酵母菌药敏标准操作规程
真菌药敏标准操作规程
真菌药敏标准操作规程真菌药敏标准操作规程一、实验室准备1. 实验室应设有专门的真菌药敏实验室，确保实验操作的安全性和准确性。
实验室的温度应保持在20-25摄氏度，相对湿度不超过60％。
2. 实验室应配备必要的设备和试剂，包括培养箱、显微镜、培养基及药物试剂等。
3. 实验人员应穿戴个人防护用品，包括实验服、手套、口罩和护目镜等，确保工作区的清洁和无菌。
二、标本处理1. 收集患者真菌感染标本，包括病理组织、血液、尿液、呼吸道分泌物等。
标本应立即送到实验室进行处理。
2. 标本处理前，应进行外部消毒，消毒方法可以是用70％的乙醇擦拭外表面。
3. 标本应立即进行处理，避免存放时间过长，以防真菌生长导致结果不准确。
三、真菌培养1. 将标本分散在适量的无菌生理盐水中，进行稀释。
注入培养基琼脂平板和液体培养基中，分别进行固体培养和液体培养。
2. 样本应在常温下放置，避免光照，保持湿润，以利于真菌生长。
3. 观察培养过程中真菌的生长情况，包括菌落形态、颜色、透明度等。
四、药敏实验1. 在培养基上划线，将待测真菌分散在培养基中。
2. 向培养基中加入不同浓度的药物，利用层析法、扩散法等方法进行药物敏感性测试。
3. 观察药物对真菌的抑菌效果，包括抑菌区直径和抑菌程度。
4. 根据药物敏感性测试结果判断真菌的药物敏感性，分为敏感、中度敏感、抵抗。
五、数据分析和结果判断1. 测定抑菌区直径，记录数据。
2. 根据抑菌区直径和抑菌程度，将真菌分为敏感、中度敏感和抵抗。
3. 结合临床情况和药物用药指南，判断真菌感染的治疗方案。
六、结果报告和存储1. 将测试结果进行记录和整理，制作报告。
2. 将结果报告及时反馈给医生。
3. 将结果数据进行存储，备份和管理，以便后续研究和参考。
七、质量控制1. 每批药物敏感性测试都应包含阳性对照和阴性对照，以确保测试结果的准确性和可靠性。
2. 定期进行质量控制，检查培养基的质量和药物敏感性测试的准确性。
细菌、霉菌及酵母菌计数操作规程
细菌、霉菌及酵母菌计数操作规程1. 目的本规程旨在为微生物计数提供一个标准化方法。
2. 适用范围微生物实验室3. 责任者QC主管生测员4. 安全注意事项严格无菌操作，防止微生物污染。
5. 规程a．平皿菌落计数法：取供试液各1ml，加入90mm的平皿中，每个稀释度各2个平皿。
每个平皿加15-20ml已融化并冷至45℃的培养基（细菌用营养琼脂培养基，霉菌和酵母菌用玫瑰红钠琼脂培养基），快速摇匀，待凝后，倒置进行培养。
同时各做一个空白对照。
b．薄膜过滤法：取相当于1mL供试品的供试液，加至适量的稀释级中，混匀，用pH7.0蛋白胨-氯化钠无菌缓冲溶液冲洗滤膜，冲洗时应注意保持供试品的溶剂及冲洗液覆盖整个滤膜表面。
冲洗量不宜过大，每张滤膜每次冲洗量约为100mL，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基上。
同时做一个空白对照。
c．培养：细菌30-35℃培养3天，计菌落数；霉菌、酵母菌25-28℃培养5天，计菌落数；空白对照应无菌生长。
必要时延长培养时间为7天6．结果判断细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu，霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据，以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1mL供试品中所含的菌数。
7. 附表及附录附录1：细菌、霉菌及酵母菌计数报告8. 制定依据参照《中华人民共和国药典》2010版第二部细菌、霉菌及酵母菌计数（附录XI J）微生物限度标准，和GB/T14233.2医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分生物学试验方法。
附录1：细菌、霉菌及酵母菌计数报告。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法一般包括以下步骤：
