氨基酸含量的测定-茚三酮比色法
茶叶中游离氨基酸总量的测定实验报告
茶叶中游离氨基酸总量的测定实验报告一、实验目的本实验旨在测定茶叶中游离氨基酸总量，了解茶叶的品质和营养价值，为茶叶的生产、加工和质量控制提供科学依据。
二、实验原理茶叶中的游离氨基酸在一定条件下与茚三酮反应，生成蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。
通过比色法测定反应液在特定波长下的吸光度，与标准曲线对照，即可计算出茶叶中游离氨基酸的总量。
三、实验材料与仪器1、实验材料茶叶样品：选取不同品种、不同产地的茶叶若干。
标准氨基酸溶液：精确配制一定浓度的谷氨酸标准溶液。
茚三酮试剂：称取适量茚三酮，用乙醇溶解并定容。
缓冲溶液：磷酸缓冲液（pH 80）。
2、实验仪器分光光度计分析天平恒温水浴锅容量瓶、移液管、比色皿等玻璃仪器四、实验步骤1、样品处理称取一定量的茶叶样品，用研钵研碎后，置于具塞三角瓶中。
加入适量的沸水，在水浴中浸提一定时间，冷却后过滤，滤液即为待测液。
2、标准曲线的绘制分别吸取不同体积的标准氨基酸溶液于一系列容量瓶中，加入缓冲溶液和茚三酮试剂，定容后摇匀。
将上述溶液置于沸水浴中加热一定时间，取出冷却至室温。
以空白溶液为参比，在分光光度计上于特定波长处测定吸光度。
以氨基酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3、样品测定吸取适量的待测液于容量瓶中，按照绘制标准曲线的步骤加入缓冲溶液和茚三酮试剂，定容、加热、冷却。
测定样品溶液的吸光度，根据标准曲线计算出游离氨基酸的含量。
五、实验结果与分析1、实验数据记录标准曲线测定数据：记录不同浓度标准氨基酸溶液的吸光度值。
样品测定数据：记录样品溶液的吸光度值及对应的计算结果。
2、结果计算根据标准曲线方程，计算样品中游离氨基酸的浓度。
按照样品处理时的稀释倍数，计算茶叶中游离氨基酸的总量。
3、结果分析比较不同茶叶样品中游离氨基酸总量的差异，分析可能的原因，如茶叶品种、生长环境、加工工艺等。
讨论实验过程中可能存在的误差来源，如样品处理的均匀性、反应条件的控制、仪器的精度等，并提出改进措施。
氨基酸显色反应茚三酮反应.ppt
氨基酸显色反应---茚三酮反应
茚三酮ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ应
实验原理
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质 都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。 该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用 的氨基酸定量测定方法。 茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮 被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分 于和氨缩合生成有色物质。
实验器材及试剂
器材： 试管、酒精灯、试管夹、试管架 试剂： (1)蛋白质溶液：2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9) (2)0.5％甘氨酸溶液 (3)0.1％茚三酮水溶液 (4)0.1％茚三酮—乙醇溶液
实验步骤
(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚 三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。 (2)在一小块滤纸上滴一滴0.5％的甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴上一滴0.1％ 的茚三酮乙醇溶液在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
氨基酸含量的测定
