三株甲基营养型芽孢杆菌抑菌活性物质初探
枯草芽孢杆菌的抗菌活性及机理研究
枯草芽孢杆菌的抗菌活性及机理研究枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然环境中的革兰氏阳性细菌，具有抗菌活性和潜在的生物防治应用前景。
本文旨在综述枯草芽孢杆菌的抗菌活性及其机理的研究进展。
一、枯草芽孢杆菌的抗菌活性枯草芽孢杆菌具备广谱的抗菌活性，能够对多种细菌、真菌和病毒起到抑制作用。
研究表明，枯草芽孢杆菌产生的抗菌物质主要有抗生素、产氢过氧化物、脂肽类物质和酶类物质等。
1. 抗生素枯草芽孢杆菌能产生多种抗生素，例如链霉菌素、波霉菌素和次黄嘌呤等。
这些抗生素具有广谱的抗菌活性，在医药和农业领域有重要的应用价值。
2. 产氢过氧化物枯草芽孢杆菌产生的过氧化氢具有一定的抗菌活性。
该物质能够干扰细菌的代谢活动，破坏细菌细胞膜和细胞壁。
此外，产氢过氧化物还能够引发氧化应激反应，导致细菌的死亡。
3. 脂肽类物质枯草芽孢杆菌能够产生一类名为潜在抗菌肽（Bacillibactin）的脂肽类物质。
这类物质具有很高的亲脂性，能够与细菌细胞膜结合并破坏其结构，从而抑制细菌的生长和复制。
4. 酶类物质枯草芽孢杆菌产生的酶类物质能够降解一些细菌的关键代谢产物，如β-内酰胺类抗生素。
这些酶类物质能够改变细菌的胞内环境，破坏其生长和繁殖的平衡。
二、枯草芽孢杆菌抗菌机理的研究枯草芽孢杆菌的抗菌机理主要涉及以下几个方面：1. 竞争性排除枯草芽孢杆菌通过竞争营养资源、空间和氧气等能源与其他菌种竞争，从而抑制了它们的生长和繁殖。
此外，枯草芽孢杆菌还能够产生一些具有细菌杀伤性的代谢产物，如溶菌酶和脂肽类物质，进一步加强了其抗菌能力。
2. 调节宿主免疫反应枯草芽孢杆菌能够通过激活宿主免疫反应来抑制病原微生物的生长。
研究发现，枯草芽孢杆菌可引发宿主细胞产生一系列的细胞因子和免疫相关蛋白，如干扰素和肿瘤坏死因子等，进而增强宿主的抗菌能力。
3. 产生毒性物质枯草芽孢杆菌产生的有毒物质可以直接或间接地杀死其他微生物。
活性芽孢杆菌的分离、鉴定
• 3.原始菌株及突变株产酶能力的测定及其产酶稳定性检测
• • （1）.标准曲线的制作(见下表) ①取7支20 ml具塞刻度试管,预先洁净灭菌干燥,编号,按表加入试剂。②摇匀,至沸水浴 中煮沸5 min。取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20 ml,以1号管作为空白调零点,在 540 nm的波长下比色测定吸光度值。并建立通过吸光度值求麦芽糖含量的回归方程。
后培养：应让变异处理后细胞在液体培养基中培养几小时，使细 胞的遗传物质复制，繁殖几代，以得到纯的变异细胞。
三、高产菌株发酵条件优化
1.原理：以淀粉酶的活力做为检测的指标。 采用单因素试验筛选高产菌生长及产淀粉酶的最佳碳源和最佳氮 源，通过正交试验对高产菌的发酵条件进行优化，建立高产菌株 的最佳摇瓶发酵条件。经相关文件检索，本实验选则碳源浓度、 氮源浓度、无机盐浓度、接种量四个对于发酵较重要的因素进行 优化。 2. 材料与仪器： 高产菌株斜面 控温摇床、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、PH试纸、紫外分光光度 计 种子液培养、初始发酵培养基 蔗糖、麦芽糖、乳糖、糊精、玉米粉1. 6%、酵母膏1. 6%、尿素0. 2%、黄豆饼粉1. 6%、0．05% CaCO3、Zn SO4、CuSO4、Mn SO4·H2O、Mg SO4·7H2O
紫外线作为物理诱变因子用于工业微生物菌种的诱变处理具有悠久的历史尽管几十年来各种新的诱变剂不断出现和被应用于诱变育种但到目前为止对于经诱变处理后得到的高单位抗生素产生菌种中有80左右是通过紫外线诱变后经筛选而获得的
活性芽孢杆菌的分离、 鉴定与育种
闫恒 黄瑞辉 段花蕊
引言
