免疫组库测序[研究知识]
临床免疫学检验知识点
临床免疫学检验知识点1.免疫系统的基本知识：了解免疫系统的组成、功能和调节机制是理解临床免疫学检验的基础。
免疫系统由免疫器官（如脾脏、淋巴结、骨髓等）和免疫细胞（如淋巴细胞、巨噬细胞、树突细胞等）组成，其功能包括抵御病原体的入侵、清除异常细胞和产生抗体等。
2.免疫细胞的检测方法：常用的免疫细胞检测方法包括流式细胞术、免疫组化和染色技术等。
流式细胞术可用于检测和计数不同类型的免疫细胞，免疫组化和染色技术可用于检测细胞表面标记物和细胞内分子的表达水平。
3.免疫球蛋白的检测方法：免疫球蛋白是免疫系统中的重要成分，其浓度和种类的改变可以指示一些疾病的存在和进展。
测定免疫球蛋白的方法包括免疫电泳、免疫扩散和化学发光等技术。
4.免疫反应的检测方法：免疫反应的检测方法可以用于评估机体对病原体的免疫应答以及检测自身免疫疾病的存在。
常用的免疫反应检测方法包括抗体检测、细胞毒性测定和溶菌试验等。
5.自身抗体的检测方法：自身抗体是机体免疫系统对自身组织产生的免疫反应产物，其异常产生与自身免疫疾病的发生和进展密切相关。
常用的自身抗体检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光和免疫印迹等。
6.免疫功能的评估方法：免疫功能的评估可以指导临床医生判断机体的免疫状况和预测疾病的发展趋势。
常用的免疫功能评估方法包括淋巴细胞亚群分析、细胞因子水平检测和细胞增殖测定等。
7.临床应用：临床免疫学检验在临床诊断和治疗中具有重要意义。
例如，检测艾滋病病毒抗体可用于艾滋病的早期诊断和监测；自身抗体的检测可用于系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎的诊断；细胞因子水平的检测可以评估炎症反应和肿瘤的进展等。
综上所述，临床免疫学检验涵盖了多个方面的知识点，包括免疫系统的基本知识、免疫细胞和免疫球蛋白的检测方法、免疫反应和自身抗体的检测方法、免疫功能的评估方法以及临床应用等。
这些知识点对于临床医生正确使用和解读免疫学检验结果具有重要的指导意义。
免疫组化、elisa 、western blot 、PT-PCR
免疫组化是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
elisa（酶联免疫吸附试验）用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
western bolt 先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
以下western 和Elisa的区别不是原创，是找的资料。
western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦elisa可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB 可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而Elisa无能为力，一锅端了。
WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。
从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而Elisa不行。
医学研究中的免疫组学与免疫组分分析
医学研究中的免疫组学与免疫组分分析免疫组学是研究免疫系统及其功能的领域，主要研究免疫系统中各种免疫组分的结构、功能、相互作用以及免疫应答的调节机制。
在医学研究中，免疫组学起着至关重要的作用，为疾病的诊断、治疗和预防提供了重要依据。
一、免疫组学的背景和概念免疫组学是由免疫学和生物化学发展而来的一个新兴的交叉学科，它以研究机体现象性免疫为中心，利用分子生物学、生物化学、免疫学等技术手段，揭示机体免疫应答的分子机制及其与疾病的关系。
通过对免疫系统的组分进行研究，可以更好地了解免疫功能的调控，为免疫系统相关疾病的诊断和治疗提供理论和实践依据。
二、免疫组分的类型与功能1. 抗体（免疫球蛋白）：抗体是免疫系统中最为重要的组分之一，具有特异性识别和结合抗原的能力。