氨基酸含量的测定标准曲线绘制准确吸取200ug/ml的氨基酸标准溶液0.0，0.6，0.8，1.0,1.2，1.5，2.0 ml，分别置于25ml容量瓶或比色管中，各加水补充至溶剂为4.0ml，然后加入茚三酮和磷酸缓冲溶液各1ml，混合均匀，于水浴上加热15min，取出迅速冷至室温，再摇匀，加水至标线25ml，摇匀。
静置15min后，在570nm波长下，以试剂空白为参比液夨订其余各溶液的吸光度A。
以氨基酸的微克数为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定：吸取澄清的样品溶液1.5ml，平行三次，按标准曲线制作步骤，在相同条件下测定吸光度A 值，用测得的A值在标准曲线上即可查得氨基酸的微克数。
公式：氨基酸总量（ug/100g）=(c/m*1000)*100式中c是指从标准曲线上查得的氨基酸的ug数；M是指测定的样品溶液相当于样品的质量g；PH计酸度计测量ph的方法：(1)拿下笔帽(2)按on/off键，机器显示运作(3)将ph计放入待测液中(4)轻轻晃动ph计，保证内气泡逸出，使之于溶液充分接触，勿碰撞杯壁(5)ph计会立即显示数值，将笔置入待测液待数值稳定，30秒内将显示正确数值，(特：ph计数值上下浮动或不稳定是正常现象)(6)按hold键锁定数值，可在待测溶液外记录读取，继续按hold键解除锁定(7)按on/off键关闭ph计(8)轻甩PH计测试笔上多于的水，用蒸馏水或脱离子水冲洗，盖上笔帽测量温度方法在测试模式下，温度数值与ph数值同步显示在液晶面板上，但在校准模式下不显示，数值默认为摄氏温度。
（一）挥发性盐基氮（TVB-N）的测定半微量定氮法（1）原理：蛋白质在酶和细菌的作用下分解后产生碱性含氮物质，有氨、伯胺、仲胺等，此类物质具有挥发性，可在碱性溶液中被蒸馏出来，用标准酸滴定，计算含量。
（2）试剂①氧化镁混悬液(10g/L) 称取1.0g氧化镁，加100ml水，振摇成混悬液。
茚三酮显色法测定赖氨酸含量
■ L-赖氨酸的化学名称为L-2,6-二氨基己酸或α，ε-二 氨基己酸，属于单斜晶系，熔点为263℃，比旋光度是 +21°，难溶于醇和醚，易溶于水，等电点为9.59。游离的 L-赖氨酸具有很强的呈盐性，极易吸收空气的CO2生成碳酸 盐，故一般商品是以L-赖氨酸盐酸盐的形式存在。L-赖氨 酸盐酸盐的化学组成为C6H15O2N2Cl或C6H14O2N2·HCl，其相 对分子量为182.64，化学性质稳定，为无色晶体，几乎无 味，易溶于水，难溶于醇和醚，在25℃的水中溶解度为 793g/L。
一、茚三酮显色法测定赖氨酸含量
பைடு நூலகம்3.操作步骤
（1）绘制标准曲线 准确吸取已配好的标准浓度系列的亮氨酸溶液各0.5mL,
分别放入5支试管中，每种浓度做3个重复。再取一支试管加 入0.5mL蒸馏水做空白对照。向每支试管中各加入0.5mL的4 ％碳酸钠溶液和2mL茚三酮试剂（头一天配好的），混匀， 在80℃恒温水浴上保温30min。取出后，立即放入冷水浴中 冷却3min，然后向每管内加入5mL的95％乙醇，摇匀，在分 光光度计上500nm波长处进行比色，以空白做对照，读取吸 光度。以吸光度值为纵坐标，亮氨酸浓度为横坐标，绘出标 准曲线，并求出曲线的斜率。
10mL8％的甲酸，最后加水到100mL ■ 茚三酮试剂：称取1lg茚三酮和1g氯化镉(CdCl2)，加入25mL
上述缓冲溶液和75mL乙二醇，室温下放置一天，第二天使用。 若出现沉淀，则过滤后使用。注意该溶液不能现用现配，一定 要配制好后第二天使用，也不宜放置过久 ■ 4％和2％无水碳酸钠溶液：各50mL ■ 标准亮氨酸溶液：准确称取25mg亮氨酸，加数滴稀盐酸，待 溶解后定容至50mL，该溶液亮氨酸浓度为500μg／mL。准确 吸取上述母液1、3、5、7、9mL，分别稀释至25mL，待用 ■ 722型分光光度计、水浴锅
氨基酸检测试剂盒（茚三酮比色法）
氨基酸检测试剂盒（茚三酮比色法）氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：氨基酸(Amino acid ，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。