• 芽孢杆菌能产生多种消化酶，帮助动物对营养物质的消化吸收。芽孢 杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时还具有降解饲料 中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等 • 而淀粉酶是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶 制剂产品之一。淀粉酶种类繁多,特点各异,在造纸、印染、酿造、果 汁和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料 及微生态制剂等多种领域具有广阔的用途。现在淀粉酶主要来源于植 物和微生物并通过发酵完成生产，因此筛选出高产、稳定的淀粉酶产 生菌是淀粉酶生产的头等大事。 • 本实验从土壤中分离出产淀粉酶的芽孢杆菌，通过诱变育种及发酵条 件优化来得到高产、稳定的淀粉酶产生菌株
三株海洋高效杀藻菌及其杀藻活性物质研究的开题报告
三株海洋高效杀藻菌及其杀藻活性物质研究的开题报告一、研究背景与意义藻类在海洋生态系统中具有重要作用，但在某些情况下，过度繁殖的藻类会引起水体富营养化，甚至危害人类健康。
因此，研究海洋高效杀藻杀藻菌及其杀藻活性物质对减轻藻类过度繁殖对海洋环境的影响，具有科学意义和实际价值。
二、研究内容和目标本研究拟从海洋中分离筛选出杀藻能力强的菌株，并进行鉴定和分类。
同时，采用化学分离技术提取杀藻活性物质，并对其进行结构鉴定和活性测试。
最终，分析分离菌株及其杀藻活性物质的特点和优缺点，为防治水体富营养化提供理论依据和实验基础。
三、研究方法（1）海水样品采集、菌群分离与筛选：采用传统分离方法和平板法分离海水样品中的微生物，筛选出对藻类具有杀藻活性的单株菌。
（2）菌株的鉴定和分类：通过常规生物学、生化学鉴定和16S rRNA序列分析等方法，对分离的菌株进行鉴定和分类。
（3）杀藻活性物质的分离、纯化、鉴定和活性测试：采用薄层色谱、高效液相色谱等化学分离技术，将杀藻活性物质从培养液中分离出来，并进行纯化和结构鉴定。
利用藻细胞密度和生长率等参数来测试杀藻活性物质的杀藻活性。
（4）分析分离菌株及其杀藻活性物质的特点和优缺点：通过比较分离菌株及其杀藻活性物质的特点和优缺点，评价海洋高效杀藻菌及其杀藻活性物质的应用潜力。
四、预期结果与意义预计本研究可以从海水样品中分离出多株对藻类具有杀藻活性的菌株，并鉴定出其属种，从中筛选出具有高效杀藻活性的菌株，并进一步筛选出其杀藻活性物质。
通过对分离菌株及其杀藻活性物质的特点和优缺点进行分析，确定多株高效杀藻菌株及其活性物质，并对其进行进一步优化和应用开发，为海洋生态环境的保护和水体富营养化的治理提供科学依据和技术支持。
三株内生菌次生代谢产物研究的开题报告
三株内生菌次生代谢产物研究的开题报告
题目：三株内生菌次生代谢产物研究
背景：
内生菌是一类生活在其他生物体内部的微生物，在自然界中广泛存在，它们可以与宿主生物共生，也可以造成宿主生物的病害。
内生菌具有独特的生境和生态地位，它们的存在和活动对生物体及其群落的生态平衡、生长发育、抗病能力等方面都具有重要的影响。
内生菌次生代谢产物是内生菌生长代代相传的独特遗传物质，具有广泛的生物学活性，包括抗生素、细胞毒素、抗肿瘤剂、免疫调节剂等，在药物开发、农业生产、环境保护等方面具有重要的应用价值。
研究目的：
本次研究旨在分离筛选三株内生菌，研究其分泌的次生代谢产物，并初步探索其生物学活性和应用价值。
研究内容：
1. 内生菌的分离和鉴定。
从不同宿主植物和昆虫体内分离内生菌菌株，运用形态学、生物学和分子生物学方法鉴定其种属和亲缘关系。
2. 次生代谢产物的筛选和鉴定。
采用有机溶剂萃取和超滤等技术，从菌株培养基中提取目标化合物，运用质谱、核磁等手段鉴定其化学结构和组成。
3. 生物学活性的评估。
评估次生代谢产物的抗菌、杀虫、抗肿瘤、免疫调节等生物学活性。