通过与抗原结合，抗体可以中和病原微生物、调节免疫细胞的功能，并参与到免疫应答的调节中。
2. 细胞因子：细胞因子是免疫系统中的信号分子，可以调节免疫细胞之间的相互作用和免疫应答的过程。
细胞因子包括巨噬细胞激活因子、淋巴因子、细胞生长因子等，它们在炎症反应、免疫细胞的增殖和分化等方面发挥着重要的调控作用。
3. 补体系统：补体系统是机体天然免疫和获得性免疫中不可或缺的组成部分。
它可以通过激活一系列的酶反应，参与到病原微生物的清除和免疫细胞的调节中。
4. 细胞免疫系统：细胞免疫系统主要由T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等组成，其功能是识别、杀伤和清除病原微生物以及异常细胞等。
细胞免疫系统在防御体内外病原微生物感染、抗肿瘤等方面具有重要作用。
三、免疫组分的分析方法免疫组分的分析是指对免疫组分进行定性和定量的检测和鉴定。
目前，针对不同的免疫组分，有多种方法可用于其分析，例如：1. 免疫电泳：免疫电泳是通过电泳将复杂样品中的免疫组分分离，并利用抗体与目标组分进行反应，通过电泳结果显示的特异性带来鉴定和定量分析。
2. 免疫荧光：免疫荧光是通过将特异性标记的荧光抗体与待测免疫组分结合，并利用荧光显微镜或流式细胞仪等设备来检测和分析。
免疫组库及高通量分析技术在原发性胆汁性胆管炎中的研究进展 赵丹彤
者和 １ ８例健康对照者 Ｉ ｇ Ｍ、 Ｉ ｇ Ｇ和 Ｉ ｇ ＡＢ Ｃ ＲＶ Ｈ家族基因取用 率， 除部分患者存在 Ｖ Ｈ ３ ａ 和Ｖ Ｈ ４家族 Ｂ Ｃ Ｒ寡克隆扩增外， 并 ｇ Ｇ 、 Ｉ ｇ Ａ和 Ｉ ｇ ＭＣ Ｄ Ｒ ３区常见的克隆扩 未发现个体内和个体间 Ｉ 增有明显不同。
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｐ ｒ ｉ ｍ ａ ｒ ｙｂ ｉ ｌ ｉ ａ ｒ ｙｃ ｈ ｏ ｌ ａ ｎ ｇ ｉ ｔ ｉ ｓ （ Ｐ Ｂ Ｃ ）ｉ ｓ ａ ｎａ ｕ ｔ ｏ ｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｅ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｗ ｉ ｔ ｈｕ ｎ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ ． Ｔ ｈ ｅ ａ ｍ ｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄｃ ｏ ｍ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎａ ｎ ｄｓ ｅ
１ ３ ８ ８
临床肝胆病杂志第 ３ ３卷第 ７期 ２ ０ １ ７年 ７月㊀ＪＣ ｌ ｉ ｎＨ ｅ ｐ ａ ｔ ｏ ｌ ， Ｖ ｏ ｌ ． ３ ３Ｎ ｏ ． ７ ， Ｊ ｕ ｌ ． ２ ０ １ ７
或γ ／ 异源二聚体组成， 参与特异性免疫应答的 Ｔ淋巴细胞 δ 主要是 α ／ 占外周 Ｔ淋巴细胞的 ９ ０ ％ β Ｔ淋巴细胞， ９ ５ ％。 Ｔ Ｃ Ｒβ链 Ｃ Ｄ Ｒ ３在抗原特异性识别中起关键作用， 是直接与抗 原肽的结合位点， 其编码基因位于人类 ７号染色体（ ７ ｑ ３ ４ ） ， 全 长６ ２ ０ｋ ｂ ， 由５ ０多个可变区（ Ｖ区） 基因片段、 ２组上游 Ｄ基因 片段 ／ 下游恒定区（ Ｃ区） 基因片段、 ６ ７个 Ｊ 区基因片段组 成， 这些基因在 Ｔ淋巴细胞发育早期不连续分布， 在胸腺内原 始 Ｔ细胞阶段， Ｄ－Ｊ 区片段连接为 Ｄ Ｊ 片段； 在成熟 Ｔ淋巴细 Ｖ 、 Ｄ Ｊ 、 Ｃ区基因片段相连成 Ｖ Ｄ Ｊ Ｃ片段。 胞阶段， 据推测， 胚系 Ｖ Ｄ Ｊ Ｃ基因片段随机组合、 重排以及 Ｔ Ｃ Ｒα ／ β 链和 γ ／ Ｃ Ｒ克隆数量高达 １ ０ δ链 Ｖ区基因重排产生的 Ｔ
免疫组化,免疫荧光
免疫组化,免疫荧光
免疫组化（Immunohistochemistry，简称IHC）和免疫荧光（Immunofluorescence，简称IF）是常用于研究细胞和组织中蛋白质分布和定位的实验技术。
免疫组化：免疫组化是通过使用特异性抗体来检测和定位组织切片中特定蛋白质的技术。
它包括将组织切片与特异性抗体结合，然后使用染色试剂使抗原-抗体复合物形成染色反应，从而可视化目标蛋白质的位置。