动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下，能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans 紫)，其吸收峰在波长570nm 处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比。
该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按植物组织：AA Lysis buffer=的比例加入AA Lysis buffer 匀浆或研磨，用去离子水稀释至，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于氨基酸的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer 进行适当匀浆，离心5min ，留取上清即为氨基酸粗提液，4℃保存备用，用于氨基酸的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer 进行恰当的稀释。
2、配制茚三酮工作液: 取适量的茚三酮显色液、AAAssaybuffer ，按茚三酮显色液：AAAssaybuffer=的比例混合，即为茚三酮工作液。
4℃避光密闭保存，2周有效。
3、配制维生素C 工作液: 取出1支维生素C ，准确溶解于10ml 去离子水，混匀。
4℃预冷备用。
-20℃保存1周有效。
注意：该试剂盒提供的维生素C 及其配制的工作液为过编号名称TC2153 100T Storage试剂(A): 氨基酸标准(50μg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): AALysisbuffer 250ml RT 试剂(C): 茚三酮显色液120ml RT 避光试剂(D):AAAssaybuffer 10.5ml RT 试剂(E): 维生素C 2支RT 使用说明书1份量。
一种比较实用的氨基酸定量测定方法_茚三酮法
术可用于生产抗生素、维生素等常用药物和人胰岛 素、 乙肝疫苗、 干扰素、 透明质酸等新药， 用于微生物 蛋白、 氨基酸和一些食品添加剂 （ 如柠檬酸、 乳酸、 天 然色素等）的生产，用于生物固氮、微生物饲料的生 产，可用微生物来净化有毒的高分子化合物，消除有 毒气体和恶臭物质以及处理有机废水、 废渣等等。利 用发酵法或半合成法生产的维生素有 9:、 9;/、 9;-/、 96 以及 ! 4 胡萝卜素等。 目前， 微生物发酵生产及遗传工程技术将合成特 定氨基酸的基因克隆进入微生物细胞质粒中， 从而借 助某些微生物增殖生产等， 生物技术已在用新菌种生 产氨基酸过程中被应用，这些方法具有产量较高、生 产周期短、成本低等优点。<=*>?@AB>C 等人在生产苏 氨酸的一些菌种以及在 D 4 赖氨酸、 D 4 苏氨酸的生 产中已成功地使用了基因传导技术。 随着理想氨基酸 模型的深入研究， 将具有生产不同氨基酸的菌种或其 基因按理想营养模式进行组装， 以期在体外或体内生 产出满足动物需求的新一代理想天然产品—— — 理想 氨基酸复合制剂的研究开发， 将会成为今后研制生产 氨基酸的发展趋势。 日粮中添加氨基酸可以平衡氨基 酸的比例，可以提高饲料蛋白质的利用效率，减少氮 排出造成的环境污染， 维生素可以提高动物机体营养 物质的吸收代谢，维持动物生命和正常生长，在动物 饲料中添加高剂量的某些维生素， 可以增进动物免疫
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测定结果的计算
氨基酸的含量（ 7） * !" "" ( !" . # ’’3 "" $ %
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式中： — 氢氧化钠标准溶液的摩尔浓度 （ !"—— "3 #452 6 ） 2 ； ； — 氢氧化钠的体积（ ""—— &"42） （ —— — 盐酸标准溶液的摩尔浓度 ； ! "3 #452 6 2） ； — 滴定所需盐酸的体积（ 42） "—— — 氨基酸 （ 或者氨基酸盐 ） 的分子量； #—— — 所称氨基酸（ 或者氨基酸盐） 的质量（ ； %—— 9） — 二氧化碳的分子量。 ’’3 ""——