1. 菌株选取：选择适当的病原菌株进行测试，一般使用已知药敏性的参比菌株作为对照。
2. 菌液的制备：将菌株接种到培养基上培养，培养至菌量合适后，采用生理盐水调制成适宜浓度的菌悬液。
3. 菌液的稀释：取一定数量的菌悬液，根据草浆法或直接法进行适当稀释，使菌量达到目标细菌的浓度，一般为0.5-2×10^8个CFU/mL。
4. 抗生素的制备：按照制备好的抗生素试纸或试剂盒的说明，将抗生素溶液或药片溶解成合适浓度的抗生素溶液。
5. 稀释菌液的扩散：将已制备好的菌液均匀涂布在含有良好的抗生素稀释浓度梯度的培养基上。
6. 培养基的培养：将涂布了菌液的培养基在合适的温度（通常为35-37）下培养约16-20小时。
7. 结果的解读：通过观察培养基上微生物的生长情况，判断细菌对抗生素的敏
感性。
一般，对抗生素敏感细菌培养后，会在培养基上形成清晰的抑菌圈，直径会随着对菌体敏感程度的增加而扩大。
8. 数据记录和分析：记录抗生素的名称、浓度、菌株信息、抗菌圈直径等数据，并进行统计和分析。
需要注意的是，药敏试验的具体操作方法可能会因实验目的、试验样本、试剂等因素而有所不同，因此在进行药敏试验前应详细阅读试剂盒或试纸的使用说明，并按照说明书操作。
酵母样真菌鉴定流程及药敏试验方法
酵母样真菌鉴定流程及药敏试验方法English response:Identification of yeast-like fungi and drug susceptibility testing are important steps in the diagnosis and treatment of fungal infections. The process of identifying yeast-like fungi involves several steps, including macroscopic and microscopic examination, biochemical tests, and molecular methods.First, the macroscopic examination involves observing the colony morphology on agar plates. Different species of yeast-like fungi have characteristic colony appearances, such as color, texture, and shape. This can provide initial clues to the identity of the fungus.Next, the microscopic examination involves observing the cellular morphology of the fungi using a microscope. This can reveal important features such as the presence of pseudohyphae, true hyphae, budding patterns, and theformation of spores. These characteristics can help narrow down the possible species of the fungus.Biochemical tests are then performed to further identify the yeast-like fungi. These tests may include carbohydrate assimilation tests, enzyme assays, and assimilation of nitrogen sources. The results of these tests can be compared to known patterns for different fungal species to aid in identification.In addition to traditional methods, molecular