该技术常用于研究细胞分化、组织病理学和肿瘤学等领域。
免疫荧光：免疫荧光是利用荧光染料（荧光标记的二抗或直接标记的一抗）结合目标抗原的方法来检测和定位组织或细胞中的蛋白质。
通过特异性的抗体与目标蛋白质结合，然后使用荧光标记的二抗或直接标记的一抗与抗原-抗体复合物结合，使目标蛋白质在显微镜下产生荧光信号，以观察其位置。
免疫荧光技术广泛应用于细胞生物学研究、免疫学和医学诊断领域。
这两种技术在原理上非常类似，但在应用上有一些区别。
免疫组化主要用于固定的组织切片，可用于定量和定位分析。
而免疫荧光通常用于固定的细胞，可以提供更高分辨率的蛋白质定位信息，并可以进行多色荧光共标记以研究多个蛋白质的相互作用和定位。
无论是免疫组化还是免疫荧光，都依赖于合适的抗体选择和样本处理步骤来确保结果的准确性。
技术的选择应根据研究
的目的和样本的性质进行评估和决策。
免疫学实验技术新进展
免疫学实验技术新进展免疫学作为生命科学的重要分支，一直以来都是医学和生物学研究的热点领域。
随着科学技术的不断发展，免疫学实验技术也在不断创新和完善，为免疫学研究和临床应用提供了更强大的工具和手段。
本文将介绍一些近年来免疫学实验技术的新进展。
一、单细胞免疫分析技术单细胞免疫分析技术是近年来免疫学领域的一项重大突破。
传统的免疫分析方法通常是对大量细胞群体进行平均化的测量，无法揭示单个细胞之间的异质性。
而单细胞免疫分析技术能够在单个细胞水平上对免疫细胞的表型、基因表达、蛋白质分泌等进行精确分析，为深入了解免疫系统的复杂性和多样性提供了有力的手段。
例如，单细胞 RNA 测序技术（scRNAseq）可以同时检测数千个单个细胞中的基因表达谱，帮助研究者发现新的免疫细胞亚群和细胞状态转换。
流式细胞术与单细胞分选技术的结合，可以对特定的免疫细胞进行分离和后续的深入分析。
此外，质谱流式细胞术（CyTOF）能够同时检测大量蛋白质标志物在单个细胞中的表达，提供了更全面的细胞免疫表型信息。
二、免疫组库分析技术免疫系统的多样性主要体现在 T 细胞受体（TCR）和 B 细胞受体（BCR）的基因重排上，形成了庞大的免疫组库。
免疫组库分析技术通过对 TCR 和 BCR 的基因序列进行测序和分析，可以了解免疫系统在不同生理和病理状态下的动态变化。
新一代测序技术（NGS）的应用使得大规模、高通量的免疫组库分析成为可能。
通过对 TCR 和 BCR 的可变区基因进行测序，可以评估免疫细胞的克隆多样性、克隆扩增情况以及抗原特异性等。
免疫组库分析在肿瘤免疫、自身免疫性疾病、感染性疾病等领域都具有重要的应用价值，有助于揭示免疫系统与疾病发生发展的关系，为疾病的诊断和治疗提供新的靶点和策略。
三、成像技术在免疫学中的应用成像技术在免疫学研究中的应用越来越广泛，为直观地观察免疫细胞在体内的分布、迁移和相互作用提供了重要手段。
共聚焦显微镜和双光子显微镜能够在细胞水平上实时观察免疫细胞与靶细胞之间的相互作用，以及细胞内的信号转导过程。
总结：PD-L1免疫组化检测难点与要点
总结：PD-L1免疫组化检测难点与要点PD-L1(programmed death ligand 1)全称程序性死亡受体配体1，是PD-1（programmed cell death 1,程序性死亡受体1）的配体。
PD-L1属于细胞膜上的⼀个跨膜蛋⽩，表达在T细胞、B细胞等免疫细胞以及肿瘤细胞上，研究表明当肿瘤细胞膜上的PD-L1与T细胞等免疫细胞上的PD-1结合后，肿瘤细胞发出抑制性信号，进⽽T细胞不能识别肿瘤细胞和对肿瘤细胞产⽣杀伤作⽤，机体的免疫功能受到抑制。
如何筛选可能获益于PD-1/PD-L1抑制剂疗法的患者是临床最关注的问题。
PD-L1免疫组化检测是预测PD-1/PD-L1抑制剂疗效的⼀种简单有效的⽅法。
⽬前，已被FDA/NMPA批准的PD-1/PD-L1抑制剂的适应症、PD-L1检测平台和判读⽅法见下表。
作为PD-1/PD-L1 免疫检查点抑制剂药物的疗效预测标志，PD-L1 检测已经获FDA批准作为免疫治疗的伴随诊断或补充诊断。
⽬前，PD-L1免疫组化检测试剂盒/抗体主要有五种：22C3、28-8、SP263、SP142和73-10，分别在两个免疫组化平台Dako和Ventana进⾏检测。