4. 应用价值的探索。
初步探索次生代谢产物在医药、农业、环境等领域的应用价值和开发前景。
研究意义：
本研究将有助于深入了解内生菌的生态学和生物学特征，同时可以为药物开发和新型农药、生物农药的研究提供新的思路和方向。
另外，研究还可以对内生菌对生态系统的影响和作用进行初步探索，对于生态系统的保护和修复具有重要的意义。
地衣芽孢杆菌
2、三株地衣芽孢杆菌BL-3菌株:产生天然 植物生长素,增产提质之王。
三株地衣芽孢杆菌中还有一株BL-3菌 株,这是用于产生植物细胞分裂素的地 衣芽孢杆菌及植物生长调节剂。这种 植物细胞分裂素被称为玉米素,是美国 科学家从玉米胚芽中分离出来的,其提 取成本非常昂贵,大约3万公斤玉米能 提取1克玉米素。三株地衣芽孢杆菌产 品中玉米素的含量达到8mg/g。使用 后苗木、大树长势强健，可迅速诱导 产生大量不定根，提高成活率。
前中国国家领导人邓小平曾说，将来
的农业问题的出路，最终要靠生物工程 来解决，要靠尖端技术。使用生物制剂 是当前最佳的解决方案。三株地衣芽孢 杆菌是其中的佼佼者。它是当前农用生 物菌中活性最强的菌种,是最新一代的 生物制剂,能解决现阶段土壤存在的各 类问题。
THANKS FOR WHATCHING
地衣芽孢杆菌
微生物与微生物的关系
微生物与微生物之间有共生和相互克制的关系, 没有经过驯化的菌,除非生存空间比较大,否则 会因为食物、空间等的竞争,不同菌种或同一菌 种间,通过吞噬或分泌有害物致死。单细胞芽孢 杆菌对霜霉、灰霉等真菌有抑制作用,活性强的 菌能在短时间内将活性弱的菌,通过抢夺食物、 空间竞争,或者分泌有害物等使其他菌饿死或将 其杀死。
1、三株地衣芽孢杆菌BL-16菌株:抑制多 种动植物及人类病原菌。
三株地衣芽孢杆菌为“三株合一”的绝 佳菌种,其中的地衣芽孢杆菌BL-16菌株可 以产生多种抗生素,包括脂肽类、几丁质 酶、抗菌蛋白、肽类、肽聚糖、磷酸类、 核酸类、氨基酸类、腐殖酸类等物质,对 多种动植物及人类病原菌起到明显抑制 作用,在农业生产领域应用广泛。地衣芽 孢杆菌是目前芽孢杆菌属最具有研究价 值的菌种,其开发价值远高于芽孢杆菌属 枯草芽孢杆菌、蜡样、巨大等单功能性 芽孢杆菌。
《三株植物内生真菌次级代谢产物及其生物活性研究》
《三株植物内生真菌次级代谢产物及其生物活性研究》一、引言植物内生真菌是生态系统中不可或缺的组成部分，它们与宿主植物之间形成了复杂的共生关系。
近年来，随着对植物内生真菌的深入研究，越来越多的次级代谢产物被发现并展现出独特的生物活性。
本文将针对三株植物内生真菌的次级代谢产物及其生物活性进行详细研究，旨在为相关领域的研究提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料本研究选取了三株具有代表性的植物内生真菌，分别来自不同地区和不同种类的植物。
这些真菌经过分离、纯化后，用于后续的实验研究。
2. 方法（1）次级代谢产物的提取与分离：采用适当的溶剂对内生真菌进行提取，通过柱层析、薄层扫描等技术分离出次级代谢产物。
（2）生物活性检测：通过体外实验和体内实验，检测次级代谢产物的生物活性，如抗菌、抗肿瘤、抗氧化等。
（3）结构鉴定：利用现代分析技术，如核磁共振、质谱等，对次级代谢产物的结构进行鉴定。
三、实验结果1. 次级代谢产物的提取与分离结果通过适当的溶剂提取和柱层析、薄层扫描等技术，成功分离出三株内生真菌的次级代谢产物。
这些产物在紫外灯下呈现不同的荧光特性，表明其化学结构具有多样性。
2. 生物活性检测结果（1）抗菌活性：三株内生真菌的次级代谢产物均表现出不同程度的抗菌活性，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用。
其中，某株真菌的代谢产物对某种病原菌的抑制效果尤为显著。
（2）抗肿瘤活性：通过体外实验，发现某株内生真菌的次级代谢产物具有显著的抗肿瘤活性，能够抑制肿瘤细胞的生长。