techniques such as polymerase chain reaction (PCR) and sequencing of specific genes can also be used for fungal identification. These methods can provide rapid and accurate identification of yeast-like fungi.Once the yeast-like fungi have been identified, drug susceptibility testing can be performed to determine the most effective antifungal treatment. The standard method for drug susceptibility testing of yeast-like fungi is the broth microdilution method. This method involves exposing the fungi to different concentrations of antifungal drugsin a liquid medium and observing the growth or inhibition of the fungi.In summary, the identification of yeast-like fungi involves a combination of macroscopic and microscopic examination, biochemical tests, and molecular methods. Once identified, drug susceptibility testing can help guide the selection of appropriate antifungal therapy.中文回答：酵母样真菌的鉴定涉及到几个步骤，包括宏观和微观检查、生化试验和分子方法。
酵母样真菌检验标准操作程序
酵母样真菌检验标准操作程序酵母样真菌检验标准操作程序1检验目的规范酵母样真菌鉴定的标准操作程序。
2检验程序的原理和方法通过美华MA120微生物鉴定仪及其他鉴别实验对酵母样真菌进行鉴定。
3性能特征酵母样真菌为侵犯表皮以外组织和器官的病原真菌和条件致病真菌，通过对分离的病原菌鉴定及抗真菌药物的敏感性试验等，协助临床诊断、治疗、流行病学调查研究和院内感染的检测。
4样品类型痰、尿、脓、各种体液、尿道及阴道分泌物、咽拭、脑脊液、血等标本。
5所需的仪器和试剂5.1仪器：美华MA120鉴定仪、比浊仪。
5.2试剂：念珠菌显色平板、革兰染液、白念珠菌ATCC 90028、生理盐水。
5.3其他：洁净玻片、无菌试管。
6环境和安全控制满足二级实验室的生物安全柜内进行操作试验。
7程序性步骤7.1镜检及染色方法7.1.1直接镜检直接镜检阳性说明送检标本中有真菌存在，排除污染的可能性后结合临床症状可做出初步诊断。
7.1.2革兰染色后镜检此法适用于大多数临床标本，将临床标本或培养物固定于洁净载玻片上，进行革兰染色，酵母样真菌被染成蓝紫色。
7.2培养特征：在科玛嘉念珠菌显色平板上生长18～24小时可见菌落，菌落呈奶油色、光滑的菌落。
7.3鉴定：从科玛嘉念珠菌显色平板上挑取可疑菌落，用比浊仪配置菌液浓度相当于1麦氏单位，用美华MA120微生物鉴定仪进行细菌鉴定。
7.4药敏：参见《MA120微生物鉴定药敏仪标准操作程序》及CLSI M100-S26最新版本文件。
8质量控制程序参见《微生物组室内质量控制管理程序》。
9警示或危急值当无菌部位培养出该菌属时，需联系临床。
10实验室临床解释10.1目前临床上分离出的酵母70%～80%为白色假丝酵母菌及热带假丝酵母菌，其他在念珠菌显色培养基不能鉴定的酵母，可用微生物鉴定仪鉴定到种。
无菌部位采集的标本中分离的任何酵母都必须鉴定到种，均有诊断意义。
同一部位反复分离出同一菌种也具有重要意义。