FDA只批准了Dako 22C3 pharmDx的PD-L1检测作为K药的伴随诊断，Dako 28-8和 Ventana SP142则分别为O药和T药（Atezolizumab）的补充诊断。
Ventana SP263 被欧盟认证作为三种免疫抑制剂的补充诊断。
当前⾯临的检测难题：1 不同抗体要求使⽤不同的检测平台主流检测平台为两家公司的4种抗体检测平台，分别为DAKO 22C3和28-8检测的AutoStainerLink 48平台和Ventana SP142和SP263检测的Ventana Benchmark Ultra平台。
2 不同的抗体检测结果判读标准不同⽬前主要PD-L1检测抗体使⽤的判读⽅法有TPS、CPS以及分别计算TC和IC判读⽅法，不同判读⽅法的主要差异在与是否计算肿瘤区域阳性表达的免疫细胞数量。
免疫组化结果判读标准
免疫组化结果判读标准
免疫组化技术用于检测和定量特定蛋白质在组织或细胞中的表达情况。
免疫组化结果的判读标准会因所检测的蛋白质和研究目的的不同而有所不同。
以下是一般免疫组化结果判读的一般原则：
1. 强阳性（Strong positive）：细胞或组织中存在大量的目标蛋白表达，通常显示为强烈的染色信号。
2. 中阳性（Moderate positive）：细胞或组织中存在适度的目标蛋白表达，染色信号强度介于强阳性和弱阳性之间。
3. 弱阳性（Weak positive）：细胞或组织中存在轻微的目标蛋白表达，染色信号强度较弱。
4. 阴性（Negative）：细胞或组织中不存在目标蛋白的表达，通常显示为无或非特异性染色。
需要注意的是，免疫组化结果的判读可能还需要结合组织或细胞的生理背景、对照组样本以及其他实验数据进行综合分析。
与实验室或领域专家进行讨论和解释结果也是非常
重要的。
此外，具体研究领域和目的可能会有特定的判读标准，因此建议参考相关的研究文献和指南以确定适用的判读标准。
大数据在免疫学研究中的数据挖掘应用
大数据在免疫学研究中的数据挖掘应用大数据技术的飞速发展正在深刻改变科学研究的面貌，而免疫学作为生命科学的一个重要分支，正逐渐融入这一技术革命之中。
通过海量数据的整合与深入挖掘，大数据为免疫学研究提供了前所未有的视角与工具，推动着我们对免疫系统的理解达到新的高度。
以下是大数据在免疫学研究中的六点数据挖掘应用概述。
一、高通量数据分析，揭示免疫细胞多样性随着单细胞测序技术的成熟，免疫学研究进入了单细胞分辨率时代。
大数据技术在此发挥了关键作用，能够处理海量的单细胞转录组数据，揭示不同状态下免疫细胞的基因表达模式及其多样性。
通过聚类分析、差异表达基因检测等数据挖掘方法，科研人员能够识别出新的免疫细胞亚群，理解其功能和调控机制，为疾病诊断和治疗策略的开发奠定基础。
二、免疫组库分析，理解免疫应答的动态变化免疫组库是指一个个体所有B细胞和T细胞受体的总和，反映了个体内免疫反应的多样性。
大数据技术在免疫组库分析中的应用，使得科学家能够监测个体随时间的免疫应答变化，特别是在感染、自身免疫疾病及癌症等情况下。
通过对大量序列数据的深度挖掘，研究人员能解析免疫细胞克隆扩增的规律，预测疫苗接种效果，或追踪疾病进展与治疗响应，为精准医疗提供依据。
三、生物信息学与机器学习，预测免疫原性免疫原性是决定抗原能否激发免疫反应的关键属性。
大数据技术结合生物信息学工具和机器学习算法，可以对蛋白质序列、结构特征等进行综合分析，预测哪些抗原具有较强的免疫原性，从而加速疫苗设计和药物筛选进程。
这种基于数据驱动的方法不仅提高了预测准确性，还大大缩短了研发周期，为应对突发疫情等公共卫生事件提供了快速响应的能力。
四、多组学数据整合，揭示免疫与疾病的复杂关联免疫系统与多种疾病的发生发展密切相关。
大数据平台能够整合基因组学、转录组学、蛋白组学等多维度数据，通过系统生物学方法，揭示免疫功能失调与疾病状态之间的复杂网络关系。
例如，在肿瘤免疫学中，通过分析肿瘤微环境中的免疫细胞组成和分子表达谱，科学家可以识别免疫逃逸机制，指导免疫治疗策略的制定。
免疫组化指标的意义知识讲解
免疫组化指标的意义免疫组化指标的意义1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。
2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。