这一结果为抗肿瘤药物的研究提供了新的思路。
（3）抗氧化活性：三株内生真菌的次级代谢产物均具有一定的抗氧化活性，能够清除自由基，减轻氧化应激对机体的损伤。
3. 结构鉴定结果通过现代分析技术，成功鉴定了三株内生真菌次级代谢产物的化学结构。
这些产物包括多种酮类、酚类、萜类等化合物，具有不同的生物活性。
四、讨论本研究发现的三株植物内生真菌的次级代谢产物具有丰富的生物活性，如抗菌、抗肿瘤、抗氧化等。
2021芽孢杆菌防治植物病害的机理及研发问题探究范文2
2021芽孢杆菌防治植物病害的机理及研发问题探究范文 长期以来，植物病害的防治主要以化学农药为主，化学农药对农业生产上防治病虫害起了十分重要的作用，但长期不合理使用化学农药产生了诸多问题。
如化学农药不仅对人、畜的健康造成危害，而且对土壤、水体、大气造成严重污染，破坏了生态平衡；病原菌和害虫抗药性的不断增强，农药的使用量和使用频度不断加大，出现了用药量与病虫害相互递增的恶性循环。
因此开发对人类和环境友好、并具良好防治效果的新植物病虫害防治策略尤为重要[1]. 随着人们对食品安全的日益重视和可持续控制病虫害发展的需要，生物防治受到各国政府和植物保护专家的重视。
生物防治是以生态学为基础来控制有害生物，是综合防治体系中一个必不可缺少的组成部分。
生物防治避免了化学农药使用带来的一系列植保、环境和能源方面的问题，促进了环境生态平衡和农业的可持续发展。
植物微生态学理论认为[2]:存在于植物体表或体内的微生物群落是一个动态平衡的生态系，一旦平衡打破，则发生植物病害；植物病害生物防治是在被病原物占据主导的生态系中引入有益的微生物，形成不利于病原物生长而利于植物生长的新的动态平衡体系，从而控制病害发生和发展。
近年来随着分子生物学技术、发酵工程和生物信息工程等新技术的飞速发展，为生物农药的研发应用奠定了坚实的理论基础和可靠的技术路线。
芽孢杆菌作为重要的生防资源，具有广阔的应用前景。
利用芽孢杆菌防治植物病害，国内外报道较多[3-7]. 芽孢杆菌在生长过程中可以在寄主植物根、叶围定殖，与病原菌竞争营养和侵染位点；分泌抗菌物质、抑制病原菌生长；诱导植物产生系统抗病性、抵御病原菌入侵，从而达到生物防治的目的。
同时，芽孢杆菌能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的芽孢，所以是理想的生防菌筛选对象。
许多性状优良的芽孢杆菌菌株已成功应用于植物病害的防治。
本文就芽孢杆菌类生物杀菌剂的研发现状、芽孢杆菌防治植物病害的机理以及在实践应用中存在的问题进行简要综述。
《短小芽孢杆菌NDY-10的分离、鉴定及抑菌活性和培养条件的研究》范文
《短小芽孢杆菌NDY-10的分离、鉴定及抑菌活性和培养条件的研究》篇一一、引言短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）是一种常见的革兰氏阳性菌，具有广泛的应用价值。
近年来，随着微生物学研究的深入，短小芽孢杆菌因其独特的生理特性和环境适应性而受到越来越多的关注。
本研究旨在通过实验，探索短小芽孢杆菌NDY-10的分离、鉴定方法，以及其抑菌活性和培养条件，为该菌的进一步应用提供理论依据。
二、材料与方法（一）材料1. 样品来源：本实验所使用的样品为土壤样品。
2. 培养基：营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆肉汤培养基等。
（二）方法1. 分离方法：采取稀释平板法进行分离纯化。
2. 鉴定方法：形态观察、生理生化试验及分子生物学鉴定。
3. 抑菌活性检测：采用琼脂扩散法测定短小芽孢杆菌NDY-10对常见病原菌的抑菌活性。
4. 培养条件优化：通过单因素实验和正交实验，优化培养温度、pH值、碳源和氮源等条件。
三、实验结果（一）短小芽孢杆菌NDY-10的分离与鉴定通过稀释平板法，成功从土壤样品中分离出短小芽孢杆菌NDY-10。