10.2从非无菌部位（痰、咽拭、粪等）分离到的条件致病菌（如白色假丝酵母菌），如直接镜检阳性，须认定具致病性。
药敏实验的操作规程
药敏实验的操作规程药敏实验是一种常用的实验方法，用于测试不同药物对细菌的敏感性。
其操作规程如下：1. 准备工作a. 选择适当的培养基：根据实验目的和细菌的需求，选择适合的培养基。
常用的培养基有Muller-Hinton (MH) 培养基和血琼脂基质（Blood Agar）。
b. 准备药物：根据研究的需求，选择要测试的药物，先进行浓度调节并制备药物试液。
c. 选择试验细菌：选择需要测试的细菌菌株，可选择多种细菌进行测试。
2. 制备药物试液a. 根据药物的浓度和用途，按照配制方法将药物试液制备好。
b. 对于不同药物，可根据需要设定不同的浓度梯度。
通常使用两倍稀释法制备浓度梯度。
3. 制备细菌悬浮液a. 从培养基中取出所需菌株，并用无菌生理盐水进行洗涤，以去除残余培养基或其他杂质。
b. 将菌株悬浮于无菌生理盐水中，通过眼镜划线计数法或光密度测定法调整细菌悬浮液的浓度至合适的范围。
4. 进行测定a. 在MH培养基或血琼脂基质上均匀涂布细菌悬浮液，使其形成薄膜。
b. 将培养基上涂有菌株的培养皿分成数个区域，每个区域均加入一种药物试液。
c. 用无菌的扩菌针分别在每个区域上刺入药物试液，使药物试液与菌株接触。
d. 将培养皿孵育于适当的环境条件下，一般为37℃，孵育时间根据实验目的而定，通常为24小时。
5. 结果判读a. 在观察期间，观察每个区域的菌落生长情况。
b. 比较不同药物试液对细菌生长的影响，评定其敏感性。
c. 根据实验目的和相应参考标准，判断细菌对药物的敏感性、中等敏感性或耐药性。
6. 数据处理和分析a. 统计每个药物试液对细菌的抑菌效果，记录菌落生长情况。
b. 根据实验结果，绘制抑菌效果图或者计算药物的最小抑菌浓度（MIC）。
7. 实验注意事项a. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免细菌的污染。
b. 实验人员必须戴上手套，避免药物对皮肤造成刺激。
c. 严格按照药物的安全操作规程进行操作，避免药物泄漏和误服。
临床细菌药物敏感试验的标准操作程序
临床细菌药物敏感试验的标准操作程序临床细菌药物敏感试验是用于确定细菌对特定药物的敏感性和耐药性的方法。
以下是一般的标准操作程序：1. 收集细菌样品：从患者体液样品（如血液、尿液、痰液等）或培养基中收集细菌样品。
2. 细菌培养：将细菌样品转移至含有适当培养基的培养皿中，并在恰当的温度和湿度条件下培养。
确保培养基的pH值和营养成分适宜。
3. 细菌纯化：如果细菌样品混有其他细菌，需要进行细菌纯化步骤，以确保测试结果准确。
4. 制备药物溶液：按照药物说明书中的要求，制备不同浓度的药物溶液。
通常会准备一系列两倍稀释的浓度，以便进行扩散法或微量稀释法。
5. 选择适当的试验方法：常见的药敏试验方法包括扩散法（如Kirby-Bauer方法）和微量稀释法（如MIC法）。
根据实验要求和实验室设备的可用性选择合适的方法。
6. 施加药物：将制备好的药物溶液施加在培养皿上，通常是使用无菌的药物敏感试验纸片或药片，或者使用微量稀释法将不同浓度的药物加入孔洞中。
7. 培养：将加药物的培养皿放置在适当的环境条件下培养一定时间，以允许细菌生长和观察。
8. 观察和记录：观察细菌在各个药物浓度下的生长情况，通常根据生长抑制圈直径或最低抑制浓度（MIC）来评估细菌对药物的敏感性。
9. 分析结果：根据观察和记录的数据，判断细菌对药物的敏感性或耐药性。
通常会参考临床实验室标准或已公开发布的敏感性解释表来进行分析。
10. 报告结果：将药敏试验结果报告给医生或临床实验室主管，以协助制定合适的治疗方案。
以上是一般的临床细菌药物敏感试验的标准操作程序，具体操作步骤可能会根据实验室的具体要求和实验目的而有所不同。
在进行任何实验之前，请确保严格遵守实验室的安全操作规程和规定。
酵母样真菌 ROSCO 法药敏试验标准操作程序
酵母样真菌ROSCO 法药敏试验标准操作程序1正确进行酵母样真菌 ROSCO 法药敏试验操作，监测耐药性酵母菌的出现及其耐药性变化，为酵母样真菌治疗提供参考依据。
