本成分为基础培养基及添加 组分两大部分。
观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他 生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子； 又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质（抗体、 生长因子）的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获 得它们的分泌产物。 往往针对性很强，价格偏高。
培养板培养法
方法：将培养细胞接种在培养 板的孔内，然后在CO2培养箱 内培养。应培养量较小也称为 微量培养。
悬滴培养法也称植块悬滴培养法，是最早
建立的体外培养技术
基本要点：将组织或器官植块接种在一张盖
玻片上，滴上一滴培养液，然后翻转盖玻片使 植块及营养液悬挂在盖玻片下，再放置于一凹 形载片之上，最后用溶蜡密封后放入培养箱中 培养。