经形态观察、生理生化试验及分子生物学鉴定，确认该菌为短小芽孢杆菌。
（二）抑菌活性检测实验结果显示，短小芽孢杆菌NDY-10对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等常见病原菌具有明显的抑菌活性。
其中，对大肠杆菌的抑菌效果最为显著。
（三）培养条件优化1. 单因素实验：通过调整培养温度、pH值、碳源和氮源等条件，发现短小芽孢杆菌NDY-10在37℃、pH值为7.0、以葡萄糖为碳源、蛋白胨为氮源的条件下生长最佳。
2. 正交实验：通过正交实验进一步优化培养条件，得出最佳组合为：培养温度37℃、pH值7.0、碳源葡萄糖、氮源蛋白胨，此时短小芽孢杆菌NDY-10的生长量达到最大。
四、讨论本研究成功分离出短小芽孢杆菌NDY-10，并对其进行了鉴定。
通过抑菌活性检测，发现该菌对常见病原菌具有显著的抑菌作用，这为该菌在生物防治、农业等领域的应用提供了理论依据。
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三株甲基营养型芽孢杆菌抑菌活性物质初探邵天蔚;张晓云;丁万隆;王蓉;李勇【摘要】目的:研究甲基营养型芽孢杆菌QM、BM2和HZ3不同抑菌活性部位.方法:采用对峙培养法及牛津杯验证提取物抑菌活性;菌丝形态用扫描电镜观察;菌株发酵上清液通过低温离心及微孔滤膜过滤制备;脂肽粗提物通过酸沉淀方法获得;有机溶剂萃取物分别用等量石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取发酵上清液获得;蛋白粗提物通过硫酸铵沉淀结合透析法获得.结果:与三株甲基营养型芽孢杆菌对峙培养的人参致病菌菌丝生长均呈现畸形,甚至死亡;菌株发酵液和发酵上清液也有明显的抑菌活性,上清液中的脂肽粗提物、蛋白粗提物及水饱和正丁醇萃取物均对人参致病菌有不同程度的抑菌效果.结论:三株芽孢杆菌发酵液中含有多种抑菌活性物质,推测其可能单独或协同发挥抑菌作用.%Objective:Study the antagonistic active sites of Bacillus methylotrophicus QM,BM2 and HZ3strains.Methods:Confrontation culture and oxford cup were used to verify the antifungal activity of extracts.Mycelial morphol-ogy was observed under electron microscopy.Fermentation supernatant were prepared through low temperature centrifugation and microporous filter membrane filtration.The crude extract of lipoprotein is obtained by acid precipitation method.The organic sol-vent extraction was by extracted by isometric petroleum ether,ethyl acetate and water saturated n-butanol from the supernatant, respectively.Protein crude extract was obtained by ammonium sulfate precipitation and dialysis.Results:The mycelium growth of ginseng pathogens in confrontation with three strains ofB.methylotrophicus shown abnormal growth and even death.The