2将含有定量抗真菌药物的药片贴在已接种待测菌的琼脂平板，药片所含药物吸收琼脂上水溶解后向周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，待测菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映了待测菌对测定药物的敏感性，根据厂家提供的药敏试验判读标准，判断抗真菌药物的体外敏感性。
33.1 培养基：采用 FMH 琼脂，同时添加氯霉素控制细菌的污染。
厚度严格控制为4cm。
3.2 接种液的配置：3.2.1 接种液的配制中，浓度的控制是最为重要的，接种液过浓会导致比咯类/咪唑类抑菌圈判读困难，而出现假阴性结果。
3.2.2 对于大多数的菌株，接种浓度为 5*105CFU/ml (先配 0.5 麦氏浊度，再用生理盐水1 ：1稀释)；3.2.2.1 对于克柔氏念珠菌(C.krusei)，先配0.5麦氏浊度，再用生理盐水1：10稀释；3.2.2.2 对于隐球菌属(Cryptococcus)，先配1.0麦氏浊度，无需稀释。
3.2.3 接种前，平板先置于 35℃干燥 20-25 分钟。
对于9cm平皿吸 0.5ml接种液，14cm吸1.0ml接种液，倾注于平板表面，涂布均匀，用移液管吸走多余液体。
然后，平板在 35℃干燥10分钟，帖药片。
最终要求，在琼脂表面，菌落恰呈合生长。
3.3 培养条件：在多数情况下，应在 35℃培养 18-24 小时后马上测量抑菌圈，因为培养时间过长会导致假耐药，特别是对于咪唑/吡咯类药物。
即培养过夜后应检查平板，如果抑菌圈清晰，应该马上测量。
如果对于某些菌株在培养过夜未见生长，那么应该再多培养 24 小时。
而对于隐球菌属在 30℃ 培养 42-48 小时。
4严重系统性感染株判读标准注：氟胞嘧啶 10ug 推荐用于黑曲霉试验， 而氟胞嘧啶 1ug 适用于念珠菌和其他酵母菌 55.1.对于多烯类抗真菌药(包括两性霉素 B 和制霉菌素)，测量无可见生长的清晰的抑菌圈，抑菌圈 出现的菌落必须视为耐药突变株；5.2 对于吡咯/咪唑类抗真菌药以及特比奈芬，在正常生长菌落形成的抑菌圈内，可能会出现由较小的部分被抑的菌落形成抑菌圈。
酵母样真菌药敏试验
一、目的：指导实验人员准确完成酵母样真菌药敏试验（微量稀释法）。
二、适用范围：怀疑酵母样真菌感染患者三、检验原理：ATB FUNGUS 3试条包括16对杯状凹cupules。
第一对不含任何抗真菌剂。
用作阳性生长对照。
另外的15对包含不同稀释度的5种抗真菌剂。
用于测定最小抑菌浓度（MIC）和（或）区分临床敏感性。
将准备好的待测酵母样真菌的悬浮液转移到培养基中，并接种到试条上。
孵育后，我们可以通过肉眼判读，或者应用A TB仪器或miniAPI判读杯状凹中液体的生长情况。
获得MIC(两性霉素B[AMB])，氟康唑[FCA],伊曲康唑[ITR],伏立康唑[VRC],5-氟胞嘧啶[5FC]),将菌株分为敏感、中介或耐药。
四、职责：生物梅里埃实验人员准确完成酵母样真菌药敏试验（微量稀释法）试剂厂家：规格：25测试／盒内含物：-25个独立包装的A TB FUNGUS 3 试条，包括干燥剂-25个孵育盖-25安瓿A TB F2培养基-25张结果记录单-一份说明书五、储存条件及有效期：在包装盒上指示的有效期前，试条和培养基应在2-8℃下存放。
有效期为12个月。
六、工作程序：(一)试验的准备：1、从包装中取出试条2、在试条延长翼上记录下被测酵母菌株的编号（二）接种物的准备：1、打开一个API®0.85%氯化钠培养基安瓿（或API培养悬液）2、采集不超过4天的菌落，制备成浊度相当于2 McFarland的悬浮液3、用McFarland试剂盒的标准浊度管比较，或使用ATB比浊仪DENSIMAT4、此菌悬液必须在准备后立即使用5、使用一移液管转移20ul此悬浮液到一A TB F2培养基的安瓿中（三）试验条的接种：手工接种：1、用ATB电子移液管混匀A TB F2培养基，避免产生气泡2、使用ATB电子移液管在每个杯状凹中加入135ul的ATB F2 培养基（大约3*104酵母菌/毫升或4*103酵母菌/杯状凹）自动接种：参考A TB接种器使用者手册3、盖好试条盖子4、把试条放入一个密封容器或是一个装有吸潮纸的GENbox型广口容器里5、在有氧条件下35℃（+2℃）的环境中，念珠菌属要培养24小时（+2h）,新型隐球菌要培养48小时（+6h）（四）试验结果的计算：检查生长对照孔的生长是否充分，对于念珠菌，如果生长不充分或未在这两孔中生长，则无法阅读结果，需要再培养24h。