茚三酮比色法测乙肝宁水提物中总游离氨基酸含量
茚三酮比色法测乙肝宁水提物中总游离氨基酸含量邹龙;李仲秋;刘辉;夏新华【摘要】目的:建立乙肝宁复方水提物中总游离氨基酸含量测定的方法.方法:以乙肝宁复方水提物中总游离氨基酸含量和蛋白质含量为指标,对总游离氨基酸含量测定最佳除蛋白的乙醇浓度和药液比进行筛选；采用茚三酮比色分光光度法,于568 nm,测定乙肝宁复方中总游离氨基酸的含量.结果:醇浓度为70％,生药浓度为1g/mL(生药比1∶6)可较好除去蛋白质等大分子物质,减少测定干扰；采用茚三酮比色法,标准曲线方程为:A=0.055 9C-0.225 3(r=0.9991),平均回收率为98.8％,RSD为2.07％(n=9),线性关系良好.该法测得乙肝宁复方药材中总游离氨基酸的含量为1.47％,乙肝宁浸膏中含量为5.65％.结论:该方法简便、快速准确,可用于测定乙肝宁复方中游离氨基酸的含量测定.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2012(032)002【总页数】4页(P161-164)【关键词】乙肝宁;总游离氨基酸;含量测定;茚三酮比色法【作者】邹龙;李仲秋;刘辉;夏新华【作者单位】湖南中医药大学药学院湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院湖南长沙 410208【正文语种】中文【中图分类】Q503乙肝宁复方为治疗病毒性乙型肝炎的一临床有效验方［1］，该复方由黄芪、白花蛇舌草、绵茵陈、金钱草、党参、蒲公英、制何首乌、牡丹皮、丹参、茯苓、白芍、白术、川楝子十三味药组成［2］，具有补气扶正、健脾化湿、滋肾养肝、利胆清热、活血化瘀等作用［3］。
在本实验早期对乙肝宁复方工艺制备方法优化研究中，发现乙肝宁水提液经絮凝澄清纯化处理后在吸湿性方面较传统醇沉纯化方法处理后有较大改善［4］。
故本课题旨在考察壳聚糖絮凝澄清法对乙肝宁中无效成分游离氨基酸、鞣质、蛋白质等的作用，以探讨其较低吸湿性的原理，说明引起中药制剂吸湿性强的原因。
测氨基酸含量的方法
测氨基酸含量的方法测氨基酸含量可不是一件简单的事儿呢。
有一种方法是茚三酮显色法。
这就像是一场神奇的化学反应魔法。
茚三酮这种东西就像一个侦探，专门和氨基酸打交道。
当它遇到氨基酸的时候，就会发生反应，然后变色。
我们可以把含有氨基酸的样品和茚三酮放在一起，在一定的条件下，比如说合适的温度、酸碱度这些，让它们充分反应。
反应完了之后，就会出现颜色变化。
然后我们可以用一个仪器，就像一个专门看颜色深浅的眼睛，去测量颜色的深浅程度。
颜色越深，就说明氨基酸的含量越高。
这就好像颜色是氨基酸含量的信号，我们通过解读这个信号来知道氨基酸有多少。
还有高效液相色谱法。
想象一下高效液相色谱仪就像一个超级复杂的赛道。
氨基酸们就像一个个小小的运动员，在这个赛道上奔跑。
我们把样品注射到这个仪器里，然后通过各种设置，比如流动相的选择、流速的控制等等，让氨基酸在赛道上按照不同的速度前进。
最后它们会一个一个地到达终点，被检测出来。
不同的氨基酸在这个过程中会有不同的表现，我们可以根据这些表现来计算出每种氨基酸的含量。
这就像一场精确的赛跑比赛，我们通过观察运动员的成绩来统计数据。
再说说氨基酸自动分析仪法。
这个仪器就像一个专门处理氨基酸的小工厂。
我们把样品送进去，它就会自动地进行一系列的操作。
它里面有各种复杂的部件，就像工厂里的机器一样。
这些部件会把氨基酸分离出来，然后进行检测。
它能非常精确地测量出氨基酸的含量，就像一个经验丰富的工人，能够把工作做得又快又好。
我记得在一个实验室里，他们要检测一种植物里的氨基酸含量。
他们先用茚三酮显色法做了一个初步的检测。
把植物样品处理好之后，和茚三酮混合在一起，然后在特定的温度下反应了一段时间。
等反应结束后，他们用分光光度计去测量颜色的变化。
通过颜色的深浅，他们大概知道了氨基酸的含量范围。
然后他们又用高效液相色谱法进行了更精确的测量。
他们仔细地准备样品，调整仪器的各种参数，让氨基酸在色谱柱里好好地“跑”一趟。