bacte-rialfermentation broth and supernatant also have significant antagonistic activity.The extracts of lipopeptide,protein crude ex-tract and water saturated n-butanol extract in the supernatant have different inhibitory effects on ginseng pathogens.Conclusion:There are a variety of antibiotics in the fermentative of three strains of B.methylotrophicus,and it is proposed that these antibi-otics may playing antagonistic activity alone or in synergy.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2018(020)002【总页数】6页(P189-194)【关键词】人参;致病菌;甲基营养型芽孢杆菌;抑菌物质【作者】邵天蔚;张晓云;丁万隆;王蓉;李勇【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193;中国科学院植物研究所,北京 100093;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193【正文语种】中文人参Panax ginseng C.A.Mey.是五加科多年生宿根植物，我国传统名贵中药材。
人参病害严重影响人参的产量和品质［1］，化学农药长期不规范使用不仅造成自然生态环境严重破坏，同时也导致人参农药残留超标，给人参用药安全带来重大安全隐患［2］。
生物防治是解决药用中药材病害防治及农残问题的有效途径之一，芽孢杆菌属是目前研究较为成熟且应用较为广泛的重要生防微生物［3-4］。
根据已有研究报道，芽孢杆菌主要通过拮抗作用、竞争作用、溶菌作用、诱导抗性和植物促生长等［5］作用形式表现其生防作用。
其中，芽孢杆菌合成具有抑菌活性的次生代谢物质，是抑制植物致病菌生长发育的关键［6］。
前期，课题组从商品化微生物菌剂中分离了三株甲基营养型芽孢杆菌，通过对峙培养试验证实了菌株对人参致病菌的抑菌效果，为上述菌剂在人参病害防治中的应用提供了理论依据。
在此基础上，本研究通过光学显微镜和扫描电镜观察，研究了对峙培养过程中三株甲基营养型芽孢杆菌对人参锈腐菌Cylindrocarpon destructans、人参黑斑菌Alternaria panax、人参根腐菌Fusarium solan i和人参灰霉菌Botrytis cinerea 菌丝生长的影响，并从菌株胞外分泌物中分离提取了粗脂肽、粗蛋白及有机溶剂萃取物，结合抑菌活性检测，初步明确了三株芽孢杆菌的抑菌活性成分的有效部位。
1 材料1.1 供试菌株人参锈腐菌 C.destructans、人参黑斑菌A.panax、人参根腐菌 F.solani和人参灰霉菌B.cinerea以及甲基营养型芽孢杆菌 QM、BM2和HZ3均由本课题组保存。
1.2 供试培养基PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂15～20 g，蒸馏水1 L，pH 7。
LB培养基：蛋白胨10 g，NaCl 10 g，酵母粉5 g，琼脂10～15 g，蒸馏水1 L，pH 7。