真菌药敏试验规范化操作
ITR
VRC
色原底物微量肉汤稀释法 商品化试剂盒- YeastOne
• 加入Alamar蓝 • 蓝色（阴性） • 红色（阳性）
两性霉素B 其它药物
29
质控允许范围
评估实验
➢ 实验菌株：
✓ 332株曲霉临床分离株（中国多中心，种属信息明确）
➢ AFST：
✓ CLSI M38-A2 ✓ Sensititre YeastOne
判读得分 0的孔， AMB的MIC = 2
4 8 16 0.5 1 2
AMB
唑类药物判读
• 氟康唑（FCA）, 伊曲康唑（ITR）和伏立康唑 （VRC）：
• 拖尾生长，MIC的测试杯得分可以为“2”、“1”， “0”分
得分 = 1 ，结果 MIC = 16ug/ml
16 32 64 128
1 24 8 FCA
唑类药物判读
• 拖尾生长现象
– 在唑类药物孔中的微弱生长 (得分 1 或 2) ， 易误判为耐药
MIC 1 MIC 0.125 MIC 0.06
Control
16 32 64 128 1 2 4 1 2 4 8
1 2 4 8 0.125 0.25 0.5 0.06 0.125 0.25
0F.5CA
• 判读结果：念珠菌属 24h ±2h，新型隐球菌 48 h ± 6h
Control
16 32 64 128 1 2 4 1 2 4 8 1 2 4 8 0.125 0.25 0.5 0.06 0.125 0.25 0.5
ATB Fungus 3判读规则
• 与生长对照相比 – 生长不减少＝4分 – 生长稍减少＝3分 – 生长明显减少＝2分 – 很微弱生长或管壁周围生长=1分 – 不生长＝0分
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酵母菌MIC检测标准操作规程（微量液基稀释法）
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1.培养基配置：
RPMI 1640 培养液：RPMI1640（Gibco BRL，Invitrogen）10g，NaHCO3 2.0g，吗啉基丙磺酸（morpholinepropanesulfonic acid, MOPS, Sigma）34.5 g（0.165 M），加三蒸水900 ml 溶解，1 M NaOH 调pH 至7.0（25℃），定容至1 000ml，过滤除菌，4℃保存。
沙堡葡萄糖琼脂培养基（sabouraud dextrose agar, SDA）：蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900 ml 溶解，加入2 mg/ml 氯霉素水溶液50 ml，调整pH 至7.0，定容至1 000 ml，115℃，高压灭菌，4℃保存。
2.抗真菌化合物的配制：
（1）待筛选化合物统一用DMSO溶解，配成6.4mg/ml母液，-70℃保存；
（2）药敏板制备前将50μl母液加入到450μl RPMI 1640 培养液中，充分振荡混匀，稀释为640μg/ml 中间浓度备用。
3.药敏板制备：
（1）取无菌96 孔板，于每排1 号孔加RPMI 1640培养液200 μl 作空白对照；
（2）96孔板每排3～12 号孔各加RPMI 1640培养液100 μl；
（3） 2 号孔分别加RPMI 1640培养液180μl 和640μg/ml 抗真菌化合物溶液20 μl，充分混匀；每排为1个待筛选化合物；最后一排为质控氟康唑；
（4）2～11 号孔10 级倍比稀释，使各孔的最终药物浓度分别为64、32、16、8、4、
2、1、0.5、0.25和0.125 μg/ml，各孔中DMSO 含量均低于1％；12 号孔不
含药物，作阳性对照；
（5）药敏板配好之后如不立即接种真菌则必须用保险塑料袋封好，储存于-70℃。