3、意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义多药耐药基因蛋白（P-Gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。
谷光甘肽S转移酶（GST π）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。
拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。
阳性率高者对VP16尤其有效。
雌激素受体（ER）--性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。
孕激素受体(PR) --性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。
C-erbB-2--癌基因产物--胞浆--阳性率越高，肿瘤恶性程度越高。
ER、PE阳性而C-erbB-2也阳性者，用三苯氧胺治疗效果不好。
Ki-67--细胞增殖标志--胞核--阳性率越高，肿瘤增殖越快，恶性程度越高。
Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
PCNA(增埴细胞核抗原)。
CEA 多数腺癌表达CEARb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。
P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。
野生型半衰期很短nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。
目前已被广泛应用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤的检测。
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T细胞受（TCR）是由T细胞分泌的膜蛋白分子，与BCR
不同的是TCR只在细胞表面而不分泌出去。一个T细胞的
TCR可以是α链和β链组成的，或者由γ链和δ链组成的。α
链和γ链由V-J-C基因片段重组而来，β链和δ链由V-D-J-C
基因片段重组而来，这也类似于BCR的重链和轻链。参
与特异性免疫应答的T淋巴细胞主要是α/β T淋巴细胞，占
以唾液和尿液作为淋巴细胞DNA来源的方式。
行业倾力
4
2、BCR
B细胞受体（BCR）又称为免疫球蛋白（IG）， 它是由B细胞分泌的可以和抗原结合的蛋白质 分子。成熟的B细胞可以将IG分泌到细胞外面 以中和抗原。免疫球蛋白由两条重链（heavy chain, H），两条轻链（light chain, L）中间通 过二硫键连接而成。重链（IGH）由 Variable （V），Diversity（D），Joining（J）和 Constant（C）基因片段重组而来；轻链（IGL） 只由V-J-C重组而来。重链（H链）又分为V区、 C区、跨膜区及胞质区；而轻链（L链）则只有 V区和C区。V区由VH和VL两个结构域组成，各 有3个CDR即CDR1、CDR2和CDR3。
行业倾力
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4、BCR/TCR多样性产生机制
1. 不同VDJ基因片段组合的多样化； 2. 不同基因片段连接时随机插入删除造成连
接的多样化，V(D)J连接区核苷酸的插入和 删除，体现为互补决定区簇CDR3)序列多 样性； 3. 不同重链和轻链组合的多样化； 4. 以及 B 细胞受体特有的随机高频突变。
行业倾力
9
5、研究免疫组库的流程
1. 提取样本DNA/RNA:根据所要研究的问题设计试验方案， 提取血液或组织样本，分离B细胞或T细胞，然后提取 和纯PCR扩增，从而仪，如Roche 454、Illumina Hi Seq2500、Illumina Mi Seq等进行测序。
外周Ｔ淋巴细胞的90-95%。TCR β 链CDR3在抗原特异性
识别中起关键作用，是直接与抗原肽的结合位点，其编
码基因位于人类7号染色体（7q34），全长620kb，由50
多个可变区（V区）基因片段、2组上游D基因片段/下游
恒定区（C区） 基因片段、6~7个J区基因片段组成，这些