1.3 主要仪器及试剂电热恒温培养箱（DH6000，天津市泰斯特仪器有限公司）恒温培养振荡器（ZHWY-100H，上海智城分析仪器制造有限公司）超净工作台（YT-CJ-1D，北京亚泰克科隆仪器技术有限公司）立式自动电热压力蒸汽灭菌锅（LX-B35L型，合肥华泰医疗有限公司）光学显微镜（Leica M205C，德国）飞纳台式扫描电镜（Phenom ProX，原产荷兰）离心机（SIGMA，3K15，德国）旋转蒸发仪（RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂）循环水真空泵（SHZ-mD，上海亚荣生化仪器厂）冷冻干燥机（2-4LD plus，德国Christ冻干机有限公司）冷冻干燥机（LGJ-18，北京松源华兴科技发展有限公司）牛津杯（内径8 mm，外径9 mm）血球计数板（0.05 mm×0.05 m m，上海市求精生化试剂仪器有限公司）PBS缓冲溶液：KH2 PO4 0.27 g，Na2 HPO4 1.42 g，NaCl 8 g，KCl 0.2 g，蒸馏水1 L，高温灭菌后4℃保存2 方法2.1 对峙培养将供试人参锈腐菌、人参黑斑菌、人参根腐菌和人参灰霉菌制成Φ6 mm菌饼，置于PDA平板中央，分别将拮抗菌株接种于距培养皿边缘10mm处，25℃恒温黑暗培养5～7 d。
以只接种人参致病菌的平板作为空白对照。
每个处理3次重复。
2.2 菌丝形态观察对峙培养5～7 d后，PDA平板上出现明显的抑菌带。
用接种针挑取靠近拮抗菌株抑菌带边缘的致病菌菌丝于载玻片上，放置于样品台的导电胶上，静置片刻后置于台式扫描电镜观察盒内，观察病菌菌丝的显微形态。
2.3 发酵上清液的制备挑取1环事先活化的芽孢杆菌菌株至100 mL的LB液体培养基中，35℃、150 r·min-1振荡培养24 h作为种子液。
按5%接种量将种子液接种到100 mL的LB液体培养基中，相同条件振荡培养48 h，所得发酵液于4℃、10 000 r·min-1离心20 min，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，得发酵上清液。
2.4 粗脂肽提取物的制备取10 mL发酵上清液，用6 mol·L-1的HCl调节至pH2，4℃静置过夜。
4℃，10 000 r·min-1离心20 min。
将上清液调节 pH7后即为酸化上清液，4℃保存，备用；所得沉淀用甲醇溶解，抽滤两次，合并滤液，旋转蒸发浓缩后冷冻干燥，所得的干燥样品用 PBS缓冲液（0.02 mol·L-1，pH 7.2）定容至10 mL，经0.22μm微孔滤膜除菌，得脂肽粗提物。
2.5 有机溶剂萃取物取10 mL发酵上清液3份，分别加入等量的石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇，萃取两次后合并有机相，挥干溶剂，用PBS缓冲液（0.02 mol·L-1，pH 7.2）定容至10 mL，经0.22μm微孔滤膜除菌，得有机溶剂萃取物。
2.6 蛋白粗提液的制备取10 mL发酵上清液，缓慢加入固体硫酸铵颗粒，使其饱和度分别达到40%、50%、60%、70%、80%和90%，4℃静置过夜。
4℃，10 000 r·min-1离心20 min，所得沉淀用0.02 mol·L-1的PBS缓冲溶液（pH 7.2）重悬至完全溶解，所得溶液装入透析袋（截留分子量8～14 kD）中除盐，直至1%的BaCl2溶液滴定透析外液无沉淀生成。
将透析袋内溶液冷冻干燥，所得的干燥样品用PBS缓冲液（0.02 mol·L-1，pH 7.2）定容至10 mL，经0.22μm微孔滤膜除菌，得粗蛋白提取液。
2.7 抑菌活性检测在距PDA培养基中心2 cm处按需摆放牛津杯，每孔加入100μL待检测溶液。
将Φ6 mm人参根腐菌菌饼接种于平板中央，静置过夜后，取下牛津杯，将PDA平板25℃倒置培养3～5 d后测量菌落半径，根据抑菌率评价不同菌株的抑菌效果。
3 结果与分析3.1 拮抗菌株对人参致病菌菌丝形态的影响扫描电镜观察发现，对照组的人参根腐菌（图2I）、人参锈腐菌（图2II）、人参黑斑菌（图2Ⅲ）和人参灰霉菌（图2Ⅳ）生长正常，菌丝表面光滑，粗细均匀。