4.阳性对照药浓度配置：
（1）氟康唑和氟胞嘧啶为水溶性药物，其母液用无菌蒸馏水配置；两性霉素、咪康唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑、特比萘芬等为脂溶性药物，其母液用DMSO
溶解；
（2）氟康唑、氟胞嘧啶母液配置浓度为1280μg/ml，两性霉素、酮康唑、咪康唑、特比萘芬、伊曲康唑母液配置浓度为1600μg/ml；
（3）所有抗真菌药物母液-70℃保存；
（4）氟康唑、氟胞嘧啶药敏板稀释浓度为：64-0.125μg/ml；
（5）两性霉素、酮康唑、咪康唑、特比萘芬、伊曲康唑药敏板稀释浓度为：16-0.313μg/ml；
5.菌株准备：
（1）将受试菌株于SDA平皿上活化2次，以保证其活力；
（2）将活化菌株划线接种于SDA平皿，35℃培养24小时；
（3）挑取直径>1mm的菌落5个，将其溶解于灭菌三蒸水中，于振荡器上震荡15秒制备成菌悬液；
（4）用血细胞计数板将菌悬液浓度用RPMI 1640培养液调整至1×106~5×106(相当于麦氏浊度0.5)CFU/ml
计算公式：菌液浓度=5个中方格内细胞数×5×104
（5）将上述已经配置好的菌悬液用RPMI 1640培养液稀释1000倍(首先稀释50倍，然后稀释20倍)，使其浓度介于1×103~5×103 CFU/ml之间。
6.接种
菌悬液稀释至1×103~5×103 CFU/ml之间后，用多道移液器将菌液接终至96孔板第2~12号孔，最终接种浓度为0.5×103~2.5×103 CFU/ml；96孔板最后一排为质控菌株近平滑念珠菌ATCC22019。
7.培养：
新型隐球菌孵箱中孵箱中35℃培养72小时后观察结果，其他念珠菌35℃培养24小时后观察结果。
8.结果判读：
（1）吸光度测定判断法
酶标仪检测96孔板吸光度值，与阳性对照相比吸光度值下降80%为该化合物的最低抑菌浓度（MIC）；
与阳性对照相比吸光度值下降80%为唑类药物、氟胞嘧啶和棘白霉素类药物的最低抑菌浓度（MIC）；
与阳性对照相比吸光度值下降100%为两性霉素的最低抑菌浓度（MIC）。
（2）肉眼结果判定:
读取MIC 值时，应当在阅读镜的辅助之下，将每个受试孔中真菌的生长情况与生长对照孔相比较，进行评分，4 分示：生长无抑制；3 分示：生长轻微减少或相当于生长对照的75 %；2 分示：生长明显减少或相当于生长对照的50 %；1 分示:轻微生长或相当于生长对照的25 %；0 分示:肉眼观察澄清或未见生长。
筛选化合物MIC 值判定为相当于生长对照有50 %或更多的生长减少时的最低药物浓度(读数为2)。
两性霉素B MIC 值判定为没有可见生长(读数为0) 的最低药物浓度。
若出现两性霉素B 拖尾的情况，临床上可能表现为耐药。
唑类药物、氟胞嘧啶和棘白霉素类药物MIC 值判定为相当于生长对照有50 %或更多的生长减少时的最低药物浓度(读数为2)。
（3）本实验室进行抗真菌化合物活性筛选实验结果判定时，应该首先进行吸光度测定判断MIC，并采用肉眼结果判定确认结果的可靠性。
9.质量控制：
每块药敏板第H行为质控菌株和质控化合物，其目的在于监测药敏试验的准确度、精密度、所用试剂、测试条件以及仪器的情况,保证试验者的操作以及结果的准确客观。
质控化合物采用氟康唑，质控菌株采用近平滑念珠菌ATCC22019。
近平滑念珠菌ATCC22019M IC参考值如下图所示，只有当其M IC值界于上述范围时，方认为试验操作准确可靠。
如同时试验菌株生长良好,则可认为试验成功，结果可接受。
参考文献：
Clinical and Laboratory Standards Institute/National Committee for Clinical Laboratory Standards: Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of Yeast.
Approved Standard, edn 3; Document M27-A3. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2009.。