基因在T淋巴细胞发育早期不连续分布，在胸腺内原始T
行业倾力
细胞阶段，D-J区片段连接为 DJ片段；在成熟T淋巴细胞
阶段，V、D、J、C区基因片段相连成 VDJC片段。
行业倾力
7
据推测，胚系VDJC基因片段随机组合、重排以及 TCR α/β链和γ/δ 链V区基因重排产生的TCR克隆数 量高达1015-1018，构成多样性极其丰富的T淋巴细 胞抗原受体库。不同T淋巴细胞克隆有不同序列或 长度的TCR-CDR3基因，翻译出不同的CDR3多肽序 列，从而反映T淋巴细胞功能状态。在发生特异性 免疫应答时，TCR多样性发生变化，出现寡克隆甚 至单克隆扩增，随着胸腺再生，大量原始T淋巴细 胞增殖，TCR免疫组库多样性得以恢复和重建。
4. 信息分析:对测出来的序列数据进行信息挖掘，来发掘 出生物学意义与结果。数据分析主要包括数据清理、 质量控制、不同样本数据分离、序列比对、序列注释 以及下游的各种分析。
行业倾力
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行业倾力
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二、免疫组库测序
行业倾力
12
1、免疫组库测序概念
免疫组库测序（Immune Repertoire sequencing(IR-SEQ)）是以 T/B 淋巴细胞为 研究目标，用多重PCR技术或5’RACE扩增决 定B细胞受体（BCR）或T细胞受体（TCR） 多样性的互补决定区（CDR3区），再结合 高通量测序技术（HTS），全面评估免疫系 统的多样性，深入挖掘免疫组库与疾病的 关系。
IR-SEQ
行业倾力
1
目录
一． 免疫组库（IR） 二． 免疫组库测序技术 三． 信息分析
行业倾力
2
1、免疫组库概念
免疫组库（Immune Repertoire，IR）是指 在任何指定时间，某个个体的循环系统中 所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。研 究免疫组库就要测定免疫系统中的BCR和 TCR的基因或RNA分子序列。
影响免疫组库组成的因素有很多种。比如 年龄、疾病、免疫记忆、免疫缺陷遗传疾 病、疫苗、器官移植、癌症治疗等。
行业倾力
3
根据淋巴细胞DNA来源的不同，对于免疫组库 的研究分为以下几大类：健康人士一般采用抽 取外周血的方式；特殊人群比如白血病人或者 白血病细胞微小残留病（MRD）患者，为了深 入研究其免疫组库的变化也将骨髓血作为淋巴 细胞DNA的来源；刚出生的婴儿，其脐带血可 以用于研究人在出生早期与母亲在免疫组库方 面的联系与区别；而对于动物来说尤其是小型 动物，脾脏也是常见淋巴细胞的DNA来源脏器。
行业倾力
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2、两种PCR技术的优缺点
行业倾力
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Arm-PCR是最新开创的一种高效扩增子救援多重 PCR，它克服了传统多重PCR的缺限。通过在扩 增的早期使用基因靶点特异性的引物，而在指数 扩增期使用共用的引物，使得所有模板的扩增效 率大大提高，因而具有较高的特异性和灵敏性。
行业倾力
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3、模板比较
行业倾力
5
决定B淋巴细胞识别抗原的关键部位是最具 多样性的重链CDR3区，其多样性的产生源 于IGHV（51个功能性基因片段）末端IGHD(23个功能性基因片段）-IGHJ前端（6 个功能性基因片段）基因重排及V-D和D-J连 接时非模板依赖性核苷酸插入或剪切和体 细胞高频突变等。
行业倾力
3、TCR
基因组虽然DNA容易制备，但PCR扩增过程 中易产生非产出性的重组序列，且J-C区之 间存在的大量内含子使其下游引物只能位 于J区，PCR扩增的敏感性一般由细胞的拷 贝量决定；相对而言，RNA需取自新鲜的标 本，其产物多为产出性的CDR3序列，下游 引物可选自C区，具有高度的敏感性。
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4、主流测序技术及优缺点